Bu çalışmada Ulusal Kanser Enstitüsü (R01CA166376 ve R01CA191489 D.X. Nguyen için) ve Savunma Bakanlığı (W81XWH-16-1-0227 D.X. Nguyen için) gelen hibe tarafından finanse edildi.

Tüm deneyler kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) Yale Üniversitesi'nde iletişim kuralları uyarınca gerçekleştirilmiştir.
1. set Up / reaktifleri hazırlanması.
<ol><li>
Bleomycin Dikkat: genel olarak uyumlu sistem (GHS üzerinde) sınıflandırma ve etiketleme, kimyasal bağlı olarak, bleomycin bir GHS08 sa˜l ' sınıflandırılır.<ol>
<li>Bleomycin bir kimyasal başlıklı hazırlayın. 15 U 5 mL steril fosfat tamponlu tuz (PBS) de resuspend.</li>
		<li>Aliquot 100-200 µL çözüm cam içine tüp ve bunları daha sonra kullanmak için-20 ° C'de dondurmak. Düzgün tüpleri resuspension tarihi ile etiketleyin. Bu tarihten itibaren 6 ay içinde kullanın. Not: Her fare zorlanma bleomycin26farklı bir duyarlılık vardır. Bleomycin her fare zorlanma için farklı dozlarda test tavsiye edilir. Fare suşları ve temsilcisi deneylerde kullanılan bleomycin karşılık gelen doz Tablo 1' de listelenmiştir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Fareler
	<ol>
<li>Deney için gerekli fare satın almak ve fareler 7 gün önce enjeksiyon alışmana izin. İnfüzyon Biyogüvenlik mahallede gerçekleştirin. Bleomycin infüzyon önce standart kurumsal yordamları kullanarak bir BSL2 Oda BSL2 sigara uyumlu odasına ev sahipliği hayvanların aktarın. Fareler 6-8 haftalık enjekte. Dikkat: tehlikeli ajanlar, Biyogüvenlik seviye 2 için kurumsal yönergeleri (BSL2) ve IACUC onay aşağıdaki fareler enjekte. Not: temsilcisi deneyler için satın fare Malzemeler tablolistelenir. Sadece erkek fareler kullanılmıştır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Akciğer kanseri hücre hatları
	<ol>
<li>Kültür kendi ortamlarına hücre hatlarında istenilen. Enjeksiyon önce kısa tandem tekrar DNA profillemesi veya uygun hücre satır kimlik sağlamak için genetik test gerçekleştirin. Vivo ve ex vivo Imaging kolaylaştırmak için hücre hatları timidin kinaz, yeşil flüoresan protein (GFP) ve luciferase füzyon muhabir27ifade bir lentivirus ile bulaştırmak ve muhabir pozitif hücrelerinin floresans tarafından sıralamak engraftment önce (FACS) sıralama hücre aktif. Hatları Mikoplazma için 6 ayda bir test.<ol>
<li>Fetal sığır Serum (FBS), Roswell Park Memorial Enstitüsü Orta (RPMI) % 10 ile kullanarak üretici tarafından önerilen gibi H2030 insan kanser hücre kültürünü kültür penisilin-streptomisin ve amfoterisin b</li>
			<li>Kültür 368T1 fare hücre kültürünü ( KrasG12D; p53- / - fare--dan türetilmiş) % 10 ile Dulbecco'nın modifiye kartal Orta (DMEM) kullanarak FBS, penisilin-streptomisin ve amfoterisin b</li>
			<li>RPMI % 10 ile kullanarak PC9 insan kanser hücre kültürünü kültür FBS, penisilin-streptomisin ve amfoterisin b</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. bleomycin tedavi
<ol><li>Fareler intratracheally bleomycin ile 14 gün önce tümör hücre engraftment enjekte edeceğim.</li>
	<li>Bleomycin hisse senedi üzerinde buz enjeksiyon öncesinde 2 h çözülme.</li>
	<li>Bir kez çözdürülen, bleomycin istenen çalışma konsantrasyonu (0.02 U/50 µL veya 0.005 U/50 µL) sulandırmak ve buz üzerinde tutun. Not: (Tablo 1) deneyler için kullanılan fare zorlanma bleomycin konsantrasyon bağlıdır. Bleomycin farelerde titrasyon en uygun doz belirlemek için yapılmalıdır.</li>
	<li>Ketamin ve xylazine 10 mg/mL ve 1 mg/mL, son bir konsantrasyon için sırasıyla sulandrarak anestezi hazırlamak, 1 mL şırınga ve 27 G iğne kullanarak, her fare 100/10 mg/kg intraperitoneally ketamin/xylazine çözüm enjekte edilerek anestezi anılan sıraya göre.</li>
	<li>Fareler nefes izlemek ve bir ayak çimdik istihdam. Fare çimdik tırnağa vermezse uygun anesthetization doğrulayın. Veteriner merhem gözleri kuruluk anestezi iken altında önlemek için uygulayın.</li>
	<li>1 fare bir entübasyon platformu üzerinde bir anda sırtını karşı platform ile ön dişlerinin asarak yerleştirin.</li>
	<li>Trakea görselleştirme ile yardımcı olmak için bir fiber optik ışığı kullanarak üst gögüs aydınlatmak. Farenin ağzı açık ve dil yavaşça steril düz forseps ile çekin.</li>
	<li>Bir damar içi kateter iğne olmadan nefes engelleme önlemek için kullanın. Pozisyon beyaz ışık üzerinde Kateter borusu açılışa yayılan.</li>
	<li>Kateter üst ön dişleri ulaşıncaya kadar Kateter borusu yerleştirin. Trakea kateterin uygun yerleştirme kateter açılış ağız ile parlayan beyaz ışık görselleştirme tarafından onaylayın.</li>
	<li>Bir pipet kullanarak, bleomycin veya araç (PBS) 50 µL birimin tümü inhale sağlamak için doğrudan kateter dağıtmak. Steril koşullarda bu adımı gerçekleştirin.</li>
	<li>Kateter doğru eklediyseniz, fare hemen kateter içeriğini nefes. Birimin tümü kateter geçecek kadar birkaç saniye bekleyin. Daha sonra kateter trakea kaldırmak ve % 10 çamaşır suyu çözümde atmayın. Not: 2.7-2,11 adımlardan fare başına ortalama saat yaklaşık 5 dk dır.</li>
	<li>Fare sıvı teneffüs edilmesi değil, dikkatli bir şekilde nefes izlemek ve kateter konumunu ayarla. Fare solunum durur, kateter hemen kaldırın ve normal kateter yeniden takmadan önce nefes devam etmek fareyi izin.</li>
	<li>Enjekte fareyi bir IACUC onaylı ısıtma yastığını onların geri kurtarma için düz bir yüzeye yerleştirin. Tüm prosedürü fare başına 10 dk sürer. Enjeksiyon tamamen iyileşti kadar diğer hayvanların şirkete uğramıştır bir hayvan döndürmüyor.</li>
	<li>24 h için kafes "Tehlikeli kimyasal ın Use" kartı yerleştirin.</li>
</ol>3. izleme fareler sonrası entübasyon
<ol><li>Anesteziden fareler uyanıncaya kadar fareler solunum için hemen entübasyon ve sonra her 15 dk sonra izlemek. Onlar sternal recumbency korumak için yeterli bilinci yerine kadar fareler sahipsiz bırakmayın.</li>
	<li>İntraperitoneally ağrı hafifletmek için ketoprofen (5 mg/kg) enjekte.</li>
	<li>Fareler 24 saat mesaj entübasyon ve haftada 3 kez hastalık belirtisi için inceleyin.</li>
	<li>Yordam, hayvan kimlik, yordam türünü, anestezi ve ameliyat sonrası izleme gözlemler kez tür tarihi bir kaydını tutmak.</li>
	<li>Fareler için kilo kaybı, solunum güçlüğü, davranış bozuklukları ve vücut durumu puanı izlemek < 2 (vertebral sütunun belirgin/dorsal pelvik kemik segmentasyon aşikar) iki haftada bleomycin enjeksiyonu takiben.</li>
	<li>Solunum zorluğu altında fare veya vücut kitle CO2 veya ketamin/xylazine servikal çıkığı tarafından takip kaybı % 15 yaşamış fareler ötenazi. Ötenazi palpasyonla solunum aktivitesi için yaparak onaylayın.</li>
</ol>4. akciğer adenokarsinom hücre hatları engraftment.
Not: engraftment hücre bleomycin (adım 2.1) enjeksiyon sonra 14 gün gerçekleştirmek.
<ol><li>Hücreleri 75 cm2 şişeler içinde karşılık gelen medya ile enjeksiyon gün önce 3 gün boyunca adım 1.3 belirtildiği gibi rahatsız edilmeden büyümeye izin. Not: Onlar enjeksiyon gününde % 80 birleşmesi olmalıdır (hangi karşılık gelen 2-3 x 10 için6 hücre bağlı olarak her şişesi ').</li>
	<li>75 cm2 şişeler ile Oda sıcaklığında 5 mL de PBS üzerinde büyüyen hücreler yıkayın.</li>
	<li>PBS Aspire edin ve tripsin 1,5 mL hücrelere ekleme ve hücreleri (tipik olarak 2-5 dk) ayırmak kadar 37 ° C'de hücreler kuluçkaya. Not: Her 2 min için hücre dekolmanı plastik şişeye veya hafif bir mikroskop altında alt basit görselleştirme tarafından kontrol önerilir. 5 dk, kuluçka tripsin ile fazla olamaz.</li>
	<li>4 mL % 10 içeren medya ekleyerek tripsin nötralize FBS (adım 4.1 olarak aynı medya). 15 mL tüp içine hücreleri toplamak ve vasıl 200 x g oda sıcaklığında 3 dk santrifüj kapasitesi.</li>
	<li>Medya Aspire edin ve hücre Pelet hücreleri yıkamak için PBS 5 mL resuspend. Hücreleri 200 x g hücreleri cips için oda sıcaklığında 3 dk de santrifüj kapasitesi. Bu 1 kez tekrarlayın.</li>
	<li>PBS Aspire edin ve Pelet PBS 1,5 ml şişe başına resuspend.</li>
	<li>Hücre karışımdan 50 µL trypan mavi 50 µL ile karıştırın ve bir hücre sayaç/hemasitometre odası28kullanarak hücreleri saymak.</li>
	<li>Hücre süspansiyon 1 x 105 hücreleri (veya belirtilen diğer tutar) enjekte etmek için PBS hücrelerde sulandrarak fare başına 50 µL hazırlayın. Hücreler buz enjeksiyon önce tutmak. Not: enjeksiyon hücre süspansiyon azalmasını önlemek en az iki kat daha fazla hücreleri hazırlayın.</li>
	<li>Ketamin ve xylazine 10 mg/mL ve 1 mg/mL, son bir konsantrasyon için sırasıyla sulandrarak anestezi hazırlamak, 1 mL şırınga ve 27 G iğne kullanarak, her fare 100/10 mg/kg intraperitoneally ketamin/xylazine çözüm enjekte edilerek anestezi anılan sıraya göre.</li>
	<li>Fareler nefes izlemek ve bir ayak çimdik istihdam. Fare çimdik tırnağa vermezse uygun anesthetization doğrulayın. Veteriner merhem gözleri kuruluk anestezi iken altında önlemek için uygulayın.</li>
	<li>1 fare bir entübasyon platformu üzerinde bir anda sırtını karşı platform ile ön dişlerinin asarak yerleştirin.</li>
	<li>Trakea görselleştirme ile yardımcı olmak için bir fiber optik ışığı kullanarak üst gögüs aydınlatmak.</li>
	<li>Yavaşça kümeleri oluşturmak değil emin olmak için bir p200 pipet kullanarak hücreleri resuspend. Farenin ağzı açık ve dil yavaşça steril düz forseps ile çekin.</li>
	<li>Bir damar içi kateter nefes engelleme önlemek için kaldırıldı iğne ile kullanın. Pozisyon beyaz ışık üzerinde Kateter borusu açılışa yayılan.</li>
	<li>Kateter üst ön dişleri ulaşıncaya kadar Kateter borusu yerleştirin. Trakea kateterin uygun yerleştirme kateter açılış ağız ile parlayan beyaz ışık görselleştirme tarafından onaylayın.</li>
	<li>Bir pipet kullanarak, hücre 50 µL birimin tümü inhale sağlamak için doğrudan kateter dağıtmak. Steril koşullarda bu adımı gerçekleştirin. Not: kateter doğru eklediyseniz, fare hemen kateter içeriğini nefes.</li>
	<li>Birimin tümü kateter geçecek kadar birkaç saniye bekleyin ve sonra kateter trakea kaldırmak ve % 10 çamaşır suyu çözümde atmayın.</li>
	<li>Fare sıvı teneffüs edilmesi değil, dikkatli bir şekilde nefes izlemek ve kateter konumunu ayarla. Fare solunum durur, kateter hemen kaldırın ve normal kateter yeniden takmadan önce nefes devam etmek fareyi izin. Not: Fare adımlardan 4.11-4,18 başına ortalama saat yaklaşık 5 dk dır.</li>
	<li>Enjekte fareyi bir IACUC onaylı ısıtma yastığını onların geri kurtarma için düz bir yüzeye yerleştirin. Not: Tüm prosedürü fare başına 10 dk sürer. Enjeksiyon tamamen iyileşti kadar diğer hayvanların şirkete uğramıştır bir hayvan döndürmüyor.</li>
	<li>Tüm kaburga alan her iki ventrally tıraş ve dorsally B6129SF1/J ve diğer fare suşları koyu saçlı bir elektrikli tıraş makinesi görüntüleme önce kullanarak.</li>
	<li>2-3 dakika sonra hücre enjeksiyon, enjekte biyoluminesans 100 µL retro-orbitally (15 mg/mL) bir insülin iğne kullanarak. Enjeksiyon görüntüleme her oturum için kullanılan göz alternatif.</li>
	<li>En az 2 dakika sonra 5 fareler bir hayvan bioluminescence Imager dorsal recumbency pozisyonda yerleştirin ve ventral resmi ışıldama ayarları29kullanarak elde.</li>
	<li>Kontrol panelinin altında belli bir hücre satır ışıldama ölçmek için çözünürlük ve hassasiyet ayarları yapın. Çoğu uygulama için 3 dk (veya "Auto" doymuş varsa), binning başlatın Orta (4), F/Durdur = 1, görüş alanı = D, konu yükseklik = 1,50 =. Not: enjeksiyon başarılı olursa, üst gögüs alanında bir akciğer veya her iki akciğer ışıldama sinyal algılanır.</li>
	<li>Fiske vurmak fareler sternal recumbency üzerine getirin ve yukarıdaki gibi dorsal bir resim elde etmek. Not: Eğer hücre enjeksiyon düzgün yapılır değil, hücre girişinde trakea veya boyun küme.</li>
	<li>Ketoprofen iğne intraperitoneally ağrı hafifletmek için 5 mg/kg.</li>
	<li>Fareler için onların kafes dönebilir ve kafes üzerinde bir "BSL-2 ajan ın Use" kartı yerleştirin.</li>
	<li>Anesteziden fareler uyanıncaya kadar fareler için solunum entübasyon ve hemen sonra her 15 dk sonra izlemek. Onlar sternal recumbency korumak için yeterli bilinci yerine kadar fareler sahipsiz bırakmayın.</li>
	<li>Fareler 24 saat mesaj entübasyon ve hastalık belirtisi için haftada üç kez inceleyin.</li>
	<li>Yordam, hayvan kimlik, yordam türünü, türü anestezik ve ameliyat sonrası izleme gözlemler ve kez tarihi seyir defteri kaydını tutun.</li>
	<li>İzlemek fareler kilo kaybı, solunum güçlüğü, davranış bozuklukları ve vücut durumu puanı için < 2 (vertebral sütunun belirgin/dorsal pelvik kemik segmentasyon aşikar) iki haftada bleomycin aşılama sonrasında. Not: Akciğer tümörleri ile fareler solunum tahriş, kilo kaybı, kaşeksi ve/veya Ölüm sergileyebilirler.</li>
	<li>Solunum zorluğu altında fare veya vücut kitle CO2 veya ketamin/xylazine doku toplama servikal çıkığı tarafından takip kaybı % 15 yaşamış fareler ötenazi. Ötenazi palpasyonla solunum aktivitesi için yaparak onaylayın.</li>
</ol>5. tümör büyüme Bioluminescence görüntüleme tarafından izlenmesi
<ol><li>Bundan sonra görüntüleme 3 gün sonrası engraftment ve haftalık farelerin yineleyin.</li>
	<li>Fareler (2.4-2,5 adımlarda açıklandığı gibi) ketamin/xylazine enjekte veya inhale isoflurane (% 2) anestezi. Nefes farelerin izlemek ve uygun anesthetization onaylamak için bir ayak çimdik istihdam. Veteriner merhem gözleri kuruluk anestezi iken altında önlemek için uygulayın.</li>
	<li>Tüm kaburga alan her iki ventrally tıraş ve dorsally B6129SF1/J ve diğer fare suşları koyu saçlı bir elektrikli tıraş makinesi görüntüleme önce kullanarak.</li>
	<li>Fareler anestezi altında olduğunda, biyoluminesans 100 µL retro-orbitally enjekte (15 mg/mL) bir insülin iğne kullanarak. 2 dk. alternatif enjeksiyon görüntüleme her oturum için kullanılan göz bekleyin.</li>
	<li>Fareler içinde Imager yerleştirin ve 4.22 4.24 adımlarda açıklandığı dorsal ve ventral görüntüleri elde etmek.</li>
	<li>Fareler kafesin içine sonra görüntüleme, onların geri kurtarma için düz bir yüzeye yerleştirin. Not: Tüm prosedürü 5 farelerin grup başına 5 dk sürer. Onlar sternal recumbency korumak için yeterli bilinci yerine kadar fareler sahipsiz bırakmayın.</li>
	<li>Imager/bioluminescence analiz yazılımı kullanarak görüntüleri analiz.<ol>
<li>Uygun görüntü seçin ve bir grup olarak bioluminescence analiz yazılımı yükleyin.</li>
		<li>' I tıklatın yatırım getirisi aracı | Meydanı faiz (ROI) kare bir bölgesine eklemek için. ROI tüm akciğer görüntü kapsayan üst göğüs üzerinde yerleştirin. Bunu her fare görüntü için tekrarlayın.</li>
		<li>Doğru tıkırtı ve seçme grubundaki tüm görüntüleri aynı YG uygulamak ve fareler, ventral ve dorsal sayısı üst göğüs pozisyon için işlev Tüm ROI kopyalayın .</li>
		<li>Görüntü penceresinin üst sol köşesindeki fotonlar işlevini seçin. ROIs ölçmek için ölçü birimi Denetim Masası işlevi tıklatın. Kopyalayın ve toplam akı (fotonlar/s) içeren çıkış tablo verilerinizi daha fazla çözümlemek için seçim bir yazılım yapıştırın.</li>
		<li>Her fare gün 0 ölçülür ROI değeri günlük ROI değerini normalleştirmek.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. doku yalıtım ve işleme.
<ol><li>Fareler (adımları 2.4-2,5 veya inhale isoflurane (% 2) tarafından açıklandığı gibi. ketamin/xylazine enjekte edilerek anestezi Nefes farelerin izlemek ve bir ayak çimdik istihdam. Fare çimdik tırnağa vermezse uygun anesthetization doğrulayın. Veteriner merhem gözleri kuruluk anestezi iken altında önlemek için uygulayın.</li>
	<li>Biyoluminesans 100 µL retro-orbitally enjekte (15 mg/mL) bir insülin iğne kullanarak. 2 dakika bekleyin.</li>
	<li>Adımları 4.22-4.24 bu protokol sonrası görüntü fareler.</li>
	<li>Adım 6.2 diğer göz içine biyoluminesans retro-orbitally önce ötenazi bir insülin iğne kullanarak başka bir 100 µL enjekte.</li>
	<li>Ketamin/xylazine mayi enjeksiyonu ile fareler ötenazi fareler IACUC tarafından sağlanan yönergelere uygun olarak derin anestezi altında iseniz (bkz. Adım 2.4 Ayrıntılar için) servikal çıkığı tarafından takip etti. Ötenazi palpasyonla solunum aktivitesi için yaparak onaylayın.</li>
	<li>Steril Cerrahi makas yapmak bir cilt kesi göğüs kemiğinin altında kullanarak. Forseps ve cerrahi makas kullanarak diyafram boyunca kas katmanı açın ve göğüs boşluğuna ya iç torasik arter kaçınarak yanal iki tarafın üzerinde göğüs kafesi ile kesme tarafından ortaya çıkarmak.</li>
	<li>Kalbin sağ atriyum içerisinde küçük bir kesi yaparak fare sıvı ve PBS 5 mL sol ventrikül yoluyla enjekte. Kan perfüzyon düzgün yapılırsa akciğer dokusu rengi kırmızıdan soluk pembe-beyaz için gidecek.</li>
	<li>Göğüs boşluğuna akciğerlerden dikkatle tarafından kapma forseps ile yemek borusu veya kalp tüketim. Yavaşça doku çekin ve cerrahi makas dikkatle ponksiyon akciğer dokusunun kaçınarak bağlama doku kesmek için kullanın. Trakea akciğer solunum yolları daha sonraki bir aşamada enflasyon için mümkün olduğunca korumak.</li>
	<li>Akciğer batış ve doku aşırı kan kaldırmak için PBS 3 mL ile dolu bir 6 iyi tabak içinde 3 kez dönen yıkayın.</li>
	<li>Akciğer 6 iyi plaka kapak üzerine yerleştirin ve kollarındaki Imager dokusunda içeren kapak yerleştirin ve ışıklı resim30elde etmek. Not: Aşağıdaki ayarları "edinme Denetim Masası'ndan" seçme öneririz "görüş alanı = A" ve "konu Yükseklik = 0,75 cm" ve sonra "otomatik pozlama" doymuş görüntüleri almamak için.</li>
	<li>Tüketim ve diğer organlar, adım 6,9-6.10, nerede metastaz tespit edilmiştir ışıldama, beyin, karaciğer, böbrek üstü, kemik, lenf düğümleri, böbrek veya dalak31gibi tarafından yapılan gibi görüntü.</li>
	<li>Akciğer 1 mL % 4 paraformaldehyde ile fare nefes borusu iğne ekleyerek sıvı. Akciğerleri iyi perfused izin verirseniz şişirmek. Dikkat: %4 paraformaldehyde bir toksik, bir sağlık olduğunu GHS07 ve GHS08 tehlike.</li>
	<li>Akciğerler ile % 4 paraformaldehyde 5 mL konik bir 15 mL içine aktarın.</li>
	<li>Akciğer veya diğer dokularda dokuya %4 paraformaldehyde gecede 4 ° C'de 30-50 RPM titreyen bir cihaz ile kuluçka tarafından tamir.</li>
	<li>Akciğerler (veya diğer dokularda) parafin veya optimum kesim sıcaklık bağlı olarak uygulama32bileşik katıştırın. Not: Parafin akciğer yapısı korumak için tercih edilen yöntemdir ve Masson Trichrome ve hematoksilen-eozin boyama için.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics,+2015.">Cancer statistics, 2015.</a> CA-Cancer J Clin. 65, 5-29 (2015).</li><li>Gaspar, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+metastases+in+lung+cancer.">Brain metastases in lung cancer.</a> Expert Rev Anticanc. 4, 259-270 (2004).</li><li>Hess, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastatic+patterns+in+adenocarcinoma.">Metastatic patterns in adenocarcinoma.</a> Cancer. 106, 1624-1633 (2006).</li><li>Hoffman, P. C., Mauer, A. M., Vokes, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+cancer.">Lung cancer.</a> Lancet. 355, 479-485 (2000).</li><li>Travis, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+of+lung+cancer.">Pathology of lung cancer.</a> Clin Chest Med. 23 (1), 65-81 (2002).</li><li>Chen, Z., Fillmore, C. M., Hammerman, P. S., Kim, C. F., Wong, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-small-cell+lung+cancers:+a+heterogeneous+set+of+diseases.">Non-small-cell lung cancers: a heterogeneous set of diseases.</a> Nat Rev Cancer. 14, 535-546 (2014).</li><li>Kim, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+human+non-small-cell+lung+cancer:+raising+the+bar.">Mouse models of human non-small-cell lung cancer: raising the bar.</a> Cold Spring Harb Sym. 70, 241-250 (2005).</li><li>Meuwissen, R., Berns, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+for+human+lung+cancer.">Mouse models for human lung cancer.</a> Gene Dev. 19, 643-664 (2005).</li><li>Junttila, M. R., de Sauvage, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+tumour+micro-environment+heterogeneity+on+therapeutic+response.">Influence of tumour micro-environment heterogeneity on therapeutic response.</a> Nature. 501, 346-354 (2013).</li><li>Nguyen, L. V., Vanner, R., Dirks, P., Eaves, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cells:+an+evolving+concept.">Cancer stem cells: an evolving concept.</a> Nat Rev Cancer. 12, 133-143 (2012).</li><li>Minchinton, A. I., Tannock, I. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+penetration+in+solid+tumours.">Drug penetration in solid tumours.</a> Nat Rev Cancer. 6, 583-592 (2006).</li><li>Leblond, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developing+cell+therapy+techniques+for+respiratory+disease:+intratracheal+delivery+of+genetically+engineered+stem+cells+in+a+murine+model+of+airway+injury.">Developing cell therapy techniques for respiratory disease: intratracheal delivery of genetically engineered stem cells in a murine model of airway injury.</a> Hum Gene Ther. 20, 1329-1343 (2009).</li><li>Vaughan, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage-negative+progenitors+mobilize+to+regenerate+lung+epithelium+after+major+injury.">Lineage-negative progenitors mobilize to regenerate lung epithelium after major injury.</a> Nature. 517, 621-625 (2015).</li><li>Zuo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p63(+)Krt5(+)+distal+airway+stem+cells+are+essential+for+lung+regeneration.">p63(+)Krt5(+) distal airway stem cells are essential for lung regeneration.</a> Nature. 517, 616-620 (2015).</li><li>Mahoney, J. E., Kim, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracing+the+potential+of+lung+progenitors.">Tracing the potential of lung progenitors.</a> Nat Biotechnol. 33, 152-154 (2015).</li><li>Wang, D., Morales, J. E., Calame, D. G., Alcorn, J. L., Wetsel, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+human+embryonic+stem+cell-derived+alveolar+epithelial+type+II+cells+abrogates+acute+lung+injury+in+mice.">Transplantation of human embryonic stem cell-derived alveolar epithelial type II cells abrogates acute lung injury in mice.</a> Mol Ther. 18, 625-634 (2010).</li><li>Ortiz, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cell+engraftment+in+lung+is+enhanced+in+response+to+bleomycin+exposure+and+ameliorates+its+fibrotic+effects.">Mesenchymal stem cell engraftment in lung is enhanced in response to bleomycin exposure and ameliorates its fibrotic effects.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 100, 8407-8411 (2003).</li><li>Suzuki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+significance+of+the+size+of+central+fibrosis+in+peripheral+adenocarcinoma+of+the+lung.">Prognostic significance of the size of central fibrosis in peripheral adenocarcinoma of the lung.</a> Ann Thorac Surg. 69, 893-897 (2000).</li><li>Cancer Genome Atlas Research, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+molecular+profiling+of+lung+adenocarcinoma.">Comprehensive molecular profiling of lung adenocarcinoma.</a> Nature. 511, 543-550 (2014).</li><li>Scotton, C. J., Chambers, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bleomycin+revisited:+towards+a+more+representative+model+of+IPF?.">Bleomycin revisited: towards a more representative model of IPF?.</a> Am J Physiol-Lung C. 299, L439-L441 (2010).</li><li>Hay, J., Shahzeidi, S., Laurent, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+bleomycin-induced+lung+damage.">Mechanisms of bleomycin-induced lung damage.</a> Arch Toxicol. 65, 81-94 (1991).</li><li>Vaccaro, C. A., Brody, J. S., Snider, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alveolar+wall+basement+membranes+in+bleomycin-induced+pulmonary+fibrosis.">Alveolar wall basement membranes in bleomycin-induced pulmonary fibrosis.</a> Am Rev Respir Dis. 132, 905-912 (1985).</li><li>Venkatesan, N., Ebihara, T., Roughley, P. J., Ludwig, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alterations+in+large+and+small+proteoglycans+in+bleomycin-induced+pulmonary+fibrosis+in+rats.">Alterations in large and small proteoglycans in bleomycin-induced pulmonary fibrosis in rats.</a> Am J Resp Crit Care. 161, 2066-2073 (2000).</li><li>Moore, B. B., Hogaboam, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+pulmonary+fibrosis.">Murine models of pulmonary fibrosis.</a> Am J Physiol-Lung C. 294, L152-L160 (2008).</li><li>Izbicki, G., Segel, M. J., Christensen, T. G., Conner, M. W., Breuer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+bleomycin-induced+lung+fibrosis.">Time course of bleomycin-induced lung fibrosis.</a> Int J Exp Pathol. 83, 111-119 (2002).</li><li>Schrier, D. J., Phan, S. H., McGarry, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+the+nude+(nu/nu)+mutation+on+bleomycin-induced+pulmonary+fibrosis.+A+biochemical+evaluation.">The effects of the nude (nu/nu) mutation on bleomycin-induced pulmonary fibrosis. A biochemical evaluation.</a> Am Rev Respir Dis. 127, 614-617 (1983).</li><li>Ponomarev, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+triple-modality+reporter+gene+for+whole-body+fluorescent,+bioluminescent,+and+nuclear+noninvasive+imaging.">A novel triple-modality reporter gene for whole-body fluorescent, bioluminescent, and nuclear noninvasive imaging.</a> Eur J Nucl Med Mol I. 31, 740-751 (2004).</li><li>Morten, B. C., Scott, R. J., Avery-Kiejda, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Three+Different+Methods+for+Determining+Cell+Proliferation+in+Breast+Cancer+Cell.">Comparison of Three Different Methods for Determining Cell Proliferation in Breast Cancer Cell.</a> J. Vis. Exp. , (2016).</li><li>Tseng, J. C., Kung, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+bioluminescence+imaging+of+mouse+tumor+models.">Quantitative bioluminescence imaging of mouse tumor models.</a> Cold Spring Harbor protocols. , (2015).</li><li>Byrne, F. L., McCarroll, J. A., Kavallaris, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyses+of+Tumor+Burden+In+Vivo+and+Metastasis+Ex+Vivo+Using+Luciferase-Expressing+Cancer+Cells+in+an+Orthotopic+Mouse+Model+of+Neuroblastoma.">Analyses of Tumor Burden In Vivo and Metastasis Ex Vivo Using Luciferase-Expressing Cancer Cells in an Orthotopic Mouse Model of Neuroblastoma.</a> Methods Mol Biol. 1372, 61-77 (2016).</li><li>Parkinson, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+necropsy+and+selected+tissue+and+sample+collection+in+rats+and+mice.">Diagnostic necropsy and selected tissue and sample collection in rats and mice.</a> J. Vis. Exp. , (2011).</li><li>Tammela, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Wnt-producing+niche+drives+proliferative+potential+and+progression+in+lung+adenocarcinoma.">A Wnt-producing niche drives proliferative potential and progression in lung adenocarcinoma.</a> Nature. 545, 355-359 (2017).</li><li>DuPage, M., Dooley, A. L., Jacks, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+mouse+lung+cancer+models+using+adenoviral+or+lentiviral+delivery+of+Cre+recombinase.">Conditional mouse lung cancer models using adenoviral or lentiviral delivery of Cre recombinase.</a> Nat Protoc. 4, 1064-1072 (2009).</li><li>Byrne, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interrogating+open+issues+in+cancer+precision+medicine+with+patient-derived+xenografts.">Interrogating open issues in cancer precision medicine with patient-derived xenografts.</a> Nat Rev Cancer. 17, 254-268 (2017).</li><li>Nguyen, D. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WNT/TCF+signaling+through+LEF1+and+HOXB9+mediates+lung+adenocarcinoma+metastasis.">WNT/TCF signaling through LEF1 and HOXB9 mediates lung adenocarcinoma metastasis.</a> Cell. 138, 51-62 (2009).</li><li>Raghu, G., Nyberg, F., Morgan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epidemiology+of+interstitial+lung+disease+and+its+association+with+lung+cancer.">The epidemiology of interstitial lung disease and its association with lung cancer.</a> Brit J Cancer. 91, S3-S10 (2004).</li><li>Hubbard, R., Venn, A., Lewis, S., Britton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+cancer+and+cryptogenic+fibrosing+alveolitis.+A+population-based+cohort+study.">Lung cancer and cryptogenic fibrosing alveolitis. A population-based cohort study.</a> Am J Resp Crit Care. 161, 5-8 (2000).</li><li>Nagai, A., Chiyotani, A., Nakadate, T., Konno, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+cancer+in+patients+with+idiopathic+pulmonary+fibrosis.">Lung cancer in patients with idiopathic pulmonary fibrosis.</a> Tohoku J Exp Med. 167, 231-237 (1992).</li><li>Rock, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+stromal+populations+contribute+to+pulmonary+fibrosis+without+evidence+for+epithelial+to+mesenchymal+transition.">Multiple stromal populations contribute to pulmonary fibrosis without evidence for epithelial to mesenchymal transition.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 108, E1475-E1483 (2011).</li><li>Saito, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+after+surgery+for+pathologic+stage+IA+non-small+cell+lung+cancer+associated+with+idiopathic+pulmonary+fibrosis.">Survival after surgery for pathologic stage IA non-small cell lung cancer associated with idiopathic pulmonary fibrosis.</a> Ann Thorac Surg. 92, 1812-1817 (2011).</li><li>Stevens, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+Matrix+Receptor+Expression+in+Subtypes+of+Lung+Adenocarcinoma+Potentiates+Outgrowth+of+Micrometastases.">Extracellular Matrix Receptor Expression in Subtypes of Lung Adenocarcinoma Potentiates Outgrowth of Micrometastases.</a> Cancer Res. 77, 1905-1917 (2017).</li><li>Harrison, J. H., Lazo, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+dose+continuous+infusion+of+bleomycin+in+mice:+a+new+model+for+drug-induced+pulmonary+fibrosis.">High dose continuous infusion of bleomycin in mice: a new model for drug-induced pulmonary fibrosis.</a> J Pharmacol Exp Ther. 243, 1185-1194 (1987).</li><li>Shcherbo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bright+far-red+fluorescent+protein+for+whole-body+imaging.">Bright far-red fluorescent protein for whole-body imaging.</a> Nature Methods. 4, 741-746 (2007).</li><li>Aso, Y., Yoneda, K., Kikkawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphologic+and+biochemical+study+of+pulmonary+changes+induced+by+bleomycin+in+mice.">Morphologic and biochemical study of pulmonary changes induced by bleomycin in mice.</a> Lab Invest. 35, 558-568 (1976).</li><li>Kim, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+bronchioalveolar+stem+cells+in+normal+lung+and+lung.">Identification of bronchioalveolar stem cells in normal lung and lung.</a> Cell. 121, 823-835 (2005).</li><li>Fichtner, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+patient-derived+non-small+cell+lung+cancer+xenografts+as+models+for+the+identification+of+predictive+biomarkers.">Establishment of patient-derived non-small cell lung cancer xenografts as models for the identification of predictive biomarkers.</a> Clin Cancer Res. 14, 6456-6468 (2008).</li><li>Zhang, X. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+patient-derived+non-small+cell+lung+cancer+xenograft+models+with+genetic+aberrations+within+EGFR,+KRAS+and+FGFR1:+useful+tools+for+preclinical+studies+of+targeted+therapies.">Establishment of patient-derived non-small cell lung cancer xenograft models with genetic aberrations within EGFR, KRAS and FGFR1: useful tools for preclinical studies of targeted therapies.</a> J Transl Med. 11, 168 (2013).</li></ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının bildirin.

Akciğer kanseri ve diğer kronik hastalıklar akciğer36arasında çarpıcı klinik paralellikler belgelenmiştir. Özellikle, idiyopatik pulmoner fibrozis (IPF) olan hastalarda gelişen akciğer kanseri için artan bir tercih var ve bu ilişki geçmiş37,38sigara bağımsızdır. IPF ilerici imha akciğer mimarisi ve bozulmuş solunum işlevini, ECM39birikimi ile karakterizedir. Ayrıca, cerrahi rezeksiyon bir zav...

Akciğer kanseri olduğu önde gelen kanser nedeni ile ilgili ölümlerin dünya çapında1. Akciğer kanseri olan hastalarda sonunda metastaz yenik uzak organlara, özellikle merkezi sinir sistemi, karaciğer, böbrek üstü bezleri ve kemikler2,3,4. Torasik maligniteler geleneksel olarak küçük hücreli akciğer kanseri (SCLC) veya küçük hücreli dışı akciğer kanseri (NSCLC)5sınıflandırılmış. NSCLC en sık malignite tanısı ve akciğer adenokarsinom (LUAD) ve akciğer Skuamöz Hücre Karsinomu (LUSC)6dahil olmak üzere farklı histolojik alt alt olduğunu. Genomik analiz rezeke insan birincil akciğer kanserlerinin tümörler belirli bir histotype içinde de daha fazla onların farklı klinik ilerleme katkıda bulunmak ve hastanın prognozu semptomlarıdır çeşitli moleküler tedirginlikler hızlı ortaya koymuştur. Akciğer kanserleri olağanüstü heterojen rasyonel tasarım, önceden klinik test ve etkili tedavi stratejileri uygulanması için önemli bir sorun temsil eder. Sonuç olarak, uysal deneysel akciğer kanser modelleri çeşitli hücresel kökenleri, moleküler alt türlerini ve bu hastalık aşamalarında çalışmaya repertuarı genişletmek için bir ihtiyaç vardır.
Hayvan modellerini kullanarak çeşitli yaklaşımlar akciğer kanseri vivo içindeher biri kendi avantajları ve dezavantajları biyolojik soru (lar) ilgi bağlı olarak çalışmaya istihdam edilmiştir. Genetiği fare modelleri (GEMMs) tümörleri içinde bu ilerleme bir immün konak7içinde kaynaklanan bir verilen progenitör hücre tipi belirli genetik değişiklikler hedefleyebilirsiniz. Son derece güçlü ve klinik, gecikme süresi, değişkenlik ve/veya akciğer tümörü morbidite GEMMs ile ilişkili belirli nicel ölçümler ve uzak organlara8geç sahne metastaz tespiti için engelleyici olabilir. Sayede akciğer kanser hücrelerini, ya doğrudan bir fare tümör elde edilen veya ilk kurulan hücre satırlar halinde kültür, türetilmiş syngeneic ana bilgisayarları yeniden kullanılmaya homogreft modellerinin kullanımı tamamlayıcı bir yaklaşımdır. Mahsum, akciğer kanseri xenografts insan hücre hatları veya hasta türetilmiş tümör örnekleri kurulur. İnsan hücre satır xenografts veya hasta türetilmiş xenografts (PDXs) immün fareler genellikle korunur ve bu nedenle tam bağışıklık-gözetim9engel. Bu dezavantajı rağmen tutarlar için et tümörler daha daha karmaşık genomik aberasyonları kodlamak insan kanser hücrelerinin insan biospecimens ve çalışma temel in vivo özelliklerinin sınırlama yaymak için bir cadde sağlarlar.
Bir yararlı özelliği, allogrefler ve xenografts onlar tümör hücreleri (tikler) bir malign hücre nüfus10içinde başlatma sıklığını ölçmek için kullanılan geleneksel sınırlayıcı hücre seyreltme deneyleri, mükellef olmasıdır. Bu deneylerde, tanımlı bir hücre sayısı subkutan hayvanlar kanat enjekte edilir ve tikler sıklığını tümörü almak oranı dayalı tahmin edilebilir. Subkutan tümörler ancak daha hipoksik11 olabilir ve fizyolojik kısıtları anahtar: akciğer tümörü microenvironment model değil. Ciğerlerine farelerin epitel kök veya progenitör hücrelerin boğaza teslimat Akciğer rejenerasyon ve hava yolu kök hücre biyolojisi12çalışmaya bir yöntemdir. Ancak, akciğerleri ilk yaralanma, viral enfeksiyon13,14gibi fizyolojik formlara tabi olan sürece bu teknik engraftment oranı nispeten düşük olabilir. Destek inflamatuar stromal hücrelerden ve/veya akciğer membran bozulma saklama transplante hücre içine ilgili kök hücre nişler distal havayolları15artırabilir. Ajanlar inducing fibrozis de önceden engraftment indüklenmiş pluripotent hücreler16 ve mezenkimal kök hücre17geliştirmek akciğerlerinin durumu. Hava yolu yaralanma benzer formları engraftment oranı etkileyebilir olsun, tümör Başlatan kapasite ve akciğer kanser hücrelerini akıbet henüz sistematik olarak değerlendirilmesi için.
Bu çalışmada, yaralanma ile fareler akciğerler önceden Klima tarafından orthotopic akciğer kanseri hücre engraftment, verimliliğini artırmak için bir yöntem açıklanmaktadır. LUAD distal airways kez kötü prognoz19ile karşılıklı olarak ilişkilendirir fibrotik stroma18 geliştirme bu kanser, önemli bir alt ile doğar. Bleomycin, bir doğal nonribosomal hibrid peptid-polyketide, pulmoner fibrozis fareler20de ikna etmek için yaygın olarak kullanılmıştır. Bleomycin hava yolu korumak ilk epitel yıpratma alveoller ve inflamatuar hücreler, makrofajlar, nötrofil ve monosit21dahil alımı teşvik etmektedir. Bu doku distal airways, membran yeniden yapılanma22,23 ve hücre dışı matriks (ECM) ifade24remodeling tarafından takip ediyor. Bir tek bleomycin enjeksiyon etkileri geçicidir, çoğu çalışmalar2530 gün sonra çözme fibrozis ile. Bleomycin ile fareler airways önceden Klima önemli ölçüde akciğer hücrelerinde LUAD almak oranı artış olabilir Eğer homogreft ve xenograft modelleri kullanarak, test ettik.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bleomycin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B5507-15UN</td>
			<td>CAUTION Health hazard GHS08</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Exel Catheter 24G</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>1484121</td>
			<td>Remove needle. For intratracheal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine (Ketaset inl 100 mg/mL C3N 10 mL)</td>
			<td>Butler Schein</td>
			<td>56344</td>
			<td>To anesthetize mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Butler Schein</td>
			<td>33198</td>
			<td>To anesthetize mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketoprofen, 5,000 mg</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td>10006661</td>
			<td>Analgesic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Veterinary Ophthalmic Ointment</td>
			<td>BUTLER ANIMAL HEALTH COMPANY LLC</td>
			<td>8897</td>
			<td>To prevent eye dryness while under anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin powder</td>
			<td>Perkin Elmer Health Sciences Inc</td>
			<td>122799</td>
			<td>For luminescent imaging. Reconstitute powder with PBS for a working concentration of 15mg/mL. Protect from Light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Intubation stand</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>RIS-100</td>
			<td>Recommended stand for intratracheal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MI-150 ILLUMINATOR 150W MI-150</td>
			<td>DOLAN-JENNER INDUSTRIES</td>
			<td>MI-150 / EEG2823M</td>
			<td>To illuminate and visualize trachea</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe Forceps, 2.75 (7 cm) long serrat</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5111</td>
			<td>For intratracheal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Luer-Lok Sterile 5ml</td>
			<td>BD / Fisher</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Satiny Smooth by Conair Dual Foil Wet/Dry Rechargeable Shaver</td>
			<td>Conair</td>
			<td>-</td>
			<td>To shave mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Scissors, 3.5&#34; straight 15 mm sharp/sharp sure cut blades</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5840SC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL conical tube</td>
			<td>BD / Fisher</td>
			<td>352097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL centrifuge tubes</td>
			<td>USA SCIENTIFIC INC</td>
			<td>1615-5500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vial Scintillation 7 mL Borosilicate Glass GPI</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>701350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter pipette tips (200 &#956;L)</td>
			<td>USA SCIENTIFIC INC</td>
			<td>1120-8710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% Trypsin-EDTA</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>25200-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM high glucose</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11965-092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI Medium 1640</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11875-093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum USDA</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>10437-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphotericin B</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A2942-20ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Stain 0.4%</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15250-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess Automated Cell Counter</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>AMQAX1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flask T/C 75cm sq canted neck, blue cap</td>
			<td>Fisher / Corning</td>
			<td>353135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Spectrum Xenogen Bioluminiscence</td>
			<td>Perkin Elmer Health Sciences Inc</td>
			<td>124262</td>
			<td>For in vivo bioluminescence imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Living image software</td>
			<td>Perkin Elmer Health Sciences Inc</td>
			<td>128113</td>
			<td>For in vivo bioluminescence analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XGI-8 Gas Anesthesia System</td>
			<td>Perkin Elmer Health Sciences Inc</td>
			<td>118918</td>
			<td>For Isoflurane anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Ultra-Fine II Short Needle Insulin Syringe 1 cc. 31 G x 8 mm (5/16 in)</td>
			<td>BD / Fisher</td>
			<td>BD328418</td>
			<td>For retro-orbital luciferin injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1ml</td>
			<td>BD / Fisher</td>
			<td>14-823-434</td>
			<td>For intraperitoneal injections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26 G x 1/2 in. needle</td>
			<td>BD / Fisher</td>
			<td>305111</td>
			<td>For intraperitoneal injections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% Paraformaldehyde</td>
			<td>VWR</td>
			<td>43368-9M</td>
			<td>CAUTION Health hazard GHS07, GHS08. For fixing tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet-Lite Pipette, Unv. SL-200XLS+</td>
			<td>METTLER-TOLEDO INTERNATIONAL</td>
			<td>17014411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayer&#39;s Hematoxylin</td>
			<td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td>
			<td>517-28-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y stain 0.25% (w/v) in 57%</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>67-63-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masson Trichrome Stain Kit</td>
			<td>IMEB Inc</td>
			<td>K7228</td>
			<td>For masson trichrome stain to visualize collagen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost plus glass slides</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>1255015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 well plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>C3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Universal Mycoplasma Detection Kit</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-1012K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT Embedding compound</td>
			<td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td>
			<td>62550-12</td>
			<td>For embedding tissue for frozen sections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica CM3050 S Research Cryostat</td>
			<td>Leica</td>
			<td>CM3050 S</td>
			<td>To section tissue for staining analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Keyence All-in One Fluorescence Microscope</td>
			<td>Keyence</td>
			<td>BZ-X700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>US National Institutes of Health</td>
			<td>IJ1.46</td>
			<td>http://rsbweb.nih.gov/ij/ download.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism 7.0 for Mac OS X</td>
			<td>GraphPad Software, Inc.</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Athymic (Crl:NU(NCr)-Foxn1nu) mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>NIH-553</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NSG (NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ) mice</td>
			<td>Jackson Laboratories</td>
			<td>5557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B6129SF1/J mice</td>
			<td>Jackson Laboratories</td>
			<td>101043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIH-H2030 cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-5914</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>368T1</td>
			<td>generously provided by Monte Winslow (Standford University)</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC9 cells</td>
			<td>Nguyen DX et al. Cell. 2009;138:51&#8211;62</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H2030 BrM3 cells</td>
			<td>Nguyen DX et al. Cell. 2009;138:51&#8211;62</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

pre-conditioning the airways of mice with bleomycin increases the efficiency of orthotopic lung cancer cell engraftment

Akciğer kanseri biyolojik olarak heterojen bir ölümcül tedavi ateşe dayanıklı hastalıktır. Anlama ve etkili bir şekilde göğüs maligniteler tam klinik spektrumu için çeşitli insan akciğer kanseri alt türlerini ve aşamaları özetlemek ek hayvan modelleri ihtiyaç vardır. Homogreft veya xenograft modelleri çok yönlü ve tumorigenic kapasite vivo içindefare ya da insan kökenli malign hücreler kullanarak, miktar etkinleştirin. Ancak, önceden açıklanan yöntemleri akciğer kanseri hücre engraftment, farelerin orthotopic nakli hücrelerin ciğerlerine verimsizlik nedeniyle kanadı gibi fizyolojik olmayan sitelerdeki gerçekleştirilmiş. Bu çalışmada, orthotopic akciğer kanseri hücre engraftment fibrozis inducing Ajan bleomycin ile fareler airways önceden Klima tarafından geliştirmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Bir prototip deney olarak, biz bu yaklaşım tümör hücreleri ya fare veya insan kaynakları, fareler çeşitli suşları aldığınız akciğer adenokarsinom alt türündeki engraft uygulanır. Biz airways bleomycin önce tümör hücre enjeksiyon ile ağır yaralı tümör hücreleri 0-17 engraftment artırır göstermek % 71-%100. Önemli ölçüde, bu yöntem Gelişmiş akciğer tümörü insidansı ve sonraki akıbet farklı modeller ve fare suşları kullanarak. Buna ek olarak, engrafted akciğer kanser hücrelerini akciğerlerden ilgili uzak organlara yaymak. Böylece, kurmak ve yeni orthotopic modelleri akciğer kanseri hücreleri veya biospecimen miktarda sınırlama ile korumak ve kantitatif akciğer kanser hücrelerini fizyolojik ilgili ayarları tumorigenic kapasitesini değerlendirmek için kullanılabilir bir protokol sağlar .

LUAD kanser hücre engraftment ciğerlerine farelerin verimliliğini artırmak için ilk orthotopic tümör hücre enjeksiyon (Şekil 1) tarafından takip bleomycin kullanarak airways ön koşulları bir protokol geliştirdi. Biz bile immün korele fareler yönetilen zaman bleomycin geçici fibrozis gün kaybı hava yolu mimarisi ve artmış kollajen birikimi (Şekil 2) tarafından kanıtlanan 14 tarafından indüklenen doğrulad...

Watch this Scientific Journal Video about Pre-Conditioning the Airways of Mice with Bleomycin Increases the Efficiency of Orthotopic Lung Cancer Cell Engraftment at JoVE.com

Pre-Conditioning the Airways of Mice with Bleomycin Increases the Efficiency of Orthotopic Lung Cancer Cell Engraftment

Biz önceden airways yaralanma ile Klima tarafından fare ciğerlerine akciğer kanser hücrelerinin orthotopic engraftment önemli ölçüde geliştirmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yaklaşım aynı zamanda akciğer microenvironment, metastatik yayılması, akciğer kanseri komorbiditeler içinde stromal etkileşimleri çalışmaya uygulanabilir ve daha verimli bir şekilde hasta oluşturmak için xenografts türetilmiş.

Bleomycin ile fareler Airways önceden Merkezi Klima Orthotopic akciğer kanseri hücre Engraftment verimliliğini artırır

Lung cancer is a deadly treatment refractory disease that is biologically heterogeneous. To understand and effectively treat the full clinical spectrum of ...

pre-conditioning-airways-mice-with-bleomycin-increases-efficiency

Research

JoVE Journal

Medicine

13.5K Görüntüleme.  Yale University School of Medicine. Biz önceden airways yaralanma ile Klima tarafından fare ciğerlerine akciğer kanser hücrelerinin orthotopic engraftment önemli ölçüde geliştirmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yaklaşım aynı zamanda akciğer microenvironment, metastatik yayılması, akciğer kanseri komorbiditeler içinde stromal etkileşimleri çalışmaya uygulanabilir ve daha verimli bir şekilde hasta oluşturmak için xenografts türetilmiş.

Video: Pre-Conditioning the Airways of Mice with Bleomycin Increases the Efficiency of Orthotopic Lung Cancer Cell Engraftment

Bronchial Thermoplasty:  A Novel Therapeutic Approach to Severe Asthma

Bronchial thermoplasty is a non-drug procedure for severe persistent asthma that delivers thermal energy to the airway wall in a precisely controlled manner to reduce excessive airway smooth muscle. Reducing airway smooth muscle decreases the ability of the airways to constrict, thereby reducing the frequency of asthma attacks. Bronchial thermoplasty is delivered by the Alair System and is performed in three outpatient procedure visits, each scheduled approximately three weeks apart. The first procedure treats the airways of the right lower lobe, the second treats the airways of the left lower lobe and the third and final procedure treats the airways in both upper lobes. After all three procedures are performed the bronchial thermoplasty treatment is complete.
Bronchial thermoplasty is performed during bronchoscopy with the patient under moderate sedation. All accessible airways distal to the mainstem bronchi between 3 and 10 mm in diameter, with the exception of the right middle lobe, are treated under bronchoscopic visualization. Contiguous and non-overlapping activations of the device are used, moving from distal to proximal along the length of the airway, and systematically from airway to airway as described previously. Although conceptually straightforward, the actual execution of bronchial thermoplasty is quite intricate and procedural duration for the treatment of a single lobe is often substantially longer than encountered during routine bronchoscopy. As such, bronchial thermoplasty should be considered a complex interventional bronchoscopy and is intended for the experienced bronchoscopist. Optimal patient management is critical in any such complex and longer duration bronchoscopic procedure. This article discusses the importance of careful patient selection, patient preparation, patient management, procedure duration, postoperative care and follow-up to ensure that bronchial thermoplasty is performed safely.
Bronchial thermoplasty is expected to complement asthma maintenance medications by providing long-lasting asthma control and improving asthma-related quality of life of patients with severe asthma. In addition, bronchial thermoplasty has been demonstrated to reduce severe exacerbations (asthma attacks) emergency rooms visits for respiratory symptoms, and time lost from work, school and other daily activities due to asthma.

Bronchial thermoplasty is a non-drug procedure for severe persistent asthma that delivers thermal energy to the airway wall in a precisely controlled manner to reduce excessive airway smooth muscle. Reducing airway smooth muscle decreases the ability of the airways to constrict, thereby reducing the frequency of asthma attacks.

Bronş Thermoplasty: Şiddetli Astım Yeni Bir Tedavi Yaklaşımı

Bronchial thermoplasty is a non-drug procedure for severe persistent asthma that delivers thermal energy to the airway wall in a precisely controlled ...

Tıp

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and subsequent cell adhesion. After their bladders are transurethrally catheterized and drained, animals are again catheterized to permit insertion of a platinum wire into bladders without damaging the urethra or bladder. The catheters are made of Teflon to serve as an insulator for the wire, which will conduct electrical current into the bladder to create a burn injury. An electrocautery unit is used to deliver 2.5W to the exposed end of the wire, burning away extracellular layers and providing attachment sites for carcinoma cells that are delivered in suspension to the bladder through a subsequent catheterization. Cells remain in the bladder for 90 minutes, after which the catheters are removed and the bladders allowed to drain naturally. The development of tumor is monitored via ultrasound. Specific attention is paid to the catheterization technique in the accompanying video.

Bladder tumors are established in female mice in a minimally invasive fashion through catheterization, local cauterization, and subsequent adhesion of carcinoma cells to the burn sites.

Murin Mesane Kanseri bir Ortotopik Model

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient management strategies. Orthotopic mouse models of oral cancer have been developed to facilitate the study of factors that impact invasion and serve as model system for evaluating anti-tumor therapeutics. In these systems, visualization of disseminated tumor cells within oral cavity tissues has typically been conducted by either conventional histology or with in vivo bioluminescent methods. A primary drawback of these techniques is the inherent inability to accurately visualize and quantify early tumor cell invasion arising from the primary site in three dimensions. Here we describe a protocol that combines an established model for squamous cell carcinoma of the tongue (SCOT) with two-photon imaging to allow multi-vectorial visualization of lingual tumor spread. The OSC-19 head and neck tumor cell line was stably engineered to express the F-actin binding peptide LifeAct fused to the mCherry fluorescent protein (LifeAct-mCherry). Fox1nu/nu mice injected with these cells reliably form tumors that allow the tongue to be visualized by ex-vivo application of two-photon microscopy. This technique allows for the orthotopic visualization of the tumor mass and locally invading cells in excised tongues without disruption of the regional tumor microenvironment. In addition, this system allows for the quantification of tumor cell invasion by calculating distances that invaded cells move from the primary tumor site. Overall this procedure provides an enhanced model system for analyzing factors that contribute to SCOT invasion and therapeutic treatments tailored to prevent local invasion and distant metastatic spread. This method also has the potential to be ultimately combined with other imaging modalities in an in vivo setting.

A comprehensive overview of the techniques involved in generating a mouse model of oral cancer and quantitative monitoring of tumor invasion within the tongue through multi-photon microscopy of labeled cells is presented. This system can serve as a useful platform for the molecular assessment and drug efficacy of anti-invasive compounds.

Oral Skuamöz Hücre Karsinomu Ortotopik Fare Modeli Tümör Hücre Invasion Multi-foton Görüntüleme

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment

We present a novel method for treating bladder cancer with intravesically delivered small activating RNA (saRNA) in an orthotopic xenograft mouse bladder tumor model. The mouse model is established by urethral catheterization under inhaled general anesthetic. Chemical burn is then introduced to the bladder mucosa using intravesical silver nitrate solution to disrupt the bladder glycosaminoglycan layer and allows cells to attach. Following several washes with sterile water, human bladder cancer KU-7-luc2-GFP cells are instilled through the catheter into the bladder to dwell for 2 hours. Subsequent growth of bladder tumors is confirmed and monitored by in vivo bladder ultrasound and bioluminescent imaging. The tumors are then treated intravesically with saRNA formulated in lipid nanoparticles (LNPs). Tumor growth is monitored with ultrasound and bioluminescence. All steps of this procedure are demonstrated in the accompanying video.

Establishing an orthotopic bladder tumor model to evaluate antitumor effects of intravesically delivered saRNA and monitoring tumor growth by ultrasound and bioluminescent imaging.

Bir Ortotopik Mesane Tümörü Model ve intravezikal Sarna Tedavisinin Değerlendirilmesi

We present a novel method for treating bladder cancer with intravesically delivered small activating RNA (saRNA) in an orthotopic xenograft mouse bladder ...

Orthotopic Aortic Transplantation in Mice for the Study of Vascular Disease

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. This is largely true, but there are a number of important principles that can reduce the difficulty of these procedures and enhance reproducibility. Orthotopic aortic transplantation is an excellent procedure in which to learn these principles because it involves only two end-to-end anastomoses, but requires good suturing technique and handling of the vessels for consistent success. This procedure begins with the procurement of a length of abdominal aorta from a donor animal, followed by division of the native aorta in the recipient. The procured aorta is then placed between the divided ends of the recipient aorta and sutured into place using end-to-end anastomoses. To accomplish this objective successfully requires a high degree of concentration, good tools, a steady hand, and an appreciation of how easily the vasculature of a mouse can be damaged, resulting in thrombosis. Learning these important principles is what occupies most of the beginner's time when learning microsurgery in small rodents. Throughout this protocol, we refer to these important points. This model can be used to study vascular disease in a variety of different experimental systems1-8. In the context shown here, it is most often used for the study of post-transplant vascular disease, a common long-term complication of solid organ transplantation in which intimal hyperplasia occurs within the allograft. The primary advantage of the model is that it facilitates quantitative morphometric analyses and the transplanted vessel lies contiguous to the endogenous vessel, which can serve as an additional control9. The technique shown here is most often used for mice weighing 18-25 grams. We have accumulated most of our experience using the C57BL/6J, BALB/cJ, and C3H/HeJ strains.

We describe a technique in which a section of the abdominal aorta from a mouse is transplanted orthotopically to just below the renal arteries in an allogeneic or syngeneic recipient. This technique can be useful in studies in which transplantation of large arteries of uniform size is deemed advantageous.

Damar Hastalığı Çalışmaları Farelerde Ortotopik Aort Nakli

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. ...

Bioluminescent Orthotopic Model of Pancreatic Cancer Progression

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%. New therapeutic options are critically needed and depend on improved understanding of pancreatic cancer biology. To better understand the interaction of cancer cells with the pancreatic microenvironment, we demonstrate an orthotopic model of pancreatic cancer that permits non-invasive monitoring of cancer progression. Luciferase-tagged pancreatic cancer cells are resuspended in Matrigel and delivered into the pancreatic tail during laparotomy. Matrigel solidifies at body temperature to prevent leakage of cancer cells during injection. Primary tumor growth and metastasis to distant organs are monitored following injection of the luciferase substrate luciferin, using in vivo imaging of bioluminescence emission from the cancer cells. In vivo imaging also may be used to track primary tumor recurrence after resection. This orthotopic model is suited to both syngeneic and xenograft models and may be used in pre-clinical trials to investigate the impact of novel anti-cancer therapeutics on the growth of the primary pancreatic tumor and metastasis.

Improved understanding of pancreatic cancer biology is critically needed to enable the development of better therapeutic options to treat pancreatic cancer. To address this need, we demonstrate an orthotopic model of pancreatic cancer that permits non-invasive monitoring of cancer progression using in vivo bioluminescence imaging.

Pankreas Kanseri İlerleme Bioluminescent Ortotopik Model

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%.  New therapeutic options are critically needed and depend on improved ...

Noninvasive Intratracheal Intubation to Study the Pathology and Physiology of Mouse Lung

The use of a model that mimics the condition of lung diseases in humans is critical for studying the pathophysiology and/or etiology of a particular disease and for developing therapeutic intervention. With the increasing availability of knockout and transgenic derivatives, together with a vast amount of genetic information, mice provide one of the best models to study the molecular mechanisms underlying the pathology and physiology of lung diseases. Inhalation, intranasal instillation, intratracheal instillation, and intratracheal intubation are the most widely used techniques by a number of investigators to administer materials of interest to mouse lungs. There are pros and cons for each technique depending on the goals of a study. Here a noninvasive intratracheal intubation method that can directly deliver exogenous materials to mouse lungs is presented. This technique was applied to administer bleomycin to mouse lungs as a model to study pulmonary fibrosis.

The use of a model that mimics the condition of lung diseases in humans is critical for studying the pathophysiology and/or etiology of a particular disease and for developing therapeutic intervention. Here a noninvasive intratracheal intubation method that can directly deliver exogenous materials to mouse lungs is presented.

Noninvaziv Entübasyon Fare Akciğer Patolojisi ve Fizyolojisi Eğitim için

The use of a model that mimics the condition of lung diseases in humans is critical for studying the pathophysiology and/or etiology of a particular ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms at work during MI and developing effective therapeutic approaches requires methodology to reproducibly simulate the clinical incidence and reflect the pathophysiological changes associated with MI. Here, we describe a surgical method to induce MI in mouse models that can be used for short-term ischemia-reperfusion (I/R) injury as well as permanent ligation. The major advantage of this method is to facilitate location of the left anterior descending artery (LAD) to allow for accurate ligation of this artery to induce ischemia in the left ventricle of the mouse heart. Accurate positioning of the ligature on the LAD increases reproducibility of infarct size and thus produces more reliable results. Greater precision in placement of the ligature will improve the standard surgical approaches to simulate MI in mice, thus reducing the number of experimental animals necessary for statistically relevant studies and improving our understanding of the mechanisms producing cardiac dysfunction following MI. This mouse model of MI is also useful for the preclinical testing of treatments targeting myocardial damage following MI.

We introduce a surgical method to induce experimental ischemia/reperfusion (I/R) injury to simulate myocardial infarction (MI) in mouse models that allows for more clarity in positioning of the ligation on the left anterior descending artery (LAD) to increase the reproducibility of MI experiments in mice.

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the functions of proteins involved in oncogenic progression or help to discover new tumor suppressors. In addition, injecting cancer cells into mice with different genotypes might provide a better understanding of the importance of the stromal compartment. Many models may be useful to investigate certain aspects of disease progression but do not recapitulate the entire cancerous process. In contrast, breast cancer cells engraftment to the mammary fat pad of mice better recapitulates the location of the disease and presence of the proper stromal compartment and therefore better mimics human cancerous disease. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into mice orthotopically and explain how to collect tissues to analyse the tumor milieu and metastasis to distant organs. Using this model, many aspects (growth, angiogenesis, and metastasis) of cancer can be investigated simply by providing a proper environment for tumor cells to grow.

Cancer is a complex disease that is influenced by the tissue surrounding the tumor as well as local pro- and anti-inflammatory mediators. Therefore, orthotropic injection models, rather than subcutaneous models may be useful to study cancer progression in a manner that better mimics human pathology.

Farelerin Meme Fat Pad içine Meme Kanseri Hücreleri Ortotopik Enjeksiyon Tümör Büyüme Eğitim için.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Non-invasive Assessment of the Efficacy of New Therapeutics for Intestinal Pathologies Using Serial Endoscopic Imaging of Live Mice

Animal models of inflammatory bowel disease (IBD) and colorectal cancer (CRC) have provided significant insight into the cell intrinsic and extrinsic mechanisms that contribute to the onset and progression of intestinal diseases. The identification of new molecules that promote these pathologies has led to a flurry of activity focused on the development of potential new therapies to inhibit their function. As a result, various pre-clinical mouse models with an intact immune system and stromal microenvironment are now heavily used. Here we describe three experimental protocols to test the efficacy of new therapeutics in pre-clinical models of (1) acute mucosal damage, (2) chronic colitis and/or colitis-associated colon cancer, and (3) sporadic colorectal cancer. We also outline procedures for serial endoscopic examination that can be used to document the therapeutic response of an individual tumor and to monitor the health of individual mice. These protocols provide complementary experimental platforms to test the effectiveness of therapeutic compounds shown to be well tolerated by mice.

We describe methods for longitudinal monitoring of the efficacy of therapeutics for the treatment of colonic pathologies in mice using a rigid endoscope. This protocol can be readily used for the characterization of the therapeutic response of an individual tumor in live mice and also for monitoring potential disease relapse.

Canlı Fareler Seri endoskopik Görüntüleme kullanma Bağırsak Patolojilerde Yeni Therapeutics Etkinliğinin Non-invaziv Değerlendirme

Animal models of inflammatory bowel disease (IBD) and colorectal cancer (CRC) have provided significant insight into the cell intrinsic and extrinsic ...