Yazarlar Drs. Jennifer Yang ve Alexander (Sasha) Kauffman yanı sıra çok sayıda yararlı ve önemli tartışmalar bu tekniği ile teknik destek için teşekkür ederiz. Serum hormon testleri tarafından Yang vd., 2017 üreme Ligand tahlil ve analiz çekirdek, Eunice Kennedy Shriver NICHD/NIH (NCTRI) Grant P50-HD28934 tarafından desteklenen araştırma için Virginia Üniversitesi Merkezi'nde yapıldı.
Araştırma Destek kaynakları: R01 NICHD 86100 (KMB), RBM T32 NICHD 007203 tarafından desteklenen.

Burada açıklanan yöntemi ulusal kurumları sağlık hayvan bakım ve kullanım yönergeleri ile anlaşma ve kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi San Diego Kaliforniya Üniversitesi tarafından yetkili olmamıştır.
1. İklimlendirme işleme için
<ol><li>İşlemi ele<ol>
<li>Yer fare Biyogüvenlik kabini kafesleri. Birinci fare kafesi ve Biyogüvenlik kabini içinde (Örneğin bir temiz kafes kapak) uygun bir yüzey üzerinde yer kaldırın.</li>
		<li>Yavaşça çalışma yüzeyinin üzerinde fareyi bir elin başparmak ve işaret parmağı ile kuyruk tabanı tutarak dizginlemek. O zaman, diğer elin başparmak ve işaret parmağı ile kuyruk ucuna tabanından kuyruk ventral yüzeyinde sıkıca inme. Bu 6 kez okşayarak tekrar (yani 1 set) ve fare için onun kafes.</li>
		<li>6 dk bekleyin ve 1.1.2 arasındaki adımları yineleyin. Not: böylece her fare işleme her gün yapılan toplam 24 kuyruk vuruşları alacaksınız toplam olarak, adım 1.1.2 4 kez (yani 4 Set 6 vuruş), fare yinelenir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Günlük kullanım sıklığı<ol>
<li>Beşten önce planlanan kan toplama günü iki hafta kadar fareler adım 1.1, beş gün haftada (fareler Cumartesi veya Pazar iklimlendirme son iki hafta kadar işlenmez) açıklandığı gibi işlemek.</li>
		<li>Deneysel tedavi örnekleme süresi boyunca herhangi bir ek işleme (Örneğin scruffing veya mayi enjeksiyon) eklerseniz, fareler için bu işleme etkinliği her işleme oturumu sırasında parkenizin. Not: enjeksiyon yordamlarına iklimlendirme için sahte enjeksiyon gerçekleştirmek için körelmenin bir iğne kullanın.</li>
		<li>Planlanan kan toplama gün önce iki hafta boyunca, haftada yedi gün 1. 1 ', açıklandığı gibi fareler başa.</li>
		<li>En az iki hafta önce planlanan kan toplama günü fare örnekleme sırasında fareler kesintileri en aza indirmek için çiftler halinde ev.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. kan toplama boru hazırlanması
<ol><li>Vericiyi LH tahlil arabellekte bir cam şişe hazırlayın: %0,2 sığır serum albümin ve % 0.05 Ara-20 PBS [0.2 g KCl, 8 g NaCl, 1.44 g Na2HPO4 (susuz), 0,24 g KH2PO4, 1 L, pH 7.4, filtre ve basınçlı kap Ultrasaf Su] , mağaza 4 ° C'de 1 Not: hazırlanacak NEMS LH tahlil arabellek hacmi tabanlı örnekleri ve (2.2 & tartışma) aşağıda belirtildiği şekilde örnek başına birim sayısı hesaplanabilir</li>
	<li>Kan toplama tüpler (0,6 mL microcentrifuge tüpler) hazırlayın. Etiket tüpleri ve aliquot tahlil arabellek (57 µL tampon tüp; başına dikkat edin, bu birimin toplanan kan kan hacmi veya istenen arabelleğine kan oranı bağlı olarak farklı olabilir). Tüpler örnekleme öncesinde gün hazır olun, 4 ° C'de depolayın</li>
</ol>3. kan toplama
<ol><li>Kan toplama malzemeleri hazırlanması.<ol>
<li>Biyogüvenlik kabini kullanıma hazırlamak ve başlık veya bir sepeti aşağıdaki belgeleri düzenlemek: 10 µL (3 µL veya istenen kan toplama hacmi ayarlı), pipet ipuçları pipet, atık kutusu için kullanılan pipet ipuçları, Zamanlayıcı, çıktının hayvan sayıları ve örnek numaraları () ile örnekleme veya hayvan sorunları ile ilgili notlar için) kova kan toplama tüpler, makas ve küçük gazlı bez (2 "x 2") ile buz. Çünkü fareler rahatsız bir sesli alarm yok Not: "say" işlev laboratuvar zamanlayıcıyla yararlıdır</li>
		<li>Örnekleme sırasında doğru fare hızlı kimlik ile yardımcı olmak için her fare işaretçisini (temel) kuyruğunu işaretlemek için kalıcı bir kalem kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kuyruk ve öncesi kan toplama hazırlanması kırpma.<ol>
<li>45 dk kan toplama başlamadan önce ilk fare kendi kafesinden çıkarmak ve yüzeyinde (temiz kafes kapak iyi çalışıyor) bir uygun Biyogüvenlik içinde kabine yerleştirin.</li>
		<li>1-2 mm aseptik hazırlık takip fare kuyruk ucu kaldırmak için keskin, steril makas kullanın (yani alkol ve betadin ile fırçalayın). Not: Bu uyanık hayvanlarda nazik kısıtlama veya isoflurane anestezi altında yapılabilir.  Ayrıca, analjezi yerel IACUC tavsiyesi takip sağlanabilir.</li>
		<li>Dikkatle fare kuyruğu yukarıda açıklandığı gibi inme (1.1.2; 1-2 vuruş genellikle yeterlidir) damlacık kan formları kuyruk ucuna kadar.</li>
		<li>Bir pipet temiz bir ucu ile kuyruk uç--dan 3 µL kan toplamak ve kan pipet ucuyla atmak için kullanın.</li>
		<li>Fareyi onun kafes için göndermeden önce kan akışını durdurdu emin olun. Gerekirse, steril gazlı bezle hafif basınç uygulayın.</li>
		<li>3.2.1 - 3.2.5 tüm fareler için yineleyin. Sonraki kan örnekleri fare kuyruk kuyruk ucu kan formları bir damlacık kadar sıkıca okşayarak tarafından toplanabilir. Not: Eğer kan damlacık sonra sert vuruş oluşturmak değil, kuyruk salin batırılmış bir gazlı bez pad ile sildi. Pıhtı forma daha büyük olasılıkla daha az sıklıkla örnekleme sırasında (yani > 15 dk aralıklarla). Pıhtı damar temizlenir sonra örnekleme devam edebilirsiniz.</li>
		<li>Bu ön kan toplama hazırlık döneminde her 6 dakikada yaklaşık 45 dakika için yukarıda açıklandığı gibi her fare üzerinden 3 µL kan toplamaya devam. Kan ve Pipet Ucu atın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kan örnekleme<ol>
<li>Yukarıda açıklandığı gibi kuyruk ucu 3 µL kan toplamak. Tüm 3 µL örnek pipet ucu (olmadan kabarcıklar veya yatak kirlenme) içine alınır emin olmak için dikkatli. Etiketli bir tüp tahlil arabellekte içine kan örneği çıkarma. INVERSION tarafından mix ve buz için tüp dönmek.</li>
		<li>Fareyi onun kafes için göndermeden önce kan akışını durdurdu emin olun. Gerekirse, steril gazlı bezle hafif basınç uygulayın.</li>
		<li>3.3.1 - 3.3.2 için her fare, her 6 dk önceden belirlenmiş örnekleme süresi için yineleyin. Her hayvan için sıkıntı (örneğin kısmen kapalı göz kapakları, kambur konum [başka bir tedavi tarafından neden olduğu değil] veya işleme yanıt eksikliği) belirtileri izlemek ve örnekleme, sonlandırmak. Not: Davranış sıkıntı veya örnekleme sona ermesi gerektiren başka komplikasyonlara yol son derece seyrek bizim laboratuvar olarak ortaya çıkar.</li>
		<li>Hayvan are değil euthanized kan örnekleme takip, kuyruk ucundan kan akımı tamamen durdurdu emin. Her hayvanın kafes (veya değişiklik kafesleri) içinden dökülmüş kan silin ve hayvan kafesleri konut raf dönün.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. örnek işleme ve analiz
<ol><li>-20 ° C'de kan örnekleri analiz kadar saklayın. Not: Tam kan örneklerinde tahlil arabellekte seyreltilmiş LH denetlesinler; hiçbir ayrım sera veya plazma depolama veya analiz önce gereklidir.</li>
	<li>Tahlil kan örnekleri vericiyi ELISA tarafından daha önce1 ve rapor değerleri ng/ml tam kan tahlil arabellekte örnek hacminin seyreltme için düzeltme aşağıdaki açıklanan.</li>
	<li>LH bakliyat veri kümesi tanımlayın. Hesaplamak ve kötü darbe genlik ve darbe frekansını (arası nabız aralığı) gerektiği veya veri kümesi için karşılaştırın. Not: Yayımlanmış ölçüt13,14 ve programları, LH darbeleri tespit için15,16 bulunmaktadır.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Steyn, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+methodology+for+and+assessment+of+pulsatile+luteinizing+hormone+secretion+in+juvenile+and+adult+male+mice.">Development of a methodology for and assessment of pulsatile luteinizing hormone secretion in juvenile and adult male mice.</a> Endocrinology. 154 (12), 4939-4945 (2013).</li><li>McArdle, C. A., Roberson, M. S., Plant, T. M., Zeleznik, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Knobil and Neill's Physiology of Reproduction. , (2015).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> Journal of Pharmacology and Pharmacotherapy. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Steiner, R. A., Bremner, W. J., Clifton, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+luteinizing+hormone+pulse+frequency+and+amplitude+by+testosterone+in+the+adult+male+rat.">Regulation of luteinizing hormone pulse frequency and amplitude by testosterone in the adult male rat.</a> Endocrinology. 111 (6), 2055-2061 (1982).</li><li>Moore, A. M., Prescott, M., Marshall, C. J., Yip, S. H., Campbell, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+a+robust+arcuate+GABAergic+input+to+gonadotropin-releasing+hormone+neurons+in+a+model+of+polycystic+ovarian+syndrome.">Enhancement of a robust arcuate GABAergic input to gonadotropin-releasing hormone neurons in a model of polycystic ovarian syndrome.</a> Proceedings of National Academy of Science U S A. 112 (2), 596-601 (2015).</li><li>Czieselsky, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulse+and+Surge+Profiles+of+Luteinizing+Hormone+Secretion+in+the+Mouse.">Pulse and Surge Profiles of Luteinizing Hormone Secretion in the Mouse.</a> Endocrinology. 157 (12), 4794-4802 (2016).</li><li>Campos, P., Herbison, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+activation+of+GnRH+neurons+reveals+minimal+requirements+for+pulsatile+luteinizing+hormone+secretion.">Optogenetic activation of GnRH neurons reveals minimal requirements for pulsatile luteinizing hormone secretion.</a> Proceedings of National Academy of Science U S A. 111 (51), 18387-18392 (2014).</li><li>Yang, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+Psychosocial+Stress+Inhibits+LH+Pulsatility+and+Kiss1+Neuronal+Activation+in+Female+Mice.">Acute Psychosocial Stress Inhibits LH Pulsatility and Kiss1 Neuronal Activation in Female Mice.</a> Endocrinology. 158 (11), 3716-3723 (2017).</li><li>Clarkson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Definition+of+the+hypothalamic+GnRH+pulse+generator+in+mice.">Definition of the hypothalamic GnRH pulse generator in mice.</a> Proceedings of National Academy of Science U S A. 114 (47), E10216-E10223 (2017).</li><li>Lewis, V. J., Thacker, W. L., Mitchell, S. H., Baer, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+technic+for+obtaining+blood+from+mice.">A new technic for obtaining blood from mice.</a> Laboratory Animal Science. 26 (2 Pt 1), 211-213 (1976).</li><li>Abatan, O. I., Welch, K. B., Nemzek, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+saphenous+venipuncture+and+modified+tail-clip+blood+collection+in+mice.">Evaluation of saphenous venipuncture and modified tail-clip blood collection in mice.</a> Journal of the American Association of Laboratory Animal Science. 47 (3), 8-15 (2008).</li><li>Durschlag, M., Wurbel, H., Stauffacher, M., Von Holst, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repeated+blood+collection+in+the+laboratory+mouse+by+tail+incision--modification+of+an+old+technique.">Repeated blood collection in the laboratory mouse by tail incision--modification of an old technique.</a> Physiology and Behavior. 60 (6), 1565-1568 (1996).</li><li>Goodman, R. L., Karsch, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulsatile+secretion+of+luteinizing+hormone:+differential+suppression+by+ovarian+steroids.">Pulsatile secretion of luteinizing hormone: differential suppression by ovarian steroids.</a> Endocrinology. 107 (5), 1286-1290 (1980).</li><li>Clarke, I. J., Cummins, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+gonadotropin-releasing+hormone+pulse+frequency+associated+with+estrogen-induced+luteinizing+hormone+surges+in+ovariectomized+ewes.">Increased gonadotropin-releasing hormone pulse frequency associated with estrogen-induced luteinizing hormone surges in ovariectomized ewes.</a> Endocrinology. 116 (6), 2376-2383 (1985).</li><li>Vidal, A., Zhang, Q., Medigue, C., Fabre, S., Clement, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DynPeak:+an+algorithm+for+pulse+detection+and+frequency+analysis+in+hormonal+time+series.">DynPeak: an algorithm for pulse detection and frequency analysis in hormonal time series.</a> PLoS One. 7 (7), e39001 (2012).</li><li>Merriam, G. R., Wachter, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Algorithms+for+the+study+of+episodic+hormone+secretion.">Algorithms for the study of episodic hormone secretion.</a> American Journal of Physiology. 243 (4), E310-E318 (1982).</li><li>Xie, T. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Deletion+of+Ghrelin-O-Acyltransferase+on+the+Pulsatile+Release+of+Growth+Hormone+in+Mice.">Effect of Deletion of Ghrelin-O-Acyltransferase on the Pulsatile Release of Growth Hormone in Mice.</a> Journal of Neuroendocrinology. 27 (12), 872-886 (2015).</li><li>Koch, C. E., Leinweber, B., Drengberg, B. C., Blaum, C., Oster, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+between+circadian+rhythms+and+stress.">Interaction between circadian rhythms and stress.</a> Neurobiology of Stress. 6, 57-67 (2017).</li><li>Tuli, J. S., Smith, J. A., Morton, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corticosterone,+adrenal+and+spleen+weight+in+mice+after+tail+bleeding,+and+its+effect+on+nearby+animals.">Corticosterone, adrenal and spleen weight in mice after tail bleeding, and its effect on nearby animals.</a> Laboratory Animal. 29 (1), 90-95 (1995).</li><li>. Animal Welfare Inspection Guide Available from: <a target="_blank" href="https://www.aphis.usda.gov/animal_welfare/downloads/Animal-Care-Inspection-Guide.pdf">https://www.aphis.usda.gov/animal_welfare/downloads/Animal-Care-Inspection-Guide.pdf</a> (2017)</li><li>Steyn, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+method+for+the+determination+of+pulsatile+growth+hormone+secretion+in+mice.">Development of a method for the determination of pulsatile growth hormone secretion in mice.</a> Endocrinology. 152 (8), 3165-3171 (2011).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Burada tarif biz pulsatil LH salgılanmasını farelerde değerlendirilmesi için tam kan kuyruk ucu örnekleri sık sık kan toplanması için bir iletişim kuralı. Bu iletişim kuralı örnekleri akut değişiklikler psikososyal stres maruz takip pulsatil LH salgılanmasını algılanması için toplama sağlar ve LH darbeleri altında diğer akut veya kronik manipülasyonlar değerlendirilmesi için uygundur.
Yükleme-boşaltma kritik bileşenidir LH bakliyat güvenilir ve sağlam profille...

Erbezi işlevi memelilerde gonadotropin salgısını, luteinizan hormon (LH) ve folikül uyarıcı hormon, hipofiz bezi üzerine bağlıdır. Gonadotropins yanıt-e doğru hipotalamik gonadotropin - releasing hormon (GnRH) salgılanmasını pulsatil veya akım desende salgılanan. Sentez ve LH ve FSH salgılanmasını molekülleri hipotalamik GnRH, gonad steroid hormonlar ve aktivin-inhibin-follistatin sisteminin yanı sıra çok sayıda dahil olmak üzere çeşitli endokrin, parakrin ve otokrin eylem ile düzenlenmektedir stres ve enerji dengesi dahil olmak üzere fizyolojik koşullar. 2
LH pulsatil desen kan yaklaşık üstel eleme tarafından takip periferik kana LH oldukça ani bir deşarj doğar. Önemli her LH deşarj frekans ve genlik LH yanıtının Özellikler desen, ikisi de, kısmen, GnRH. son sürüme hipofiz hipotalamik portal kan ölçümü için toplama zorluk tarafından dikte pulsatil GnRH, örnekleme ve LH ölçümü bir proxy olarak hipofiz gonad hipotalamik eksen GnRH düzenlenmesi için kullanılır. Bu nedenle, önemli bilgileri tek bir örnek belirlenemiyor LH bakliyat genliği ve sıklığı kodlanmış olduğunu.
Pulsatil LH salgılanmasını Analizi tarihsel olarak büyük kan hacmi ve sık sık kan örnek koleksiyon için tolerans nedeniyle büyük memeliler (insan, primatlar ve koyun) için sınırlı olmuştur. Kemirgenler, sık sık kan örnekleme fare sınırlıydı ve atriyal kateter kalıcı yolu ile elde. 3 , 4 nispeten düşük maliyet ve genetik kullanılabilirliği (Örneğin cre-lox, CRISPR) ve karmaşık sinir devresi (Örneğin optogenetics, chemogenetics) manipülasyon yapmak fareler bir çekici model organizma; Ancak, sık sık kan örnekleri kazanma ve LH konsantrasyonu daha sonraki analiz kadar son zamanlarda, zor olduğu kanıtlandı. Bu anıtsal görev Steyn ve iş arkadaşları tarafından öncülük. 1 beri o zaman, birkaç labs sık kan örnekleme ve pulsatil LH salgılanmasını deneysel paradigmalar çeşitli değerlendirmek için Ultra-duyarlı LH deneyleri kullanmaya başladı. 5 , 6 , 7 , 8 , 9 bu fareler birden fazla kan örnekleri toplama pratik bir yöntem takip için en az 40 yıl10 yol boyunca yapılan birden fazla iyileştirmeler ile sürdürülen olmuştur belirtilmelidir. 11 , 12
Değerlendirmesi LH darbe desenleri (yani frekans ve genlik), bazal gonadotropin salgısını genetik olarak uysal bu hayvan modelinde izlenmesinde önemli bir arıtma gösterir. Geleneksel olarak, LH konsantrasyonu farelerde tek kan örneği belirlenmiştir. LH konsantrasyonu doğal olarak her darbe sırasında dalgalanıyor çünkü tek nokta örneklerinin bir zayıflık bir son derece değişken veri kümesidir. İzole ölçümleri doğal olarak kritik bilgi LH darbe salgı desenleri tarafından aktarılmaktadır özledim başka bir zayıflıktır. Böylece, özgürce davranmaya içinde sık sık kan örnekleri toplamak için bir yöntemi (dışında nazik işleme sırasında örnekleme) sınırsız fareler gelişmiş bilgi sağlamak ve pulsatil hormon düzenleme araştıran birçok laboratuvarlar için yararlı.
Burada, biz sık topluluğu için bir iletişim kuralı tanımlamak (her 6 dk) kan örnekleri uyanık, yasayı, fareler. Önemlisi, biz bir işleme dahil hangi öncesi ve sonrası değerlendirme akut bir meydan okuma için bir süre kararlı, tam kan örneklerinde pulsatil LH salgılanmasını sağlam ve sürekli tespiti üzerine toplanan için izin veren iklimlendirme Protokolü psiko-sosyal stres immobilizasyon ve kısıtlama yanıt gibi. Etkili bir tahlil LH konsantrasyonu tam kan örneklerinden için daha önce açıklanan; 1 bu protokolü LH nabız ölçümü için kan örnekleri toplamak için bir yöntemi üzerinde duruldu.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="638">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Biosaftey cabinet</td>
			<td style="width:121px;">Lab Products Inc</td>
			<td style="width:119px;">L/F-B</td>
			<td style="width:183px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bovine serum albumin</td>
			<td style="width:121px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">A5403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tween-20</td>
			<td style="width:121px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P2287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">KCl</td>
			<td style="width:121px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P9333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaCl</td>
			<td style="width:121px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Na2HPO4 (anhydrous)</td>
			<td style="width:121px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">S7907</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">KH2PO4</td>
			<td style="width:121px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P5655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ultrapure water</td>
			<td style="width:121px;">Millipore</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Purified and filtered water</td>
		</tr>
		<tr height="92">
			<td height="92" style="height:92px;width:216px;">Broome Rodent Restraint Device</td>
			<td style="width:121px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:119px;">52-0460</td>
			<td style="width:183px;">Not necessary for blood collection, but were used in the collection of representative data.</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:216px;">DynPeak</td>
			<td style="width:121px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:183px;">http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0039001</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

frequent tail-tip blood sampling in mice for the assessment of pulsatile luteinizing hormone secretion

Birçok endokrin sistemlerinde, dolaşımdaki faktörler veya hormonlar sürekli serbest bırakılmaz, ancak yanıt releasing faktör olarak ayrık bir darbe olarak salgılanan. Tek-noktaya örnekleme önlemler tamamen pulsatil hormonlarının normal fizyolojik koşullar altında veya bozukluk koşulları sırasında salgı desen biyolojik önemini anlamak yetersizdir. Luteinizan hormon (LH) anterior hipofiz gonadotrope hücreleri tarafından sentezlenen ve sık sık kan örnekleri topluluğu için nabız değerlendirme gerektiren pulsatil desen salgılanan. İçin bir teknik gelişme sık düşük hacimli örnek koleksiyon, başlangıçta Steyn ve meslektaşları tarafından açıklanan ve bu kadar yüksek-duyarlı LH tahlil gelişimi nedeniyle son zamanlarda, farelerde mümkün olmamıştır. 1 burada tarif biz sık periferik kan örnek koleksiyonundan pulsatil LH salgılanmasını algılamaya yeterli işleme iklimlendirme ile fareler için bir iletişim kuralı. Geçerli protokol LH sağlam ve sürekli darbeleri değerlendirilmesi üzerinde birden fazla saat izin veren bir genişletilmiş iklimlendirme dönemi ayrıntıları. Bu iletişim kuralı, kuyruk ucu kırpılır ve kan el bir pipet kullanarak kuyruk toplanır. Gonadectomized farelerde pulsatil LH değerlendirmesi için seri örneklerdir önemlisi, her 5-6 min 90-180 dakika süreyle toplanan kan toplanması ve LH sağlam darbeleri ölçülmesi yeterli işleme verilen uyanık, özgürce davranmaya farelerde başarılı İklimlendirme ve çevre stresler en aza indirmek için çaba. Yeterli iklimlendirme kan toplama önce 4-5 hafta içinde elde edilebilir. Bu iletişim kuralı tam kan örnekleri pulsatil LH salgılanmasını desenleri değerlendirmesi Mouse, nöroendokrin araştırma için güçlü bir hayvan modeli birden çok saat üzerinde toplama sağlamak için metodoloji gelişmeler vurgulamaktadır.

Temsilcisi LH darbe 4 fareler desenlerini Şekil 1 ' de (veri Yang vd., 2017 yeniden basıldı) gösterilir. LH bir akut psiko-sosyal stres sınama yanıt belirlemek için sık sık kan örneklerinde ölçüldü. Yetişkin kadın C57/Bl6 fareler Ovariektomili ve bu iletişim kuralı için sık sık kan toplama içinde ayrıntılı olarak ele alınır. Kan örnekleri ilk 90 dk LH pulsatil salgı bir ön arıtma temel kurmak için tüm hayvanlar için ...

Watch this Scientific Journal Video about Frequent Tail-tip Blood Sampling in Mice for the Assessment of Pulsatile Luteinizing Hormone Secretion at JoVE.com

Frequent Tail-tip Blood Sampling in Mice for the Assessment of Pulsatile Luteinizing Hormone Secretion

Burada kontrolsüz farelerde sık örnek koleksiyon için bir kuyruk ucu kan örnekleme iletişim kuralı mevcut. Bu yöntem, pulsatil luteinizan hormon salgısı değerlendirilmesi desenleri yararlıdır ve dolaşımdaki diğer faktörleri analiz için adapte.

Pulsatil luteinizan hormon salgısı değerlendirilmesi için kuyruk ucu kan örnekleme farelerde sık

In many endocrine systems, circulating factors or hormones are not released continuously, but are secreted as a discrete pulse in response to a releasing ...

frequent-tail-tip-blood-sampling-mice-for-assessment-pulsatile

Research

JoVE Journal

Neuroscience

14.6K Görüntüleme.  University of California, San Diego School of Medicine. Burada kontrolsüz farelerde sık örnek koleksiyon için bir kuyruk ucu kan örnekleme iletişim kuralı mevcut. Bu yöntem, pulsatil luteinizan hormon salgısı değerlendirilmesi desenleri yararlıdır ve dolaşımdaki diğer faktörleri analiz için adapte.

Video: Frequent Tail-tip Blood Sampling in Mice for the Assessment of Pulsatile Luteinizing Hormone Secretion

Assessment of Motor Balance and Coordination in Mice using the Balance Beam

Brain injury, genetic manipulations, and pharmacological treatments can result in alterations of motor skills in mice. Fine motor coordination and balance can be assessed by the beam walking assay. The goal of this test is for the mouse to stay upright and walk across an elevated narrow beam to a safe platform. This test takes place over 3 consecutive days: 2 days of training and 1 day of testing. Performance on the beam is quantified by measuring the time it takes for the mouse to traverse the beam and the number of paw slips that occur in the process. Here we report the protocol used in our laboratory, and representative results from a cohort of C57BL/6 mice. This task is particularly useful for detecting subtle deficits in motor skills and balance that may not be detected by other motor tests, such as the Rotarod.

Deficits in fine motor coordination can be assessed with the balance beam test. Performance on the beam is quantified by the speed at which the beam is traversed and the number of times the mouse slips on the beam.

Denge kullanarak Fare Motor Denge ve Koordinasyon Değerlendirme

Brain injury, genetic manipulations, and pharmacological treatments can result in alterations of motor skills in mice.  Fine motor coordination and ...

Nörobilim

Assessment of Dendritic Arborization in the Dentate Gyrus of the Hippocampal Region in Mice

Dendritic arborization has been shown to be a reliable marker for examination of structural and functional integrity of neurons. Indeed, the complexity and extent of dendritic arborization correlates well with the synaptic plasticity in these cells. A reliable method for assessment of dendritic arborization is needed to characterize the deleterious effects of neurological disorders on these structures and to determine the effects of therapeutic interventions. However, quantification of these structures has proven to be a formidable task given their complex and dynamic nature. Fortunately, sophisticated imaging techniques can be paired with conventional staining methods to assess the state of dendritic arborization, providing a more reliable and expeditious means of assessment. Below is an example of how these imaging techniques were paired with staining methods to characterize the dendritic arborization in wild type mice. These complementary imaging methods can be used to qualitatively and quantitatively assess dendritic arborization that span a rather wide area within the hippocampal region.

We describe two methods for visualization and quantification of dendritic arborization in the hippocampus of mouse models: real-time and extended depth of field imaging. While the former method allows sophisticated topographical tracing and quantification of the extent of branching, the latter allows speedy visualization of the dendritic tree.

Farelerde Hipokampal Bölgesi Dentate Gyrus dendritik arborization Değerlendirilmesi

Dendritic arborization has been shown to be a reliable marker for examination of structural and functional integrity of neurons. Indeed, the complexity ...

Assessment of Hippocampal Dendritic Complexity in Aged Mice Using the Golgi-Cox Method

Dendritic spines are the protuberances from the neuronal dendritic shafts that contain&#160; excitatory synapses. The morphological and branching variations of the neuronal dendrites within the hippocampus are implicated in cognition and memory formation. There are several approaches to Golgi staining, all of which have been useful for determining the morphological characteristics of dendritic arbors and produce a clear background. The present Golgi-Cox method, (a slight variation of the protocol that is provided with a commercial Golgi staining kit), was designed to assess how a relatively low dose of the chemotherapeutic drug 5-flurouracil (5-Fu) would affect dendritic morphology, the number of spines, and the complexity of arborization within the hippocampus. The 5-Fu significantly modulated the dendritic complexity and decreased the spine density throughout the hippocampus in a region-specific manner. The data presented show that the Golgi staining method effectively stained the mature neurons in the CA1, the CA3, and the dentate gyrus (DG) of the hippocampus. This protocol reports the details for each step so that other researchers can reliably stain tissue throughout the brain with high quality results and minimal troubleshooting.

Here we present a Golgi-Cox protocol in extensive detail. This reliable tissue stain method allows for a high-quality assessment of the cytoarchitecture in the hippocampus, and throughout the entire brain, with minimal troubleshooting.

Yaşlı Bir Farede Hipokampal Dendritik Karmaşıklığın Golgi-Cox Yöntemi ile Değerlendirilmesi

Dendritic spines are the protuberances from the neuronal dendritic shafts that contain&#160; excitatory synapses. The morphological and branching ...

Assessment of Dopaminergic Homeostasis in Mice by Use of High-performance Liquid Chromatography Analysis and Synaptosomal Dopamine Uptake

Dopamine (DA) is a modulatory neurotransmitter controlling motor activity, reward processes and cognitive function. Impairment of dopaminergic (DAergic) neurotransmission is strongly associated with several central nervous system-associated diseases such as Parkinson&#39;s disease, attention-deficit-hyperactivity disorder and drug addiction1,2,3,4. Delineating disease mechanisms involving DA imbalance is critically dependent on animal models to mimic aspects of the diseases, and thus protocols that assess specific parts of the DA homeostasis are important to provide novel insights and possible therapeutic targets for these diseases.
Here, we present two useful experimental protocols that when combined provide a functional read-out of the DAergic system in mice. Biochemical and functional parameters on DA homeostasis are obtained through assessment of DA levels and dopamine transporter (DAT) functionality5. When investigating the DA system, the ability to reliably measure endogenous levels of DA from adult brain is essential. Therefore, we present how to perform high-performance liquid chromatography (HPLC) on brain tissue from mice to determine levels of DA. We perform the experiment on tissue from dorsal striatum (dStr) and nucleus accumbens (NAc), but the method is also suitable for other DA-innervated brain areas.
DAT is essential for reuptake of DA into the presynaptic terminal, thereby controlling the temporal and spatial activity of released DA. Knowing the levels and functionality of DAT in the striatum is of major importance when assessing DA homeostasis. Here, we provide a protocol that allows to simultaneously deduce information on surface levels and function using a synaptosomal6 DA uptake assay.
Current methods combined with standard immunoblotting protocols provide the researcher with relevant tools to characterize the DAergic system.

Synaptosomal dopamine uptake and high-performance liquid chromatography analysis represent experimental tools to investigate dopamine homeostasis in mice by assessing the function of the dopamine transporter and levels of dopamine in striatal tissue, respectively. Here we present protocols to measure dopamine tissue content and assess the functionality of the dopamine transporter.

Dopaminerjik Homeostasis farelerde yüksek performanslı sıvı Kromatografi analizi ve Synaptosomal dopamin alımı kullanımı tarafından değerlendirilmesi

Dopamine (DA) is a modulatory neurotransmitter controlling motor activity, reward processes and cognitive function. Impairment of dopaminergic (DAergic) ...

Assessment of Blood-brain Barrier Permeability by Intravenous Infusion of FITC-labeled Albumin in a Mouse Model of Neurodegenerative Disease

Disruption of blood-brain barrier (BBB) integrity is a common feature for different neurological and neurodegenerative diseases. Although the interplay between perturbed BBB homeostasis and the pathogenesis of brain disorders needs further investigation, the development and validation of a reliable procedure to accurately detect BBB alterations may be crucial and represent a useful tool for potentially predicting disease progression and developing targeted therapeutic strategies.
Here, we present an easy and efficient procedure for evaluating BBB leakage in a neurodegenerative condition like that occurring in a preclinical mouse model of Huntington disease, in which defects in the permeability of BBB are clearly detectable precociously in the disease. Specifically, the high molecular weight fluorescein isothiocyanate labelled (FITC)-albumin, which is able to cross the BBB only when the latter is impaired, is acutely infused into a mouse jugular vein and its distribution in the vascular or parenchymal districts is then determined by fluorescence microscopy.
Accumulation of green fluorescent-albumin in the brain parenchyma functions as an index of aberrant BBB permeability and, when quantitated by using Image J processing software, is reported as Green Fluorescence Intensity.

In this study, we present an easy and efficient procedure for evaluating the disruption of the blood-brain barrier under neurodegenerative conditions. To achieve our objective, we infused high molecular weight fluorescein isothiocyanate labelled (FITC)-albumin into mouse jugular vein and evaluated its leakage into the brain parenchyma by fluorescence microscopy.

Kan - beyin bariyerini geçirgenliği FITC etiketli albümin nörodejeneratif hastalık, bir fare modeli intravenöz infüzyonu tarafından değerlendirilmesi

Disruption of blood-brain barrier (BBB) integrity is a common feature for different neurological and neurodegenerative diseases. Although the interplay ...

An In Vivo Blood-brain Barrier Permeability Assay in Mice Using Fluorescently Labeled Tracers

Blood-brain barrier (BBB) is a specialized barrier that protects the brain microenvironment from toxins and pathogens in the circulation and maintains brain homeostasis. The principal sites of the barrier are endothelial cells of the brain capillaries whose barrier function results from tight intercellular junctions and efflux transporters expressed on the plasma membrane. This function is regulated by pericytes and astrocytes that together form the neurovascular unit (NVU). Several neurological diseases such as stroke, Alzheimer&#39;s disease (AD), brain tumors are associated with an impaired BBB function. Assessment of the BBB permeability is therefore crucial in evaluating the severity of the neurological disease and the success of the treatment strategies employed.
We present here a simple yet robust permeability assay that have been successfully applied to several mouse models both, genetic and experimental. The method is highly quantitative and objective in comparison to the tracer fluorescence analysis by microscopy that is commonly applied. In this method, mice are injected intraperitoneally with a mix of aqueous inert fluorescent tracers followed by anesthetizing the mice. Cardiac perfusion of the animals is performed prior to harvesting brain, kidneys or other organs. Organs are homogenized and centrifuged followed by fluorescence measurement from the supernatant. Blood drawn from the cardiac puncture just before perfusion serves for normalization purpose to the vascular compartment. The tissue fluorescence is normalized to the wet weight and serum fluorescence to obtain a quantitative tracer permeability index. For additional confirmation, the contralateral hemi-brain preserved for immunohistochemistry can be utilized for tracer fluorescence visualization purposes.

An In Vivo Blood-brain Barrier Permeability Assay in Mice Using Fluorescently Labeled Tracers

Here we present a mouse brain vascular permeability assay using intraperitoneal injection of fluorescent tracers followed by perfusion that is applicable to animal models of blood-brain barrier dysfunction. One hemi-brain is used for assessing permeability quantitatively and the other for tracer visualization/immunostaining. The procedure takes 5 - 6 h for 10 mice.

Vivo kan - beyin bariyerini geçirgenliği tahlil Fluorescently kullanarak farelerde izleyiciler etiketli

Blood-brain barrier (BBB) is a specialized barrier that protects the brain microenvironment from toxins and pathogens in the circulation and maintains ...

An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

Ischemic stroke leads to vasogenic cerebral edema and subsequent primary brain injury, which is mediated through destruction of the blood-brain barrier (BBB). Rats with induced ischemic stroke were established and used as in vivo models to investigate the functional integrity of the BBB. Spectrophotometric detection of Evans blue (EB) in the brain samples with ischemic injury could provide reliable justification for the research and development of novel therapeutic modalities. This method generates reproducible results, and is applicable in any laboratory without a need for special equipment. Here, we present a visualized and technical guideline on the detection of the extravasation of EB following induction of ischemic stroke in rats.

An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

The overall goal of this procedure is to provide a highly reproducible technique for in vivo assessment of the blood-brain barrier disruption in rat models of ischemic stroke.

Kan - beyin bariyerini bozulma iskemik inme, bir fare modeli Vivo içinde değerlendirilmesi

Ischemic stroke leads to vasogenic cerebral edema and subsequent primary brain injury, which is mediated through destruction of the blood-brain barrier ...

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

Two-photon imaging is a powerful tool for the in vivo analysis of neuronal circuits in the mammalian brain. However, a limited number of in vivo imaging methods exist for examining the brain tissue of live newborn mammals. Herein we summarize a protocol for imaging individual cortical neurons in living neonatal mice. This protocol includes the following two methodologies: (1) the Supernova system for sparse and bright labeling of cortical neurons in the developing brain, and (2) a surgical procedure for the fragile neonatal skull. This protocol allows the observation of temporal changes of individual cortical neurites during neonatal stages with a high signal-to-noise ratio. Labeled cell-specific gene silencing and knockout can also be achieved by combining the Supernova with RNA interference and CRISPR/Cas9 gene editing systems. This protocol can, thus, be used for analyzing the developmental dynamics of cortical neurons, molecular mechanisms that control the neuronal dynamics, and changes in neuronal dynamics in disease models.

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

We present an in vivo two-photon imaging protocol for imaging the cerebral cortex of neonatal mice. This method is suitable for analyzing the developmental dynamics of cortical neurons, the molecular mechanisms that control the neuronal dynamics, and the changes in neuronal dynamics in disease models.

Vivo Yenidoğan farelerde kortikal nöronların iki fotonlu görüntüleme

Two-photon imaging is a powerful tool for the in vivo analysis of neuronal circuits in the mammalian brain. However, a limited number of in vivo imaging ...

The Power of Interstimulus Interval for the Assessment of Temporal Processing in Rodents

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in neurocognitive disorders. Despite the popularization of prepulse inhibition (PPI) in recent years, many current protocols promote using a percent of control measure, thereby precluding the assessment of temporal processing. The present study used cross-modal PPI and gap prepulse inhibition (gap-PPI) to demonstrate the benefits of employing a range of interstimulus intervals (ISIs) to delineate effects of sensory modality, psychostimulant exposure, and age. Assessment of sensory modality, psychostimulant exposure, and age reveals the utility of an approach varying the interstimulus interval (ISI) to establish the shape of the ISI function, including increases (sharper curve inflections) or decreases (flattening of the response amplitude curve) in startle amplitude. Additionally, shifts in peak response inhibition, suggestive of a differential sensitivity to the manipulation of ISI, are often revealed. Thus, the systematic manipulation of ISI affords a critical opportunity to evaluate temporal processing, which may reveal the underlying neural mechanisms involved in neurocognitive disorders.

Temporal processing, a preattentive process, may underlie deficits in higher-level cognitive processes, including attention, commonly observed in neurocognitive disorders. Using prepulse inhibition as an exemplar paradigm, we present a protocol for manipulating interstimulus interval (ISI) to establish the shape of the ISI function to provide an assessment of temporal processing.

Interstimulus Aralık kemirgenler zamansal işleme değerlendirilmesi için güç

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in ...

Double Direct Injection of Blood into the Cisterna Magna as a Model of Subarachnoid Hemorrhage

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% of the total stroke-related mortality with an important morbidity in terms of neurological outcome. A delayed cerebral vasospasm (CVS) may occur most often in association with a delayed cerebral ischemia. Different animal models of SAH are now being used including endovascular perforation and direct injection of blood into the cisterna magna or even the prechiasmatic cistern, each exhibiting distinct advantages and disadvantages. In this article, a standardized mouse model of SAH by double direct injection of determined volumes of autologous whole blood into the cisterna magna is presented. Briefly, mice were weighed and then anesthetized by isoflurane inhalation. Then, the animal was placed in a reclining position on a heated blanket maintaining a rectal temperature of 37 &#176;C and positioned in a stereotactic frame with a cervical bend of about 30&#176;. Once in place, the tip of an elongated glass micropipette filled with the homologous arterial blood taken from carotid artery of another mouse of the same age and gender (C57Bl/6J) was positioned at a right angle in contact with the atlanto-occipital membrane by means of a micromanipulator. Then 60 &#181;L of blood was injected in the cisterna magna followed by a 30&#176; downward tilt of the animal for 2 minutes. The second infusion of 30 &#181;L of blood into the cisterna magna was performed 24 h after the first one. The individual follow-up of each animal is carried out daily (careful evaluation of weight and well-being). This procedure allows a predictable and highly reproducible distribution of blood, likely accompanied by intracranial pressure elevation that can be mimicked by an equivalent injection of an artificial cerebral spinal fluid (CSF), and represents an acute to mild-model of SAH inducing low mortality.

We described in this protocol a standardized subarachnoid hemorrhage (SAH) mouse model by a double injection of autologous whole-blood into the cisterna magna. The high degree of standardization of the double-injection procedure represents a middle-to-acute model of SAH with relative safety regarding mortality.

Subaraknoid Kanama Modeli olarak Cisterna Magna içine Kan Çift Doğrudan Enjeksiyon

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% ...