Name: establishment of a clonal culture of unicellular conjugating algae
Uploaded: 2018-07-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 53 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishment of a Clonal Culture of Unicellular Conjugating Algae at JoVE.com

Biz Hisayoshi Nozaki (Tokyo Üniversitesi), Takashi Nakada (Keio Üniversitesi), Yuka Marukawa Hashimoto (Japonya Kadın Üniversitesi) ve Hiroyuki Sekimoto (Japonya Kadın Üniversitesi) teşekkür ederim. Gözden geçirenler kendi yorum için teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışmada bilim promosyon, Japonya, Japonya toplumdan bilimsel araştırma (No. 26440223 ve 15 H 04413) için bir Grant-in-Aid ve yeni teknoloji geliştirme Vakfı Hibe Yuki Tsuchikane için tarafından desteklenmiştir.

1. toplama algler içeren su örneği
Not: Tek hücreli conjugatophytes gölleri, bataklıklar ve çeltik alanları gibi durgun tatlı su alanlarda büyümek. Bir yosun içeren su örneği bir kültür yük üretmek için bu ortamların birini toplanır. Aşağıdaki öğeler işlemine başlamadan önce ihtiyaç vardır: bir plankton net, tek kullanımlık bir pipet ve bir şişe veya su örnekleri toplamak için bir 50 mL tüp.
<ol><li>Bir göl ortamında net bir plankton yosun denizden toplamak için kullanın. Amaca bağlı olarak uygun bir net kullanın. Not: Net üst kısmındaki Su geçirgen. Tarafından net yakaladı yosun plankton net alt kapsayıcıya yoğunlaşmıştır. Kaba bir kafes küçük yosun geçmesine izin verir. İyi bir kafes kolayca tıkanmış.</li>
	<li>(Yaklaşık 50 mL) su 50 mL tüp ya da 100 mL plastik şişe aktarmak. Konsantre su örneği laboratuvara getir.</li>
	<li>Tek hücreli conjugatophytes de bataklıklar veya çeltik alanlarını büyümeye. Bu sığ su gibi yerlerde, algler içeren su örneği doğrudan bir damlalık ile tatmak mümkündür. Ardından 50 mL tüp ya da 50 mL plastik şişe su (30-50 mL) aktarın. Not: örnek herhangi bir toprak içermiyor olabilir böylece su dikkatle toprak yüzeyi üzerinde örneklenir.</li>
</ol>2. onay alg
Not: Aşağıdaki öğeler gereklidir: bir büyüteç veya taşınabilir mikroskop ve 60 mm çanak gözlem için.
<ol><li>Tek kullanımlık pipet ise yosun örnek varlığını doğrulamak için örnek doğrudan gözlemlemek için Büyüteç kullanın. Not: Yaklaşık büyük hücreler kolayca 400-1000 µm (Örneğin, Closterium ehrenbergii) uzunluğunda olabilir gözlenen bu yöntemi kullanarak.</li>
	<li>Yosun taşınabilir mikroskop altında onaylamak için bir plastik laboratuvar tabağına su örneği dökün.<ol>
<li>Üst yarısı iç kısmı (yaklaşık 3 mL) örnek koymak (kapak) 60 mm Petri dish, sonra alt yarısında, üst kapak iç kısmı karşı karşıya onun alt kısmı ile yer. Not: Bu yöntem örnek hareket etmesini tutar ve gözlem kolaylaştırır.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. yalıtım için cam kapiller pipet Pasteur pipet üzerinden hazırlanması
Not: işlemi başlamadan önce aşağıdaki öğeler gereklidir: Pasteur Pipetler, bir raf Pasteur Pipetler, eldiven, bir lastik ampul, bir ruh lamba, metanol ruhu lamba, bir çakmak, forseps, çöp kutusu, camlar için için için steril ve temiz oda veya laminar akış hood (gerekirse).
<ol><li>Bir alkol brülör tutuşturmak.<ol>
<li>İnce cam kapiller pipet yalıtım için üretmek için alev değil titreşen emin olun. Alev keskinleştirmek ve Pasteur pipet ucu, eritin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Isı Steril cam Pasteur pipet forseps kullanarak el ile ve ipucu yan tarafında kauçuk ampul desteklenir, alev üzerinde.</li>
	<li>Pasteur pipet alev kapalı almak ve o streç.<ol>
<li>Cam eritme, hızlı bir şekilde Pasteur pipet alev kaldırmak ve sonra çekin. Not: Bu deneyde, Pasteur pipet 15-20 cm. tarafından Make emin alev kapatın çekerek sırasında olan pipet uzatıldı.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Cam kapiller pipet ucu için uygun uzunlukta kesin. Selam bölümü en iyi olduğu için için belgili tanımlık uç idealdir. Not: Bu çalışmada, bir cam kapiller pipet ucu 5-10 cm ile hazırlanmıştır.<ol>
<li>Kılcal erime sonra atmak ve alev koymak onaylamak emin olun.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Cam kapiller pipet yayımlanan kabarcıklar açılış belgili tanımlık uç boyutunu gösterir. İzole edilmesi için hücre için doğru boyutu seçin. Kabarcıklar yaklaşık 1 mm Closterium türler, yalıtım ile 10-20 µm hücre genişlikleri için uygun.</li>
</ol>4. tek hücreli yalıtım cam kapiller pipet tarafından
Not: Başlamadan önce aşağıdaki öğeleri ihtiyaç vardır: bir ters ışık mikroskobu, watch gözlük, bir plastik tabak ve steril dişli test CA Orta (Tablo 1) içeren veya CA orta7şartına tüpleri.
<ol><li>Bir kaç saat gözlük (22 mm çapında ve 1 mm derinlik), her içeren 1 mL steril CA orta hazırlayın.</li>
	<li>Hedef hücre alanında toplanan su örneği üzerinden ayırma.<ol>
<li>Hedef hücreleri içeren plastik tabak içine su örneği (yaklaşık 30-40 mL) dökün.</li>
		<li>Örnek bir ters ışık mikroskobu altında Plastik tabak kesilmediğini gözleyerek, cam kapiller pipet kullanarak tek hücreleri seçin.</li>
		<li>Hücre hücre aspirasyon kılcal eylem tarafından kolaylaştırmak için yakın cam kapiller pipet getir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Hücreleri 1 mL steril CA Orta (Şekil 1a) içeren bir izleme cam içine aktarın.</li>
	<li>Tekrar bir yeni cam kapiller pipet steril CA ortamdan kullanarak hücreleri almak ve steril CA Orta (Şekil 1b) içeren bir ikinci izle cam için transfer. Not: Bu işlem tek bir hücre spot plaka (Şekil 1 c) izole kadar yinelenir.</li>
	<li>Yeni bir cam kapiller pipet kullanarak tek hücre kadar almak ve sonunda CA orta veya şartına CA Orta (Şekil 1 d) 14 mL içeren bir test tüpünde aktarın. Örnek bir 16-h ışık: 8 altında 23 ° C'de kuluçkaya-h karanlık döngüsü 2 hafta boyunca. Not: hücre bölünmesi4kolaylaştırmak için klimalı ortamda çevresini hücre büyümesini salgılanan, bilinmeyen factor(s) hücre çoğalması için eklenmiştir. Klonal bir kültür kurulmuşsa, kültür orta4şartına CA orta hazırlayın. Kültür başarılı olursa yeşile döndürür.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Wickett, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phylotranscriptomic+analysis+of+the+origin+and+early+diversification+of+land+plants.">Phylotranscriptomic analysis of the origin and early diversification of land plants.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 111, E4859-E4868 (2014).</li><li>Delwiche, C. F., Cooper, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+evolutionary+origin+of+a+terrestrial+flora.">The evolutionary origin of a terrestrial flora.</a> Current Biology. 25, R899-R910 (2015).</li><li>Daste, P., Neuville, D., Victor-Baptiste, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+procedure+for+obtaining+clonal+isolation+of+diatoms.">A simple procedure for obtaining clonal isolation of diatoms.</a> British Journal of Psychology. 18, 1-3 (1983).</li><li>Pringsheim, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pure Cultures of Algae: Their Preparation and Maintenance. , 119 (1946).</li><li>Sieracki, M., Poulton, N., Crosbie, N., Andersen, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+isolation+techniques+for+microalgae.">Automated isolation techniques for microalgae.</a> Algal Culturing Techniques: Automated isolation techniques for microalgae. , 101-116 (2005).</li><li>Andersen, R. A., Kawachi, M., Andersen, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traditional+microalgae+isolation+techniques.">Traditional microalgae isolation techniques.</a> Algal Culturing Techniques: Traditional micro algae isolation techniques. , 83-100 (2005).</li><li>Abe, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+nuclear+transformation+of+the+Closterium+peracerosum-strigosum-littorale+complex.">Stable nuclear transformation of the Closterium peracerosum-strigosum-littorale complex.</a> Plant and Cell physiology. 52, 1676-1685 (2011).</li><li>Tsuchikane, Y., Tsuchiya, M., Kokubun, Y., Abe, J., Sekimoto, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conjugation+processes+of+Penium+margaritaceum+(Zygnemophyceae,+Charophyta).">Conjugation processes of Penium margaritaceum (Zygnemophyceae, Charophyta).</a> Phycological Research. 59, 74-82 (2011).</li><li>Kanda, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR/Cas9-based+knockouts+reveal+that+CpRLP1+is+a+negative+regulator+of+the+sex+pheromone+PR-IP+in+the+Closterium+peracerosum-strigosum-littorale+complex.">CRISPR/Cas9-based knockouts reveal that CpRLP1 is a negative regulator of the sex pheromone PR-IP in the Closterium peracerosum-strigosum-littorale complex.</a> Scientific Reports. 7, 17873 (2017).</li><li>Ichimura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mating+types+and+reproductive+isolation+in+Closterium-ehrenbergii+Meneghini.">Mating types and reproductive isolation in Closterium-ehrenbergii Meneghini.</a> Botanical Magazine-Tokyo. 94, 325-334 (1981).</li><li>Sekimoto, H., Satoh, S., Fujii, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+and+physiological+properties+of+a+protein+inducing+protoplast+release+during+conjugation+in+the+Closterium+peracerosum-strigosum-littorale+complex.">Biochemical and physiological properties of a protein inducing protoplast release during conjugation in the Closterium peracerosum-strigosum-littorale complex.</a> Planta. 182, 348-354 (1990).</li><li>Ichimura, T., Watanabe, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Closterium+calosporum+complex+from+the+Ryukyu+Islands-Variation+and+taxonomical+problems.">The Closterium calosporum complex from the Ryukyu Islands-Variation and taxonomical problems.</a> Memoirs of the National Science Museum. 7, (1974).</li><li>Provasoli, L., Pintner, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artificial+media+for+fresh-water+algae:+problems+and+suggestions+.">Artificial media for fresh-water algae: problems and suggestions .</a> The Ecology of Algae, a symposium held at the Pymatuning Laboratory of Field Biology on June 18 and 19, 1959. , 84-96 (1960).</li><li>Provasoli, L., Tryon, C. A., Hartmann, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Media++&amp;+prospects+for+the+cultivation+of+marine+algae.">Media &amp; prospects for the cultivation of marine algae.</a> Proceedings of U. S.-Japan Conference in Hakone, Japan. , 63-75 (1968).</li><li>Guillard, R. R. L., Andersen, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+methods+for+microalgae.">Purification methods for microalgae.</a> Algal Culturing Techniques: Purification methods for microalgae. , 117-132 (2005).</li></ol>

Mevcut yöntemini kullanarak, Closterium sp. 9 klonal kültür suşları %60 başarı oranı temsil eden su örneği (Inba1), izole 15 hücrelerden kuruldu. Tür kimliği gelecekte morfolojik gözlem yanı sıra moleküler filogenetik Analizi8gibi DNA analizleri yapılacaktır.
Mevcut yönteminde su örneği tazelik için başarı oranı önemlidir. Su örnekleri hücrelerden en kısa zamanda alan koleksiyonu sonra ayırmak daha iyidir. Her ne kadar Closterium türlerinin (Örneğin, C. ehrenbergii, C. peracerosum-strigosum-littorale karmaşık) hücreleri su örnek için 7 d 4-8 ° C'de depolayarak korunabilir, yalıtım hücrelerin arzu edilir Rezervasyonun yapıldığı gün toplama ya da öbür gün. Yani çamaşır Tekrarlamaların sayısını artırmayı hedef hücreleri dışında herhangi bir kirletici kaldırmak önemlidir (Örneğin, > 3 x) kültürlerin bir kirlenme mikroorganizmaların toprak ve hücreleri tarafından engel olabilir.
Bu tekniğin bir sınırlama kültür bu protokol (CA veya şartına CA orta) için kullanılan ortam her zaman tüm conjugating algler için uygun değildir. Bazı durumlarda, başka bir ortam, aynı zamanda farklı ışık ve sıcaklık koşullarında kullanmayı düşünün gerekebilir. Ayrıca, bu bir kültür bir tek hücreden büyüdü olup olmadığını kanıtlaması zor olduğundan, doğru bir şekilde sadece 1 hücre hücreleri bir test tüpünde aktarırken almak gereklidir. Bu nedenle, Transfer bir yeni cam kapiller pipet ile her zaman yapılmalıdır.
Klonal bir kültür yöntemi yıkama Bu pipet ile kurulması bir klasik/standart yöntemdir ve bir çalışma için istediğiniz hücreleri izole etmek için kullanmak için en güvenilir yöntemdir. Birçok çalışmalar8,9,10,11 kullanılan yosun conjugating klonal kültürleri mevcut yöntemini kullanarak kuruldu. Conjugating yosun klonal bir kültür olmadan analiz etmek zordur. Ayrıca, son yıllarda de novo tüm genom dizileri (MinION nanopore sequencer kullanarakÖrneğin,) elde etmek kolay oldu ve klonal kültürler oluşturma de novo sıralama daha da kolaylaştıracaktır. Başka bir deyişle, bu yöntem ilk adım gelecekte onların biyolojik çeşitliliğin daha iyi anlamak için bu alg eğitim olur.
Bir kararlı kültür yük oluşturmak için doğru protokolü içinde kritik belirli adımları gerçekleştirmek gereklidir. Sadece tek bir hücreye geçişini izin vermek için en uygun bir diyafram ile cam kapiller pipet hazırlanması en önemli adımdır. Cam kapiller pipet diyafram faiz hücre küçük eksen uzunluğundan daha biraz daha fazla olması gerekir. Optimum cam kapiller pipet tek bir hücre kılcal eylem tarafından Aspire. Ancak, diyafram çapı çok büyükse, kılcal da olmayan yaşam kirletici maddeler veya bile (bir) diğer organism(s), hedef hücre ek olarak çizecektir.
Bir cam kapiller pipet optimum bir diyafram ile elde etmek için aşağıdaki noktaları unutmayın. İlk olarak, alev ayağı cam kapiller pipet Isıtma dar olması gerekir. Ardından, Pasteur pipet çekerek zaman o alev kaldırılması gerekir; Aksi takdirde, Pasteur pipet diyafram çökecek.
Ekipman ve kapsayıcılar bu protokol için gösterilen temel ve değiştirilebilir. Örneğin, çok iyi plakaları izle gözlük bir kuyu ile yerine kullanarak, hücre çamaşır daha verimli hale getirilebilir. Buna ek olarak, konteyner benzer diğerleri için yedek olabilir. Tek bir hücre kültür ortamına son aşamada aktararak, klonal bir kültür kurulabilir.
Steril bir kap hazırlama ve bir mahallede çalışma axenic (kirlenmemiş) suşlar kuracak. Kontaminasyonu önlemek için daha--dan 3 x ile taze aliquots çamaşır adımı yinelemek gereklidir. Bazen bakteriler de antibiyotik15ekleyerek sterilize.
Bu yöntem desmid üzerinde (Zygnematales) yalıtım odaklı, ancak cam kapiller pipet diyafram boyutunu değiştirerek, bu farklı ölçekli plankton yalıtım için uygulanabilir.

Algler (Zygnematales düzenin) conjugating, olarak da bilinen conjugatophytes, işgal arazi bitkiler1,2hemen atalarının en yakın yaşayan akrabası olarak anahtar bir filogenetik konumu. Klonal kültürleri oluşturulmuş: yosun taksonomik, fizyolojik ve genetik çalışmalar çok çeşitli için son yıl içinde açmıştır. Doğal bir alandan mikroorganizmaların yalıtım teknikleri uzun geleneği3,4var. Son yıllarda, otomatik yalıtım teknikleri kullanarak akış sitometresi de5kurdu. Klonal bir kültür kurulması için tek bir hücre elde etmek için kullanılan en yaygın yöntemdir cam kapiller pipet6kullanarak tek hücreli yalıtım. Bu geleneksel yöntem beceri ve hassas bir deneysel protokol gerektirir.
Bu makalede, biz yosun örnekleme alanı örnekleri ve Closterium türler gibi conjugating tek hücreli alg klonal kültürler kurulması bir cam kapiller pipet kullanarak göstermek. Bitkisel hücreleri içeren su örneği bir alan sitesinden (Örneğin, bir göl, gölet veya çeltik alan) toplanır. Hücreler bir cam kapiller pipet kullanarak su örneği izole ve sonra yıkanır. Hücreleri azot takıma Orta (CA orta) içeren bir test tüpünde bir 16-h ışık: 8 altında 24 ° C'de kültürlü-s karanlık rejimi. Bu yöntem klonal kültürler oluşturmak için diğer mikroalg yalıtmak için uygundur.

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;Sampling&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plankton net</td><td>RIGO, Japan</td><td>N-NO380T</td><td>Mesh size: 32 &amp;micro;m</td></tr><tr><td>Portable microscope (e.g., Nature Scope FABRE)</td><td>Nikon, Japan</td><td>JAN: 4960759 206725</td><td>Magnification: 20&amp;times;</td></tr><tr><td>Loupe (e.g., Peak 1985 Steinheil System Magnifier)</td><td>Tohkai Sangyo Co. Ltd., Japan</td><td>1985-20</td><td>Magnification: 20&amp;times;</td></tr><tr><td>Spuit</td><td>EIKEN CHEMICAL CO. LTD. Japan</td><td>Sterile spuit No.4</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Tube (50 mL centrifuge tubes with screw caps)</td><td>Labcon, USA</td><td>3181-345-008</td><td></td></tr><tr><td>Bottle (100 mL Polycarbonate bottle)</td><td>AS ONE Corporation, Japan</td><td>1-7403-01</td><td></td></tr><tr><td>60 mm dish</td><td>Asahi glass Co. Ltd., Japan</td><td>1010-060</td><td>&amp;nbsp;For observation of algae.&amp;nbsp; 60 mm/non-treated dish</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Preparation of a micropipette&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pasteur pipettes (cotton plugged 9&amp;rdquo; Pasteur Pipettes)</td><td>Fisher Scientific, USA</td><td>13-678-8B</td><td>7 &amp;times; 225 mm</td></tr><tr><td>Rubber bulb (SPOID SILICONE, 1 cc)</td><td>AS ONE Corporation, Japan</td><td>5-5669-01</td><td>10 &amp;times; 40 mm</td></tr><tr><td>Stainless forceps</td><td>AS ONE Corporation, Japan</td><td>PT-09</td><td>110 mm</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Single-cell isolation&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Watch glass (Blood reaction board)</td><td>Sekiya Rika Co., Ltd, Japan</td><td>F14-155-030</td><td>to rinse cells during isolation. 22 mm diameter and 1 mm depth</td></tr><tr><td>Threaded test tubes&amp;nbsp;</td><td>Fujimotorika, Co., Ltd, Japan</td><td>XX142</td><td>18 &amp;Oslash; &amp;times; 170 mm</td></tr><tr><td>Inverted light microscope</td><td>Olympus, Tokyo, Japan</td><td>CKX41N</td><td>for isolation of algae.</td></tr><tr><td>Plastic dish</td><td>Asahi glass Co. Ltd., Japan</td><td>SH90-15E&amp;nbsp;</td><td>&amp;nbsp;90 &amp;times; 15 mm</td></tr></tbody></table>

establishment of a clonal culture of unicellular conjugating algae

Mikroalg kullanmak için klonal kültürleri fizyolojisi, genetik, Taksonomi ve Mikrobiyoloji gibi çeşitli konularda çalışmaları kurmak için önemlidir. Böylece, klonal kültürler kurmak için teknikleri geliştirmek son derece önemlidir. Bu makalede, biz conjugating alga klonal kültürleri kurulması göstermek. Su örnekleri tarladan toplanır. Daha sonra medyada yer ve klonal bir kültür oluşturmak için uygun koşullar altında yetiştirilen bir cam kapiller pipet, kullanarak izole hücrelerdir.

50 mL su örneği (Inba1) bir örnekleme noktasından Gölü INBA numa toplanmıştır (pH 8.1, 24,7 ° C; 35 ° 44′30. 2″N 140 ° 12′08. 2″E), Sakura-shi, Chiba, Japonya, 25 Haziran 2016. Su örneği 4-8 ° C'de depolanan Koleksiyon, bir örnek Closterium sp., ertesi günü bitkisel hücreleri içeren su örneği izole edildi. Bitkisel hücrelerin on beş özdeş morfoloji (Inba1-1, -2, -3, -4, -5, -6, -7, -8, -9, -10, -11, -12, -13, -14 ve -15) alınan örneğin izole edildi ve yöntemi yıkama pipet kullanarak yıkadım. On beş izole tek hücreleri bağımsız test şartına CA orta 15 mL içeren tüplerde kültürlü. Kuluçka 2 hafta sonra hücre çoğalması 9 test tüplerde gözlendi [Inba1-1, -3, -4, -5 (Şekil 2a), -6, -9, -10, -12 (Şekil 2b) ve -13; Tablo 2]. Dokuz klonal kültürler Inba1 örnek yalıtır (Şekil 3) kuruldu.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57761/57761fig1.jpg"> Resim 1 : Tek hücreli yalıtım akışının. (bir) Transfer tek hedef yosun hücre özgün su örneği steril ortamda ilk izle cam. (b, c) Hücreyi tekrar yıkamak için sonraki izle cam aktarmak. Hiçbir diğer hücreleri/kirletici hedef Orta olana bu yordamı yinelenmelidir; üç saat gözlük şemada burada örnek olarak gösterilir. (d) son olarak, yıkanmış hücre büyüme için uygun orta tüp bebek transfer. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57761/57761fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57761/57761fig2v2.jpg"> Resim 2 : Bitkisel hücrelerin fotoğraflarını Closterium SP. (bir) Inba1-5 ve (b) Inba1-12 burada gösterilir. Ölçek çubuğu 50 µm. = <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57761/57761fig2v2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57761/57761fig3.jpg"> Şekil 3 : Inba1 örnek klonal bir kültürden kurulması. 2 hafta boyunca kültürlü test tüpleri altından çekildi. Yıldız işareti hücre çoğalması gösterir. Ölçek çubuğu 2 cm. = <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57761/57761fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Ortam adı</td>
			<td>Başvuru</td>
			<td colspan="2">Yorumlar</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="13">CA</td>
			<td rowspan="13">Ichimura ve Watanabe12
</td>
			<td>CA (NO3)2·4H2O</td>
			<td>2 mg</td>
		</tr>
<tr>
<td>KNO3
</td>
			<td>10 mg</td>
		</tr>
<tr>
<td>NH4NO3
</td>
			<td>5 mg</td>
		</tr>
<tr>
<td>Β-Na2glycerophosphate·5H2O</td>
			<td>3 mg</td>
		</tr>
<tr>
<td>MgSO4·7H2O</td>
			<td>2 mg</td>
		</tr>
<tr>
<td>B12 vitamini</td>
			<td>0,01 μg</td>
		</tr>
<tr>
<td>Biotin</td>
			<td>0,01 μg</td>
		</tr>
<tr>
<td>Tiamin HCl</td>
			<td>1 μg</td>
		</tr>
<tr>
<td>PIV metaller</td>
			<td>0.1 mL</td>
		</tr>
<tr>
<td>Fe (EDTA; olarak 1:1 molar)</td>
			<td>0.1 mL</td>
		</tr>
<tr>
<td>HEPES</td>
			<td>40 mg</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">100 mL yapmak için su ekleyin</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">pH 7.2 için NaOH ile ayarlamak</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="7">P IV metaller</td>
			<td rowspan="7">13 Provasoli ve Pintner
</td>
			<td>Na2EDTA·2H2O</td>
			<td>100 mg</td>
		</tr>
<tr>
<td>FeCl3·6H2O</td>
			<td>19,6 mg</td>
		</tr>
<tr>
<td>MnCl2· 4H2O</td>
			<td>3.6 mg</td>
		</tr>
<tr>
<td>ZnCl2*</td>
			<td>1,04 mg</td>
		</tr>
<tr>
<td>CoCl2·6H2O</td>
			<td>0.4 mg</td>
		</tr>
<tr>
<td>Na2MoO4·2H2O</td>
			<td>0,25 mg</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">100 mL yapmak için su ekleyin</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Fe (EDTA; olarak 1:1 molar)</td>
			<td rowspan="3">Provasoli14
</td>
			<td>Fe (NH4)2(yani4)2·6H2O,</td>
			<td>70,2 mg</td>
		</tr>
<tr>
<td>Na2EDTA·2H2O,</td>
			<td>66 mg</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">100 mL yapmak için su ekleyin</td>
		</tr>
<tr>
<td>Klimalı CA orta</td>
			<td>Abe vd.7
</td>
			<td colspan="2">Taze CA orta hücrelerde 14-20 gün kuluçkaya. Kültürlü orta nitel filtre kağıdı kullanarak filtreleme tarafından toplamak ve ısıyla (15dk için 121 ° C) tarafından filtre uygulanmış orta sterilize.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="4">* İçinde imkan sağlayacaktır, 1,04 mg ZnCl2 2.2 mg ZnSO4·7H2O. tarafından değiştirilir</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 1: Formülasyonları Bu çalışmada kullanılan medya.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Su örneği</td>
			<td>Hücrenin adını</td>
			<td>Sonra kültür durumu</td>
			<td>Soy adı</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="15">Inba1</td>
			<td>-1</td>
			<td>Hücreleri hızla</td>
			<td>Inba1-1</td>
		</tr>
<tr>
<td>-2</td>
			<td>Değişmedi</td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>-3</td>
			<td>Hücreleri hızla</td>
			<td>inba1-3</td>
		</tr>
<tr>
<td>-4</td>
			<td>Hücreleri hızla</td>
			<td>inba1-4</td>
		</tr>
<tr>
<td>-5</td>
			<td>Hücreleri hızla</td>
			<td>inba1-5</td>
		</tr>
<tr>
<td>-6</td>
			<td>Hücreleri hızla</td>
			<td>inba1-6</td>
		</tr>
<tr>
<td>-7</td>
			<td>Değişmedi</td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>-8</td>
			<td>Değişmedi</td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>-9</td>
			<td>Hücreleri hızla</td>
			<td>inba1-9</td>
		</tr>
<tr>
<td>-10</td>
			<td>Hücreleri hızla</td>
			<td>inba1-10</td>
		</tr>
<tr>
<td>-11</td>
			<td>Değişmedi</td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>-12</td>
			<td>Hücreleri hızla</td>
			<td>inba1-12</td>
		</tr>
<tr>
<td>-13</td>
			<td>Hücreleri hızla</td>
			<td>inba1-13</td>
		</tr>
<tr>
<td>-14</td>
			<td>Değişmedi</td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>-15</td>
			<td>Değişmedi</td>
			<td></td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 2: Yalıtım deneme Özeti.

Watch this Scientific Journal Video about Establishment of a Clonal Culture of Unicellular Conjugating Algae at JoVE.com

Establishment of a Clonal Culture of Unicellular Conjugating Algae

Tek hücreli alg Conjugating klonal bir kültür kurulması

Bu makalede, biz klonal bir doğal alanı sitesinden toplanan tek hücreli conjugating yosun türlerin kültürleri kurulması göstermek.

It is essential to establish clonal cultures of microalgae for use in studies of various topics, such as physiology, genetics, taxonomy, and microbiology. ...

establishment-of-a-clonal-culture-of-unicellular-conjugating-algae

Research

JoVE Journal

Biology

13.2K Görüntüleme.  Japan Women's University. Bu makalede, biz klonal bir doğal alanı sitesinden toplanan tek hücreli conjugating yosun türlerin kültürleri kurulması göstermek.

Video: Establishment of a Clonal Culture of Unicellular Conjugating Algae

The Barnacle Balanus improvisus as a Marine Model - Culturing and Gene Expression

Barnacles are marine crustaceans with a sessile adult and free-swimming, planktonic larvae. The barnacle Balanus (Amphibalanus) improvisus is particularly relevant as a model for the studies of osmoregulatory mechanisms because of its extreme tolerance to low salinity. It is also widely used as a model of settling biology, in particular in relation to antifouling research. However, natural seasonal spawning yields an unpredictable supply of cyprid larvae for studies. A protocol for the all-year-round culturing of B. improvisus has been developed and a detailed description of all steps in the production line is outlined (i.e., the establishment of adult cultures on panels, the collection and rearing of barnacle larvae, and the administration of feed for adults and larvae). The description also provides guidance on troubleshooting and discusses critical parameters (e.g., the removal of contamination, the production of high-quality feed, the manpower needed, and the importance of high-quality seawater). Each batch from the culturing system maximally yields roughly 12,000 nauplii and can deliver four batches in a week, so up to almost 50,000 larvae per week can be produced. The method used to culture B. improvisus is, probably, to a large extent also applicable to other marine invertebrates with free-swimminglarvae. Protocols are presented for the dissection of various tissues from adults as well as the production of high-quality RNA for studies on gene expression. It is also described how cultured adults and reared cyprids can be utilized in a wide array of experimental designs for examining gene expression in relation to external factors. The use of cultured barnacles in gene expression is illustrated with studies of possible osmoregulatory roles of Na+/K+ ATPase and aquaporins.

The Barnacle Balanus improvisus as a Marine Model - Culturing and Gene Expression

The barnacle Balanus (Amphibalanus) improvisus is a model for studying osmoregulation and antifouling. However, natural seasonal spawning yields an unpredictable supply of cyprid larvae. Here, a protocol for the all-year-round culturing of B. improvisus is described, including the production of larvae. The use of cultured barnacles in gene expression studies is illustrated.

Deniz bir Model - olarak Barnacle Balanus improvisus kültür ve gen ekspresyonu

Barnacles are marine crustaceans with a sessile adult and free-swimming, planktonic larvae. The barnacle Balanus (Amphibalanus) improvisus is particularly ...

Çevre

Cultivation of Green Microalgae in Bubble Column Photobioreactors and an Assay for Neutral Lipids

There is significant interest in the study of microalgae for engineering applications such as the production of biofuels, high value products, and for the treatment of wastes. As most new research efforts begin at laboratory scale, there is a need for cost-effective methods for culturing microalgae in a reproducible manner. Here, we communicate an effective approach to culture microalgae in laboratory-scale photobioreactors, and to measure the growth and neutral lipid content of that algae. Instructions are also included on how to set up the photobioreactor system. Although the example organisms are species of Chlorella and Auxenochlorella, this system can be adapted to cultivate a wide range of microalgae, including co-cultures of algae with non-algae species. Stock cultures are first grown in bottles to produce inoculum for the photobioreactor system. Algae inoculum is concentrated and transferred to photobioreactors for cultivation in batch mode. Samples are collected daily for the optical density readings. At the end of the batch culture, cells are harvested by centrifuge, washed, and freeze dried to obtain a final dry weight concentration. The final dry weight concentration is used to create a correlation between the optical density and the dry weight concentration. A modified Folch method is subsequently used to extract total lipids from the freeze-dried biomass and the extract is assayed for its neutral lipid content using a microplate assay. This assay has been published previously but protocol steps were included here to highlight critical steps in the procedure where errors frequently occur. The bioreactor system described here fills a niche between simple flask cultivation and fully-controlled commercial bioreactors. Even with only 3-4 biological replicates per treatment, our approach to culturing algae leads to tight standard deviations in the growth and lipid assays.

Here, we present a protocol to construct lab-scale bubble column photobioreactors and use them to culture microalgae. It also provides a method for the determination of the culture growth rate and neutral lipid content.

Kabarcık sütun Photobioreactors ve bir tahlil yeşil mikroalg ekimi için nötr lipitler

There is significant interest in the study of microalgae for engineering applications such as the production of biofuels, high value products, and for the ...

Cultivation of the Marine Pelagic Tunicate Dolioletta gegenbauri (Uljanin 1884) for Experimental Studies

Gelatinous zooplanktons play a crucial role in ocean ecosystems. However, it is generally difficult to investigate their physiology, growth, fecundity, and trophic interactions primarily due to methodological challenges, including the ability to culture them. This is particularly true for the doliolid, Dolioletta gegenbauri. D. gegenbauri commonly occurs in productive subtropical continental shelf systems worldwide, often at bloom concentrations capable of consuming a large fraction of daily primary production. In this study, we describe cultivation approaches for collecting, rearing, and maintaining D. gegenbauri for the purpose of conducting laboratory-based studies. D. gegenbauri and other doliolid species can be captured live using obliquely towed conical 202 &micro;m mesh plankton nets from a drifting ship. Cultures are most reliably established when water temperatures are below 21 &deg;C and are started from immature gonozooids, maturing phorozooids, and large nurses. Cultures can be maintained in rounded culture vessels on a slowly rotating plankton wheel and sustained on a diet of cultured algae in natural seawater for many generations. In addition to the ability to establish laboratory cultures of D. gegenbauri, we demonstrate that the collection condition, algae concentration, temperature, and exposure to naturally conditioned seawater are all critical to the culture establishment, growth, survival, and reproduction of D. gegenbauri.

Cultivation of the Marine Pelagic Tunicate Dolioletta gegenbauri Uljanin 1884 for Experimental Studies

Doliolids, including the species Dolioletta gegenbauri, are small gelatinous marine zooplankton of ecological significance found on productive subcontinental shelf systems worldwide. The difficulty of culturing these delicate organisms limits their investigation. In this study, we describe cultivation approaches for collecting, rearing, and maintaining the doliolid Dolioletta gegenbauri.

Deneysel Çalışmalar için Deniz Pelajik Tunicate Dolioletta gegenbauri (Uljanin 1884) Yetiştiriciliği

Gelatinous zooplanktons play a crucial role in ocean ecosystems. However, it is generally difficult to investigate their physiology, growth, fecundity, ...

Streamlined Sampling and Cultivation of the Pelagic Cosmopolitan Larvacean, Oikopleura dioica

Oikopleura dioica is a planktonic chordate with exceptional filter-feeding ability, rapid generation time, conserved early development, and a compact genome. For these reasons, it is considered a useful model organism for marine ecological studies, evolutionary developmental biology, and genomics. As research often requires a steady supply of animal resources, it is useful to establish a reliable, low-maintenance culture system. Here we describe a step-by-step method for establishing an O. dioica culture. We describe how to select potential sampling sites, collection methods, target animal identification, and the set-up of the culturing system. We provide troubleshooting advice based on our own experiences. We also highlight critical factors that help sustain a robust culture system. Although the culture protocol provided here is optimized for O. dioica, we hope our sampling technique and culture setup will inspire new ideas for maintaining other fragile pelagic invertebrates.

Streamlined Sampling and Cultivation of the Pelagic Cosmopolitan Larvacean, Oikopleura dioica

Oikopleura dioica is a tunicate model organism in various fields of biology. We describe sampling methods, species identification, culturing setup, and culturing protocols for the animals and algal feed. We highlight key factors that helped strengthen the culture system and discuss the possible problems and resolutions.

Pelagic Cosmopolitan Larvacean, Oikopleura dioica'nın Kolay Örnekleme silikve ekimi

Oikopleura dioica is a planktonic chordate with exceptional filter-feeding ability, rapid generation time, conserved early development, and a compact ...

Coupling Carbon Capture from a Power Plant with Semi-automated Open Raceway Ponds for Microalgae Cultivation

In the United States, 35% of the total carbon dioxide (CO2) emissions come from the electrical power industry, of which 30% represent natural gas electricity generation. Microalgae can biofix CO2 10 to 15 times faster than plants and convert algal biomass to products of interest, such as biofuels. Thus, this study presents a protocol that demonstrates the potential synergies of microalgae cultivation with a natural gas power plant situated in the southwestern United States in a hot semi-arid climate. State-of-the-art technologies are used to enhance carbon capture and utilization via the green algal species Chlorella sorokiniana, which can be further processed into biofuel. We describe a protocol involving a semi-automated open raceway pond and discuss the results of its performance when it was tested at the Tucson Electric Power plant, in Tucson, Arizona. Flue gas was used as the main carbon source to control pH, and Chlorella sorokiniana was cultivated. An optimized medium was used to grow the algae. The amount of CO2 added to the system as a function of time was closely monitored. Additionally, other physicochemical factors affecting algal growth rate, biomass productivity, and carbon fixation were monitored, including optical density, dissolved oxygen (DO), electroconductivity (EC), and air and pond temperatures. The results indicate that a microalgae yield of up to 0.385 g/L ash-free dry weight is attainable, with a lipid content of 24%. Leveraging synergistic opportunities between CO2 emitters and algal farmers can provide the resources required to increase carbon capture while supporting the sustainable production of algal biofuels and bioproducts.

A protocol is described to utilize the carbon dioxide in natural gas power plant flue gas to cultivate microalgae in open raceway ponds. Flue gas injection is controlled with a pH sensor, and microalgae growth is monitored with real time measurements of optical density.

Mikroalg Yetiştiriciliği için Yarı Otomatik Açık Yuvarlanma Yolu Göletleri ile Bir Enerji Santralinden Karbon Yakalama Birleştirme

In the United States, 35% of the total carbon dioxide (CO2) emissions come from the electrical power industry, of which 30% represent natural gas ...

Mating and Tetrad Separation of Chlamydomonas reinhardtii for Genetic Analysis

The unicellular green alga Chlamydomonas reinhardtii (Chlamydomonas) has become a popular organism for research in diverse areas of cell biology and genetics because of its simple life cycle, ease of growth and manipulation for genetic analysis, genomic resources, and transformability of the nucleus and both organelles. Mating strains is a common practice when genetic approaches are used in Chlamydomonass, to create vegetative diploids for analysis of dominance, or following tetrad dissection to ascertain nuclear vs. organellar inheritance, to test allelism, to analyze epistasy, or to generate populations for the purpose of map-based cloning. Additionally, genetic crosses are routinely used to combine organellar genotypes with particular nuclear genotypes. Here we demonstrate standard methods for gametogenesis, mating, zygote germination and tetrad separation. This protocol consists of an easy-to-follow series of steps that will make genetic approaches amenable to scientists who are less familiar with Chlamydomonas. Key parameters and trouble spots are explained. Finally, resources for further information and alternative methods are provided.

Mating and Tetrad Separation of Chlamydomonas reinhardtii for Genetic Analysis

Mating and tetrad separation are required for genetic analysis in Chlamydomonas reinhardtii. Here we demonstrate standard methods for gametogenesis, mating, zygote germination and tetrad dissection. This protocol consists of an easy-to-follow series of steps that will make genetic approaches amenable to scientists who are less familiar with Chlamydomonas.

Çiftleşme ve tetrad Ayırma Chlamydomonas reinhardtii Genetik Analiz

The unicellular green alga Chlamydomonas reinhardtii (Chlamydomonas) has become a popular organism for research in diverse areas of cell biology and ...

Biyoloji

A Multi-Omics Extraction Method for the In-Depth Analysis of Synchronized Cultures of the Green Alga Chlamydomonas reinhardtii

Microalgae have been the focus of research for their applications in the production of high value compounds, food and fuel. Moreover, they are valuable photosynthetic models facilitating the understanding of the basic cellular processes. System wide studies enable comprehensive and in-depth understanding of molecular functions of the organisms. However, multiple independent samples and protocols are required for proteomics, lipidomics and metabolomics studies introducing higher error and variability. A robust high throughput extraction method for the simultaneous extraction of chlorophyll, lipids, metabolites, proteins and starch from a single sample of the green alga Chlamydomonas reinhardtii is presented here. The illustrated experimental setup is for Chlamydomonas cultures synchronized using 12 h/12 h light/dark conditions. Samples were collected over a 24 h cell cycle to demonstrate that the metabolites, lipids and starch data obtained using various analytical platforms are well conformed. Furthermore, protein samples collected using the same extraction protocol were used to conduct detailed proteomics analysis to evaluate their quality and reproducibility. Based on the data, it can be inferred that the illustrated method provides a robust and reproducible approach to advance understanding of various biochemical pathways and their functions with greater confidence for both basic and applied research.

A Multi-Omics Extraction Method for the In-Depth Analysis of Synchronized Cultures of the Green Alga Chlamydomonas reinhardtii

System-wide analysis of multiple biomolecules is crucial to gain functional and mechanistic insights into biological processes. Hereby, an extensive protocol is described for high throughput extraction of lipids, metabolites, proteins and starch from a single sample harvested from synchronized Chlamydomonas culture.

Yeşil Alga Chlamydomonas reinhardtii eşitlenmiş kültürlerin derinlemesine analizi için Multi-Omics ekstraksiyon yöntemi

Microalgae have been the focus of research for their applications in the production of high value compounds, food and fuel. Moreover, they are valuable ...

Gelişim Biyolojisi

<meta charset="utf8"></head><body>Büyüme Faktörü Optimizasyonu ile Mikroalglerde Klorofil Üretiminin Artırılması

Evaluation of the Effect of Growth Factors on Chlorophylls a and b Production from Microalgae

Microalgae contain two main groups of pigments: chlorophylls and carotenoids. Chlorophyll is a green pigment that absorbs light energy and transforms it into chemical energy to facilitate the synthesis of organic compounds. This pigment serves as a valuable primary source for biotechnological input products in the food, pharmaceutical, and cosmetic industries due to its high antioxidant properties and coloring capabilities. The objective of this research was to evaluate the effect of growth factors (CO2 concentration, light color, and light intensity) through a Taguchi L4 experimental design on cell growth and the cellular content of chlorophyll a and b in Chlorella sorokiniana, followed by validation of the method using Haematococcus pluvialis microalgae as an additional study model. Cell growth was quantified using the optical density spectrophotometric technique at a wavelength of 550 nm. For the quantification of chlorophylls, a cell extract was obtained using a 90% pure acetone solution, and subsequently, the concentrations of chlorophylls a and b were quantified using spectrophotometric techniques at wavelengths of 647 nm and 664 nm, according to the method described by Jeffrey and Humphrey. The experimental results indicated that controlling conditions of low CO2 addition, purple light, and low light intensity increases both cell growth and the concentration of chlorophylls a and b within the cells. The implementation of this chlorophyll quantification method allows for quick, simple, and precise determination of chlorophyll content, as the wavelengths used are at the absorbance peaks of both types of chlorophylls, making this technique easily reproducible for any microalgae under study.

<meta charset="utf8"></head><body>Yazar Spot Işığı: Biyoteknolojik Olarak İlgili İkincil Metabolitlerin Üretimi için Büyüme Faktörlerinin Optimize Edilmesi

The present study highlights the advantages of employing the method developed by Jeffrey and Humphrey for extracting and quantifying fat-soluble pigments from microalgae. This method serves as a valuable tool for assessing the influence of growth factors on chlorophyll production and cellular content in these organisms.

Büyüme Faktörlerinin Mikroalglerden Klorofil a ve b Üretimi Üzerine Etkisinin Değerlendirilmesi

Microalgae contain two main groups of pigments: chlorophylls and carotenoids. Chlorophyll is a green pigment that absorbs light energy and transforms it ...

Tek hücreli alg Conjugating klonal bir kültür kurulması

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Deniz bir Model - olarak Barnacle Balanus improvisus kültür ve gen ekspresyonu

Kabarcık sütun Photobioreactors ve bir tahlil yeşil mikroalg ekimi için nötr lipitler

Deneysel Çalışmalar için Deniz Pelajik Tunicate Dolioletta gegenbauri (Uljanin 1884) Yetiştiriciliği

Pelagic Cosmopolitan Larvacean, Oikopleura dioica'nın Kolay Örnekleme silikve ekimi

Mikroalg Yetiştiriciliği için Yarı Otomatik Açık Yuvarlanma Yolu Göletleri ile Bir Enerji Santralinden Karbon Yakalama Birleştirme

Çiftleşme ve tetrad Ayırma Chlamydomonas reinhardtii Genetik Analiz

Yeşil Alga Chlamydomonas reinhardtii eşitlenmiş kültürlerin derinlemesine analizi için Multi-Omics ekstraksiyon yöntemi

Büyüme Faktörlerinin Mikroalglerden Klorofil a ve b Üretimi Üzerine Etkisinin Değerlendirilmesi

Büyüme Faktörlerinin Mikroalglerden Klorofil a ve b Üretimi Üzerine Etkisinin Değerlendirilmesi

Büyüme Faktörlerinin Mikroalglerden Klorofil a ve b Üretimi Üzerine Etkisinin Değerlendirilmesi