Bu yöntem, araştırmacılara elementel görüntüleme teknikleri için sucul bitki köklerini, çevredeki rizosferi ve dökme toprağı hazırlamak için yeni bir yol sağlar. Bu yöntemin ana avantajı, nispeten hızlı ve uygun fiyatlı olması ve aynı zamanda ilgi çekici unsurların dağılımını ve spekülasyonunu doğru bir şekilde korumasıdır. Bu teknik, tarım sistemlerindeki besin maddelerinden fettermiasyon sistemlerindeki kirleticilerin kaderine ve taşınmasına kadar birçok element ve bitki sistemi ile ilgili soruları yanıtlamak için kullanılabilir.
Örnekleme için kök sisteminin istenen alanına veya alanlarına dikkat ederken hızlı bir şekilde çalıştığınızdan emin olun. Ve kök sistemi başına birden fazla örnek alın. Çarpma dondurma ekipmanını bir deneye hazırlamak için, sıvı nitrojen tutabilen temiz bir soğutucuya yatay olarak iki, beşe beşe beş bakır blok yerleştirin.
Ve uygun KKD'yi giyerek, blokları batırmak için soğutucuya yeterli sıvı nitrojen dökün. Köpürtücülük azaldığında, bir bakır bloğun her ucuna bir ara yerleştirin. Daha sonra, maşa ve kriyojenik eldivenler kullanarak, numune yerindeyken geri almayı kolaylaştırmak için diğer bakır blogunu ucunda bekletin.
Örneği toplamak için, bir saksı bitkisi kullanın veya ıslak topraktan istenen bitkiyi ve rizosferi çıkarmaya başlamak için bir kürek kullanın, kazılmış deliğin istenen kök hacminden çok daha büyük olmasına dikkat edin. İstenilen alan içindeki toprağı rahatsız etmemeye dikkat ederek fazla toprağı kesmek için çelik bir bıçak kullanın. İstenilen alanlar ulaştığında, yaklaşık üçe üçe üç iki santimetre kök küpü kesin ve küpü hemen yatay bakır blok üzerindeki iki ara çubuğun arasına yerleştirin.
Numunenin bir slam donması için, dikey bakır bloğu yaklaşık beş dakika boyunca ara öğelere yerleştirmek için kriyojenik eldivenleri kullandı. Köpürme azaldığında, slam donmuş rizosfer küpü örneğini önceden etiketlenmiş bir alüminyum folyo kare parçasına aktarın. Toprak küplerini dondurmak için, donduran kurutucu uygun vakum basıncına ve sıcaklığına ulaştığında, temiz ve asitle yıkanmış 50 mililitrelik tüp için bir donmuş rizosfer küpü örneği yerleştirin veya doğrudan dondurucu kurutucuya yerleştirin ve tozun vakum pompasına girmesini önlemek için temiz bir tek kullanımlık mendil kullanın.
Numuneleri kuruyana kadar en az birkaç gün dondurularak kurutucu kabına yerleştirin. Dokular dondurularak kurutulduğunda, küpleri bir vakum kurutucunun içindeki etiketli formlara yerleştirmeden önce toprak küplerini analiz için uygun bir boyuta kurutulmuş bir çelik bıçak kullanın. Üreticinin talimatlarına göre epoksiyi hazırladıktan sonra, epoksi numuneyi tamamen kaplayana kadar toprağın bir tarafındaki forma yavaşça epoksi eklemek için bir damlalık kullanın.
Epoksi toprağı ıslattıkça toprak renk olarak kararacak. Formlar epoksi ile doldurulduktan sonra, kurutucuyu kapatın ve vakumun açın. İlk bir ila dört saat boyunca her 30 ila 90 dakikada bir epoksi seviyesini kontrol edin ve gerekirse ek epoksi ekleyin.
Epoksi sertleştikten sonra numuneyi çıkarın. Gömmeden sonra, numuneyi kesmek için elmas bıçak duyarlı ıslak testere kullanın. Önceki kesimde kök elde edilirse numuneyi farklı bir yönde kesin.
Kırpmadan sonra, her numunenin kesilmiş tarafını kum boyutu başına 30 saniye boyunca kademeli olarak daha ince zımpara kağıdı ile manuel olarak zımparalayın. Bu şekilde, toprak matrisi içinde enine kesitler olarak birkaç kök çapı gözlenebilir. Kökler farklı kalite seviyeleri gösterebilir.
Örneğin, bu görüntüde, iyi korunmuş bir kök, dondurarak kurutma işlemi tarafından bozulmuş bir kök ve ince kesit işlemi sırasında çekilen bir kök gözlemlenebilir. Bu kök enine kesitinin uzunlamasına bölümde lateral kök ile senkrotron x-ışını floresan görüntüleme ile analiz edilmesi demir, manganez ve arsenik tespitine izin verir. Toprak içindeki demirin varlığı ve demir plaktaki kökün çevresi de ışık mikrografi görüntülerinde görülebilir.
Manganez, yanal kökün korteksinde benzersiz bir şekilde bulunur, aynı zamanda demir plak içindeki bazı alanlarda yeşil-mavi bir ton olarak demir ile birlikte lokalize eder. Arsenik çoğunlukla primer kökün vaskülatında birleşen lateral kökün vaskülatında bulunur. Kimyasal spektasyon görüntüleme, arsenik türlerinin lokalizasyonunda değişkenlik olduğunu ortaya koymaktadır.
Bu üç renkli arsada gözlemlendiği gibi, arsenit ve arsenit glutatyon vaskülasyonda yakından ilişkilidir, arsenat ise öncelikle demir plakla ilişkili olarak kökün dış kısmı içinde lokalize olur. Örnek toplamadan önce, elementel görüntüleme için kök sisteminin istenen kısmını belirleyin. Bu, kaldırılan kök anahtarın konum yönünü belirler.
Bu protokolü takiben, örnekler, belirli araştırma sorularına, ilgi çekici unsurlara veya mevcut enstrümantasyona bağlı olarak çeşitli teknikler kullanılarak mikron ölçeğinde veya kaba olarak görüntülenebilir.
