Bu yeni protokol, propofol anestezisi kullanan farelerde cerrahi anesteziyi tanımlamaktadır. Yöntem, fare hastalık modellerinde propofol anestezisinin araştırılmasını sağlar. Protokol, total intravenöz anestezinin değerlendirilmesine izin verir ve uçucu anestezi kullanımını önler.
Protokol, propofol anestezisinin hastalıkla ilgili sonuçları nasıl etkilediğini araştırmak için kullanılabilir. Örneğin, burada tümörü çıkarmak için ameliyattan sonra kısa ve uzun vadeli kanser sonuçlarını değerlendiriyoruz. Başlamak için, % 10 FBS ve 200 milimolar glutamin içeren alfa MEM ortamında ateşböceği lusiferazı eksprese etmek için kararlı bir şekilde dönüştürülen kültür 66 CL4 Mirai meme kanseri hücreleri.
Hücreleri 37 santigrat derecede inkübe edin, ancak% 5 karbondioksit. Alt kültür, hücreler yaklaşık% 80 akıcılığa ulaştığında hücreler. Hücreler EDTA çözeltisinde iki mililitre damlama ile logaritmik bir büyüme aşamasındayken, yapışkan hücreleri kaldırın ve bir hemositometre kullanarak hücreleri sayın.
Daha sonra hücreleri PBS'de seyreltin ve seyreltilmiş hücre süspansiyonunu fare enjeksiyona hazır olana kadar buz üzerinde tutun. Fare tamamen uyuşturulduktan sonra, enjeksiyon bölgesini hazırlamak için dördüncü sol meme yağ yastığı bölgesini tek kullanımlık bir alkollü çubukla silin. Steril bir 27 gauge hipodermik iğneye tutturulmuş 25 mikrolitrelik bir Hamilton şırıngasını kanser hücresi süspansiyonu ile doldurun.
Cildi kaldırmak ve sabitlemek için forseps kullanın. Beşinci hücrelere bir kez 10 ve 20 mikrolitre PBS'yi meme ucundan yaklaşık bir milimetre uzaktaki dördüncü sol meme yağ yastığına enjekte edin. Hücreler lusiferaz ile etiketlenmişse, 30 gauge hipodermik iğne ile 0.5 mililitrelik bir insülin şırıngası kullanarak anestezi uygulanan farenin lateral kuyruk damarına 100 mikrolitre D-luciferin enjekte edin.
Enjeksiyondan iki dakika sonra fareyi, meme yağ yastığı yukarı bakacak şekilde bir biyolüminesans görüntüleme sistemine yerleştirin ve görüntüyü 10 saniye boyunca yakalayın. Görüntülemeden sonra, fareyi temiz kafese yerleştirin ve anesteziden kurtulmasına izin verin. Bir kumpas kullanarak primer tümör büyümesinin büyümesini izleyin.
Tümör hacmini hesaplayın ve birincil tümör 80 ila 90 kübik milimetre hacme ulaştığında tümörü rezeke edin. Otomatik şırınga pompasını, yüzde iki propofol formülasyonu içeren 30 gauge bir mililitre insülin şırıngası ile kurun. Yüzde üç sevofluran veya izofluran içeren bir indüksiyon odasında anesteziyi indükleyin.
Daha sonra anestezi uygulanan fareyi 37 santigrat derecede bir ısıtma yastığına aktarın ve anesteziyi bir burun konisi kullanarak yüzde iki ila üç sevofluran veya izofluran ile sürdürün. Pedal refleksi kaybı ve solunum hızının dakikada 100 nefesten az olması ile gösterilen stabil bir anestezi derinliğini korumak için intravenöz kanülasyon sırasında sevofluran verilmesini gerektiği gibi ayarlayın. Korneanın kurumasını önlemek için gözlere sulu kayganlaştırıcı uygulayın ve daha sonra deri altından kilogram büprenorfin başına 0.05 miligram enjekte edin.
Propofol bazlı total intravenöz anesteziyi vermek için, steril bir poliüretan kateterine bağlı steril bir 30 gauge hipodermik iğne kullanarak lateral kuyruk damarını kanüle edin. Kateterin içine kan geri dönüşü ile doğru yerleşimi onaylayın. Toplam intravenöz anesteziye başlamak için bir dakika boyunca kilogram başına 27 miligramlık bir başlangıç bolusu olarak yüzde iki propofol uygulayın.
Serofluran uygulamasını durdurun. Ameliyat sırasında stabil anestezi derinliğini korumak için propofol infüzyonunu dakikada kilogram başına 2.2 ila 4.0 miligram hızında tutun. Karın bölgesini tıraş edin ve cerrahi bölgeyi povidon-iyot çözeltisi ile dezenfekte edin.
Sol dördüncü meme yağ yastığındaki tümörden daha düşük bir santimetre kesi yapın. Tümörü ve sol kasık lenf nodunu diseke etmek için forseps ve makas kullanın. Lusiferaz etiketli tümör hücreleri kullanılıyorsa, gösterildiği gibi lateral kuyruk damarına d-luciferin enjekte edin ve net kenar boşlukları elde etmek için görüntüleri 60 saniye boyunca yakalayın.
Kalıntı bir tümör tespit edilirse, meme yağ yastığından ek doku rezeke edin. Cerrahi bölgede hemostaz sağlandıktan sonra, 5-0 naylon sütür kullanarak cildi kapatın. Yarayı povidon-iyot çözeltisi ile silin.
Ameliyatın tamamlanmasının ardından, anesteziyi durdurun ve anesteziden kurtulmasını sağlamak için fareyi bir ısıtma yastığı üzerinde temiz bir kafese yerleştirin. Fare normal uyanıklığa dönene kadar fareyi her 15 dakikada bir izleyin. Daha sonra ameliyattan sonra 48 saat boyunca her 12 saatte bir analjezi izleyin ve sağlayın.
Primer tümör nüksü veya uzak nüks değerlendirmesi için, fareleri haftada bir kez izleyin ve biyolüminesans görüntüleme sistemi kullanarak ameliyattan sonraki haftaya başlayın. Primer tümörün rezeksiyonu sonrası akciğerlerdeki uzak tümör nüksünü tanımlamak için biyolüminesans görüntüleme kullanıldı. Bu model, perioperatif dönemde meydana gelen olayları değerlendirmek için kullanılabilir.
Propofol altında kanser cerrahisinden 24 saat sonra dolaşımdaki plazma sitokinleri değerlendirildi. Yanal kuyruk damarını hızlı bir şekilde kanüle etmek ve sevoflurana maruz kalma süresini en aza indirmek için gerekli uygulamalar. Aşırı sedasyonu önlemek için propofol bolus uygulandığı için sevofluran yavaş yavaş titre edilmelidir.
Bu yöntem, propofol anestezisinin fare kalp cerrahisi modellerinde veya sepsis gibi kritik hastalıklardaki etkisini araştırmak için kullanılabilir.
