Bu protokolün genel amacı, iftiraş syatik sinir ezilmenin gerçekleştirilmesinde rol oynayan prosedürleri tanımlamak ve periferik travma sonrası motor davranışların değerlendirilmesi için bir protokol sağlamaktır. Güçlü ve güvenilir bir davranışsal test pilinin seçimi, çok çeşitli davranışsal yönleri kapsamak için gereklidir ve kullanılan hayvan modeline ve bilimsel araştırma sorusuna bağlıdır. Bu protokol, siyatik sinir ezilme yaralanmasının nasıl gerçekleştirildiğini ayrıntılı olarak açıklar ve sıçanlardaki motor açıklarının değerlendirilmesi için açık alan testi, CatWalk yürüyüş analizi, ışın yürüme görevi ve merdiven basamak yürüyüş görevini içeren bir davranışsal test pili sağlar.
Hayvan deneyleri, hayvanların bakımı ve kullanımı için geçerli ulusal ve kurumsal yönergelere uygun olarak gerçekleştirildi. Tüm cerrahi işlem sırasında steril bir ortam sağlayın. Ameliyat masasını gerekli ekipmanlarla kurun.
Sıçanı izofluran ile kapalı bir dolapta derinden uyuşturun ve sağ arka uzvun geniş bir alanını tıraş edin. Daha sonra, sıçanı anestezi maskesine yerleştirin ve izofluran ile derin anesteziye devam edin. Farenin gövdesini ve her iki arka uzuvlarını bantla sabitleyin.
Her iki arka uzvunu simetrik ve uzanmış bir konuma yerleştirin ve her pençeyi ameliyat masasına düzleştirin. Tıraş edilen bölgenin cildini uygun bir antiseptikle dezenfekte edin. İleumun siyatik çentikini arayın.
Siyatik çentiğinden neşterle pençe yönüne bir cilt kesisi yapın. Arka uzuvlar sabitlenirse ve deri kesisi doğru yapılırsa, gluteus maximus kası ile pazı femoris kası arasındaki fasyal düzlemde beyaz bir çizgiye benzeyen bir boşluk görülebilir. Kapalı süper ince hemostatik forsepsleri boşluğa yerleştirin ve forsepsleri yayın.
Fasyal düzlem herhangi bir kas dokusunu yaralamadan açılmalıdır. Deri kesisini açık tutmak için lastik bant retraktörlerini kasların altına yerleştirin. Sinir tamamen açığa çıkarıncaya kadar çevredeki herhangi bir dokuyu ve kan damarlarını siyatik sinirden hafifçe çıkarın.
Tüm işlem sırasında siniri germemek veya çekmemek önemlidir. Siyatik siniri tırtıksız bir kelepçe ile sabit ve hızlı kullanılabilir basınçla ezin. Bunun için kelepçeyi açın, siniri kelepçenin alt çenesine yerleştirin ve kelepçeyi ilk konuma 3 x 10 saniye kilitleyerek kapatın.
Ezilme yaralanmasından sonra, kelepçeyi dikkatlice yeniden açın. siyatik sinirin ezilme bölgesi yarı saydam görünür. Lastik bant retraktörlerini çıkarın.
Fasyal düzlem kesisini resorbable bir dikişle kapatın. Cilt kesisini vücut derisi zımbaları ile kapatın. Lokomotor aktivitesinin yanı sıra sıçanların davranışsal aktivitesi açık alan testi ile analiz edilebilir.
Karanlık ve sessiz bir ortamda bulunması gereken açık alanın kurulumu, otomatik video takip sistemi EthoVision XT ve çizilmeye dayanıklı, temizlenebilir siyah yüzeye sahip bir arenadan oluşuyor. Arenayı ve kamerayı doğru konuma getirin ve EthoVision XT yazılımını kurun. Sıçanı test arenasının ortasına hafifçe yerleştirin.
Kayıt sırasında, deneyci, farenin dikkatini dağıtmamak için açık alandan uzak durmalıdır. Açık alan testinin veri analizi için sol kenar çubuğundaki analiz bölümüne gidin ve Sonuçlar"sekmesinin altında Görselleştirmeyi İzle'yi seçin. Ardından, gerekli parametreleri XL.In the software'e dışa aktararak, veri analizi için farklı kategorilerden bir dizi değişken seçin.
CatWalk XT sistemi tarafından yapılan bir yürüyüş analizi, hayvan modellerinin ayak izleri, duruşu ve yürüyüşü ile ilgili birçok farklı parametreyi değerlendirmeye yardımcı olabilir. Cam bir yürüyüş yolu yeşil ışıkla aydınlatılıyor ve hayvanların ayak izlerinin saçtığı ışık, yürüyüş yolunun altında bulunan yüksek hızlı bir video kamera ile yakalanıyor. Sinyaller CatWalk XT yazılımı ile analiz edilebilir.
Deney karanlık koşullar altında yapılmalıdır. CatWalk XT sistemini kurarak başlayın. Deneysel ayarları seçin.
Kamerayı yerine yerleştirin ve odağı ayarlayın. Algılama ayarlarını yapın. CatWalk sisteminin koridor duvarlarını kurun ve duvarların yürüyüş yoluna paralel kaldığından emin olun.
Yürüyüş yolunun uzunluğunu tanımlayın ve yürüyüş yolunu kalibre edin. Ardından, bir arka plan görüntüsü kırarak. Arka plan görüntüsü için temiz ve boş bir yürüyüş yolu gereklidir.
Sıçan herhangi bir kesinti olmadan geçit geçmeli. Tanımlanan çalışma kriterlerine göre, veri analizi için sıçan başına üç uyumlu çalıştırmaya ihtiyaç vardır. Gerçek deneye başlamadan önce hayvanları en az sekiz gün eğitin.
CatWalk, sürekli bir görev performansı sağlamak için haftada en az bir kez, 6 ila 10 koşu ile gerçekleştirilmelidir. Veri çözümlemesi için yalnızca uyumlu çalıştırmaları değerlendirin. CatWalk XT yazılımıyla pençe baskılarını otomatik olarak sınıflandırın.
Pençe baskı etiketlerini manuel olarak gözden geçirin. Yanlış pençe baskı etiketlerini düzeltin, algılanmayan pençe baskılarının etiketlerini ekleyin ve gürültüyü ve yanlış etiketleri silin. Bir XL sayfasında görüntülenen ve bir dizi temel parametreyi gösteren sayısal sonuçlar.
Her ayak izi hakkında daha ayrıntılı bilgi için arka pençelerin ayak izlerini sınıflandırın. Bu analiz etkileşimli ayak izi ölçümleri modülünü gerektirir. Ayak izi analizi için işaretleyicileri manuel olarak ayarlayın.
Üç uyumlu çalıştırmada da her arka pençe baskısını analiz edin. İlk başpenin ortasından beşinci başpenin ortasına bir çizgi çekerek ton yayılımını ölçün. Orta ton yayılımını ölçmek için ikinci tonun ortasından dördüncü tonun ortasına bir çizgi çekin.
Manuel baskı uzunluğunu ölçmek için üçüncü ayak parmağından arka pençenin topuğuna bir çizgi çizin. Ayrı bir sayfada görüntülenen etkileşimli ayak izi ölçümlerinin sayısal sonuçlarını gözden geçirin. Yürüyüş açıkları kiriş yürüme görevi ile belirlenebilir.
Bu özel araştırma başlığında ışın yürüme görevinin odak noktası motor dengesinin değerlendirilmesi değil, motor koordinasyonunun analizi olacaktır. Kiriş yürüyüşü görevi için kiriş, aralayıcı, masa, tekdüze arka plan ve video kamera gereklidir. 90 santimetre uzunluğunda, 1,7 santimetre genişliğinde ve 2 santimetre yüksekliğinde ahşap bir kiriş kullanın.
Hayvanları yedi gün eğitin. Sıçanı kirişin başlangıç platformuna yerleştirin. Sıçan herhangi bir kesinti olmadan kirişi üç kez geçmelidir.
Sıçan ilk üç koşu içinde üç uyumlu koşuya ulaşsa bile, sürekli görev performansı için en az 6 ila 10 çalışma yapılmalıdır. Kayıttan üç uyumlu çalıştırmanın video dizilerini seçin. Seçili üç uyumlu çalıştırmanın başlangıç zaman noktasını ve bitiş zaman noktasını tanımlayın.
Burada, başlangıç zaman noktası kiriş üzerindeki siyah bir çizgi ile etiketlenmiştir ve ilk arka uzvun siyah çizginin arkasına yerleştirilmesi koşunun başlangıç zaman noktası olarak tanımlanır. Kirişin sonundaki platforma ilk arka uzvun yerleştirilmesi bitiş zaman noktasını tanımlar. Daha sonra, sıçanın ışından geçmesi için gereken süreyi hesaplayın.
Yazılımın yakınlaştırma ve ağır çekim işlevini kullanarak, her iki arka uzuv için de ayrı ayrı üç uyumlu çalıştırmadan adım ve hata sayısını puanla. Hatalar toplam ayak kaymalarını ve yarım ayak kaymalarını içerir. Toplam ayak kayması, derin kayma ile takip edilen ve etkilenen pençenin ışınla temas kaybına neden olan bir ayak yerleşimi olarak tanımlanır.
Yarım kayma, pençenin tam temasını kaybetmeden kirişin yan duvarından kayması olarak tanımlanır. Kirişi geçecek adım sayısına göre ayak kaymalarının yüzdesini hesaplayın. Merdiven basamak yürüyüş görevi motor fonksiyonu, hem ön uzuvların hem de arka uzuvların yerleştirilmesini ve uzuvlar arası koordinasyonu değerlendirebilir.
Bu davranış testi için bir merdiven basamak aparatı, aralayıcı, tablo, tekdüze arka plan ve video kamera gereklidir. Yatay harfli basamak aparatı metal basamaklardan ve şeffaf polikarbonat yan duvarlardan oluşur. Hayvanları sekiz gün eğitin.
Sıçanı merdiven basamak operatörlerinin başlangıç bölgesine yerleştirin. Sıçan, uyumlu bir koşu olarak nitelendirebilmesi için merdiven basamak aparatının 100 santimetrelik yürüyüş yolunu kesintisiz olarak üç kez geçmek zorundadır. Kayıttan üç uyumlu çalıştırmanın video dizilerini seçin.
Seçili üç uyumlu çalıştırmanın başlangıç zaman noktasını ve bitiş zaman noktasını tanımlayın. Arka uzvun cihazın yan duvarındaki ilk siyah çizginin arkasına yerleştirilmesi, koşunun başlangıç zaman noktasını tanımlar. İlk ön uzvun cihazın yan duvarındaki ikinci siyah çizginin arkasına yerleştirilmesi, koşunun bitiş zaman noktasını tanımlar.
Ardından, yürüyüş yolundaki koşunun süresini hesaplayın. Yazılımın ağır çekim veya kare kare işlevini kullanarak Mets ve iş arkadaşlarından 7 kategori ölçeğiyle uyumlu üç çalıştırmayı puanla. Her uzuv için ölçek kategorilerine göre adım sayısını ve hata sayısını ayrı ayrı belirleyin.
Ölçek aşağıdaki kategoriler arasında ayrımlar. Tam bir ıska. Derin kayma.
Hafif bir kayma. Replacement.Correction. Kısmi yerleştirme. Ve doğru yerleştirme.
Ardından, adım başına hataları hesaplayın. Beş dakikalık açık alan testinin temsili sonuçları, ameliyattan beş hafta sonra sinir ezilme yaralanmasının lokomotor aktivite üzerinde hiçbir etkisi olmadığını göstermektedir. CatWalk XT sistemi ile yürüyüş analizi birçok farklı parametre oluşturur.
Koşu ortalama hızı, adım uzunluğu ve sinirden yaralanan sağ arka pençenin baskı alanı için önemli değişiklikler tespit edilebilir. Sinirden yaralanan yabani tip sıçanlar, yaralanmadan beş hafta sonra vahşi tip naif sıçanlara kıyasla kirişi geçmek için önemli ölçüde artan bir gecikme süresi gösterdi. Işın yürüme görevinin ek bir okuması olarak, sinirden yaralanan arka uzvun tam kaymaları ve yarım kaymaları sayıldı ve istatistiksel analiz için bir hata olarak kabul edildi.
Sinirden yaralanan sağ arka uzvun adım başına hata yüzdesi, sinirden yaralanan yabani tip sıçanlarda, vahşi tip naif sıçanlara kıyasla önemli ölçüde artmıştır. Merdiven basamak yürüyüş görevinin temsili verileri, merdiven basamak aparatının yürüyüş yolunu geçmek için gecikme süresinde veya sinir yaralı sağ arka uzvun adım başına hata yüzdesinde önemli değişiklikler göstermez. Sinir yaralanması olan arka uzvun adım başına hata yüzdesinin analizi, Mets ve meslektaşlarından 7 kategori ölçeğinin sadece 0'dan 2'ye kadar olan puanını dikkate aldı.
Bu videoyu izledikten sonra, siyatik sinir ezilme yaralanmasının nasıl gerçekleştirildiğini ve tek taraflı siyatik sinir ezilme sonrası sıçanlarda motor davranışın çok faktörlü bir değerlendirmesinin nasıl uygulanılacağını iyi anlamalısınız. Siyatik sinir ezilme yaralanmasından sonra tutarlı, tekrarlanabilir ve karşılaştırılabilir sonuçlar elde etmek için, sinir ezilme indükleme için standartlaştırılmış bir yöntemin yanı sıra standartlaştırılmış bir fenotipik karakterizasyon gereklidir. Belirli davranış testi için uygun eğitim, deney değerlendirmesi sırasında zamandan tasarruf etmenin ve daha iyi sonuçlar elde etmenin avantajlarını sağlar.
