Bu yöntem, çoğaltma alanındaki anahtar soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Ve endokrinoloji. Polikistik Over Sendromu veya PKOS ve hiperandrojenizm çalışmaları için de geçerlidir.
Bu tekniğin avantajı, pahalı etkili bir şekilde hormonların tutarlı, düzgün, uzun vadeli salınımını kolaylaştırıyor olmasıdır. Prosedürü tedavi eden JHUs Ping Xue, benim laboratuvar bir teknisyen olacaktır. Dihidrotestosteron veya DHT pelet hazırlama için, silikon boru 15 milimetrelik bir parça kesmek için bir jilet kullanın.
Ve tüpün bir ucuna iki ila beş milimetrelik tıbbi yapışkan silikon enjekte etmek için körtilmiş 20 gauge iğne ile donatılmış üç mililitrelik şırınga kullanın. Tüpün bir gecede kurumasını bekleyin. Ve mühürlü ucunda hava kabarcıkları kontrol edin.
Uygun kişisel koruyucu ekipman giyen akışiçinde plastik bir yol teknesi içine DHT tozu dökün. Yapışkan kapaklı tüpün açık ucunu tozun içine doğru etkileyin. Büyük bir düzleştirilmiş ataş kullanarak, DHT uygun deneysel derinliğe ulaşana kadar tozu boruya boşaltın.
Sonra bir gecede silikon ile tüpün açılan tarafı mühür. Ertesi sabah, DHT'nin her iki tarafında iki milimetre uzunluğunda silikon elde etmek için her mühürlü tarafı kesin ve DHT kontrol peletleri yok. Daha sonra peletleri oda sıcaklığında folyo ile sarılmış 50 mililitrelik konik tüpte üç aya kadar saklayın.
PCOS fare modeli üretimi için 20 DHT'ye kadar denge leyin veya 30 mililitrelik konik tüplerde 30 mililitrelik tuzlu su içeren ayrı 50 mililitrelik borularda 37 santigrat derecede 24 saat boyunca dengeleyin. Ertesi gün, anestezi iki aylık kadın fare de parmak çimdik yanıt eksikliği onaylamak ve cerrahi alana sıralı Povidon-iyot ve yüzde 70 ethynol scrubs yönetmek için steril gazlı bez kullanın. Sonra, boynuna yakın deriden beş milimetrelik bir kesik yapın.
Ve 10 metrelik bir trocar kullanarak rostral yönde 15 milimetrelik bir tünel yapın. Tünele bir pelet dorsally eklemek ve cerrahi yapıştırıcı ile kesi mühür için trocar kullanın. Kopma kuvveti ile yara kenarlarını manuel olarak yaklaşın ve karşı yara kenarlarının her iki yanından bir santimetre ye üç ince sıvı yapıştırıcı katmanı uygulamak için nazik fırçalama vuruşları kullanın.
Sonra tam recumbency kadar izleme ile bir ısı yastığı üzerinde bir kafeste tek başına fare yerleştirin. Androjen maruziyeti sabit bir düzeyde korumak için her dört haftada bir pelet değiştirme. Pelet takıldıktan üç gün sonra, vajinal kaviteye on mikrolitre steril salin fışkırtmak için p10 pipet kullanın ve pipet ucunu kullanarak tuzlu eti hemen geri alın.
Vajinal hücre tuzlu örneği etiketli bir slayt üzerine yayın. Ve tuzlu oda sıcaklığında kurumasını bekleyin. Kurutulmuş slaytları en az beş dakika boyunca yüzde 100 ethynol bir kapta düzeltin.
Daha sonra slaytları her biri bir dif hızlı boyama kitinden B tamponve tampon C'de birer dakika lekelayın. Tampon C kuluçka sonunda üç saniye musluk suyu ile slaytlar yıkayın ve oda sıcaklığında kuru. Bir ışık mikroskobu on kez hedefi altında slaytlar görüntülemek için estrous döngüsellik görüntülemek için.
Her aşamadaki günleri sayın ve her aşamada yüzde süresini hesaplamak için toplam gün sayısına bölün. Glikoz toleransını test etmek için, 20 gün DHT takılması, fareleri bir gecede hızlı bir şekilde hızlandırın. Farelerertesi sabah tartın ve kuyruk damar kanı fesleğen glikoz seviyesini ölçmek için bir glucometer ve test şeritler kullanın.
Farelere kilogram başına yüzde 20 dekstroz vücut ağırlığı ile iki gram enjekte edin. Sonra 15, 30, 60, 90, 120 dakika dekstroz uygulama sonrası kuyruk damar kan örneklerinin glikoz düzeyini ölçün. DHT eklenmiş kadınlardan dişi yavrular elde etmek için, pelet takılması sonrasında, 15 gün kendini proven doğurgan bir erkek ile kafeste test etmek için kadın fare hareket ettirin.
Farenin hamile olup olmadığını belirlemek için her hafta kadın vücut ağırlığını belgele. Doğum dan sonra gün yedi, dövme macunu içine bir mızrak ucu daldırma ve ayak üzerinde bir dövme ile her yavru işaretlemek. İşaretli fareleri 70 güne kadar her yedi günde bir tartın.
Doğum sonrası tarih 12 ile 16 arasında, kulak yumruk fareler ilerler şekilde gösterildiği gibi sisteme göre numaralandırmak için. Cinsiyeti ayırt etmek için, etiketlenen her farenin ventral tarafını inceleyin. Dişilerin görünür meme uçları olacaktır.
Çeşitli downstream analizleri için kan örnekleri toplamak için submandibuler damar kanaması ile dokuz ve on arasında yaklaşık deneysel kan hacmi toplamak için bir lancet kullanın. Ve serum toplama sağlamak için örnekleri santrifüj. Daha sonra serum örneklerini analiz edilene kadar eksi 80 santigrat derecede 1,5 mililitrelik mikro santrifüj tüplerde saklayın.
DHT dişi yavrularda ergenliği değerlendirmek için, her gün doğum sonrası 21. Ve ano-genital mesafeölçmek için kalibre kullanın. Serum DHT'nin mutlak değerleri kütle spektrometresi ve Elisa analizi arasında farklılık olsa da, DHT'nin göreceli halk değişimi ile no-DHT eklemesi hem tahlillerden hem de deneylerde benzerdir.
HEM DHT hem de DHT farelerde gebelik öncesi DHT düzeyleri önemli ölçüde artmaktadır. Bununla birlikte, DHT düzeyleri DHT farelerde hem pre-conceptional hem de gebelik zaman noktalarında dht farelere göre iki kat daha yüksektir. Yetişkin DHT kızları üreme fonksiyonlarında farklılıklar sergilerler.
Örneğin, yetişkin hiçbir DHT kızları metestrus diestrus ve pro-esterous ve esteröz daha az zaman önemli ölçüde daha uzun süre yaşayan göre bozulmuş eestrous döngüsellik. Bu prosedürü denerken, hormonun tek tip salınımı için kullanılmadan önce peletleri 24 saat kuluçkaya yatırmayı unutmamak önemlidir. Bu işlemden sonra DHT maruziyetinin üreme ve metabolik sonuçları da incelenebilir.
Bu teknik, geliştirildikten sonra, endrokronoloji ve maternal fetal etkileşim alanında araştırmacıların PKOS'u ve kadın farelerde düşük seviyeli hiperandrojenizmin etkisini incelemelerinin önünü açtı. DHT ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve eldiven, maske ve gözlük takmak ve biyo-güvenlik başlığında çalışmak gibi önlemlerin bu işlemi gerçekleştirirken her zaman alınması gerektiğini unutmayın.
