Name: an orthotopic mouse model of spontaneous breast cancer metastasis
Uploaded: 2016-08-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 11 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Orthotopic Mouse Model of Spontaneous Breast Cancer Metastasis at JoVE.com

Supported by grants from the National Institute of Health grants CA133085, CA182518 and CA185909 (to KL) and VA Merit Review Award BX001962 (to KL).

Tüm işlemler Gürcistan Regents Üniversitesi Hayvan Kullanım ve Bakım Komitesi tarafından kurallar ve onaylı protokolleri uygulayın. Ortotopik Meme Kanseri Tümör 1. kurulması <ol><li> Bir gün önce deney, kültür yaklaşık 10 mi RPMI ortamında 10 cm&#39;lik bir kültür kaplarına 2 x 10 6 4T1-Luc tümör hücreleri,% 10 FBS ihtiva eden. 37 ° C &#39;de, bir CO2 inkübatör kültürü çanak inkübe ve% 5 CO2. </li><li> tümör hücre enjeksiyonu gününde, PBS kaldırmak, 5 ml steril fosfat tamponlu tuzlu su (PBS), kültür tabağına, pH 7.4 ilave vakum kültür çanak kültür ortamı çıkarın ve yavaşça kültür yüzeyini yıkamak için çanak sallayın vakum ile. </li><li> Kültür kabı 2 mi tripsin-EDTA (% 0.05 tripsin ve 0.53 mM EDTA) ilave yaklaşık 5 dakika için 37 ° C &#39;de CO2 inkübatör içinde inkübe edilir. Tüm hücreler kültür çanak alt kopuk olduğundan emin olmak için ters bir mikroskop hücreleri kontrol edin. &lt;/ Li&gt; <li> yaklaşık 450 x g&#39;de oda sıcaklığında 3 dakika boyunca 15 ml&#39;lik konik bir tüp ve santrifüj hücreleri 8 ml serum içeren ortam transfer hücreler eklenerek tripsin Quench. </li><li> 10 ml PBS vakum ve tekrar süspansiyon hücreleri tarafından süpernatantı. Santrifüj hücreleri yaklaşık 450 xg 3 dakika. vakum ile süpernatantı ve 10 ml PBS hücrelerin tekrar süspansiyon. </li><li> Pipet kapak cam altında bir hemasitometre üzerine hücre süspansiyonu 10 ul. hücre konsantrasyonunu saptamak için hücre sayımı. 2 x 10 5 hücre / ml HBSS yoğunluğunda PBS içinde yeniden süspanse hücreleri. 1.5 ml steril bir mikro santrifüj tüpüne hücreleri aktarın ve kullanılana kadar buz üzerinde hücreleri tutun. </li><li> tümör hücre enjeksiyonu için, 8 haftalık - 6 dişi BALB / c fareleri kullanın. <ol><li> elektronik saç düzeltici kullanılarak meme 3. çevreleyen yakın saç tıraş. meme bezi 3 yağ yastığı içine 4T1 hücrenin enjeksiyonu tekrarlanabilir akciğer metastazı oluşturur. % 70 etano batırılarak pamuklu çubukla kullanarak traş alanı temizleyinl. 3 kez - mikrosantrifüj tüpü 2 tersini hücreleri tekrar süspansiyon. Yavaşça aspire ½ CC 27 G 1/2 tüberkülin şırınga içine hücre süspansiyonu 50 ul. </li><li> BALB / C fare 3. meme bezi kapsamında memenin yağlı pedine tümör hücrelerinin enjekte edilir. Temiz bir kafes içinde fare yerleştirin ve hayvan konut tesis kafesi dönün. Tümör gelişimi için 30 gün - 21 yaklaşık bekleyin. Tümör büyüme tümör çalışmaları için kurumun politikaları başı olarak düzenli olarak izlenmelidir. </li></ol></li></ol> Tümör Büyümesi 2. Canlı Fare Biyoparlaklık Görüntüleme <ol><li> her 3 günde görüntüleme tesisine tümör enjeksiyon Transferi fareler sonra görüntü fareler. önce görüntüleme farelere 100 ul luciferase (PBS içerisinde 30 mg / ml) intraperitoneal (ip) enjekte edilir. Yaklaşık 10 dakika,% 2 izofluran / O 2 akışı ile indüksiyon odasında fareler uyutmak. fare bacak dokunmak için forseps kullanabilir. dokunma yanıt yok tha teyitFare t tamamen bilinçsiz. <ol><li> 2 L / dakikalık bir akış hızında, sürekli% 2 izofluran ve O 2 görüntüleme odasında fareler yerleştirin. Ilgi alanı (yani, ilk tümör enjeksiyon meme ped) görüntüleme sistemi kamera karşı karşıya olduğu fare gibi yerleştirin. burun sağlamak ve fare ağız sıkıca anestezik boru içinde ayarlanır. Hayvanlar kurumda veteriner standartlarına göre anestezi gerekir. </li></ol></li><li> çeşitli pozlama süresi bir dizi ile biyoparlaklık görüntüleme kazanır. Örneğin, 1.5 cm, 25, 30 nesne yüksekliği görüş alanını (FOV) pozu ayarlamak, ve düşük güç X-ray ile ışıldayan fotoğrafik görüntüleri elde edebilir. ölçü birimlerini ayarla &quot;parlaklık&quot;. <ol><li> Yaklaşık 2.4 x 10 7 parlaklık birimlerinin maksimum otomatik doğrusal bir renk aralığını kullanın. İlk görüntüleri aldıktan sonra, (Şekil ayarlarını ve optimize-görüntü eldes, 3&#39;tür ve 4). </li></ol></li><li> kafesleri temizlemek ve fareler konut tesisine hayvanları dönmeden önce ambulasyon ile bilinç yeniden sağlamak için farelerin dönün. </li><li> görüntüleme cihazı ile ilişkili yaşam görüntüleme yazılımı ile verileri analiz edin. bir görüntüleme programı kullanarak, faiz (ROI) bölge etrafında kapalı bir çizgi çizin. ROI nuru yoğunluğunu belirlemek için görüntüleme yazılımı kullanın. Her fare için her ROI göreli yoğunluklarını kaydedin. NOT: Yüksek parlaklık yoğunlukları ışıldayan hücrelerin daha yüksek seviyelerde, ve böylece daha büyük tümör büyümesini gösterir. </li><li> Görme fareye olumsuz etkileri için her 3 günde bir inceleyin. NOT: Fareler haftada bir kez tartılır olacaktır. % 15 vücut ağırlığının bir kilo kaybı advers etki olarak kabul edilecektir ve ülsere tümörlerde 5. Fare da ötenazi olacaktır adımda açıklandığı gibi tümör taşıyan farelere ötenazi yapılacaktır. </li></ol> İlköğretim Tümörlerin 3. Cerrahi Kaldırma YOK HAYIRTE: Otoklav makas, forseps ve yara klipleri ve yara klip uygulayıcı (Şekil 1). <ol><li> enfeksiyon riskini azaltmak için steril bir durumda muhafaza edilmesi için bir steril bir muhafaza içinde ameliyat. ameliyattan bir gün önce, bir elektrikli saç düzeltici ile tümör taşıyan farelerin tümörlerini çevredeki tıraş. </li><li> Yaklaşık 2 - ameliyattan önce 4 saat, 5 mg / kg vücut ağırlığı bir dozda fareler için formüle farenin çiğnenebilir karprofen tabletler beslenir. </li><li> yaklaşık 30 saniye boyunca oksijen içinde% 2 izofluran içeren bir bölme fareler koyun. Sürekli tüm cerrahi döneminde bir anestezi cihazı kullanarak fare uyutmak. </li><li> anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için fare gözlerine veteriner merhem uygulamak için steril bir pamuklu çubuk kullanın. fare bacak dokunmak için forseps kullanabilir. dokunma yanıt yok fare tamamen bilinçsiz olduğunu doğrular. </li><li> Üç alternatif tümör site çevresinde cilt alanı dezenfekteBir sabun dezenfektan bodur mendil. % 70 alkol silin cerrahi bölgeyi silin. </li><li> Tümör yakın küçük bir kesi kesmek için steril bir neşter (Şekil 1) kullanın. </li><li> Tümör nodül (Şekil 2A) maruz tümörün etrafındaki deriyi kesmek için kesi sterilize bir makasın ucu yerleştirin. Steril forseps ile tümörü tutun ve derinin (Şekil 2B) tümörün ayırmak için makas kullanın. -80 ° C derin dondurucuda dondurularak veya ileride kullanılmak üzere% 10 formalin çözeltisi içinde sabitleme tarafından tümör örneği kaydedin. </li><li> Otomatik klip uygulayıcı (Şekil 1) kullanılarak 9 mm yara klipleri ile cerrahi siteyi kapatın. otoklavlanmış yatak ile temiz bir kafes fare dönün. hayvanlar kurumsal kurallarına göre izlenmelidir. NOT: Fare genellikle yeterli bilinç kavuşur ve kafes içinde yaklaşık 10 hareket etmeye başlar - ameliyattan sonra 30 dakika. </li><li> için Birleşik Devletlerde köpekler yönetmeameliyat sonrası fareler yeniden 24 saat. Carprofen ameliyat sonrası analjezi için ve ameliyat sonrası analjezi reçete kurumun veteriner kadrosu ile doğrudan istişare yoluyla kontrol edilmelidir. (- 7 gün ameliyat sonrası genelde içinde 5) yara iyileşene sonra yara klipleri çıkarın. Otomatik klip sökücü kullanılarak yara klipleri çıkarın. </li></ol> Tümör metastaz 4. Canlı Fare Biyoparlaklık Görüntüleme <ol><li> ameliyat sonrası görüntü farenin her 3 günde bir aşama 2&#39;de tarif edildiği gibi. </li></ol> Tümör taşıyan Akciğerler Hindistan Mürekkep Enflasyonu kullanma Doğrulama Akciğer Metastazlarının 5. NOT: lusiferaz canlı tümör görüntüleme sonuçlarını doğrulamak tümör nodülleri ölçmek için tümör taşıyan fare akciğerlerin Hindistan mürekkep enflasyon gerçekleştirmek için. 4T1 hücreleri, başka organ ve dokularda (Şekil 5) ve gerekirse, bu nedenle, tümör metastazı doğrulamak için bu organların histolojik muayene yapılmalıdır metastaz. Bu protokol kullanım lunBir örnek olarak gr metastazı. <ol><li> Ötenazi için kendi mevcut ev kafeste fareler tutun. diğer hayvanlarla birlikte yer zaman, farklı bir kafese ötenazi olmamak bu fareler taşınmaya. </li><li> Kafes filtre üst çıkarın ve CO 2 filtre üst ile değiştirin. CO2 filtre en bağlı basınçlı CO2 gaz silindiri (% 100) açar. 2 L / dk akış hızını ayarlayın ve en az 10 dakika süreyle ilgili CO2 tutun. Fareler hala 10 dakika sonunda nefes varsa fareler nefes durdurmak sonra, en az 1 dakika kadar devam CO 2 bırakın. CO 2 silindir kontrol ve debimetre kapatın. 3 dakika daha bekleyin ve filtre üst çıkarın. </li><li> polistiren gemide sırtında kurban-fare yerleştirin. trakea engelsiz erişim sağlamak için bacaklarını Pin. % 70 etanol ile fareler püskürtün. </li><li> makas kullanarak, sali doğru yukarı göğüs kafesi üzerinden fare orta karın orta hat boyunca kesilmiş vebezleri değişir. trakea gözlemleyin. trakea maruz trakea çevre dokulara çıkarmak için forseps kullanın. </li><li> trakea altında bir pipet geçirin. tek elle ucu Holding, yavaşça yukarı ve vücuttan uzak trakea kaldırın. </li><li> fareyi 180 ° tutan bir platform döndürün. trakea yoluyla ciğerlerine Hindistan Mürekkep (% 10 çini mürekkebi ve% 0.1 Amonyum Hidroksit) enjekte etmek için bir ½ CC 27 G 1/2 tüberkülin şırınga kullanın. güçlü bir direnç hissedilir kadar tamamen mürekkeple akciğerleri şişirmek. </li><li> trakea kesmek için bir makas kullanın. fare tutmak için forseps kullanabilir ve akciğerlerin altında forseps başka bir set yerleştirin ve fare dışında akciğer lobları çekin. Bir bardak içeren su içinde akciğer kısaca durulayın. </li><li> Kimyasal bir davlumbaz olarak, Fekete solüsyonu (% 50 etanol,% 6 formaldehit ve% 3 buzlu asetik asit), 3 ml ihtiva eden bir cam sintilasyon şişesine akciğerlere aktarın. buharlaşan çözüm önlemek için şişeyi Cap. NOT: Dokular süresiz Fekete çözeltisi saklanabilir. </li><li> Birkaç dakika sonra, siyah akciğerler (Şekil 5) üzerinde beyaz noktalar olarak tümör nodülleri gözlemlemek. beyaz tümör nodülü gözleri ile görülebilir. Davlumbaz bir çanak akciğerlere aktarın ve beyaz noktaların sayısını saymak. Her beyaz nokta, tek bir metastatik tümör nodülü temsil eder. </li></ol>

<ol>
	<li>Fantozzi, A., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+breast+cancer+metastasis.">Mouse models of breast cancer metastasis.</a> Breast Cancer Res. 8, 212 (2006).</li><li>Weigelt, B., Peterse, J. L., van 't Veer, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+metastasis:+markers+and+models.">Breast cancer metastasis: markers and models.</a> Nat Rev Cancer. 5, 591-602 (2005).</li><li>Kocaturk, B., Versteeg, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mammary+fat+pad+of+mice+to+study+tumor+growth.">Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth.</a> J Vis Exp. , (2015).</li><li>Stewart, T. J., Abrams, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+tumours+escape+mass+destruction.">How tumours escape mass destruction.</a> Oncogene. 27, 5894-5903 (2008).</li><li>Lopez, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD44+attenuates+metastatic+invasion+during+breast+cancer+progression.">CD44 attenuates metastatic invasion during breast cancer progression.</a> Cancer Res. 65, 6755-6763 (2005).</li><li>Khanna, C., Hunter, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+metastasis+in+vivo.">Modeling metastasis in vivo.</a> Carcinogenesis. 26, 513-523 (2005).</li><li>Cuevas, B. D., Winter-Vann, A. M., Johnson, N. L., Johnson, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MEKK1+controls+matrix+degradation+and+tumor+cell+dissemination+during+metastasis+of+polyoma+middle-T+driven+mammary+cancer.">MEKK1 controls matrix degradation and tumor cell dissemination during metastasis of polyoma middle-T driven mammary cancer.</a> Oncogene. 25, 4998-5010 (2006).</li><li>Danna, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+removal+of+primary+tumor+reverses+tumor-induced+immunosuppression+despite+the+presence+of+metastatic+disease.">Surgical removal of primary tumor reverses tumor-induced immunosuppression despite the presence of metastatic disease.</a> Cancer Res. 64, 2205-2211 (2004).</li><li>Tao, K., Fang, M., Alroy, J., Sahagian, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imagable+4T1+model+for+the+study+of+late+stage+breast+cancer.">Imagable 4T1 model for the study of late stage breast cancer.</a> BMC Cancer. 8, 228 (2008).</li><li>Hu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deregulation+of+apoptotic+factors+Bcl-xL+and+Bax+confers+apoptotic+resistance+to+myeloid-derived+suppressor+cells+and+contributes+to+their+persistence+in+cancer.">Deregulation of apoptotic factors Bcl-xL and Bax confers apoptotic resistance to myeloid-derived suppressor cells and contributes to their persistence in cancer.</a> J Biol Chem. 288, 19103-19115 (2013).</li><li>Kwan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenes+expressing+the+Wnt-1+and+int-2+proto-oncogenes+cooperate+during+mammary+carcinogenesis+in+doubly+transgenic+mice.">Transgenes expressing the Wnt-1 and int-2 proto-oncogenes cooperate during mammary carcinogenesis in doubly transgenic mice.</a> Mol Cell Biol. 12, 147-154 (1992).</li><li>Guy, C. T., Cardiff, R. D., Muller, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+mammary+tumors+by+expression+of+polyomavirus+middle+T+oncogene:+a+transgenic+mouse+model+for+metastatic+disease.">Induction of mammary tumors by expression of polyomavirus middle T oncogene: a transgenic mouse model for metastatic disease.</a> Mol Cell Biol. 12, 954-961 (1992).</li><li>Almholt, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+metastasis+of+transgenic+mammary+cancer+in+urokinase-deficient+mice.">Reduced metastasis of transgenic mammary cancer in urokinase-deficient mice.</a> Int J Cancer. 113, 525-532 (2005).</li><li>Gallego, M. I., Bierie, B., Hennighausen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+expression+of+HGF/SF+in+mouse+mammary+epithelium+leads+to+metastatic+adenosquamous+carcinomas+through+the+activation+of+multiple+signal+transduction+pathways.">Targeted expression of HGF/SF in mouse mammary epithelium leads to metastatic adenosquamous carcinomas through the activation of multiple signal transduction pathways.</a> Oncogene. 22, 8498-8508 (2003).</li><li>Lin, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatic+mutation+of+p53+leads+to+estrogen+receptor+alpha-positive+and+-negative+mouse+mammary+tumors+with+high+frequency+of+metastasis.">Somatic mutation of p53 leads to estrogen receptor alpha-positive and -negative mouse mammary tumors with high frequency of metastasis.</a> Cancer Res. 64, 3525-3532 (2004).</li><li>Ridgeway, A. G., McMenamin, J., Leder, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P53+levels+determine+outcome+during+beta-catenin+tumor+initiation+and+metastasis+in+the+mammary+gland+and+male+germ+cells.">P53 levels determine outcome during beta-catenin tumor initiation and metastasis in the mammary gland and male germ cells.</a> Oncogene. 25, 3518-3527 (2006).</li><li>Zimmerman, M., Hu, X., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+metastasis+and+CTL+adoptive+transfer+immunotherapy+mouse+model.">Experimental metastasis and CTL adoptive transfer immunotherapy mouse model.</a> J Vis Exp. , (2010).</li></ol>

Mice were purchased from the Jackson Laboratory and housed in the Georgia Regents University animal facility. Experiments and care/welfare were in agreement with federal regulations and an approved protocol by the Georgia Regents University IACUC committee. The authors have nothing to disclose.

Göğüs kanseri metastazı transgenik fare modellerinde bir çok tipi geliştirilmiştir. 1. Bu transgenik fareler, 60 ile% 100 arasında değişen yüksek bir tümör insidansı vardır. (-% 100 14) Bununla birlikte, bu transgenik farelerin metastazı sıklığı, tümör insidansı çok daha düşüktür. Tümör hücreleri, meme kanseri metastazı bu transgenik fare modellerinin çoğunda LN ve akciğerlere metastaz. Metastaz gecikme modelden modele değişir ve 2 ila 8 ay arasında değişmektedir. Meme kanseri metastazı 6,11-16 Bu transgenik fare modelleri, meme kanseri metastazı altında yatan genetik ve moleküler mekanizmaları çalışmak için mükemmel sistemlerdir. Bununla birlikte, düşük metastaz olması ve uzun süre metastazı gecikme anti-kanser ajanlarının test bu modellerin faydasını sınırlar. Primer tümörlerin ve daha sonra metastatik büyümeye resembl oluşumu ile, memenin yağlı pedine 4T1 hücrelerinin ortotopik implantasyonu,primer tümör oluşumu, lenf nodu metastazı ve uzak organ metastazı da dahil olmak üzere habis meme kanseri birden aşamaları, es. Ayrıca, sinjenik transplantasyon malign tümör progresyonu için bağışıklık sistemi de dahil olmak üzere tümör mikro katkısı, çalışma izin immünolojik host-versus-graft reaksiyonu önler. Bu model aynı zamanda bir ev sahibi bir anti-tümör bağışıklık tepkisini incelemek için yararlıdır. Bu nedenle, memenin yağlı pedine 4T1 hücrelerinin enjeksiyonu göğüs kanseri metastazı çalışma için hızlı ve nicel bir yöntemi temsil eder. Ortotopik 4T1 nakli tümör modeli en az 30 gün ve 60 günden az (Şekil 2-4)% 100 metastaz insidansında% 100 tümör oranına sahiptir. Ayrıca, göğüs kanseri metastazı transjenik fare modelleri çoğunun, 4T1 tümör hücreleri, aynı zamanda, insan göğüs kanseri metastazı benzeyen, bu şekilde, kemik (Şekil 4) metastaz. Kararlı expression lusiferaz kodlama 4T1 tümör hücrelerinde cDNA zaman, canlı farelerde tümör büyümesi ve ilerlemesinin izlenmesi (Şekil 3) sağlar. Tümör yükü ve metastaz kinetiği lüminesan yoğunluğuna dayalı ölçülebilir. Ayrıca, metastaz siteleri de lusiferaz görüntüleme (Şekil 4) ile tanımlanır ve tamamlayıcı bir yaklaşım (Şekil 5) ile doğrulanabilir. Bu nedenle, bu meme kanseri kendiliğinden metastaz modeli in vivo anti-metastaz maddelerin etkinliğini belirlemek için mükemmel bir modeldir. cerrahinin en dikişlerle kesim kapatılmasını gerektirir. Burada, paslanmaz yara klipleri de (Şekil 1) çalıştıkları gözlendi. Yara klip kolayca sterilize ve kolayca AutoCLIP uygulayıcı (Şekil 1) ile uygulanabilir. Yara klipleri kolayca yara iyileştikten sonra klip çıkarıcı (Şekil 1) ile temizlenebilir. Bunu OB adresüzerinde 20 ameliyatlarda bu cerrahi teknikle hiçbir zaman enfeksiyon görev yaptı. Bu modelin bir sınırlama hızlı tümör büyüme oranıdır. Çok kapsamlı metastaz yükü ameliyat sonrası 2 ay - metastaz taşıyan farelere Çoğunluk 1 ölür. Başka bir sınırlama 4T1 fare hücre hattıdır ve deneysel ilaçlara verdiği cevap, insan hücrelerinden yanıt farklılık olmasıdır. Bu deneysel ilaç testleri için çalışma tasarımında dikkate alınmalıdır. Özetle, biz ortotopik meme kanseri spontan metastaz modeli basit ve henüz hassas prosedür optimize ettik. Bu model, insan göğüs kanseri metastazı taklit eder. Tümör ilerlemesi kinetiği izlenir ve zaman içinde ölçülebilir. Bu model, göğüs kanseri metastazı ve büyümesini incelemek için değil, aynı zamanda 17 spontan meme kanseri metastazı bastırılmasında kemoterapötik ve immünoterapötik maddelerin etkisini test etmek için, sadece bir yere bir tanesidir.

Amerikan Kanser Derneği&#39;ne göre, meme kanseri ABD&#39;de kadınlarda kanser en sık tanı şeklidir. Son zamanlarda geliştirilen hedefe yönelik tedavilerin birlikte erken teşhis önemli ölçüde son yirmi yılda meme kanseri ölümlerini azalttı. Bununla birlikte, meme kanseri hala Amerika Birleşik Devletleri&#39;nde 1 kadınlarda kansere bağlı ölümlerin ikinci önde gelen nedenidir. meme kanseri hastalarının ölümlerin büyük çoğunluğu tümör hücresi metastazı kaynaklanmaktadır. Ne yazık ki, çoğu meme kanseri invaziv ve sık sık kemik, akciğer, karaciğer ve beyin de dahil olmak üzere uzak organlara, sonradan lenf nodu metastaz ve. 1,2 anda metastatik meme kanseri için etkili bir tedavi yoktur. Bu nedenle, kemoterapötik ve immünoterapötik maddelerin geliştirilmesi metastatik meme kanseri büyük önem taşımaktadır bastırmak için. Çeşitli meme kanseri spontan metastaz fare modelleri b vareen meme tümör hücresi ilerlemesini ve metastazını ve terapötik maddelerin geliştirilmesi için model olarak kullanılmak üzere altında yatan moleküler mekanizmaları incelemek için geliştirilmiştir. 1,3-5 Bununla birlikte, bu fare modellerinin en genetik tümör modelleri olduğu iken mekanik mükemmel modeller çalışmaları, metastaz bu genetik modeller geliştirmek için ay sürer çünkü bu şekilde anti-kanser ajanlar pahalı uzun vadeli olarak uygulanmasını gerektiren, terapötik maddeler test edilmesi için uygun değildir. canlı farelerde 6,7 izlenmesi tümör ilerlemesi aynı zamanda teknik olarak zordur. Buna karşılık, bir nakledilen meme kanseri metastaz modeli, kısa süreli, tümör ilerlemesi ve canlı farelerde tümör ilerlemesi kolayca izlemenin avantajı vardır. 4T1 ortotopik meme kanseri spontan metastaz fare modeli böyle bir nakledilen tümör modeli. 8 Bu modelde ise, göğüs tümör hücreleri primer tümör nodülleri kurmak için meme yağ yastığı nakledilmektedir. primer tümörDaha sonra cerrahi insan göğüs kanseri hastalarında olduğu gibi uzaklaştırılabilir. 4T1 tümör hücreleri son derece invaziv. 8,9, 3,10 Hemen hemen tüm tümör taşıyan fareler meme yağ pedine tümör nakli sonrası 30 gün içinde metastaz gelişir. Ancak, 4T1 tümörler birincil sitelerde agresif büyüyecek ve tümör boyutları genellikle en hayvan protokolleri izin verilen sınırları aşan. Bu aşamada, metastazlar genellikle mikrometastazlar vardır. Nedenle, terapötik maddeler test etmek için metastaz gelişimini sağlamak için birincil tümörlerin kaldırmak için gereklidir. Burada, primer tümör nakli, primer tümörün ve in vivo 4T1 tümör büyümesi ve ilerlemesi biyoparlaklık görüntüleme bazlı ölçümü cerrahi olarak çıkarılması basit ve henüz hassas prosedür olduğu rapor edilmektedir.

<table><tbody><tr><td>Ami-X Imaging System&amp;nbsp;</td><td>Spectral Instruments Imaging Inc. Tucson, AZ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IsoTec SurgiVet</td><td>Anesthesia Service &amp;amp; Equipment , Inc., Atlanta, GA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>AutoClip Physicians Kit</td><td>Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD</td><td>427638</td><td></td></tr><tr><td>9 mm AutoClip Applier&amp;nbsp;</td><td>Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD</td><td>427630</td><td></td></tr><tr><td>9 mm AutoClip Remover</td><td>Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD</td><td>427637</td><td></td></tr><tr><td>9 mm AutoClip Wound Clip</td><td>Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD</td><td>427631</td><td></td></tr><tr><td>Sharp-Pointed Dissecting Scissors</td><td>Fisher</td><td>8940</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting Fine-Pointed Forceps</td><td>Fisher</td><td>8875</td><td></td></tr><tr><td>1/2 CC 27&amp;nbsp;G&amp;nbsp;1/2 tuberculin syringe</td><td>Becton Dickinson and Co. NJ&amp;nbsp;</td><td>305620</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 medium</td><td>Mediatech Inc</td><td>10-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Mediatech Inc</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>70% Ethanol</td><td>Ultrapure-usa.com</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Mediatech Inc</td><td>25-040-CI</td><td></td></tr></tbody></table>

an orthotopic mouse model of spontaneous breast cancer metastasis

Metastatik meme kanseri hastalarının ölüm birincil nedenidir. Meme kanseri metastazı dahil kanser hücre metastazı, altta yatan mekanizma, büyük ölçüde bilinmemektedir ve kanser araştırmalarında bir odak noktasıdır. Çeşitli meme kanseri spontan metastaz fare modelleri kurulmuştur. Burada, ortotopik nakledilen meme kanseri primer tümörün kurmak ve insan meme kanseri metastazı taklit spontan metastaz ve sonuç için basitleştirilmiş bir prosedür rapor. biyolüminesans canlı tümör görüntüleme ile birlikte bu fare modeli tümör büyümesi ve ilerlemesi kinetikleri izlenmesi ve sayısal sağlar. Bu modelde, 4T1-Luc göğüs kanseri hücrelerinin bir düşük doz (1 x 10 4 hücre), bir tüberkülin şırıngası kullanılarak Balb / C fare meme yağ tabanına enjekte edilmiştir. Fareler lusiferin ile enjekte edilmiş ve bir biyolojik olarak ışık veren görüntüleme sistemi kullanılarak, çeşitli zaman noktalarında görüntülenmiştir. primer tümörler yakl (IACUC onaylı protokol gibi boyutu sınırı büyüdüğündeoximately 30 gün), farenin% 2 izofluran ve oksijen sürekli bir akışı altında anestezi uygulanmıştır. tümör alanı% 70 etanol ile sterilize edildi. Tümörün etrafında fare deri steril bir makasla ile çıkarıldı tümörü açığa çıkarıldı. Primer tümör uzaklaştırılması bir ay 4T-1, tümör taşıyan farelerin hayatta kalma uzanır. fareler daha sonra tekrar tekrar uzak organlara yayılma metastatik tümör için görüntülendi. Terapötik ajanlar, bu noktada, tümör metastazı bastırmak için uygulanabilir. Bu model, primer bölgesi uzaktaki organlara ilerlemesi kinetiği meme kanseri hücre büyümesini miktarının basit ve henüz duyarlıdır ve bu nedenle, in vivo olarak anti-metastaz terapötik ve immünoterapötik maddeler test etmek için, meme kanserinin oluşumu ve ilerlemesinin incelenmesi için mükemmel bir modeldir .

Ortotopik Meme Kanseri Fare Modeli Kurulması 4T1 agresif meme karsinoma hücre hattıdır. Memenin yağlı pedine az 4 ila 10 x 1 ile hücrelerin enjeksiyonu da (Şekil 2A) yerinde bir tek tümör nodülü oluşturulmasına neden olabilir. Bu sebepten, tümör insan primer meme kanseri taklit eder. Neredeyse% 100 fareler ortotopik tümör gelişebilir. Tümör büyüklüğü, bir dijital kumpas veya canlı tümör görüntüleme (Şekil 3) kullanılarak belirlenebilir. Tümörler bir biyoışıldama görüntüleme sistemi kullanılarak tümör enjeksiyonundan sonra tespit yaklaşık olarak 3 gün, ve tümör boyutu arttıkça lüminesans şiddeti artar (Şekil 3). Bu nedenle, bu model, meme karsinomu, tüm safhalarına karşı kemoterapötik ve immünoterapötik maddelerin etkisini test etmek için ideal bir ortotopik meme kanseri modelidir. Spontan Metastaz insan meme kanseri hastalarında, primer tümörler cerrahi tanı konduktan sonra kaldırılır. Ancak, hastaların çok sayıda zaten tanı anında LN veya uzak metastaz var. bir prosedürde, farelerin çok tümör nakli 30 gün sonra LN ve uzak metastaz geliştirdi. Tarif edilen cerrahi prosedür tamamen birincil tümör (Şekil 2B) kaldırır. 30 gün ameliyattan sonra (Şekil 2B) - Hayır artık primer tümörler primer tümör siteleri 10 tespit edilir. primer tümörün cerrahi olarak çıkarılmasından tümör taşıyan farelerin yaşam süresini uzatır, ancak fareler çeşitli bölgelerinde tümör metastazı engellemez. Bu metastaz canlı görüntüleme yöntemi (Şekil 4) ile tespit edilebilir. Bu model, böylece insan meme kanseri hastaları taklit eden spontan metastatik meme kanseri modelidir. 1) okuyan spontan bre: Bu model için yararlıdırAST kanser metastazı (örneğin, 4T1 hücreleri, meme kanseri, spontan metastazında bu genlerin fonksiyonlarını test etmek için ilgi konusu bir gen ile transfekte edilebilir); ve 2) bir bağışıklık-kompetan ana spontan meme metastazı karşı kemoterapötik ve immünoterapötik maddelerin etkisini test etmek. Siteleri ve metastaz derece canlı görüntüleme (Şekil 4) tarafından algılanır ve ikinci yaklaşımı (Şekil 5) ile doğrulamak olabilir. Lüminesans görüntüleme tüm akciğer tümör yükünü ölçmek. Tümör taşıyan akciğer Mürekkep enflasyonu tümör metastazının ücretsiz miktar yöntemi temsil eden ve böylece, her bir akciğer (Şekil 5) asıl tümör nodüllerinin doğru sayma sağlar. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54040/54040fig1.jpg" /> Şekil 1. Cerrahi Aletler. 1.Stainless neşter, 2. Forseps. 3. Paslanmaz makas. 4. AutocYara klip uygulayıcı dudak. 5. AutoCLIP yara klip sökücü. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54040/54040fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54040/54040fig2.jpg" /> Şekil 2. Ortotopik 4T1 Tümör Modeli. Bir. 4T1 tümör hücreleri (100 ul PBS içinde 1 x 10 4 hücre) meme yağ tabanına enjekte edilmiştir. Otuz gün tümör enjeksiyonundan sonra, fare kurban edilmiş ve tümör büyümesi açısından incelendi. Enjeksiyon (sarı ok) yerinde tek bir tümör nodülü. B tümör taşıyan fareler olduğunu göstermiştir. A&#39;da gösterildiği gibi tümör cerrahi uzaklaştırılmıştır. 10 gün primer tümörün cerrahi olarak çıkarılması sonrası 4T1 tümör taşıyan fareler olduğunu göstermiştir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54040/54040fig2large.jpg" target="_blank">Bir büyük görmek için tıklayınız</a>Bu rakamın sürümü. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/54040/54040fig3.jpg" /> Şekil Lusiferaz tabanlı Canlı tümör görüntüleme 3. Canlı Tümör Görüntüleme. 4T1 tümör hücreleri (100 ul PBS içinde 1 x 10 4 hücrelerinde) meme yağ tabanına enjekte edilmiştir. Fare 7, gösterilen 14 ve 28. primer tümörün lüminesans yoğunluğu günlerde görüntülendi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54040/54040fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/54040/54040fig4.jpg" /> Şekil Lusiferaz tabanlı Canlı tümör görüntüleme tümör progresyonu 4. Görselleştirme. 4T1 tümör hücreleri (100 ul PBS içinde 1 x 10 4 hücrelerinde) meme yağ tabanına enjekte edilmiştir. primer tümör ameliyatla sh olarak çıkarıldıKendi Şekil 3&#39;te. Fare daha sonra primer tümörün cerrahi olarak çıkarılmasından sonra 17 gün görüntülendi. Metastaz görüntü olduğunu göstermiştir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54040/54040fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/54040/54040fig5.jpg" /> Hindistan Mürekkep Enflasyon ile Akciğer Tümör Nodüllerinin Şekil 5. Görselleştirme. Tümör taşıyan fare akciğer çini mürekkebi ile şişirilmiş ve Fekete çözümü giderilmiştir. Beyaz noktalar akciğer metastazları vardır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54040/54040fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about An Orthotopic Mouse Model of Spontaneous Breast Cancer Metastasis at JoVE.com

An Orthotopic Mouse Model of Spontaneous Breast Cancer Metastasis

Ortotopik meme kanseri primer tümör modeli ve primer tümörün cerrahi olarak çıkarılması açıklanan spontan metastaz oluşturmak için fare ömrünü uzatmak için. tümör büyümesi ve ilerlemesi izlenir ve lusiferaz floresan görüntüleme ile ölçülür.

Spontan Meme Kanseri metastaz Ortotopik Fare Modeli

Metastasis is the primary cause of mortality of breast cancer patients. The mechanism underlying cancer cell metastasis, including breast cancer ...

an-orthotopic-mouse-model-of-spontaneous-breast-cancer-metastasis

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

30.6K Görüntüleme.  Augusta University.  Ortotopik meme kanseri primer tümör modeli ve primer tümörün cerrahi olarak çıkarılması açıklanan spontan metastaz oluşturmak için fare ömrünü uzatmak için. tümör büyümesi ve ilerlemesi izlenir ve lusiferaz floresan görüntüleme ile ölçülür. 

Video: An Orthotopic Mouse Model of Spontaneous Breast Cancer Metastasis

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast cancer metastasis, and results in poor outcomes with median survival rates of only 4.8 - 15 months. Current rodent models of breast cancer metastasis, including primary tumor cell xenograft and spontaneous tumor models, rarely metastasize to the liver. Intracardiac and intrasplenic injection models do result in liver metastases, however these models can be confounded by concomitant secondary-site metastasis, or by compromised immunity due to removal of the spleen to avoid tumor growth at the injection site. To address the need for improved liver metastasis models, a murine portal vein injection method that delivers tumor cells firstly and directly to the liver was developed. This model delivers tumor cells to the liver without complications of concurrent metastases in other organs or removal of the spleen. The optimized portal vein protocol employs small injection volumes of 5 - 10 &#956;l, &#8805; 32 gauge needles, and hemostatic gauze at the injection site to control for blood loss. The portal vein injection approach in Balb/c female mice using three syngeneic mammary tumor lines of varying metastatic potential was tested; high-metastatic 4T1 cells, moderate-metastatic D2A1 cells, and low-metastatic D2.OR cells. Concentrations of &#8804; 10,000 cells/injection results in a latency of ~ 20 - 40 days for development of liver metastases with the higher metastatic 4T1 and D2A1 lines, and &#62; 55 days for the less aggressive D2.OR line. This model represents an important tool to study breast cancer metastasis to the liver, and may be applicable to other cancers that frequently metastasize to the liver including colorectal and pancreatic adenocarcinomas.

A surgical procedure was developed to deliver mammary tumor cells to the murine liver via portal vein injection. This model permits investigation of late stages of liver metastasis in a fully immune competent host, including tumor cell extravasation, seeding, survival, and metastatic outgrowth in the liver.

Bir Portal Ven Enjeksiyon Modeli Karaciğer Metastazı Meme Kanseri Eğitim için

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Kanser Araştırmaları

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, xenografts, genetic manipulation, chemical reagents induction, etc.) have various pathological characters and play important roles in investigating certain aspects of diseases. Although no single model can totally mimic the whole human disease progression, orthotopic organs disease models with a proper stromal environment play an irreplaceable role in understanding diseases and screening for potential drugs. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into the mammary fat pad in a simple, less invasive, and easy-to-handle way, and follow the metastasis to distant organs. With the proper features of primary tumor growth, breast and nipple pathological changes, and a high occurrence of other organs&#39; metastasis, this model maximumly mimics human breast cancer progression. Primary tumor growth in situ, long-distant metastasis, and the tumor microenvironment of breast cancer can be investigated by using this model.

Here, we present a protocol to implant breast cancer cells into the mammary fat pad in a simple, less invasive, and easy-to-handle way, and this mouse orthotopic breast cancer model with a proper mammary fat pad environment can be used to investigate various aspects of cancer.

Fareler meme yağ yastığı içine meme kanser hücrelerinin Orthotopic enjeksiyon

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less aggressive breast tumors, the 5-year survival rate of TNBC patients is 77% due to their characteristic drug-resistant phenotype and metastatic burden. Toward this end, murine models have been established aimed at identifying novel therapeutic strategies limiting TNBC tumor growth and metastatic spread. This work describes a practical guide for the TNBC orthotopic model where MDA-MB-231 breast cancer cells suspended in a basement membrane matrix are implanted in the fourth mammary fat pad, which closely mimics the cancer cell behavior in humans. Measurement of tumors by caliper, lung metastasis assessment via in vivo and ex vivo imaging, and molecular detection are discussed. This model provides an excellent platform to study therapeutic efficacy and is especially suitable for the study of the interaction between the primary tumor and distal metastatic sites.

This work presets an advanced protocol to accurately assess tumor loading by detection of green fluorescent protein and bioluminescence signals as well as the integration of quantitative molecular detection technique.

Ortotopik Meme Kanseri Modeli Kullanarak Üçlü Negatif Meme Kanseri Eğitimi

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

Orthotopic Transplantation of Breast Tumors as Preclinical Models for Breast Cancer

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. Immortalized cell lines are easy to grow and genetically modify to study molecular mechanisms, yet the selective pressure from cell culture often leads to genetic and epigenetic alterations over time. Patient-derived xenograft (PDX) models faithfully recapitulate the heterogeneity and drug response of human breast tumors. PDX models exhibit a relatively short latency after orthotopic transplantation that facilitates the investigation of breast tumor biology and drug response. The transplantable genetically engineered mouse models allow the study of breast tumor immunity. The current protocol describes the method to orthotopically transplant breast tumor fragments into the mammary fat pad followed by drug treatments. These preclinical models provide valuable approaches to investigate breast tumor biology, drug response, biomarker discovery and mechanisms of drug resistance.

Patient-derived xenograft (PDX) models and transplantable genetically engineered mouse models faithfully recapitulate human disease and are preferred models for basic and translational breast cancer research. Here, a method is described to orthotopically transplant breast tumor fragments into the mammary fat pad to study tumor biology and evaluate drug response.

Meme Kanseri için Preklinik Modeller Olarak Meme Tümörlerinin Ortopedik Transplantasyonu

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. ...

In Vivo Imaging to Measure Spontaneous Lung Metastasis of Orthotopically-injected Breast Tumor Cells

Metastasis remains the primary cause of cancer-related death. The succession of events that characterize the metastatic cascade presents multiple opportunities for therapeutic intervention, and the ability to accurately model them in mice is critical to evaluate their effects. Here, a step-by-step protocol is presented for the establishment of orthotopic primary breast tumors and the subsequent monitoring of the establishment and growth of metastatic lesions in the lung using in vivo bioluminescence imaging. This methodology allows for the evaluation of treatment or its biological effects along the entire range of metastatic development, from primary tumor escape to outgrowth in the lungs. Breast orthotopic tumors are generated in mice via injection of a luciferase-labeled cell suspension in the 4th mammary gland. Tumors are allowed to grow and disseminate for a specific amount of time and are then surgically resected. Upon resection, spontaneous lung metastasis is detected, and the growth over time is monitored using in vivo bioluminescence imaging. At the desired experimental endpoint, lung tissue can be collected for downstream analysis. The treatment of established, clinically evident metastasis is critical to improve outcomes for stage IV cancer patients, and it can be evaluated through tail vein models of experimental lung metastasis. However, metastatic dissemination occurs early in breast cancer, and many patients have latent, subclinical disseminated disease after surgery. Utilization of spontaneous models such as this one provides the opportunity to study the whole spectrum of the disease, especially the systemic effects driven by treatment of the primary tumor such as pre-metastatic niche priming, and evaluate treatments on dormant and subclinical disease after surgery.

<meta charset="utf8"></head><body>Ortotopik Olarak Enjekte Edilen Meme Tümörü Hücrelerinin Spontan Akciğer Metastazını Ölçmek için İn Vivo Görüntüleme

The manuscript describes a methodology for the establishment as well as longitudinal growth monitoring of spontaneous lung metastasis from orthotopically-injected breast tumors, amenable to intervention at all stages of the metastatic cascade.

In vivo (İn canlı) Ortotopik Olarak Enjekte Edilen Meme Tümörü Hücrelerinin Spontan Akciğer Metastazını Ölçmek için Görüntüleme

Metastasis remains the primary cause of cancer-related death. The succession of events that characterize the metastatic cascade presents multiple ...

Initiation of Metastatic Breast Carcinoma by Targeting of the Ductal Epithelium with Adenovirus-Cre: A Novel Transgenic Mouse Model of Breast Cancer

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in exponential tumor growth and metastasis to distal tissues and the collapse of anti-tumor immunity. Many useful animal models exist to study breast cancer, but none completely recapitulate the disease progression that occurs in humans. In order to gain a better understanding of the cellular interactions that result in the formation of latent metastasis and decreased survival, we have generated an inducible transgenic mouse model of YFP-expressing ductal carcinoma that develops after sexual maturity in immune-competent mice and is driven by consistent, endocrine-independent oncogene expression. Activation of YFP, ablation of p53, and expression of an oncogenic form of K-ras was achieved by the delivery of an adenovirus expressing Cre-recombinase into the mammary duct of sexually mature, virgin female mice. Tumors begin to appear 6 weeks after the initiation of oncogenic events. After tumors become apparent, they progress slowly for approximately two weeks before they begin to grow exponentially. After 7-8 weeks post-adenovirus injection, vasculature is observed connecting the tumor mass to distal lymph nodes, with eventual lymphovascular invasion of YFP+ tumor cells to the distal axillary lymph nodes. Infiltrating leukocyte populations are similar to those found in human breast carcinomas, including the presence of &#945;&#946; and &#947;&#948; T cells, macrophages and MDSCs. This unique model will facilitate the study of cellular and immunological mechanisms involved in latent metastasis and dormancy in addition to being useful for designing novel immunotherapeutic interventions to treat invasive breast cancer.

Activation of latent mutations with adenovirus-Cre into the mammary ductal system results in a clinically relevant metastatic breast cancer. Incorporation of a YFP promoter allows tracking of distal metastatic tumor cells. This model is useful to study latent metastasis, anti-tumor immunity, and for designing novel immunotherapies to treat breast cancer.

Meme Kanseri Bir Roman Transgenik Fare Modeli: Adenovirüs-Kretasedekine ile epiteli Hedefleme ile Metastatik Meme Kanseri Başlatma

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in ...

Tıp

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the functions of proteins involved in oncogenic progression or help to discover new tumor suppressors. In addition, injecting cancer cells into mice with different genotypes might provide a better understanding of the importance of the stromal compartment. Many models may be useful to investigate certain aspects of disease progression but do not recapitulate the entire cancerous process. In contrast, breast cancer cells engraftment to the mammary fat pad of mice better recapitulates the location of the disease and presence of the proper stromal compartment and therefore better mimics human cancerous disease. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into mice orthotopically and explain how to collect tissues to analyse the tumor milieu and metastasis to distant organs. Using this model, many aspects (growth, angiogenesis, and metastasis) of cancer can be investigated simply by providing a proper environment for tumor cells to grow.

Cancer is a complex disease that is influenced by the tissue surrounding the tumor as well as local pro- and anti-inflammatory mediators. Therefore, orthotropic injection models, rather than subcutaneous models may be useful to study cancer progression in a manner that better mimics human pathology.

Farelerin Meme Fat Pad içine Meme Kanseri Hücreleri Ortotopik Enjeksiyon Tümör Büyüme Eğitim için.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

A "Patient-Like" Orthotopic Syngeneic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma Metastasis

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of cancer metastasis are still unclear. Animal models are essential for elucidating the mechanisms and for evaluating novel strategies for the treatment of metastatic cancers. Here, an in-depth description of a &#8220;patient-like&#8221; orthotopic syngeneic mouse model for exploring the mechanisms of metastasis of solid organ tumors is provided. The survival surgical implantation of BNL 1ME A.7R.1 mouse hepatocellular carcinoma cells directly into the liver (the organ of origin) of the inbred wild-type immune competent laboratory mouse strain, BALB/c is described. The success and reproducibility of this methodology recommends it for widespread use in elucidating the biological mechanisms of solid organ cancer metastasis.

The metastatic spread of cancer is the major cause of cancer-related deaths. We provide an in-depth description of our survival surgery methodology for establishing a &#8220;patient-like&#8221; orthotopic syngeneic mouse model system for studying the mechanisms of metastasis in solid organ tumors.

Bir &quot;Hasta gibi&quot; Ortotopik singenik Fare Modeli Hepatoselüler karsinomu metastazı

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of ...

Generating a Murine Orthotopic Metastatic Breast Cancer Model and Performing Murine Radical Mastectomy

In vivo mouse models to assess breast cancer progression are essential for cancer research, including preclinical drug developments. However, the majority of the practical and technical details are commonly omitted in published manuscripts which, therefore, makes it challenging to reproduce the models, particularly when it involves surgical techniques. Bioluminescence technology allows for the evaluation of small amounts of cancer cells even when a tumor is not palpable. Utilizing luciferase-expressing cancer cells, we establish a breast cancer orthotopic inoculation technique with a high tumorigenesis rate. Lung metastasis is assessed utilizing an ex vivo technique. We, then, establish a mastectomy model with a low local recurrence rate to assess the metastatic tumor burden. Herein, we describe, in detail, the surgical techniques of orthotopic implantation and mastectomy for breast cancer with a high tumorigenesis rate and low local recurrence rates, respectively, to improve breast cancer model efficiency.

We introduce a murine orthotopic breast cancer model and radical mastectomy model with bioluminescence technology to quantify the tumor burden to mimic human breast cancer progression.

Fare Orthotopic metastatik meme kanseri Model oluşturma ve fare radikal mastektomi gerçekleştirme

In vivo mouse models to assess breast cancer progression are essential for cancer research, including preclinical drug developments. However, the majority ...

Spontan Meme Kanseri metastaz Ortotopik Fare Modeli

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Bir Portal Ven Enjeksiyon Modeli Karaciğer Metastazı Meme Kanseri Eğitim için

Fareler meme yağ yastığı içine meme kanser hücrelerinin Orthotopic enjeksiyon

Ortotopik Meme Kanseri Modeli Kullanarak Üçlü Negatif Meme Kanseri Eğitimi

Meme Kanseri için Preklinik Modeller Olarak Meme Tümörlerinin Ortopedik Transplantasyonu

In vivo (İn canlı) Ortotopik Olarak Enjekte Edilen Meme Tümörü Hücrelerinin Spontan Akciğer Metastazını Ölçmek için Görüntüleme

Meme Kanseri Bir Roman Transgenik Fare Modeli: Adenovirüs-Kretasedekine ile epiteli Hedefleme ile Metastatik Meme Kanseri Başlatma

In vivo (İn canlı) Ortotopik Olarak Enjekte Edilen Meme Tümörü Hücrelerinin Spontan Akciğer Metastazını Ölçmek için Görüntüleme

Farelerin Meme Fat Pad içine Meme Kanseri Hücreleri Ortotopik Enjeksiyon Tümör Büyüme Eğitim için.

Bir "Hasta gibi" Ortotopik singenik Fare Modeli Hepatoselüler karsinomu metastazı

Fare Orthotopic metastatik meme kanseri Model oluşturma ve fare radikal mastektomi gerçekleştirme