Teknik destek için Shandong İl Hastanesi hayvan laboratuvarına teşekkür etmek istiyoruz. Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (NSFC 82101645), Çin'in Shandong Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı (ZR2020QH088) ve Shandong Eyaletindeki Kolejlerin Gençlik İnovasyonu için Bilim ve Teknoloji Destek Planı (2021KJ051) tarafından desteklenmiştir.

Aşağıdaki protokol, araştırma hayvanlarının kullanımına ilişkin tüm kurumsal etik yönergelere uygundur ve Çin'deki Shandong İl Hastanesi'ndeki Hayvan Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır. Tüm cerrahi manipülasyonlar derin anestezi altında yapıldı ve hayvanlar işlem sırasında hiçbir aşamada ağrı hissetmedi.
1. Operasyon öncesi hazırlık
<ol><li>Alet sterilizasyonu<ol><li>Ameliyattan önce cerrahi aletleri bir otoklavda (15 dakika boyunca 121 ° C) buharla sterilize edin. Yeterli miktarda tek kullanımlık dikiş ve iğne hazırlayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Ameliyat platformu kurulumu<ol><li>Ameliyatı cerrahi prosedürlere ayrılmış bir odada gerçekleştirin. İşlem için en az 60 cm x 60 cm'lik bir tezgah alanı atayın. Alanın yüzeyini %75 alkol ile temizleyin ve tek kullanımlık bir tıbbi havlu ile örtün ve ardından 30 dakika önceden ultraviyole radyasyonla dezenfekte edin (Şekil 1A).</li>
	</ol></li>
	<li>Hayvan hazırlama<ol><li>Tüm hayvanları sıcaklık kontrollü bir odada (20-25 °C) 12 saat aydınlık, 12 saat karanlık döngüde barındırın. 8 haftalık dişi C57BL/6 fareleri ameliyattan önce 1 hafta boyunca barınma tesisine alıştırmak.</li>
		<li>Ameliyattan önce fareleri tartın. İşlem sırasında herhangi bir aşamada ağrısızlık elde etmek için 9 haftalık tüm dişi fareleri intraperitoneal Tribromoetanol (280 mg / kg) enjeksiyonu ile genel anestezi ile uygulayın. Ağrıyı hafifletmek için ameliyattan yaklaşık 1 saat önce deri altına meloksikam (2 mg / kg) enjekte edin.</li>
		<li>Ameliyat sırasında kornea kuruluğunu önlemek için göz merhemi sürün.</li>
		<li>Temiz bir pamuklu çubuk kullanarak sırtınıza epilasyon losyonu uygulayın. Losyonu 3-5 dakika farenin üzerinde bekletin, ardından gazlı bez ve pamuklu çubuklarla tüyleri alın. Farenin arkasındaki tüm tüyler alınana kadar bu adımı tekrarlayın.</li>
		<li>Cildi% 75 alkolle temizlemek için gazlı bez ve pamuklu çubuk kullanın. Fareyi lastik bir şerit veya pamuk ip kullanarak ameliyat platformuna sabitleyin (Şekil 1B) ve sırtını temizlemek için iyodofor solüsyonu uygulayın. NOT: Ovariektomiden önce anestezi derinliğini bir ayak parmağı kıstırma ile onaylayın.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Yumurtalık ameliyatı
NOT: Tribromoetanol yaklaşık 30 dakika muhafaza edilerek ameliyatın mümkün olduğunca tamamlanması sağlanabilir.
<ol><li>Tek kullanımlık bir neşter kullanarak uyluk tabanından yukarıya doğru uzunlamasına ~1.0 cm'lik bir dorsal kesi yapın, sadece cilt ve deri altı fasyanın kesildiğinden emin olun ve bu sırada posterior peritonu kesmekten kaçının.</li>
	<li>Kesi sola doğru çekildiğinde beyaz bir yağ yastığı görülebilir. Mikro forseps ve makas kullanarak intraperitoneal boşluğu ortaya çıkarmak için beyaz yağ yastığı boyunca ~ 0.5 cm kesin.</li>
	<li>Posterior peritonu kestikten sonra, beyaz yağ yastığını mikro forseps ile intraperitoneal boşluktan yavaşça ve nazikçe çıkarın. Beyaz yağ dokusunu hemen ıslatılmış gazlı bezin dışında% 0.9 steril salin ile nemlendirin. Karın boşluğunun dışındayken açıkta kalan dokuyu daima nemli tutun.</li>
	<li>Beyaz yağ yastığının alt kısmına pembe granüler bir madde yani yumurtalık eklenir (Şekil 2A). Yumurtalıklar ince bir kanala yani rahime bağlıdır. Uterusun yumurtalık ucunu bağlamak ve sol yumurtalığı çıkarmak için 5-0 emilebilir sütürler kullanın (Şekil 2B).</li>
	<li>Bir yumurtalığı çıkarırken, çevredeki yağ dokusunu mümkün olduğunca koruyun. Cerrahi aletler ve yumurtalıklar arasında doğrudan temastan kaçının ve yumurtalık dokusunun intraperitoneal implantasyonunu önleyin.</li>
	<li>Beyaz yağ yastığını dikkatlice intraperitoneal boşluğa geri yerleştirin. Posterior peritonda 5-0 emilebilir sütür ile basit bir aralıklı sütür uygulayın (Şekil 2C). Dikiş tamamlandıktan sonra, kanamaları %0,9 steril tuzlu suya batırılmış gazlı bezle temizleyin.</li>
	<li>Cilt kesisini sağa doğru çekin ve aynı yöntemi kullanarak sağ yumurtalığı çıkarın.</li>
	<li>4-0 emilmeyen dikişlerle aralıklı dikiş atın ve kanamaları %0.9 steril tuzlu suya batırılmış gazlı bezle temizleyin (Şekil 2D).</li>
	<li>Her iki dikişi de tamamladıktan sonra yarayı bir iyodofor solüsyonu ile temizleyin. İntraperitoneal olarak geniş spektrumlu antibiyotikler enjekte edilir.</li>
</ol>3. Operasyon sonrası gözlem
<ol><li>Ameliyattan sonra fareleri 37 °C sabit sıcaklıktaki bir battaniyeye taşıyın. Fareler serbestçe hareket edene kadar, hayvanları kendi kafeslerinde tutun. Sternal yaslığı korumak için yeterli bilinci yeniden kazanana kadar hayvanı gözetimsiz bırakmayın.</li>
	<li>Ağrıyı hafifletmek için ameliyattan 24 saat sonra deri altına meloksikam (2 mg/kg) enjekte edin.</li>
	<li>Cerrahi yaranın herhangi bir komplikasyon belirtisi (ayrışma) olmadan düzgün bir şekilde iyileştiğinden emin olmak için fareleri günlük olarak izleyin.</li>
</ol>4. Estradiol takviyesi
<ol><li>Estradiol valerat ile desteklenmiş yem hazırlayın. 1 kg yem başına takviye edilmiş 2.6 mg beta-estradiol 17-valerat kullanın.</li>
	<li>Ameliyatın tamamlanmasından 3 gün sonra, fareleri estradiol valerat ile besleyin.</li>
</ol>5. FSH enjeksiyonu
<ol><li>Rekombinant insan FSH çözeltisi hazırlayın. Enjeksiyon için rekombinant insan FSH tozunu 100 IU / mL'ye kadar% 0.9 steril salin ile çözün.</li>
	<li>Fareleri deney planlarına göre gruplandırın ve 2 hafta boyunca intraperitoneal enjeksiyon yoluyla çözücü veya farklı dozlarda rekombinant FSH verin. Rekombinant FSH'nin biyolojik aktivitesine göre, menopoz geçiş döneminde kadınlarda serum FSH seviyesine eşdeğer farelerde FSH enjeksiyon dozunu kullanın. NOT: Farklı tedavilere dayanarak, yumurtalıklı östrojen takviyeli fareler rastgele üç gruba ayrıldı, 100 μL / gün çözücü alan çözücü (NS) grubu, günde 15 IU / kg vücut ağırlığı alan düşük doz FSH (L-FSH) grubu ve günde 30 IU / kg vücut ağırlığı alan yüksek doz FSH (H-FSH) grubu.</li>
</ol>

FSH Düzeyi Yükseltilmiş Yumurtalıklı Fare Modeli Geliştirilmesi

<ol>
	<li>Harlow, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Executive+summary+of+the+Stages+of+Reproductive+Aging+Workshop+++10:+addressing+the+unfinished+agenda+of+staging+reproductive+aging.">Executive summary of the Stages of Reproductive Aging Workshop + 10: addressing the unfinished agenda of staging reproductive aging.</a> Journal of Clinical Endocrinology &amp; Metabolism. 97 (4), 1159-1168 (2012).</li><li>Ulloa-Aguirre, A., Zari&#241;&#225;n, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Follitropin+Receptor:+Matching+Structure+and+Function.">The Follitropin Receptor: Matching Structure and Function.</a> Molecular Pharmacology. 90 (5), 596-608 (2016).</li><li>Franks, S., Stark, J., Hardy, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follicle+dynamics+and+anovulation+in+polycystic+ovary+syndrome.">Follicle dynamics and anovulation in polycystic ovary syndrome.</a> Human Reproduction Update. 14 (4), 367-378 (2008).</li><li>Guo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blocking+FSH+inhibits+hepatic+cholesterol+biosynthesis+and+reduces+serum+cholesterol.">Blocking FSH inhibits hepatic cholesterol biosynthesis and reduces serum cholesterol.</a> Cell Research. 29 (2), 151-166 (2019).</li><li>Xiong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FSH+blockade+improves+cognition+in+mice+with+Alzheimer's+disease.">FSH blockade improves cognition in mice with Alzheimer's disease.</a> Nature. 603 (7901), 470-476 (2022).</li><li>Sun, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FSH+Directly+Regulates+Bone+Mass.">FSH Directly Regulates Bone Mass.</a> Cell. 125 (2), 247-260 (2006).</li><li>Liu, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FSH+regulates+fat+accumulation+and+redistribution+in+aging+through+the+G&#945;i/Ca(2+)/CREB+pathway.">FSH regulates fat accumulation and redistribution in aging through the G&#945;i/Ca(2+)/CREB pathway.</a> Aging Cell. 14 (3), 409-420 (2015).</li><li>Maclellan, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+Follicle-Stimulating+Hormone+Receptor+in+Vascular+Anomalies.">Expression of Follicle-Stimulating Hormone Receptor in Vascular Anomalies.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 133 (3), 344e-351en (2014).</li><li>Liu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blocking+FSH+induces+thermogenic+adipose+tissue+and+reduces+body+fat.">Blocking FSH induces thermogenic adipose tissue and reduces body fat.</a> Nature. 546 (7656), 107-112 (2017).</li><li>Ji, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epitope-specific+monoclonal+antibodies+to+FSH&#946;+increase+bone+mass.">Epitope-specific monoclonal antibodies to FSH&#946; increase bone mass.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (9), 2192-2197 (2018).</li><li>El Khoudary, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trajectories+of+estradiol+and+follicle-stimulating+hormone+over+the+menopause+transition+and+early+markers+of+atherosclerosis+after+menopause.">Trajectories of estradiol and follicle-stimulating hormone over the menopause transition and early markers of atherosclerosis after menopause.</a> European Journal of Preventive Cardiology. 23 (7), 694-703 (2016).</li><li>Radu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+Follicle-Stimulating+Hormone+Receptor+in+Tumor+Blood+Vessels.">Expression of Follicle-Stimulating Hormone Receptor in Tumor Blood Vessels.</a> The New England Journal of Medicine. 363 (17), 1621-1630 (2010).</li><li>Sowers, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endogenous+hormones+and+bone+turnover+markers+in+pre-+and+perimenopausal+women:+SWAN.">Endogenous hormones and bone turnover markers in pre- and perimenopausal women: SWAN.</a> Osteoporosis International. 14 (3), 191-197 (2003).</li><li>Kristensen, V. N., Kure, E. H., Erikstein, B., Harada, N., B&#248;rresen-Dale, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+susceptibility+and+environmental+estrogen-like+compounds.">Genetic susceptibility and environmental estrogen-like compounds.</a> Mutation Research/Fundamental and Molecular Mechanisms of Mutagenesis. 482 (1), 77-82 (2001).</li></ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

Üreme aşamasından üreme dışı faza (menopoz) geçiş sırasında, birçok kadın önemli fizyolojik ve patolojik değişiklikler yaşar. Menopoz geçişi sırasında FSH seviyeleri yükselir1. Ortaya çıkan çalışmalar, çeşitli ekstragonadal doku ve organlarda FSH'nin dislipidemi4, Alzheimer hastalığı5, osteoporoz 9,10, ateroskleroz11, obezite9 ve kanser12 dahil olmak üzere birçok hastalığın patogenezinde kritik olduğunu ortaya koymuştur. Bu nedenle, FSH'nin in vivo bağımsız etkilerini incelemeye yardımcı olabilecek bir hayvan modeli oluşturmak özellikle önemlidir. OVF fare modeli, nispeten stabil östrojen ve yükselen FSH seviyeleri ile menopoz geçişinin erken aşamasını taklit eder ve özellikle FSH'nin ekstragonadal etkilerini keşfetmeye yönelik çalışmalar için uygundur.
Bu yöntemde ovarektomi, uyluk tabanından yukarıya doğru yaklaşık 1 cm olacak şekilde tek bir sırt sırtı kesisi kullanılarak yapıldı (Şekil 1B). Deri, keskin diseksiyon makası kullanılarak dorsal kaslarla neredeyse birlikte kesildi ve böylece periton boşluğuna erişildi. Ameliyat sonrası kas insizyonu dikiş gerektirmedi ve cilt yarası bilateral olarak tek katgüt sütür ile kapatıldı (Şekil 2). Operasyon, kullanılan diğer yöntemlere kıyasla teknik olarak daha kolay, daha az zaman alıcı ve dişi fareler için daha az zararlıdır.
Ameliyat işlemi sırasında dikkat edilmesi gereken bazı detaylar. İlk olarak, ameliyat sonrası enfeksiyon riskini azaltmak için tüm cerrahi prosedürler temiz ve mümkün olduğunca steril tutulmalıdır. İkincisi, yumurtalık dokusu çok kırılgan olduğundan, intraperitoneal implantasyonu önlemek için cerrahi aletler yumurtalıklara doğrudan temas edemez. Üçüncüsü, ameliyattan sonra, postoperatif hipoterminin ölüme yol açmasını önlemek için fareler iyileşme sırasında 37 °C sabit sıcaklıktaki bir battaniyeye taşındı.
Daha önceki bir çalışma, endojen östrojenin premenopozal kadınların yumurtalık teka hücrelerinde veya postmenopozal kadınların memenin adipoz stromal hücrelerinde ve periferik dokuda küçük miktarlarda sentezlendiğini kanıtlamıştır14. Serum östrojeni, yumurtalıklı fareler için keskin bir şekilde düştü, ancak elimine edilemez (Şekil 3B). Bununla birlikte, ekstragonadal dokuda sentezlenen endojen östrojen, OVF modelinde östrojen seviyelerinin stabilitesini etkilemez (Şekil 4B).
OVF modelinde bazı sınırlamalar vardır. Cerrahi operasyon dikkatli olmadığında ve yumurtalık intraperitoneal implantasyonuna yol açtığında, model başarısızlığına yol açabilir. Bu durumda, serum östrojeni keskin bir şekilde düşmez ve östrus döngüsünün farklı aşamalarında dalgalanır. Östrojen ve FSH'nin eksojen uygulamasından sonra vücudun dengeye ulaşması yaklaşık 1 hafta sürer. Bu nedenle, 1 hafta içinde meydana gelen OVF modelinin patolojik değişiklikleri FSH'nin etkilerini gösteremez.
Sonuç olarak, OVF modeli istikrarlı, düşük maliyetli ve kullanımı kolay olma avantajlarına sahiptir. Yüksek seviyeli FSH'nin sistemik etkileri, FSH'nin intraperitoneal enjeksiyonundan sonra gözlenebilir; yani, OVF modeli, FSH'nin ekstragonadal etkilerini araştıran çalışmalar için uygundur. Bununla birlikte, model cerrahi ve intraperitoneal enjeksiyon prosedürleri için gereksinimler oldukça yüksektir. Finansman yeterliyse, belirli nakavt modelleri en iyi seçimdir.

Menopoz geçişi sırasında folikül uyarıcı hormon (FSH) düzeyleri yükselir (menopozal geçiş terimi 2011 yılında üreme yaşlanması evrelerinde tanımlanmıştır atölye (STRAW) + 10 sistemi)1. Yükselen FSH seviyeleri ve nispeten stabil östrojen1 ile karakterize edilen bir dönem olan menopoz geçişi sırasında, kadınlar adet döngüsü değişiklikleri ve çeşitli hücre ve dokuları içeren önemli fizyolojik değişiklikler yaşarlar. Bu değişiklikler kadınların yaşam kalitesini ve sağlığını ciddi şekilde etkileyebilir. FSH'nin etkilerini araştırmak, kadınların yaşam kalitesini ve sağlığını iyileştirebilir.
FSH, ön hipofizdeki gonadotrop hücrelerinden salgılanır ve gonadal fonksiyon ve üremenin kontrolünde kritik öneme sahiptir2. FSH'nin işlevine, G proteinine bağlı reseptöre (GPCR) ait olan FSH reseptörü (FSHR) aracılık eder.3. FSHR genellikle gonadlarda, yani yumurtalık ve testiste ifade edilir. FSHR'nin karaciğer4, hipokampus5, osteoklastlar6, adipositler7 ve endotel hücreleri8 dahil olmak üzere çoklu ekstragonadal hücre ve dokularda evrensel olarak eksprese edildiği kanıtlanmıştır. Ortaya çıkan çalışmalar, FSH'nin ekstra gonadal etkilerini ve dislipidemi4, Alzheimer hastalığı5, osteoporoz 9,10, ateroskleroz11, obezite9 ve kanser12'deki potansiyel klinik önemini ortaya koymuştur. Bu nedenle, FSH'nin bağımsız etkilerini in vivo olarak incelemeye yardımcı olabilecek bir hayvan modeli oluşturmak, tek başına FSH'nin etkilerini araştırmak için özellikle önemlidir.
Protokolde, nispeten stabil östrojen ve yükselen FSH seviyeleri13 ile bir fare modeli oluşturma prosedürünü tanıttık. Fare modeli, yumurtalık cerrahisi ile menopoz geçişini taklit eder ve daha sonra estradiol valerat ve rekombinant FSH ile desteklenir. Yumurtalıklı fareler, sahte olarak çalıştırılan farelerle benzer östrojen seviyelerini korumak için eksojen östrojen ile desteklendiğinden, hipofiz bezindeki östrojen geri bildirimi nedeniyle endojen FSH seviyeleri stabildi. Bu durumda, östrojen seviyelerini değiştirmeden eksojen FSH uygulayarak FSH seviyelerini kontrol edebilir. Böylece, OVF fare modeli östrojenin etkisini dışlayabilir ve FSH'nin ekstragonadal fizyolojik ve patolojik etkilerini gözlemleyebilir. Ayrıntılı ve görselleştirilmiş prosedürün, araştırmacıların laboratuvarlarında OVF fare modelini oluşturmaları ve gerektiğinde menopoz geçişi sırasındaki fizyolojik ve patolojik değişiklikleri araştırmak için uygulamaları için yararlı olduğuna inanıyoruz.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>beta-estradiol 17-valerate</td>
			<td>Macklin</td>
			<td>E829824</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Estradiol sensitive ELISA</td>
			<td>Demeditec</td>
			<td>DE4399</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin Staining Solution</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C0107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam</td>
			<td>Aladdin</td>
			<td>M129228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>recombinant human Follicle-stimulating hormone</td>
			<td>Merck Serono</td>
			<td>N19Z8803G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tribromoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T48402</td>
			<td>Aliphatic name: 2,2,2-Tribromoethanol</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

exploring independent effects of follicle-stimulating hormone in vivo in a mouse model

Üreme aşamasından üreme dışı aşamaya (menopoz) geçiş sırasında, birçok kadın azalmış kemik kütlesi, artmış kan lipitleri ve artmış viseral yağlanma dahil olmak üzere önemli fizyolojik ve patolojik değişiklikler yaşar. Menopoz geçişi sırasında folikül uyarıcı hormon (FSH) seviyeleri yükselir. Birçok çalışma, çeşitli ekstragonadal doku ve organlarda FSH'nin çoklu hastalıkların patogenezi ile ilişkili olduğunu göstermiştir. Bu nedenle, FSH'nin in vivo bağımsız etkilerini incelemeye yardımcı olabilecek bir hayvan modeli oluşturmak özellikle önemlidir. Bu çalışmada, hipotalamik-hipofiz-gonadal eksenin etkisini ortadan kaldırmak için C57BL/6 dişi fareler yumurtalıktan çıkarıldı ve estradiol valerat (OVX + E2) ile desteklendi. OVX + E2 fareleri, nispeten stabil östrojen ve yükselen FSH seviyeleri ile karakterize edilen bir fare modeli (OVF) oluşturmak için intraperitoneal enjeksiyon yoluyla çözücü (NS) veya farklı dozlarda rekombinant FSH aldı. Bu nedenle, yüksek serum FSH seviyeleri ile karakterize edilen menopoz geçişinin erken aşamasını taklit etmek için deneysel bir fare modelini başarıyla oluşturduk. OVF modeli, FSH'nin ekstragonadal etkilerini keşfetmeye yönelik çalışmalar için uygun olan kararlı, düşük maliyetli ve kullanımı kolay olma avantajlarına sahiptir. Burada, fare OVF modeli için ayrıntılı protokolleri açıklıyoruz.

Levels of follicle-stimulating hormone (FSH) rise during the menopausal transition (the term menopausal transition was defined in 2011 at stages of reproductive aging workshop (STRAW) + 10 system)1. It is during the menopausal transition, a period characterized by rising FSH levels and relatively stable estrogen1, thatwomen experience menstrual cycle changes and significant physiological changes involving various cells and tissues. These changes can seriously affect the quality of life and health of women. Exploring the effects of FSH may improve women's quality of life and health.
FSH is secreted from gonadotrope cells in the anterior pituitary and is critical in controlling gonadal function and reproduction2. The function of FSH is mediated through the FSH receptor (FSHR), which belongs to the G protein-coupled receptor (GPCR)3. FSHR is generally expressed in gonads, namely, the ovary and testis. It has been proved that FSHR is universally expressed in multiple extragonadal cells and tissues, including liver4, hippocampus5, osteoclasts6, adipocytes7, and endothelial cells8. Emerging studies have revealed extra gonadal actions of FSH and its potential clinical relevance in dyslipidemia4, Alzheimer's disease5, osteoporosis9,10, atherosclerosis11, obesity9, and cancer12. Thus, building an animal model that can help study the independent effects of FSH in vivo is particularly important in exploring the actions of FSH alone.
In the protocol, we introduced the procedure for establishing a mouse model with relatively stable estrogen and rising FSH levels13. The mouse model mimics the menopause transition by ovariectomized surgery and then supplemented with estradiol valerate and recombinant FSH. As the ovariectomized mice were supplemented with exogenous estrogen to maintain similar estrogen levels with the sham-operated mice, the levels of endogenous FSH were stable due to estrogen feedback at the pituitary gland. In this condition, it could control the FSH levels by administering exogenous FSH without altering the estrogen levels. Thus, the OVF mouse model can exclude the influence of estrogen and observe the extragonadal physiological and pathological effects of FSH. We believe the detailed and visualized procedure is useful for researchers to establish the OVF mouse model in their laboratory and apply it to investigate physiological and pathological changes during the menopause transition as needed.

Yazar Gündemi: Perimenopozal Kadınlarda FSH ve Patofizyolojik Değişiklikler Arasındaki İlişkinin Araştırılması - Bir Fare Modelinden Görüşler 

Folikül Uyarıcı Hormonun Bağımsız Etkilerinin Bir Fare Modelinde İn Vivo Olarak Araştırılması

Our research is focused on physiological and pathological changes in perimenopausal women. In this study, we are trying to determine which pathophysiological alternations are related to FHC. Menopause is associated with dyslipidemia and an increased risk of cardio-cerebrovascular disease.Using this mouse model, we found that follicle-stimulating hormone, independent of aspirin, increases serum cholesterol levels. Moreover, blocking FSH signaling could effectively prevent hypocholesterolemia. This mouse model mimics the early stage of the menopause transition, characterized by elevated serum FSH levels and relatively stable estrogen levels.The model has the advantages of being stable, low cost, and easy to operate, which is suitable for studies to explore the extra gonadal actions of FSH.

OVF fare modeli, nispeten stabil östrojen ve yükselen FSH seviyeleri13 ile menopoz geçişinin erken aşamasını taklit eder. İlk olarak, yumurtalık çıkarma ameliyatı için 9 haftalık dişi C57BL / 6 farelerine genel anestezi uygulandı ve sahte bir operasyona (Sham) veya bilateral overektomiye (OVX) tabi tutuldu. Papanicolaou boyalı hücrelerin smear görüntüleri, östrus döngüsünün proöstrus, östrus, metestus ve diestrus aşamalarını açıkça tanımladığından, OVX fareleri östrus döngüsünü kaybetti (Şekil 3A) ve ELISA yöntemi serum estradiol (E2) seviyelerinde önemli bir azalma gösterdi (Şekil 3B). İkincisi, OVX fareleri, serum östrojenini Sham grubuyla aynı seviyede tutmak için beta-estradiol 17-valerat (OVX + E2) ile desteklendi. Üçüncüsü, OVX + E2 fareleri, nispeten stabil östrojen ve yükselen FSH seviyeleri ile karakterize edilen bir fare modeli (OVF) oluşturmak için intraperitoneal enjeksiyon yoluyla çözücü (NS) veya farklı dozlarda rekombinant FSH aldı (Şekil 4).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65665/65665fig01.jpg"> Şekil 1. Cerrahi ortam ve fare duruşu. (A) Operasyon için en az 60 cm x 60 cm'lik bir tezgah alanı. Alanın yüzeyini %75 alkol ile temizleyin ve tek kullanımlık tıbbi havlu ile örtün ve ardından 30 dakika önceden ultraviyole radyasyonla dezenfekte edin. (B) Fareyi lastik bir şerit veya pamuk ip kullanarak ameliyat platformuna sabitleyin. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65665/65665fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65665/65665fig02.jpg"> Şekil 2. Cerrahi operasyonun temel adımları. (A) Yumurtalık pozisyonu, (B) ovariektomi, (C) sütür peritonu ve (D) sütür cilt kesisi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65665/65665fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65665/65665fig03.jpg"> Şekil 3. Vajinal sitoloji. Vajinal sitoloji, yumurtalıklı farelerde (OVX) ve sahte olarak işletilenlerde östrus döngüsünün ve endojen östrojenin aşamalarını temsil eder (Sham; Sham grubu için n = 12; OVX grupları başına n = 10). (A) Vajinal sitoloji, lökositlerin, kornifiye epitel hücrelerinin ve çekirdekli epitel hücrelerinin göreceli varlığına göre östrus döngüsünün aşamalarını temsil eder. Kızgınlığın aşamaları arasında proöstrus, çekirdekli epitel hücrelerinin baskınlığı; östrus, enükleasyonlu kornifiye hücrelerin baskınlığı; metestrus, lökositlerin varlığı ve kornifiye ve çekirdekli epitel hücreleri; diestrus, lökositlerin baskınlığı. Ölçek çubuğu = 100 μm. (B) Yumurtalıklı farelerde (OVX) ve sahte olarak çalıştırılanlarda (Sham) endojen östrojen. Veriler SEM'± ortalaması olarak gösterilir. İstatistiksel analiz için Student t-testi kullanılmıştır. p< 0.001. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65665/65665fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65665/65665fig04.jpg"> Şekil 4. OVF modeli ve serum hormon seviyeleri. (A) Akış şeması OVF modeli. (B) Serum östrojen (E2) ve FSH konsantrasyonlarının ELISA analizi. Veriler ortalama ± SEM olarak gösterildi. İstatistiksel analiz için tek yönlü varyans analizi kullanıldı. * p< 0.05 ve ** p< 0.01. Bu rakam4'ten değiştirildi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65665/65665fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Investigating the Relationship Between FSH and Pathophysiological Changes in Perimenopausal Women - Insights from a Mouse Model at JoVE.com

Çeşitli ekstragonadal doku ve organlarda folikül stimüle edici hormon (FSH) birçok hastalığın patogenezi ile ilişkilidir. Yumurtalıklı ve FSH ile tedavi edilmiş fare modeli (OVF), FSH'nin ekstragonadal etkilerini araştırmak için kullanılabilir.

During the transition from a reproductive to a nonreproductive phase (menopause), many women experience significant physiological and pathological ...

Araştırmamız perimenopozal kadınlarda fizyolojik ve patolojik değişikliklere odaklanmıştır. Bu çalışmada hangi patofizyolojik değişikliklerin FHC ile ilişkili olduğu belirlenmeye çalışılmıştır. Menopoz, dislipidemi ve artmış kardiyo-serebrovasküler hastalık riski ile ilişkilidir.Bu fare modelini kullanarak, aspirinden bağımsız folikül uyarıcı hormonun serum kolesterol seviyelerini arttırdığını bulduk. Ayrıca, FSH sinyalinin bloke edilmesi hipokolesterolemiyi etkili bir şekilde önleyebilir. Bu fare modeli, yüksek serum FSH seviyeleri ve nispeten stabil östrojen seviyeleri ile karakterize edilen menopoz geçişinin erken aşamasını taklit eder.Model, FSH'nin ekstra gonadal etkilerini keşfetmeye yönelik çalışmalar için uygun olan kararlı, düşük maliyetli ve kullanımı kolay olma avantajlarına sahiptir.

exploring-independent-effects-follicle-stimulating-hormone-vivo-mouse

Research

JoVE Journal

Biology

Exploring Independent Effects of Follicle-Stimulating Hormone In Vivo in a Mouse Model

1.1K Görüntüleme.  The Affiliated Hospital of Qingdao University. Araştırmamız perimenopozal kadınlarda fizyolojik ve patolojik değişikliklere odaklanmıştır. Bu çalışmada hangi patofizyolojik değişikliklerin FHC ile ilişkili olduğu belirlenmeye çalışılmıştır. Menopoz, dislipidemi ve artmış kardiyo-serebrovasküler hastalık riski ile ilişkilidir.Bu fare modelini kullanarak, aspirinden bağımsız folikül uyarıcı hormonun serum kolesterol seviyelerini arttırdığını bulduk. Ayrıca, FSH sinyalinin bloke edilmesi hipokol...

Video: Yazar Gündemi: Perimenopozal Kadınlarda FSH ve Patofizyolojik Değişiklikler Arasındaki İlişkinin Araştırılması - Bir Fare Modelinden Görüşler 

During the transition from a reproductive to a nonreproductive phase (menopause), many women experience significant physiological and pathological changes, including decreased bone mass, increased blood lipids, and increased visceral adiposity. Levels of follicle-stimulating hormone (FSH) rise during the menopausal transition. Many studies have shown that FSH in various extragonadal tissues and organs is associated with the pathogenesis of multiple diseases. Thus, building an animal model that can help study the independent effects of FSH in vivo is particularly important. In this study, C57BL/6 female mice were ovariectomized and supplemented with estradiol valerate (OVX + E2) to eliminate the effect of the hypothalamic-pituitary-gonadal axis. The OVX + E2 mice received solvent (N.S.) or different doses of recombinant FSH via intraperitoneal injection to create a mouse model (OVF) characterized by relatively stable estrogen and rising FSH levels. Thus, we successfully generated an experimental mouse model to mimic the early stage of menopause transition, characterized by elevated serum FSH levels. The OVF model has the advantages of being stable, low cost, and easy to operate, which is suitable for studies to explore the extragonadal actions of FSH. Here, we describe detailed protocols for the mouse OVF model.

Follicle-stimulating hormone (FSH) in various extragonadal tissues and organs is associated with the pathogenesis of multiple diseases. The ovariectomized and FSH-treated mouse model (OVF) can be used to explore the extragonadal actions of FSH.

Biyoloji

Creating an Ovariectomized and Follicle Stimulating Hormone (FSH)-Treated Mouse Model for Exploring the Extragonadal Actions of FSH

To begin, prepare the surgery platform setup in a room with a bench area of 60 centimeters by 60 centimeters for the operation. Clean the surface with 70%alcohol and cover it with a disposable medical towel. Then, disinfect the area with ultraviolet radiation for 30 minutes.Acclimate eight-week-old female C57 black/6 mouse to the housing facility for one week before surgery. Using a clean cotton swab, apply hair removal lotion to the back of the anesthetized mouse. After three to five minutes, remove the hairs using gauze and cotton swabs.Next, clean the skin with 70%ethanol. Fix the mouse on the surgery platform with its back facing up using a rubber strip or cotton rope, and apply iodophor solution to clean the back. For ovariectomy, using a disposable scalpel, make a one-centimeter dorsal incision longitudinally from the thigh base upwards, ensuring that only the skin and subcutaneous fascia are incised and avoiding cutting into the posterior peritoneum.Next, pull the incision to the left to visualize a white fat pad. Using microforceps and scissors, cut 0.5 centimeters along the white fat pad to expose the intraperitoneal cavity. After cutting the posterior peritoneum, using microforceps, slowly and gently remove the white fat pad from the intraperitoneal cavity.Immediately following removal, moisten the white fat tissue with 0.9%sterile saline-soaked gauze. In the lower part of the white fat pad, identify the pink granular substances as ovaries and ensure they are connected to the uterus. Using 5O absorbable sutures, ligate the ovarian end of the uterus.Then, remove the left ovary, avoiding direct contact between surgical instruments and the ovaries, preventing intraperitoneal implantation of ovarian tissue. After surgery, carefully place the white fat pad back into the intraperitoneal cavity. Then, using a 5-0 absorbable suture, perform an intermittent suture on the posterior peritoneum.Clean any areas of bleeding with gauze soaked in 0.9%sterile saline. Next, pull the skin incision to the right and remove the right ovary using the same method. Perform an intermittent suturing with 4-0 non-absorbable sutures and clean any bleeding with 0.9%sterile saline-soaked gauze.After completing both sutures, clean the wound with an iodophor solution. After 24 hours, inject meloxicam subcutaneously to relieve pain. Monitor the mouse daily to confirm proper surgical wound healing without any signs of complications.After three days, feed the mouse with freshly prepared estradiol valerate. For FSH injection, prepare FSH solution by dissolving recombinant human FSH powder in 0.9%sterile saline to 100 international units per milliliter. According to the biological activity of recombinant FSH, administer solvent or different doses of recombinant FSH via intraperitoneal injection for two weeks.The smear images of Papanicolaou-stained cells clearly identified the proestrus, estrus, metestrus, and diestrus stages of the estrus cycle. In contrast, the bilateral ovariectomy mice lost the estrus cycle. The ELIZA method showed a significant decrease in serum estradiol levels in bilateral ovariectomy mice compared to the sham group mice.The endogenous estrogen synthesized in the extra gonadal tissue does not affect the stability of estrogen levels in the FSH-treated mouse model.