이 프로토콜의 전반적인 목표는 돌이킬 수없는 상반신경 호감을 수행하는 데 관련된 절차를 설명하고 말초 외상 후 운동 행동의 평가를위한 프로토콜을 제공하는 것입니다. 강력하고 신뢰할 수있는 행동 테스트 배터리의 선택은 다양한 행동 측면을 커버하는 데 필수적이며 사용되는 동물 모델 및 과학적 연구 질문에 따라 다릅니다. 이 프로토콜은 상골 신경 호감 부상을 수행하는 방법을 자세히 설명하고 오픈 필드 테스트, CatWalk 걸음걸이 분석, 빔 보행 작업 및 사다리 렁 걷기 작업을 포함하는 쥐의 모터 적자 평가를위한 행동 테스트 배터리를 제공합니다.
동물 실험은 동물의 치료와 사용을 위한 해당 국가 및 제도적 지침에 따라 수행되었습니다. 전체 외과 적 시술 중에 멸균 환경을 유지합니다. 필요한 장비로 수술 테이블을 설정합니다.
이소플루란으로 닫힌 캐비닛에 쥐를 심층 마취시키고 오른쪽 뒷다리의 광범위한 영역을 면도한다. 다음으로, 쥐를 마취 마스크에 넣고 이소플루란으로 깊은 마취를 계속합니다. 몸통과 쥐의 뒷다리를 테이프로 고정합니다.
뒷두다리를 대칭적이고 뻗은 위치에 놓고 각 발을 수술 테이블에 평평하게 놓습니다. 면도 부위의 피부를 적절한 방부제로 소독합니다. ileum의 상시 노치를 검색합니다.
메스로 발 의 방향으로 좌골 노치에서 피부 절개를합니다. 뒷다리가 고정되고 피부 절개가 올바르게 수행되면 둔부 막시무스 근육과 이두근 여성근 근육 사이의 근막 평면의 공동은 흰색 선과 유사한 것을 볼 수 있습니다. 닫힌 초미세 혈전성 집게를 캐비티에 삽입하고 집게를 퍼뜨리습니다.
근막 비행기는 어떤 근육 조직을 다치게하지 않고 열어야한다. 고무 밴드 리트랙터를 근육 아래에 놓고 피부 절개를 열어 두십시오. 신경이 완전히 드러나때까지 주변 조직과 혈관을 상시 신경에서 부드럽게 제거합니다.
전체 시술 중에 신경을 스트레칭하거나 당기지 않는 것이 중요합니다. 일정하고 빠른 사용 가능한 압력으로 톱니 모양의 클램프로 시차성 신경을 분쇄하십시오. 이를 위해 클램프를 열고 신경을 클램프의 아래턱에 놓고 클램프를 3 x 10초 동안 첫 번째 위치로 잠그면 클램프를 닫습니다.
호감 부상 후, 조심스럽게 클램프를 다시 엽니 다. 좌골 신경의 호감 부위는 반투명하게 나타납니다. 고무 밴드 리트랙터를 제거합니다.
접합 식 봉합사로 근면 한 평면 절개를 닫습니다. 바디 스킨 스테이플로 피부 절개를 닫습니다. 궤적 활성뿐만 아니라 쥐의 행동 활성은 열린 필드 테스트에 의해 분석 될 수있다.
어둡고 조용한 환경에 위치해야 하는 개방형 필드의 설정은 자동화된 비디오 추적 시스템인 EthoVision XT및 스크래치 방지, 세척 가능한 블랙 표면이 있는 경기장으로 구성됩니다. 경기장과 카메라를 올바른 위치에 배치하고 EthoVision XT 소프트웨어를 설정합니다. 시험 장 한가운데에 쥐를 부드럽게 놓습니다.
기록 하는 동안, 실험자 쥐산만 을 피하기 위해 설정 된 오픈 필드에서 멀리 해야 합니다. 열린 필드 테스트의 데이터 분석을 보려면 왼쪽 사이드바의 분석 섹션으로 이동하여 결과 탭 에서 트랙 시각화를 선택합니다. 그런 다음 소프트웨어 내에서 필요한 매개 변수를 XL.In에 내보내 데이터 분석을 위해 다른 범주의 여러 변수를 선택합니다.
CatWalk XT 시스템의 걸음걸이 분석은 동물 모델의 발자국, 자세 및 걸음걸이에 관한 다양한 매개 변수를 평가하는 데 도움이 될 수 있습니다. 유리 통로는 녹색 빛으로 조명되고 동물의 발자국에 의해 흩어져있는 빛은 보도 아래에있는 고속 비디오 카메라로 캡처됩니다. 신호는 CatWalk XT 소프트웨어로 분석할 수 있습니다.
실험은 어두운 조건에서 수행되어야 합니다. 먼저 CatWalk XT 시스템을 설정합니다. 실험 설정을 선택합니다.
카메라를 제자리에 놓고 초점을 조정합니다. 검색 설정을 설정합니다. CatWalk 시스템의 복도 벽을 설정하고 벽이 보도와 평행하게 유지되도록 합니다.
보도 길이를 정의하고 보도를 교정합니다. 다음으로 배경 이미지를 스냅합니다. 배경 이미지에는 깨끗하고 빈 통로가 필요합니다.
쥐는 중단없이 보도를 건너야합니다. 정의된 실행 기준에 따라 데이터 분석을 위해 쥐당 세 개의 준수 실행이 필요합니다. 실제 실험을 시작하기 전에 적어도 8 일 동안 동물을 훈련시다.
CatWalk는 일주일에 한 번 이상 수행해야 하며, 지속적인 작업 성능을 보장하기 위해 6~10회 실행해야 합니다. 데이터 분석의 경우 준수 실행만 평가합니다. CatWalk XT 소프트웨어로 발 인쇄를 자동으로 분류합니다.
발 인쇄 라벨을 수동으로 검토합니다. 잘못된 발 인쇄 라벨을 수정하고, 감지되지 않은 발 인쇄 라벨을 추가하고, 노이즈 및 잘못된 라벨을 삭제합니다. XL 시트에 표시되는 숫자 결과는 여러 가지 기본 매개 변수를 보여 주습니다.
각 발자국에 대한 자세한 내용은 뒷발의 발가락을 분류합니다. 이 해석에는 대화형 설치 공간 측정 모듈이 필요합니다. 발자국 해석의 마커를 수동으로 설정합니다.
세 번의 준수 실행 에서 모든 뒷발 인쇄를 분석합니다. 발가락 확산을 측정하기 위해 첫 번째 발가락의 중심에서 다섯 번째 발가락의 중앙에 선을 그립니다. 두 번째 발가락의 중심에서 네 번째 발가락의 중앙으로 선을 그려 중간 발가락 확산을 측정합니다.
세 번째 발가락의 중심에서 뒷발의 발 뒤꿈치에 선을 그려 수동 인쇄 길이를 측정합니다. 별도의 시트에 표시되는 대화형 설치 공간 측정의 수치 결과를 검토합니다. 걸음걸이 적자는 빔 보행 작업에 의해 결정될 수 있다.
이 특정 연구 주제에서 빔 워킹 작업의 초점은 모터 균형의 평가가 아닌 모터 조정의 분석입니다. 빔 워킹 작업의 경우 빔, 스페이서, 테이블, 균일한 배경 및 캠코더가 필요합니다. 길이 90cm, 너비 1.7cm, 높이 2cm의 나무 빔을 사용합니다.
7 일 동안 동물을 훈련. 빔의 시작 플랫폼에 쥐를 놓습니다. 쥐는 중단없이 빔을 세 번 건너야합니다.
쥐가 처음 세 번의 실행 내에서 3개의 준수 런에 도달하더라도 연속 작업 성능을 위해 최소 6~10개의 런을 수행해야 합니다. 레코딩에서 세 번의 준수 실행의 비디오 시퀀스를 선택합니다. 시작 시점과 선택한 세 개의 준수 실행의 종료 시간을 정의합니다.
여기서 시작 시점은 빔의 검정선에 의해 표시되고, 검은 선 뒤에 첫 번째 뒷다리의 배치는 실행의 시작 시점으로 정의된다. 빔 끝에 있는 플랫폼에 첫 번째 뒷다리 배치는 종료 시간 점을 정의합니다. 다음으로, 쥐가 빔을 교차하는 데 필요한 시간을 계산합니다.
소프트웨어의 줌 및 슬로우 모션 기능을 사용하여 두 뒷다리모두에 대해 세 개의 호환 실행에서 단계 및 오류 수를 별도로 점수매기. 오류에는 총 발 전표와 반 발 전표가 포함됩니다. 총 발 미끄러짐은 깊은 미끄러짐으로 이어지는 발 배치로 정의되어 빔과 영향을받는 발의 접촉이 손실됩니다.
반 슬립은 완전한 접촉을 잃지 않고 빔의 사이드 월에서 슬라이딩 발로 정의됩니다. 빔을 교차하는 단계 수와 관련하여 발 미끄러짐의 백분율을 계산합니다. 사다리 렁 워킹 작업은 모터 기능, 앞사지와 뒷다리 배치, 사지 간 협응도 등을 평가할 수 있습니다.
이 행동 테스트를 위해 사다리 가루 장치, 스페이서, 테이블, 균일 한 배경 및 캠코더가 필요합니다. 수평 문자 렁 장치는 금속 횡선과 명확한 폴리 카보네이트 측벽으로 구성됩니다. 8 일 동안 동물을 훈련.
래더 런그 연산자의 시작 영역에 쥐를 놓습니다. 쥐는 규정을 준수하는 달리기로 자격을 갖추기 위해 사다리 횡선 장치의 100센티미터 보도를 세 번 중단없이 통과해야합니다. 레코딩에서 세 번의 준수 실행의 비디오 시퀀스를 선택합니다.
시작 시점과 선택한 세 개의 준수 실행의 종료 시간을 정의합니다. 장치의 측벽에 첫 번째 검은 색 선 뒤에 뒷사지의 배치는 실행의 시작 시점을 정의한다. 장치의 측벽에 제1 전방 사지의 배치는 실행의 종료 시간 지점을 정의한다.
그런 다음 보도를 가로질러 실행 기간을 계산합니다. 소프트웨어의 슬로우 모션 또는 프레임별 기능을 사용하여 Mets 및 동료의 7가지 범주 척도로 세 가지 준수 실행을 점수매기세요. 각 사지의 배율 범주에 따라 단계 수와 오차 수를 별도로 결정합니다.
축척은 다음 범주를 구분합니다. 총 미스. 깊은 슬립.
약간의 미끄러짐. 교체.수정. 부분 배치. 그리고 올바른 배치.
다음으로 단계당 오류를 계산합니다. 5분 간의 오픈 필드 테스트의 대표적인 결과는 수술 후 5주 후 신경 호감 부상이 운동 활동에 영향을 미치지 않는다는 것을 보여줍니다. CatWalk XT 시스템을 갖춘 걸음걸이 분석은 다양한 매개 변수를 생성합니다.
주행 평균 속도, 보폭 길이 및 신경 부상을 입은 오른쪽 뒷발의 인쇄 영역에 대해 상당한 변화를 감지할 수 있습니다. 신경 부상 야생 형 쥐는 야생 유형 순진한 쥐에 비해 빔을 교차하는 대기 시간이 크게 증가 한 것으로 나타났다 5 주 부상 후. 빔 보행 작업의 추가 판독으로, 신경 부상 뒷다리의 전체 전표 및 반 전표는 계산되고 통계 분석을 위한 오류로 고려되었습니다.
신경 부상 오른쪽 뒷다리의 단계당 오류의 비율은 야생 유형 순진한 쥐에 비해 신경 부상 야생 형 쥐에서 크게 증가했다. 사다리 렁 보행 작업의 대표적인 데이터는 사다리 횡선 장치의 보도를 통과하는 대기 시간 또는 신경 부상 오른쪽 뒷다리의 단계당 오차 비율에 상당한 변화를 나타내지 않습니다. 신경 부상 뒷다리의 단계당 오차 비율의 분석은 메츠와 동료에서 7 범주 척도의 0에서 2까지의 점수만 고려했습니다.
이 비디오를 시청 한 후, 당신은 상골 신경 호감 부상을 수행하는 방법에 대한 좋은 이해를 가져야한다, 그리고 일방적 인 sciatic 신경 호감 후 쥐에서 모터 행동의 다인성 평가를 구현하는 방법. 상주 신경 호감 부상 후 일관되고 재현 가능하며 유사한 결과를 얻으려면 신경 호감을 유도하는 표준화된 방법뿐만 아니라 표준화된 현상 전형특성화가 필수적입니다. 특정 행동 테스트에 대한 적절한 교육은 실험 평가 중에 시간을 절약하고 더 나은 결과를 얻는 이점을 제공합니다.
