Bu yöntem, böcek öldürücülerin kahve meyvesi delicisine karşı toksisitesini test etmek için yeşil kahve meyvelerini kullanır. İnsektisit uygulaması, böcek ölümlerinin kovuculuğunu ve diğer etkilerini incelemek için böcek istilasından önce veya sonra gerçekleştirilir. Gerçek yeşil kahvenin böcek büyümesi için yeterli besinlerle kullanılması, bileşiklerin simüle edilmiş doğal koşullar altında böceklere toksisitesini değerlendirmenin en uygun yoludur.
Protokol, kimyasal insektisitlerin ve mantarlar veya kovucu maddeler gibi patojenlere yönelik toksik etkilerinin değerlendirilmesine izin verir. Meyvelerin ve böceklerin bu enfeksiyonu kritik bir adımdır, çünkü yanlış dezenfeksiyon kontaminasyon nedeniyle böcek ölümüne neden olabilir. Zayıf böcekler toksik bir ürünün sonuçlarını abartacağı için böcek kalitesi de önemlidir.
Görsel gösterim, meyvelerin böcek istilası sürecinin, toksik maddenin yayılması için uygun anın uygun aşamasının belirlenmesini sağlar. Ve meyveleri diseke etmenin yolu. Prosedürü gösteren, laboratuvardan bir araştırma asistanı olan Claudia Martinez olacak.
Başlamak için, yeşil kahve meyvelerini sabahın erken saatlerinde, kahve tarlalarından çiçeklenmeden yaklaşık 120 ila 150 gün sonra yaklaşık gelişim yaşı ile toplayın. Yaklaşık 300 eşit büyüklükte ve sağlıklı meyve seçin ve pedinkülleri geri çekin. Yeşil kahve meyvelerini% 2'lik bir sabun çözeltisine batırın ve ovalayarak iyice temizleyin.
Daha sonra meyveleri üç kez temiz suyla durulayın. Bunları% 0.5 sodyum hipoklorit çözeltisine batırın ve dakikada 110 devirde 10 dakika boyunca çalkalayıcıya yerleştirin. Meyveleri üç kez temiz suyla durulayın ve steril kağıt havlularla kurulayın.
Meyveleri, UV özellikli yatay laminer akış istasyonunun içine 15 dakika boyunca UV kaynağından 55 santimetreye yerleştirerek ışınlayın. Tüm meyvenin uygun şekilde ışınlanmasını sağlamak için meyveleri her beş dakikada bir hareket ettirin. Biyotahlilleri kurmak için, aynı gün ortaya çıkan kahve meyvesi delicilerini% 0.5 sodyum hipoklorit çözeltisine batırın ve 10 dakika boyunca bir fırça ile yavaşça çalkalayın.
Bu böcekleri müslin bir bezden süzün ve steril damıtılmış suyla üç kez yıkayın. Fazla suyu steril kağıt havlularla temizleyin. Deney ünitesi başına 30 yeşil kahve meyvesinden oluşan bir grup hazırlayın ve bunları plastik bir kutuya yerleştirin.
Portatif bir püskürtücü ünitesi kullanarak değerlendirme için bir test ürününün farklı konsantrasyonlarını uygulayın, burada% 5 ve% 6 alkaloid emülsiyonları kullanılmıştır. Kontrol olarak, bir grup yeşil kahve meyvesini suyla püskürtün. Tedavi başına en az üç deney ünitesi kullanın, birbiri ardına püskürtün.
Steril bir başlıkta, yeşil kahve meyvesi başına iki kahve meyvesi delici yetişkini serbest bırakın ve 30 dakika sonra kutuları örtün. Plastik kutuları, istila edilmiş yeşil kahve meyveleri ile karanlıkta, kontrollü koşullara sahip bir odanın veya inkübatörün içinde bırakın. 1, 7, 15 ve 21 gün sonra, her kutudaki meyvelerin dışındaki daha delici meyvelerin ve canlı ve ölü böceklerin sayısını sayın.
İstiladan sonraki 20 günde, her yeşil kahve meyvesini stereo mikroskop altında 10x büyütme ile inceleyin ve her meyvedeki böcekler tarafından zarar görmüş sağlıklı tohum veya tohum sayısını sayın. Farklı kahve meyvesi delici biyolojik aşamalarını sayın. Deney birimi başına böcek ölümlerini belirlemek için her tohumdaki ölü böcek sayısını gözlemleyin.
Steril bir başlıkta, kahve meyvesi delici yetişkinleri daha önce dezenfekte edilmiş yeşil kahve meyvelerine iki-bir oranında bırakın ve istilanın 21 santigrat derecede üç saat ilerlemesine izin verin. Yeşil kahve meyvelerinin çoğu, kahve meyvesi delicisinin karnı hala açıkta kalacak şekilde üç saat sonra istila edilmelidir. 46 istila edilmiş meyve seçin ve bunları 96 delikli plastik bir rafa yerleştirin, böylece işlem doğrudan meyveyi delen kahve meyvesi delicisine püskürtülebilir.
Tedavi için üç rafı birbiri ardına en az üç kez püskürtün ve 30 dakika sonra rafları örtün. 20 gün sonra, yeşil kahve meyvelerini stereo mikroskop altında 10 x büyütmede inceleyin ve her meyvedeki böceklerden zarar gören sağlıklı tohumların veya tohumların sayısını sayın. Deney birimi başına böcek ölümünü belirlemek için farklı kahve meyvesi delici biyolojik aşamalarını ve her tohumdaki ölü böcek sayısını sayın.
Meyveler üzerinde koruyucu etkisi olan bir ürünü değerlendirmek için ilk adımları izleyin ve yeşil kahve meyveleri yetişkinlerini plastik kutulara bırakın. Ardından, kutulardan uzaklaşan kahve meyvesi delicilerin sayısını ve yeşil kahve meyvelerini enfekte eden sayıyı sayın. Kuluçkadan sonra, kontrollü koşullar altında, istiladan 20 gün sonra diseksiyon ve tohumların ve ölü böceklerin sayımı, kahve meyvesi delici istilasından sonra ürünü değerlendirmek için belirtilen adımları izleyin.
Yeşil kahve meyvelerinden çıkan veya meyvelerden uzaklaşan kahve meyvesi deliklerinin sayısını sayın. Her tedaviyi püskürttükten sonra, deney birimi başına böcek ölümünü belirlemek için kontrollü koşullar altında inkübasyondan sonraki adımları izleyin. Kahve meyvesi delicisine uygulanan %5 ve %6 insektisit, 20. günde yüksek böcek ölümlerine neden olmuş ve kontrole göre önemli farklılıklar göstermiştir.
İnsektisit iki uygulamasının sağlıklı tohumların %94'ü, insektisit ikincisinin ise sağlıklı tohumların %89'u ile sonuçlandığı görülmüştür. Tohumların% 37'si kontrol grubunda istila edilmedi. İstila sonrası durumlarda, ürünler böcek kütikülüne nüfuz ederek böcek ölümlerine neden oldu.
En yüksek mortalite insektisit iki ile meydana geldi. İnsektisitlerin etkileri, değerlendirmenin 20. gününde, enfekte olmamış sağlıklı tohumların yüzdesine yansımıştır. Kahve tohumlarının içinde, kontrol grubunda bulunan ve su ile püskürtülen böcek popülasyonuna kıyasla azalmış bir böcek popülasyonu bulundu.
Entomopatojen ve kovucu kombine etki, minimum tohum hasarı ve maksimum böcek ölümü ile sonuçlandı. Meyvelerin bu enfeksiyonu ve böceklerin dezenfeksiyonu protokol başarısını sağlar. Bu metodoloji aynı zamanda kahve meyvelerinin kahve meyvesi delicisine toleransını veya direncini değerlendirmek için de kullanılabilir.
Böceğe dayanıklı kahve tohumları durumunda böcek popülasyonuna karşı olumsuz bir etki de gözlenebilir. Bu metodoloji sadece insektisitin farklı etki biçimleriyle değerlendirilmesi için entomolojide değil, aynı zamanda toleranslı çeşitlerin değerlendirilmesi için bitki ıslahında ve meyve/patojen etkileşimini incelemek için bitki patolojisinde de kullanılabilir.
