Fiber fotometri CSOM görüntüleme serbestçe hareket eden hayvan nöral aktiviteyi izlemek için genetik olarak kodlanmış özel gösterge ve optik lifleri birleştirir. Hangi nöronların belirli bir grup yönetmenlik veya bir eylem veya uyarıcı yanıt oynamak anlamak için önemlidir. Bu teknik, bağlantı veya genetik profilleri ile tanımlanan belirli beyin bölgelerinden kayıt için erişilebilir bir yoldur, gürültü ye sinyal ayırmak için kontrol yerleşik ile.
İşlemcinin, Laboratuvarımda yüksek lisans öğrencisi olan Ekaterina Martianova olacağını gösteriyor. Beş eksenli çevirmendeki tüm vidaları gevşeterek başlayın. Yama kablosunu, beş eksenli çevirmene yapıştırılmış adaptöre vida.
Daha sonra 470 nanometre uyarma ışığını düşük güçte açın ve otomatik floresan plastik kaydırağa işaret eden lifin ucunu yerleştirin. Canlı modda ücretsiz metal oksit yarı iletken veya CMOS kamera sonraki kayıt. Görüntüyü hedefin odak noktasında görünene kadar kazancı artırın veya arama tablosunu ayarlayın.
Beş eksenli çevirmeni, 470 nanometrelik ışığın yama kablosunun SMA veya FC ucundaki lif üzerinde ortalanmasını sağlayan hedefe doğru ilerletin, ta ki kamerada bir görüntü çözülene kadar. Son olarak, görüntü ortalanana ve iyi çözülene kadar X ve Y eksenlerini ayarlayın. İzotropik bir daire olarak görünmesi gerektiği gibi, yama kablosunun variole ucundan yayılan ışığı görselleştirin.
Lifleri daha iyi görselleştirmek için tüm uyarma ışıklarını açarak başlayın. Ve kamera hiçbir piksel doymuş ve liflerin net bir görüntü mevcut olduğu gibi kazançlar ayarlayın. O zaman bir ön görüntü al.
Liflerin etrafına ilgi çekici bölgeler veya ROIS çizin. Ve kayıtlar sırasında ortalama yoğunluk değerlerinin ölçümü için saklayın. Birden fazla fiber kayıt için, tüm liflerden canlı kayıt yaparak bağımsızlar için test edin.
Bir lifi ışık kaynağına doğru işaretedin ve parmağınızla dokunun. Kanaldaki dalgalanmaları gözlemleyin. Daha sonra hangi YR'nin hangi fibere karşılık gelir etiketlemek için liflerin sonuna renkli bant uygulayın.
Son olarak, standları, kelepçeleri ve tutucuları kullanarak yama kablosunu arenanın üzerine asarak kayıt alanını ayarlayın. Son olarak, hayvan lif uzunluğu ile hareket sınırlı olmayacak ve serbestçe tüm arena boyunca hareket emin olun. Yama kablosunun liflerinin distal ucunu göz tarafından ve mini fiber mikroskobu ile inceleyerek başlayın.
Liflerin yüzeyi çizik ise, ince kum ile fiber parlatma filmi kullanarak lifleri yeniden parlatmak. Daha sonra yama kablosunun distal uçlarını %70 etanol ve pamuk uçlu aplikatör ile temizleyin. %70 etanol ve pamuk ucu aplikatörü kullanarak fiber optik kanülleri temizleyin.
Yama kablosunun variole ucunu, siyah bir shrink tüpüyle kaplanmış seramik bölünmüş bir kılıf kullanarak implante edilen elyafa bağlayın. Bağlantı sırasında, kılıfın sıkı olduğundan emin olun. Hayvanın birkaç dakika lığına iyileşmesini bekleyin.
Sonra optik sinyali kaydetmeye başlayın ve deneyi çalıştırın. Kayıt sırasında kaliteli kayıtları sağlamak için canlı izleme dikkatli bir göz tutmak. Ve kol yeterince sıkı olmadığını gösteren sinyal herhangi bir sıçramalar için izleyin.
Çift renkli kayıtlar için, kırmızı floresan kalsiyum sensörü ve uygun dikroik aynalar ve filtreler heyecanlandırmak için fotometri sistemine 516 nanometre LED ekleyin. Daha sonra yeşil ve kırmızı emisyon dalga uzunluklarını ayırmak için hedef ve CMOS kamera arasında bir görüntü ayırıcı ekleyin. Son olarak, kırmızı ve yeşil hem renk, tüm lifleretrafında ROIS çizin.
Her yatırım getirisini ilgili fiber ve kanalla net bir şekilde tanımladığından emin olun. 470 nanometre ve 560 nanometre LED ile eşzamanlı uyarma tetikleyin ve 410 nanometre LED ile değiştirin. Sonuçlar gösteriyor ki, ölçülen floresan lha-LHB yolunun aktivasyonu ile fareler için hava puffs uygulanması ile eş zamanlı olarak önemli ölçüde artmıştır.
Ancak, yeşil floresan protein veya GFP ifade farelerde, sinyal hiçbir değişiklik hava puffs uygulanması sırasında tespit edildi. Bu teknik, araştırmacıların farklı beyin bölgelerindeki belirli tipteki hücrelerden makul bir şekilde kayıt yapmasına olanak tanır. Bir hayvan özgürce davranırken.
Bu davranış ile ilgili olarak bu beyin bölgelerinin işlevlerini incelemek için yeteneği daha da ileri.
