Bu eser Avrupa Topluluğu [FP7-insanlar-2011-IAPP proje 285827 (EPIXCHANGE)] bir hibe tarafından desteklenmiştir.

Tüm deneysel protokoller Ferrara Üniversitesi etik kurul için hayvan deney ve İtalyanca Sağlık Bakanlığı tarafından kabul edildi. VARIŞ (hayvan araştırma: Raporlama In Vivo deneyler11) yönergeleri takip etti.
1. kuvars iğneler hazırlanması
<ol><li>Temiz ve distile suda 5 dk, 5 dk etanol % 99 ve 5 dakika içinde Dietil eter yerleştirerek ( Tablo malzemelerigörmek) kuvars kılcal sterilize.</li>
	<li>Kılcal koyup tamamen kuruyuncaya kadar bırakın en az 1 h için başlık altında bırakın.</li>
	<li>Bir lazer çektirmenin bireysel ihtiyaçlarına bağlı olarak yeterince uzun, yeterince ince bir iğne imalatı izin parametrelere göre kullanarak iğneler hazır olun. Not: Biz bir lazer çektirmenin kullanın (bkz. Tablo malzeme). Bir iki satır program çekmek için kullanın. Yüksek güç, en büyük tarama uzunluğu (FİLAMENTLER DEĞERİNE karşılık gelen) ve çekerek güç kullanmaya ilk satırını kullanır. Bu parametreler birleşimi kılcal büyük iç/dış boyutu uzun bir iğneyle şekillendirme için izin en düşük uzantısı hızı ile en büyük bölümü erime yol açar ve şaft düşük. Bu şekilde, bir yüksek mekanik direnci ve tıkanma olmadan kök hücre veya viral parçacıkların geçişini sağlayan geni iç çapı iğne korur. Ucu çok küçük ve uzun, gerekli mekanik ve şekil özellikleri eksik olmadan önce hız ve gecikme bu program satırının kapiller uzantısı durdurmanız gerekir. Kuvars soğuduktan sonra çekerek programının ikinci satır otomatik olarak çalıştırılmasına (5 s). Güç, filaman ve kuvvet çekme bir ucu kısa olası ipucu uzunluğu ve bir ipucu kopma iki iğnelerle ayrılması kaçınarak dik shank ile kesmek için fonksiyonel parametreleridir. Düzenli olarak, bizim ekipman ile aşağıdakileri kullanın: (a) Line 1 = güç 990, filaman 5, hız 130, gecikme 110, çekme 0; (b) satır 2 = güç 970, gecikme 70, filament 3, hız 0 0 çekin.</li>
	<li>İğneler daha önce % 70 etanol ile temizlenmiş Petri kabına koyun.<ol>
<li>Bir plastik parafin film ile çanak kapağı.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kılcal mikro-tetkik kes.<ol>
<li>Başlangıç lazer güç doğrulamak için bir hazneler süreç çalıştırmak ve teslim enerji ver. Sonra kesme parametreleri ayarlayın. Not: Biz bir mikro-tetkik kullanın (bkz. Tablo reçetesi) ve aşağıdaki parametreleri: lazer güç darbe enerji (63 µJ), lazer ışın çapı maksimum diyafram % 20 (maksimum diyafram: 1.0 µm) ve kesme hızı maksimum hız (maksimum % 10 hız: 30 µm/s).</li>
		<li>Sıkıca iğne mikroskop tablosunu düzeltmek ve ucu bilgisayar ekranın ortasına konumlandırın.</li>
		<li>Menü çubuğunda kalem simgesine tıklayın ve bir işareti iğne lazer kesme için çizmek için kullanın. Not: Cut iğne yüzeyi ile ilgili yaklaşık 45 ° açılı olması gerekir.</li>
		<li>Yan çubuğu işlevi önceden işaretlenmiş nokta kesmek lazer izin vermek için "kesin Başlat" düğmesini içeren bayrağı seçin.</li>
		<li>Gerekirse, yan hole(s) 1.5.2-3 içinde açıklanan yordamları yineleyerek kesilmiş; iğne (şekil 1) yeniden konumlandırmak için gerek yoktur.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Temizlik sonrası kesti.<ol>
<li>İğne geçersiz bir pompa ile bir plastik tüp takın.</li>
		<li>Pompa açmak ve el ile ılımlı bir hızda (3 µL/dak) ileriye doğru akış oranını ayarlamak.</li>
		<li>% 99 etanol Aspire kesme nedeniyle kirleri çıkarmak için ilk ve daha sonra distile su.</li>
		<li>Tekrar kurutma kolaylaştırmak için % 99 etanol Aspire edin. Not: Her adım en az 3 dakika sürmelidir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>İğneler düzgün kapalı kabında cerrahi güne kadar saklayın.</li>
	<li>İğne yeniden kullanılabilir; deney sonunda, temiz çamaşır suyu ve etanol çözüm ve olası doku artıklarını çıkarın. Bir daha eksiksiz, iğne ucunu aşağı doğru işaret eden bir micropipette depolama kavanoza koyup temizlik için ipuçları kaplıdır kadar kavanoz distile su ile doldurun, kalan herhangi bir doku kaldırın, sonra etanol ile yıkamak için 1,5 dakika kaynatın.</li>
</ol>2. yordam
<ol><li>Pompa kullanım kılavuzu tarafından sağlanan yönergeleri izleyerek, pompa çapı/hacim mikroenjeksiyon şırınganın göre kalibre ve 0.3 µL/dak akış hızı ayarlamak için Ayarlar menüsünü seçin.</li>
	<li>((Örneğin, Hamilton iğne, 30 G) künt bir iğne ve kısa politetrafloroetilen tüp ile donatılmış) bir 10 mL şırınga steril su ile doldurun ve mikroenjeksiyon şırınga (sonra çok dikkatli piston çıkarmak) ve enjeksiyon doldurmak için kullanın Montaj parçaları kiti için el ile mikroenjeksiyon pompa (MMP). Not: MMP kit stereotaksik çerçeve (Şekil 2) iğnede güvenli bir şekilde bağlamak için kullanılır. Kiti içerir: politetrafloroetilen boru, radarı boru coupler, pipet tutucu ve contalar Pipetler farklı dış çapı için.</li>
	<li>İğne MMP teçhizat-e doğru bağlamak.<ol>
<li>Daha fazla su sistemi genelinde 10 mL şırınga temizler ve su dışında iğne gelir olup olmadığını kontrol edin. Not: doldurma adımları tekrar uygulayarak sistem içinde herhangi bir hava kabarcığı kaldırdığınızdan emin olun.</li>
	</ol></li>
	<li>10 mL şırınga yavaş yavaş piston bir damla su mikroenjeksiyon şırınga üstündeki bırakmak için bastırıyor ise mikroenjeksiyon şırıngadan çıkarın. Piston mikroenjeksiyon şırıngada yerleştirin.</li>
	<li>Mikroenjeksiyon şırınga pompa bağlanmak ve 0.3 µL/dak akış hızı ayarlayın. Not: bir damla iğneyi ucundan sızıntı tamamlanana kadar bekleyin ve sonra başka bir 3 dakikadır gidelim.</li>
	<li>Akış 0.1 µL/dk az ayarlayın ve cerrahisi prosedürü başlatın. Pompa ameliyat yaparken sürekli olması gerekir. Not: Bu makalesinde bildirilen deneyler için biz erkek Sprague Dawley Rat 300 g (3 ay-in yaş) kullanın. Ancak, yordamı özellikle fareler diğer türler için geçerlidir.</li>
	<li>Genel anestezi yerel düzenlemelere tarafından onaylanmış bir yöntemi kullanarak neden. Not: Anestezi için 20-50 dk 85 mg/kg ketamin ve 8 mg/kg xylazine mayi enjeksiyon (IP) bir karışımı kullanın. Kuyruk ve/veya ayak Pinch hayvan tamamen uyuşturulmuş emin olmak için kullanılır önemlidir. Anestezi ve temel hayati önce ameliyat başlar ve ameliyat yaparken her 10 min izlenen değerlendirildi. Hayvan vücut ısısı sırasında ve sonrasında cerrahi işlemler yeniden Isıtma yastığını dolaşan bir su kullanarak daha önce sabit tutulur. Hayvanlar kadar tamamen iyileşti izlenir (örneğin dik ve Ambulatuvar vardır). Ayrıca, hayvanlar üç gün boyunca post-operatively her 24 h analjezikler (tramadol, 5-7 mg/kg ı.p.) alırsınız.<ol>
<li>Hayvanın kafasını tıraş ve yeterince için aseptik cerrahi cerrahi site hazırlamak. Bir iki aşamalı bodur iyot tabanlı çözüm (betadin) % 70 etanol tarafından takip ile gerçekleştirin. Ayrıca, asepsis korumak için cerrahi sitesi cerrahi örtüsü ile sarın (video gösterim amacıyla çıkarılmıştır).</li>
	</ol></li>
	<li>Fareyi stereotaksik çerçevede yeniden Isıtma battaniye dolaşan bir su üzerinde konumlandırın. Ek ağrı sağlamak için % 0.5 lidokain çözüm ameliyat yerinde geçerli (7 mg/kg fazla olamaz). Önceden tüm cerrahi aletler sterilize de %2 oxazolidin artı %7.05 fenol (Sporodicin veya Cidex) aletleri immerging tarafından bir boncuk Sterilizatör veya sıvı soğuk dezenfeksiyon kullanarak durulama steril su veya serum fizyolojik ile izledi. Dezenfeksiyon prosedürleri arasında bile gerçekleştirilmelidir. Bir boyuna kesim kafatası üzerinde steril neşter kullanarak yapmak. Aşırı kanama önlemek için nazik ol. Düz bir spatula kullanarak kafa derisi açın ve cerrahi klipleri onu açık tutmak için cilt kapakları üzerinde uygulayın. Çok yavaşça bregma ve hangi aracılığıyla iğne eklenir kafatası alan duyurmak kapaklarini bağlantısını kesin.</li>
	<li>(Akış devam eden ise) stereotaksik karede kol mount ve tam olarak bregma, ucu kırmamaya dikkat üzerine iğne ucu taşıyın. Bregma antero-posterior ve medio-lateral koordinatlarını açıklama ekleyin ve istediğiniz koordinatları tercüme. Bir stereomicroscope tarafından yönlendirilen, iğne ucu neredeyse kafatası dokunuyor kadar düşük, sondaj spot mark biraz stereotaksik kol yükseltme sonra.</li>
	<li>Matkap (matkap ucu Ø: 0.8 mm; matkap hızı: 1000 devir/dakika) işaretli nokta kafatasında. Beyin zarı Delme işlemler sırasında nüfuz değil bakım alınması gerekir. Delme sırasında kemik hasarı ve nekroz önlemek için steril serum fizyolojik damla.</li>
	<li>Plastik parafin film küçük bir parça keser ve kafatasında yerleştirir. 10 µL damlalıklı kullanarak, plastik parafin filmde enjekte için çözüm teslimatı yap. Pompa kes, biraz itici pompa almak ve mikroenjeksiyon şırınga piston hafifçe çekerek kılcal içinde küçük bir hava kabarcığı oluşturun.</li>
	<li>İğne ucu damla ulaşıncaya kadar stereotaksik kolu indir. Örnek (çok yavaş) herhangi bir kabarcık oluşumu kaçınarak mikroenjeksiyon şırınga piston çekerek çizin. Pompa itici piston ile temas halinde eski yerine koymak ve pompanın debisi 0,3 µL/dak bekle, bir sonraki adıma devam etmeden önce bir damla (bir kaç dk) oluşumu kadar açın. Not: mevcut örnek deneyde, yapay beyin omurilik sıvısı (aCSF) içinde striatum infüzyon (AP: +1.5, ML: ±2.7; DV:-5.0) ve dorsal hippocampus (AP:-3.5, ML: ±2.1; DV:-3.5; dura üzerinden mm), 2 µL/site. İki enjeksiyon yöntemleri arasında karşılaştırma kolaylaştırmak için her beyin alan bir Yarımküre ve 26 G künt bahşiş kuvars iğne veya diğer 30 G eğim-tip paslanmaz çelik iğne kullanarak infüzyon.</li>
	<li>Daha düşük akış 0.1 µL/dk, dura bir paslanmaz çelik eğim uçlu iğneyle nick ve beyin dokusu girerek dorso-ventral balta stereotaksik kolunda yavaşça indirin. İstediğiniz konuma geldiğinde, bir ek 0,1 mm pompa durdurmak, stereotaktik kol tarafından 0,1 mm yükseltmek ve 0.3 µL/dk akış istasyonlarında baştan gidin. Not: iğne düşürürken bir yavaş akış sağlamak için neden küçük parçaları iğne kendisi doku penetrasyonu önler bir pozitif basınç sağlamaktır. Böyle bir durumda çözüm teslimini bozulması uç, engel. İğne ve düşürücü hızını düşürerek yaklaşık 10 s/mm ise akış hızı çok yavaş olduğu için bu iğne parça kalır çözüm miktarda bu hedef sitede enjekte karşılaştırıldığında yok denecek kadar azdır anlamına gelir. Bu önlem iğneler ile yan delik kullanırken gerek kalmayabilir.</li>
	<li>Sayacı başlatmak ve enjekte etmek için istenen birimde bağlı olarak ihtiyaç duyduğu zaman (2 µL enjekte Eğer örneğin, 6 dk 40 sn) bekleyin. Kabarcık hareketi enjekte ederken izlemek. Sonunda, pompa durdurun ve yavaş yavaş iğne almadan önce 5 dakika bekleyin. Kuvars iğne tamamen ayıklandığında, pompa yeniden başlatın ve iğne ucunda bir damla oluşumu için kontrol edin.</li>
	<li>Kafatası yüzey kemik balmumu ile açılış mühür, Kan durdurucu sargı küçük resimleri kaldırmak ve kafa derisi dikiş, yara bir antibiyotik krem (örneğin, neosporin) ile çevresini kat ve hayvan ev kafese döndürür. Not: Bu makalede açıklanan deneyler için kurumsal etik kurul tarafından onaylanmış ötenazi Protokolü hayvanlar derin 43 mg/kg ketamin ve 7 mg/kg xylazine bir ı.p. enjeksiyon ile anestezi ve kesti. 48 h ve parafin gömülü için formalin postfixed beyin çıkarıldı. Koronal bölümler (8 µm) beyin bir microtome kullanarak dilimlenmiş.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Kirik, D., Rosenblad, C., Bj&#246;rklund, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+behavioral+and+neurodegenerative+changes+following+partial+lesions+of+the+nigrostriatal+dopamine+system+induced+by+intrastriatal+6-hydroxydopamine+in+the+rat.">Characterization of behavioral and neurodegenerative changes following partial lesions of the nigrostriatal dopamine system induced by intrastriatal 6-hydroxydopamine in the rat.</a> Exp Neurol. 152 (2), 259-277 (1998).</li><li>Paolone, G., Brugnoli, A., Arcuri, A., Mercatelli, D., Morari, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eltoprazine+prevents+levodopa-induced+dyskinesias+by+reducing+striatal+glutamate+and+direct+pathway+activity.">Eltoprazine prevents levodopa-induced dyskinesias by reducing striatal glutamate and direct pathway activity.</a> Mov Disord. 30 (13), 1728-1738 (2015).</li><li>Paolone, G., Lee, T. M., Sarter, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+to+pay+attention:+attentional+performance+time-stamped+prefrontal+cholinergic+activation,+diurnality,+and+performance.">Time to pay attention: attentional performance time-stamped prefrontal cholinergic activation, diurnality, and performance.</a> J Neurosci. 32 (35), 12115-12128 (2012).</li><li>Shoichet, M. S., Winn, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+delivery+to+the+central+nervous+system.">Cell delivery to the central nervous system.</a> Adv Drug Deliv Rev. 42, 81-102 (2000).</li><li>Simonato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+in+gene+therapy+for+neurological+disorders.">Progress in gene therapy for neurological disorders.</a> Nature RevNeurol. 9, 277-291 (2013).</li><li>Bj&#246;rklund, H., Olson, L., Hahl, D., Schwarcz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-and+Long-Term+Consequences+of+Intracranial+Injections+of+the+Excitotoxin,+Quinolinic+Acid,+as+Evidenced+by+GFA+Immunohistochemistry+of+Astrocytes.">Short-and Long-Term Consequences of Intracranial Injections of the Excitotoxin, Quinolinic Acid, as Evidenced by GFA Immunohistochemistry of Astrocytes.</a> Brain Res. 317, 267-277 (1986).</li><li>Paradiso, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localized+delivery+of+fibroblast+growth+factor-2+and+brain-derived+neurotrophic+factor+reduces+spontaneous+seizures+in+an+epilepsy+model.">Localized delivery of fibroblast growth factor-2 and brain-derived neurotrophic factor reduces spontaneous seizures in an epilepsy model.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (17), 7191-7196 (2009).</li><li>Falcicchia, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silencing+Status+Epilepticus-Induced+BDNF+Expression+with+Herpes+Simplex+Virus+Type-1+Based+Amplicon+Vectors.">Silencing Status Epilepticus-Induced BDNF Expression with Herpes Simplex Virus Type-1 Based Amplicon Vectors.</a> PLoS One. 11 (3), 1-17 (2016).</li><li>Munoz, J. L., Coles, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quartz+micropipettes+for+intracellular+voltage+microelectrodes+and+ion-selective+microelectrodes.">Quartz micropipettes for intracellular voltage microelectrodes and ion-selective microelectrodes.</a> J Neurosci Meth. 22 (1), 57-64 (1987).</li><li>Kilkenny, C., Browne, W., Cuthill, I. C., Emerson, M., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+research:+reporting+in+vivo+experiments:+the+ARRIVE+guidelines.">Animal research: reporting in vivo experiments: the ARRIVE guidelines.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 31, 991-993 (2011).</li><li>Torres, E. M., Trigano, M., Dunnett, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translation+of+cell+therapies+to+the+clinic:+characteristics+of+cell+suspensions+in+large-diameter+injection+cannulae.">Translation of cell therapies to the clinic: characteristics of cell suspensions in large-diameter injection cannulae.</a> Cell Transplant. 24, 737-749 (2015).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bu makalede açıklanan tekniği için çeşitli amaçlar12gerçekleştirilen microinjections optimize etmek için giriş bölümünde özetlenen ihtiyaçlarını yerine getirir. Burada açıklanan iğneler zarar en az, aslında algılanabilir seviyeye azaltmak; varyans (viraj eğilimli olduğunu) cam iğneler ile kuvars iğneler sert ve derin koordinatlarındaki bile istenen beyin bölgesi güvenilir bir doz emin olun. Ayrıca, ucu delik beyin dokusu içinde ekleme sırasında tıkandı bile yan delik çözüm olarak dağıtılmasını sağlar.
Sınırlamalar ve alternatifleri. Nedeniyle yüksek erime noktası, kuvars kılcal bir geleneksel çektirmenin, Yaniçekti, onlar pahalı ekipmana gerektirir. Cam kılcal damarlar hasar doku, ama daha az enjeksiyonları derin yapılar için güvenilir ve daha kırılgan (Yani, tasarım açısından daha az esnek) kaçınmak açısından aynı derecede iyi. Ancak, Eğer amaç yüzeysel yapılarda enjeksiyon gibi korteks veya dorsal Hipokampus ve iğne kırılma riskini artıracak birden fazla delik için bir gereksinim, cam iğneler kesinlikle geçerli ve ucuz bir alternatif temsil.
Bir kuvars ve cam iğneler onlar birden fazla enjeksiyonu Kanüller kılavuzunu birleştiğinde paslanmaz çelik iğneler gibi farklı zaman noktalarda izin vermez olduğunu kısıtlamasıdır. Bu nedenle, çelik iğneler ile nispeten büyük (26 G) ve/veya künt kenar iğne önlemek için tavsiye bu uygulamalar için en iyi seçenek kalır.
İletişim kuralında kritik adımlar. Genel olarak, yukarıda açıklanan protokol çok basittir ve microinjections içinde deneyimli herhangi bir araştırmacı için kullanmak zor olmamalı. İğneler kullanılabilir yapıldıktan sonra istihdam için anestezi, ameliyat, yavaş ekleme ve kaldırma iğne, bir minipump tarafından düzenlenir infüzyon sürekli ve yavaş oranı normal önlemler iyi ve tekrarlanabilir sonuçlar sağlayacak.
Avantajları ve daha fazla gelişmeler. Yukarıda belirtildiği gibi kuvars iğneler önemli avantajı çift iğne tasarımını kişiselleştirmek imkanı ile en az mekanik zarar etmektir. Birden fazla delik ve belirli deneysel ihtiyaçlarına adapte edilebilir farklı çaplarda iğne hazırladık. Örneğin, farklı çaplarda viral Vektörler ve uyuşturucu veya toksinler ile karşılaştırıldığında hücreleri enjekte için gerekli olabilir; birden fazla delik enjeksiyon çözüm daha büyük bir alan içinde büyük miktarda sağlamak yararlı olabilir ve zor geometri beyin bölgeleri için özellikle yararlı olabilir. Bu teknik çok yönlülük gen terapisi veya hücreler için viral vektörler dokusunda yayılmış en iyi duruma getirmek için yararlanabilir. Nitekim, bu iğneler viral vektörler veya hücreleri enjekte etmek için kullanın.
Diğer avantajı iğneler yeniden kullanma imkanı içerir. Bunu yapmak için iğne etanol ve çözüm ve olası doku artıklarını çıkarın çamaşır suyu ile temizlenebilir. Bir tek iğne tekrarlanan kullanımı yordamı nispeten yüksek maliyetli üretim rağmen düşük maliyetli yapabilir.

Microinjections farmakolojik aktif bileşikler teslim etmek için uzun bir süre için belirli beyin alanlarda nöronal aktivite modüle için kullanılmıştır. Buna ek olarak, toksinler nörodejeneratif olaylar karakteristik bazı hastalıkların, örneğin 6-hidroksi-Parkinson hastalığı taklit etmek için nigrostriatal dopamin sisteminde dopamin taklit etmek için belirli nöron popülasyonları yakınındaki enjekte kullanılmıştır 1 , 2 veya anma 192 IgG saporin lezyon kolinerjik sistemi3için. Daha yakın zamanlarda, mikroenjeksiyon işlemleri viral vektörler veya hücreleri Greftler deneysel beyin bozuklukları4,5gen veya hücre tedavisi için teslim etmek için kullanılmaktadır.
Bu çalışmalarda kullanılan iğneler klasik tip paslanmaz çelikten imal edilmiştir. Ne kadar kolay ve pratik kullanmak, bir dizi sorunları6çelik iğneler var: onlar nispeten büyük ve doku hasarı, kan - beyin bariyerini kaçağı ve astrocytes; aktivasyonu ile neden Ayrıca, onlar bir engel oluşturmak veya hatta tamamen kaçınmak istediğiniz çözüm akışının iğne alır beyin dokusunun Asitleme üretebilir. Daha yakın zamanlarda, hazırlanan özel kılcal damarlar üzerinden tanıtıldı içinde cam iğne7,8kullanın. Bunlar önemli doku hasarı ne de astrocyte harekete geçirmek, neden olmaz ama nispeten esnek ve yerelleştirme (kişisel gözlemler) doğruluğunu azaltarak derin yapılarını tanıttığında viraj.
Bu nedenle olası hasar olduğu kadar hassasiyet ve tekrarlanabilirlik artırırken (özellikle hasar iyileşir deneyler yaparken) azaltmak için bir ihtiyaç olduğunu (Yani, tüm çözüm iletilmesini sağlamak ve doğru yerelleştirme emin olun). Ayrıca, en iyi beyin alanlarda değişen geometrileri ile enjekte çözüm dağıtımını sağlamak için farklı iğne tasarımları kullanmak arzu olacaktır. Bu makalede, biz hazırlamak ve kuvars iğneler microinjections kemirgen beyin için kullanmak için bir iletişim kuralı tanımlamak. Yüksek erime noktası nedeniyle kuvars kılcal bir geleneksel çektirmenin çekti ve bu nedenle, geçmişte iğneler oluşturmak için kullanılmamış. Kuvars, ancak, cam, özellikle yüksek sertlik ve ara direnç9bazı önemli avantaj sunar. Onların sertlik nedeniyle kuvars iğneler ideal enjeksiyonları ventral beyin bölgeleri için uygundur. Onların kırılma direnci nedeniyle onlar bile karmaşık geometriler10ile beyin bölgeleri hedefleme en etkili kanıtlayabilir tasarımlar elde birden fazla delik eklemek modellenebilir.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Quartz capillaries</td>
			<td>Sutter Instruments, Novato, CA USA</td>
			<td>Q100-50-10</td>
			<td>Without filament</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puller</td>
			<td>Sutter</td>
			<td>P2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette storage jar</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI), Sarasota, FL, USA</td>
			<td>E210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser microdissector</td>
			<td>Leica Microsystems, Wetzlar, Germany</td>
			<td>LMD6500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe</td>
			<td>Hamilton ILS Innovative Labor Systeme GmbH, St&#376;tzerbach, Germany</td>
			<td>19138-U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinfusion pump</td>
			<td>Univentor, Zejtun, Malta</td>
			<td>Model 864</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manual microinjection pump kit</td>
			<td>WPI</td>
			<td>Item#: MMP-KIT</td>
			<td>Kit allowing for micropipettes to be securely mounted to the stereotactic frame</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision Drill</td>
			<td>Proxxon</td>
			<td>28510 MicroMot 50/E</td>
			<td>Ball bearing drive shaft with variable speed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artficial Cerebral Spinal Fluid</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>3525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles 26 G Blunt and 30 G Bevel</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>26 G Blunt: 19138-U 
			30 G Bevel: 20757</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica, Germany</td>
			<td>LEICA RM212RT</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

personalized needles for microinjections in the rodent brain

Microinjections uyuşturucu ya da toksinlerin belirli beyin bölgeleri içinde teslim etmek için uzun süre kullanılmıştır ve daha yakın zamanlarda, bunlar gen veya hücre terapi ürünleri teslim etmek için kullanılmıştır. Ne yazık ki, şu anki mikroenjeksiyon teknikleri için birden çok nedeni suboptimal çelik veya cam iğne kullanın: özellikle, çelik iğneler doku hasarına neden olabilir ve cam iğne eğmek derinden hedef bölge eksik beyin düşürdü. Bu makalede, biz hazırlamak ve yararlı özellikleri birleştirmek kuvars iğne kullanmak için bir iletişim kuralı tanımlamak. Bu iğneler tespit doku hasarı üretmek değildir ve çok sert olmak, güvenilir teslim istenen beyin bölgesinde derin koordinatları kullanırken bile olun. Ayrıca, birden fazla delik istenilen çap yaparak iğne tasarımını kişiselleştirmek mümkündür. Enjeksiyon hücrelerinin büyük delikler kolaylaştırmak, ancak birden fazla delik çözüm daha büyük bir alan içinde büyük miktarda enjeksiyon kolaylaştırmak. Buna ek olarak, bu kuvars iğneler temizlenmesi ve kullanılan, yeniden öyle ki yordamı maliyet-etkin hale gelir.

Biz fare dorsal Hipokampus ve striatum iki klasik, 26 G künt end ve 30 G eğimli kenar ile karşılaştırıldığında bir kuvars iğne (60 µM dış çapı uç; bir 20 µM çapı yan delik; tip C, şekil 1) kullanarak doğrudan mikroenjeksiyon tarafından indüklenen zarar göre Paslanmaz çelik iğneler. Bu amaç için aCSF sağ 2 µL enjekte ve dorsal Hipokampus ve sırasıyla kuvars ve çelik iğne ve, 48 saat sonra enjeksiyon kullanarak striatum yaptı, Hematoksilen-Eozin (HE) Boyama kullanarak doku hasarı değerlendirildi. Enjeksiyon daha iyi takdir sonra farklı iğne tarafından üretilen akut mekanik hasar biz erken bir saat noktası seçti (zamanında, karanlık doku tamir mekanizmaları ilk hasar)7.
Beyin bölgeleri 26 G çelik künt son iğne enjekte işaretli hasar (şekil 3) sergilenen ise yukarıda açıklanan Protokolü kuvars iğne tespit herhangi bir hasar ve bir ancak algılanabilir iğne parça üretmek değildi. 30 G eğim açısı (30 °) paslanmaz çelik iğne bir daha sınırlı, henüz açıkça tespit beyin lezyon striatum (4B rakam) ve dorsal oluşur (şekil 5) indüklenen. ACSF enjeksiyon deneyler ayrı bir kümesi içinde her iki iğne ile aynı derecede başarılı olduğunu kanıtlamak için biz Trypan mavi (şekil 4A) 2 µL enjekte. Önemlisi, tüm alınan kuvars iğneler mükemmel olduğu gibi Yani, biz hiçbir zaman herhangi bir hasar nedeniyle ekleme manevralar gözlenen.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55751/55751fig1.jpg"> Şekil 1: ipucu ve sıvı enjeksiyon için istihdam delik farklı çaplarda gösterilen bir kuvars iğne ucu mikroskobik görüntü. Düşük büyütme resim(a)ve (B) daha yüksek büyütme ve (C). İğne farklı hazır görgü (farklı uzunlukta, delik numaraları ve delik boyutları) anatomisi beyin bölgesi, Yayilim amaç ve (B) gösterildiği gibi çözüm, viskozite ve (C). Delik ve düşük güç lazer mikrodiseksiyon kullanılarak elde ipucu düzgün kesme dikkat edin. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55751/55751fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55751/55751fig2.jpg"> Resim 2: microinjections için tuzak kurdu. Kuvars pipet (solda) ve stereotaktik micropositioner için (sağ) paslanmaz çelik iğne güvenliğini sağlamak için kullanılan kit gösteren resim. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55751/55751fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55751/55751fig3.jpg"> Şekil 3: kuvars iğne kullanarak daha az hasar gösterilen koronal bölümler. Koronal sıçan beyin hasar üretmek bir kuvars iğne şekil 1 c (sol taraf) ve 26 G künt bitiş paslanmaz çelik iğne (teçhizat gösterildiği gibi kullanarak 2 µL aCSF iğne ile arasında bir karşılaştırma gösterilen striatum düzeyde bölümlerini (8 µm kalınlık) HT yan). Biraz hasar uygun olmayan şekilde derin sondaj kafatası nedeniyle kuvars iğneyi tarafında kortekste üretildi. Bu görüntüleri iki farklı hayvanlardan alınan, temsilcisi denemeye dahil tüm 5 hayvanların çoğu (ölçek çubuğu 500 µm =). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55751/55751fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55751/55751fig4.jpg"> Şekil 4: yaymak ve doku hasarı. (A)dağıtım, striatum (solda), 30 G eğimli kenar paslanmaz çelik iğne ile karşılaştırıldığında (sağda) kuvars iğneyle enjekte Trypan mavi. (B) Koronal bölümünde sıçan beyin striatum, düzeyde lekeli bir kuvars iğne ve 30 G eğimli kenar paslanmaz çelik iğne arasında bir karşılaştırma gösterilen o ile (ölçek çubuğu 500 µm =). (Sol ve sağ), daha yüksek bir büyütme hasar kutularındaki (ölçek çubuğu 200 µm, 10 X =). Bu görüntüler denemeye dahil 5 hayvanların temsilcisi vardır. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55751/55751fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55751/55751fig5.jpg"> Şekil 5: zarar indüklenen bir kuvars iğne ve 26 G eğimli kenar paslanmaz çelik iğne dorsal Hipokampus düzeyde. Temsilcisi denemeye dahil 5 hayvanların burada gösterilir iki olgu (ölçek çubuğu 400 µm =). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55751/55751fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Personalized Needles for Microinjections in the Rodent Brain at JoVE.com

Personalized Needles for Microinjections in the Rodent Brain

Biz burada mikroenjeksiyon kuvars iğneleri kullanan kemirgen beyin için bir iletişim kuralı tanımlamak. Bu iğneler değil algılanabilir doku hasarı üretmek ve derin bölgelerde bile güvenilir teslim edilmesini sağlamak. Ayrıca, araştırma ihtiyaçlarına tarafından kişiselleştirilmiş tasarımlar adapte edilebilir ve yeniden kullanılabilir.

Microinjections kemirgen beyin için kişiselleştirilmiş iğneler

Microinjections have been used for a long time for the delivery of drugs or toxins within specific brain areas and, more recently, they have been used to ...

personalized-needles-for-microinjections-in-the-rodent-brain

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Neuroscience

11.1K Görüntüleme.  University of Ferrara. Biz burada mikroenjeksiyon kuvars iğneleri kullanan kemirgen beyin için bir iletişim kuralı tanımlamak. Bu iğneler değil algılanabilir doku hasarı üretmek ve derin bölgelerde bile güvenilir teslim edilmesini sağlamak. Ayrıca, araştırma ihtiyaçlarına tarafından kişiselleştirilmiş tasarımlar adapte edilebilir ve yeniden kullanılabilir.

Video: Personalized Needles for Microinjections in the Rodent Brain

Simultaneous fMRI and Electrophysiology in the Rodent Brain

To examine the neural basis of the blood oxygenation level dependent (BOLD) magnetic resonance imaging (MRI) signal, we have developed a rodent model in which functional MRI data and in vivo intracortical recording can be performed simultaneously. The combination of MRI and electrical recording is technically challenging because the electrodes used for recording distort the MRI images and the MRI acquisition induces noise in the electrical recording. To minimize the mutual interference of the two modalities, glass microelectrodes were used rather than metal and a noise removal algorithm was implemented for the electrophysiology data. In our studies, two microelectrodes were separately implanted in bilateral primary somatosensory cortices (SI) of the rat and fixed in place. One coronal slice covering the electrode tips was selected for functional MRI. Electrode shafts and fixation positions were not included in the image slice to avoid imaging artifacts. The removed scalp was replaced with toothpaste to reduce susceptibility mismatch and prevent Gibbs ringing artifacts in the images. The artifact structure induced in the electrical recordings by the rapidly-switching magnetic fields during image acquisition was characterized by averaging all cycles of scans for each run. The noise structure during imaging was then subtracted from original recordings. The denoised time courses were then used for further analysis in combination with the fMRI data. As an example, the simultaneous acquisition was used to determine the relationship between spontaneous fMRI BOLD signals and band-limited intracortical electrical activity. Simultaneous fMRI and electrophysiological recording in the rodent will provide a platform for many exciting applications in neuroscience in addition to elucidating the relationship between the fMRI BOLD signal and neuronal activity.

We have developed a method for simultaneous functional magnetic resonance imaging and electrophysiological recording in the rodent brain, providing a platform for the investigation of the relationship between neural activity and the blood oxygenation level dependent (BOLD) MRI signal.

Kemirgen Beyin aynı anda fMRI ve Elektrofizyoloji

To examine the neural basis of the blood oxygenation level dependent (BOLD) magnetic resonance imaging (MRI) signal, we have developed a rodent model in ...

Nörobilim

A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain

This video presentation was created to show a method of harvesting the two most important highly vascular structures, not residing within the brain proper, that support forebrain function. They are the cerebral surface (superficial) vasculature along with associated meninges (MAV) and the choroid plexus which are necessary for cerebral blood flow and cerebrospinal fluid (CSF) homeostasis. The tissue harvested is suitable for biochemical and physiological analysis, and the MAV has been shown to be sensitive to damage produced by amphetamine and hyperthermia 1,2. As well, the major and minor cerebral vasculatures harvested in MAV are of potentially high interest when investigating concussive types of head trauma. The MAV dissected in this presentation consists of the pial and some of the arachnoid membrane (less dura) of the meninges and the major and minor cerebral surface vasculature. The choroid plexus dissected is the structure that resides in the lateral ventricles as described by Oldfield and McKinley3,4,5,6. The methods used for harvesting these two tissues also facilitate the harvesting of regional cortical tissue devoid of meninges and larger cerebral surface vasculature, and is compatible with harvesting other brain tissues such as striatum, hypothalamus, hippocampus, etc. The dissection of the two tissues takes from 5 to 10 min total. The gene expression levels for the dissected MAV and choroid plexus, as shown and described in this presentation can be found at GSE23093 (MAV) and GSE29733 (choroid plexus) at the NCBI GEO repository. This data has been, and is being, used to help further understand the functioning of the MAV and choroid plexus and how neurotoxic events such as severe hyperthermia and AMPH adversely affect their function.

This video presentation shows a method of harvesting the two most important highly vascular structures that support forebrain function. They are the cerebral surface (superficial) vasculature along with associated meninges (MAV) and the choroid plexus which are necessary for cerebral blood flow and cerebrospinal fluid (CSF) homeostasis.

Rat Beyin gelen Serebral Yüzey damarları ve İlişkili Beyin zarları ve Diseksiyon ve Koroid Pleksus bir Görsel Açıklama

This video presentation was created to show a method of harvesting the two most important highly vascular structures, not residing within the brain ...

Direct Intraventricular Delivery of Drugs to the Rodent Central Nervous System

Due to an inability to cross the blood brain barrier, certain drugs need to be directly delivered into the central nervous system (CNS). Our lab focuses specifically on antisense oligonucleotides (ASOs), though the techniques shown in the video here can also be used to deliver a plethora of other drugs to the CNS. Antisense oligonucleotides (ASOs) have the capability to knockdown sequence-specific targets 1 as well as shift isoform ratios of specific genes 2. To achieve widespread gene knockdown or splicing in the CNS of mice, the ASOs can be delivered into the brain using two separate routes of administration, both of which we demonstrate in the video.
The first uses Alzet osmotic pumps, connected to a catheter that is surgically implanted into the lateral ventricle. This allows the ASOs to be continuously infused into the CNS for a designated period of time. The second involves a single bolus injection of a high concentration of ASO into the right lateral ventricle. Both methods use the mouse cerebral ventricular system to deliver the ASO to the entire brain and spinal cord, though depending on the needs of the study, one method may be preferred over the other.

We describe a method to target drugs to the central nervous system by either implanting a catheter or performing a bolus injection into the right lateral ventricle in mice. We focus specifically on the delivery of antisense oligonucleotides. This technique is readily adaptable to other drugs and to rats.

Kemirgen Merkezi Sinir Sistemi İlaçların doğrudan Intraventriküler teslim

Due to an inability to cross the blood brain barrier, certain drugs need to be directly delivered into the central nervous system (CNS). Our lab focuses ...

Growing Neural Stem Cells from Conventional and Nonconventional Regions of the Adult Rodent Brain

Recent work demonstrates that central nervous system (CNS) regeneration and tumorigenesis involves populations of stem cells (SCs) resident within the adult brain. However, the mechanisms these normally quiescent cells employ to ensure proper functioning of neural networks, as well as their role in recovery from injury and mitigation of neurodegenerative processes are little understood. These cells reside in regions referred to as &#34;niches&#34; that provide a sustaining environment involving modulatory signals from both the vascular and immune systems. The isolation, maintenance, and differentiation of CNS SCs under defined culture conditions which exclude unknown factors, makes them accessible to treatment by pharmacological or genetic means, thus providing insight into their in vivo behavior. Here we offer detailed information on the methods for generating cultures of CNS SCs from distinct regions of the adult brain and approaches to assess their differentiation potential into neurons, astrocytes, and oligodendrocytes in vitro. This technique yields a homogeneous cell population as a monolayer culture that can be visualized to study individual SCs and their progeny. Furthermore, it can be applied across different animal model systems and clinical samples, being used previously to predict regenerative responses in the damaged adult nervous system.

Neural stem cells harvested from the adult brain are increasing utilized in applications ranging from the basic research of nervous system development to exploring potential clinical applications in regenerative medicine. This makes rigorous control in the isolation and culturing conditions used to grow these cells critical to sound experimental outcomes.

Yetişkin Kemirgen Beyin konvansiyonel ve konvansiyonel olmayan Bölgelerinden Nöral Kök Hücreler Büyüyen

Recent work demonstrates that central nervous system (CNS) regeneration and tumorigenesis involves populations of stem cells (SCs) resident within the ...

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution has been a long sought tool for neuroscientists in the systems-level search for the neural circuitry governing complex behavioral states. Optogenetics is a cutting-edge tool that is revolutionizing the field of neuroscience and represents one of the first systematic approaches to enable causal testing regarding the relation between neural signaling events and behavior. By combining optical and genetic approaches, neural signaling can be bi-directionally controlled through expression of light-sensitive ion channels (opsins) in mammalian cells. The current protocol describes delivery of specific wavelengths of light to opsin-expressing cells in deep brain structures of awake, freely-moving rodents for neural circuit modulation. Theoretical principles of light transmission as an experimental consideration are discussed in the context of performing in vivo optogenetic stimulation. The protocol details the design and construction of both simple and complex laser configurations and describes tethering strategies to permit simultaneous stimulation of multiple animals for high-throughput behavioral testing.

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

Optogenetics has become a powerful tool for use in behavioral neuroscience experiments. This protocol offers a step-by-step guide to the design and set-up of laser systems, and provides a full protocol for carrying out multiple and simultaneous in vivo optogenetic stimulations compatible with most rodent behavioral testing paradigms.

Kemirgen Santral Sinir Sistemi vivo optogenetic Stimülasyon içinde

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful analysis of synaptic transmission modulation when performing field potential or intracellular recordings. This manuscript describes methodological aspects that might be helpful in improving experimental conditions for the maintenance of acute brain slices and for recording field excitatory postsynaptic potentials in a commercially available submersion chamber with an outflow-carbogenation unit. The outflow-carbogenation helps to stabilize the oxygen level in experiments that rely on the recycling of a small buffer reservoir to enhance the cost-efficiency of drug experiments. In addition, the manuscript presents representative experiments that examine the effects of different carbogenation modes and stimulation paradigms on the activity-dependent synaptic plasticity of synaptic transmission.

This protocol describes the stabilization of the oxygen level in a small volume of recycled buffer and methodological aspects of recording activity-dependent synaptic plasticity in submerged acute hippocampal slices.

Sinaptik plastisite akut Hipokampal dilimleri bir küçük hacimli geri dönüşüm-, perfüzyon- ve batma-tipi oda sistemi içinde tutulan kayıt

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Effects of Blast-induced Neurotrauma on Pressurized Rodent Middle Cerebral Arteries

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral vascular effects. Impact (i.e., non-blast) traumatic brain injury (TBI) is known to decrease pressure autoregulation in the cerebral vasculature in both humans and experimental animals. The hypothesis that blast-induced traumatic brain injury (bTBI), like impact TBI, results in impaired cerebral vascular reactivity was tested by measuring myogenic dilatory responses to reduced intravascular pressure in rodent middle cerebral arterial (MCA) segments from rats subjected to mild bTBI using an Advanced Blast Simulator (ABS) shock tube. Adult, male Sprague-Dawley rats were anesthetized, intubated, ventilated and prepared for Sham bTBI (identical manipulation and anesthesia except for blast injury) or mild bTBI. Rats were randomly assigned to receive Sham bTBI or mild bTBI followed by sacrifice 30 or 60 min post-injury. Immediately after bTBI, righting reflex (RR) suppression times were assessed, euthanasia at the time points post-injury was completed, the brain was harvested and the individual MCA segments were collected, mounted and pressurized. As the intraluminal pressure perfused through the arterial segments was reduced in 20 mmHg increments from 100 to 20 mmHg, MCA diameters were measured and recorded. With decreasing intraluminal pressure, MCA diameters steadily increased significantly above baseline in the Sham bTBI groups while MCA dilator responses were significantly reduced (p &#60; 0.05) in both bTBI groups as evidenced by the impaired, smaller MCA diameters recorded for the bTBI groups. In addition, RR suppression in the bTBI groups was significantly (p &#60; 0.05) higher than in the Sham bTBI groups. MCA&#39;s collected from the Sham bTBI groups exhibited typical vasodilatory properties to decreases in intraluminal pressure while MCA&#39;s collected following bTBI exhibited significantly impaired myogenic vasodilatory responses to reduced pressure that persisted for at least 60 min after bTBI.

Here, we present a protocol to describe methods for ex vivo vascular reactivity determination following a primary blast traumatic brain injury (bTBI) using isolated, pressurized, rodent middle cerebral arterial (MCA) segments. bTBI induction is accomplished using a shock tube, also known as an Advanced Blast Simulator (ABS) device.

Serebral arterler patlama kaynaklı Neurotrauma etkilerini basınçlı kemirgen orta

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral ...

Translational Brain Mapping at the University of Rochester Medical Center: Preserving the Mind Through Personalized Brain Mapping

The Translational Brain Mapping Program at the University of Rochester is an interdisciplinary effort that integrates cognitive science, neurophysiology, neuroanesthesia, and neurosurgery. Patients who have tumors or epileptogenic tissue in eloquent brain areas are studied preoperatively with functional and structural MRI, and intraoperatively with direct electrical stimulation mapping. Post-operative neural and cognitive outcome measures fuel basic science studies about the factors that mediate good versus poor outcome after surgery, and how brain mapping can be further optimized to ensure the best outcome for future patients. In this article, we describe the interdisciplinary workflow that allows our team to meet the synergistic goals of optimizing patient outcome and advancing scientific understanding of the human brain.

This article provides an overview of a multi-modal brain mapping program designed to identify regions of the brain that support critical cognitive functions in individual neurosurgery patients.

Rochester Tıp Merkezi Üniversitesi'nde Çeviri beyin haritalama: Kişiselleştirilmiş Beyin Haritalama ile Zihin Korunması

The Translational Brain Mapping Program at the University of Rochester is an interdisciplinary effort that integrates cognitive science, neurophysiology, ...

Using Near-infrared Fluorescence and High-resolution Scanning to Measure Protein Expression in the Rodent Brain

Neuroscience is the study of how cells in the brain mediate various functions. Measuring protein expression in neurons and glia is critical for the study of neuroscience as cellular function is determined by the composition and activity of cellular proteins. In this article, we describe how immunocytochemistry can be combined with near-infrared high-resolution scanning to provide a semi-quantitative measure of protein expression in distinct brain regions. This technique can be used for single or double protein expression in the same brain region. Measuring proteins in this fashion can be used to obtain a relative change in protein expression with an experimental manipulation, molecular signature of learning and memory, activity in molecular pathways, and neural activity in multiple brain regions. Using the correct proteins and statistical analysis, functional connectivity among brain regions can be determined as well. Given the ease of implementing immunocytochemistry in a laboratory, using immunocytochemistry with near-infrared high-resolution scanning can expand the ability of the neuroscientist to examine neurobiological processes at a systems level.

Here, we present a protocol that uses near-infrared dyes in conjunction with immunohistochemistry and high-resolution scanning to assay proteins in brain regions.

Kemirgen beyninde protein Ifadesini ölçmek için yakın kızılötesi floresan ve yüksek çözünürlüklü tarama kullanma

Neuroscience is the study of how cells in the brain mediate various functions. Measuring protein expression in neurons and glia is critical for the study ...

Quantifying Subcellular Ubiquitin-proteasome Activity in the Rodent Brain

The ubiquitin-proteasome system is a key regulator of protein degradation and a variety of other cellular processes in eukaryotes. In the brain, increases in ubiquitin-proteasome activity are critical for synaptic plasticity and memory formation and aberrant changes in this system are associated with a variety of neurological, neurodegenerative and psychiatric disorders. One of the issues in studying ubiquitin-proteasome functioning in the brain is that it is present in all cellular compartments, in which the protein targets, functional role and mechanisms of regulation can vary widely. As a result, the ability to directly compare brain ubiquitin protein targeting and proteasome catalytic activity in different subcellular compartments within the same animal is critical for fully understanding how the UPS contributes to synaptic plasticity, memory and disease. The method described here allows collection of nuclear, cytoplasmic and crude synaptic fractions from the same rodent (rat) brain, followed by simultaneous quantification of proteasome catalytic activity (indirectly, providing activity of the proteasome core only) and linkage-specific ubiquitin protein tagging. Thus, the method can be used to directly compare subcellular changes in ubiquitin-proteasome activity in different brain regions in the same animal during synaptic plasticity, memory formation and different disease states. This method can also be used to assess the subcellular distribution and function of other proteins within the same animal.

This protocol is designed to efficiently quantify ubiquitin-proteasome system (UPS) activity in different cellular compartments of the rodent brain. Users are able to examine UPS functioning in nuclear, cytoplasmic and synaptic fractions in the same animal, reducing the amount of time and number of animals needed to perform these complex analyses.

Subcellular Ubiquitin ölçümü-kemirgen beyinde proteasom aktivitesi

The ubiquitin-proteasome system is a key regulator of protein degradation and a variety of other cellular processes in eukaryotes. In the brain, increases ...