Bu araştırma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82201084), Çin Doktora Sonrası Bilim Vakfı (2022M722232), Pekin Doktora Sonrası Araştırma Vakfı (2023-ZZ-020), Pekin Tiantan Hastanesi Miaopu Projesi, Başkent Tıp Üniversitesi (2023MP10) ve Hong Kong Araştırma Hibeleri Konseyi (27111820 ve 17116521) tarafından desteklenmiştir.

Aşağıda açıklanan tüm prosedürler, Başkent Tıp Üniversitesi, Pekin Tiantan Hastanesi Etik Komitesi (NO. KY2023-177-01) tarafından onaylanmıştır ve bu çalışmaya dahil olan tüm hastalar bilgilendirilmiş onam vermiştir.
1. Hasta dahil etme ve dışlama kriterleri
<ol><li>Dahil edilme kriterleri: 2016 Amerikan Romatoloji Koleji (ACR) / Romatizmaya Karşı Avrupa Birliği (EULAR) kriterlerini12 karşılıyorlarsa hastaları pSS hastaları olarak sınıflandırın. Spesifik olarak, nihai sınıflandırma kriterlerini beş öğenin ağırlıklı toplamına dayandırın: anti-SSA/Ro antikor pozitifliği ve fokal lenfositik sialadenit, her biri 3 puan alan ≥ 1 odak/4mm2 odak skoru; 5'≥ anormal Oküler Boyama Skoru (veya ≥ 4'lük van Bijsterveld skoru), ≤ 5 mm / 5 dk'lık bir Schirmer test sonucu ve ≤ 0.1 mL / dk'lık uyarılmamış tükürük akış hızı, her biri 1 puan. SS'yi düşündüren belirti ve/veya semptomları olan ve yukarıdaki maddeler için toplam puanı ≥ 4 olan bireyler pSS kriterlerini karşılamaktadır.</li>
	<li>Dışlama kriterleri: Örnek toplama ile işbirliği yapamayan hastaları ve oral Candida enfeksiyonu için tedavi gören hastaları hariç tutun. NOT: Aşağıda açıklanan yöntemlerin, sekonder SS'li bireylerde oral Candida enfeksiyonlarının kapsamlı karakterizasyonu için de uygun olduğuna dikkat etmek önemlidir.</li>
	<li>Candida numunelerinin toplanması, taşınması ve kültürlenmesi sırasında olası kontaminasyonları önlemek için titiz önlemler alın. Bu, titiz deney hazırlığını, tek kullanımlık ve steril malzemelerin kullanımını, uygun etiketlemeyi, numune alma tüplerinin güvenli bir şekilde kapatılmasını ve profesyonel bir biyogüvenlik kabininde deneysel prosedürlerin yürütülmesini içerir.</li>
</ol>2. Örnek toplama
<ol><li>Tükürük toplama: Hastalara tüpü bir huni ile tutmalarını ve tükürüğün alt dudak boyunca yavaş yavaş tüpe akmasına izin vermelerini söyleyin. Toplama işleminin sonunda, hastadan ağızda kalan tüm tükürüğü tüpe tükürmesini isteyin. Tükürüğü 15 dakika boyunca toplayın.</li>
	<li>Gargara ve sürüntü toplama: Hastanın uyarılmamış tükürük akışı yoksa veya çok düşükse (0.03 mL / dk'dan az), oral Candida enfeksiyonu şüphesi olan oral mukozal bölgeyi en az 10 kez sürüntü, ardından hastadan 5 mL fosfat tamponlu salin kullanmasını isteyin (PBS; bkz. Malzeme Tablosu) ağzı 1 dakika boyunca çalkalamak için. Gargarayı 50 mL'lik steril bir tüpte saklayın ve swabı gargara tüpüne koyun. NOT: 0.03 mL / dakikadan fazla uyarılmamış tükürük akışı olan pSS hastaları için, adım 2.2 oral Candida enfeksiyonu tespiti için numune toplamak için hala kullanılabilir.</li>
</ol>3. Numune işleme
<ol><li>Toplanan tükürüğe 1 mL PBS ekleyin. PBS ile gargara içine PBS eklemeyin. Gargara tüpünü 1 dakika boyunca bir girdap kullanarak titreştirin.</li>
</ol>4. Candida kültürü
<ol><li>Sabourand'ın Agar (SDA) ortamını yapmak için, 70 g SDA'yı ( Malzeme Tablosuna bakınız) 1000 mL çift damıtılmış suda çözün.</li>
	<li>121 ° C'de 15 dakika boyunca bir otoklav ile steril hale getirin, bu SDA ortamından 10 mL'yi 10 cm'lik bir mikrobiyolojik kültür kabına koyun (Malzeme Tablosuna bakınız) ve soğutun.</li>
	<li>Adım 3'te hazırlanan 200 μL numuneyi alın ve adım 4.2'de 10 mL SDA besiyeri ile hazırlanan 10 cm'lik mikrobiyolojik kültür kaplarına sürün.</li>
	<li>37 ° C'de 48 saat kuluçkaya yatın ve Candida kolonisi olgunlaşacaktır. SDA kabını Candida kolonileriyle birlikte geçici olarak 4 °C'de saklayın. SDA kabında kültürlenen Candida kolonileri 2-4 hafta saklanabilir.</li>
</ol>5. Candida suş tanımlaması
<ol><li>Ortamı yapmak için 47.7 g Candida diagnostic agar ( Malzeme Tablosuna bakınız) tozunu çıkarın, 1000 mL çift damıtılmış suya koyun ve 100 ° C'ye ısıtın.</li>
	<li>Ortam hafifçe kaynadığında, 10 cm'lik bir mikrobiyolojik kültür kabına 10 mL koyun ve soğumaya bırakın.</li>
	<li>Candida kolonilerini 500 μL SDA ortamında çözün (adım 4), pipetleme ile askıya alın ve ayrışın.</li>
	<li>Candida kolonileri (adım 5.3) ile numunenin 50 μL'sini adım 5.2'de hazırlanan ortam üzerine yerleştirin. Candida kolonileri olgunlaşana kadar 37 ° C'de 48 saat kuluçkaya yatırın.</li>
	<li>Candida kolonilerinin rengine ve desenlerine göre, pSS hastalarından edinilen Candida'nın suşlarını belirleyin. Aşağıdaki Candida suşu tanımlama kriterlerini kullanın: zümrüt yeşili koloni Candida albicans, mavi-gri koloni Candida tropicalis, bulanık kenarlı pembe koloniler ve mikrovilluslar Candida krusei, morumsu kırmızı küçük koloni Candida glabrata, süt beyazı koloni Candida parapsilosis dahil olmak üzere çeşitli suşlar içerir.</li>
</ol>6. Candida biyofilm oluşum deneyi
<ol><li>Maya Azot Bazını (YNB) -50 glikoz (G) ortamı yapmak için, 1.34 g YNB (Malzeme Tablosuna bakınız) ve 1.98 g D (+)- Glikoz (Malzeme Tablosuna bakınız) ağırlığındadır. Bunları 200 mL çift damıtılmış suda çözün.</li>
	<li>YNB-100G ortamını yapmak için 1.34 g YNB ve 3.96 g D (+)- Glikozu çıkarın ve 200 mL çift damıtılmış suda çözün.</li>
	<li>Çözeltileri 0,22 μm'lik bir şırınga filtresi ile filtreleyin (Malzeme Tablosuna bakınız). Filtrelenmiş YNB-50G ve YNB-100G ortamı 4 ° C'de 3 ay boyunca saklanabilir.</li>
	<li>Adım 5'teki bulaşıkların üzerindeki aynı suştan 3 (veya daha fazla) koloniyi seçin ve bunları 96 oyuklu bir plakada 200 μL YNB-50G ortamına (adım 6.1 ve 6.3) aktarın (bkz. Tabakta gözlenen suşlar için bunu yapın. 200 rpm'de çalkalama ile 37 ° C'de gece boyunca kültür.</li>
	<li>Candida süspansiyonunu aspire edin, 1 mL PBS ekleyin, maya hücrelerini oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 1500 x g'da santrifüjleyin ve süpernatanı atın. Bu adımı aynı tüpte 2 kez tekrarlayın.</li>
	<li>Hücreleri 1 mL YNB-100G ortamında yeniden süspanse edin ve hücrelerin farklı seyreltmelerini (1:10, 1:100 ve 1:1000) hazırlayın. 200 μL gradyan hücre süspansiyonu alın ve spiral plaka yöntemi13 ile 10 cm SDA ortamına plakalayın. Kaplama, bir Arşimet spirali şeklinde giderek azalan bir miktarda dönen bir agar plakası üzerine bilinen bir hacimde numune bırakan bir makine kullanılarak yapılır. 37 ° C'de 24-48 saat kültür.</li>
	<li>Standart bir yönteme dayalı olarak SDA plakasındaki CFU sayısına göre farklı seyreltmelerdeki hücrelerin konsantrasyonunu hesaplayın13. Her plakada iyi ayrılmış kolonileri kısaca sayın. En az 25 koloni gözlenene kadar kolonileri dış kenardan merkeze doğru bir oktant halinde sayın. Ayrıca, 25. sayımın gerçekleştiği yayın geri kalanını da sayın. Koloni sayısını, koloni sayımının elde edildiği alana karşılık gelen sıvı hacmine bölerek hücrelerin konsantrasyonunu hesaplayın13. Hücre konsantrasyonunu 1 x 107 hücre / mL'ye ayarlayın.</li>
	<li>YNB-100G'de 100 μL hücre süspansiyonunu 96 oyuklu bir plakaya koyun ve 200 rpm'de sallarken 37 ° C'de 2 saat inkübe edin.</li>
	<li>Süpernatanı dikkatli bir şekilde çıkarın, 2x'i PBS ile yıkayın ve yüzen maya hücrelerini uzaklaştırın. Candida biyofilmi, 96 oyuklu plakanın dibinde oluşur.</li>
</ol>7. Hif oluşumu deneyi
NOT: Sadece hif oluşturabilen Candida ( Candida albicans gibi) hif oluşumu için indüklenebilir. Hif oluşturamayan Candida'nın ( Candida glabrata gibi) daha fazla karakterizasyonu için 8. adıma gidin.
<ol><li>Adım 6.6'da maya hücresi süspansiyonunu yeniden süspanse edin ve hücre konsantrasyonunu YNB-100G ortamı ile 1 x 106 hücre / mL'ye ayarlayın.</li>
	<li>RPMI 1640 tam büyüme ortamını hazırlamak için, 450 mL RPMI 1640 ortamına (Malzeme Tablosuna bakınız) 50 mL Fetal Sığır Serumu (Malzeme Tablosuna bakınız) ekleyin ve daha fazla deney için 4 ° C'de saklayın.</li>
	<li>200 μL RPMI 1640 tam büyüme ortamında seyreltilmiş 2 μL Candida hücre süspansiyonunu 96 oyuklu bir plakaya aktarın ve hif ve maya hücrelerinin oluşmasına izin vermek için gece boyunca 37 ° C'de kültürleyin.</li>
</ol>8. KOH smear testi ve CFW boyama testi
<ol><li>Hassas kalıplanmış bir halka kullanarak (Malzeme Tablosuna bakın) adım 3 veya adım 6 veya adım 7'den 1 μL numune alın ve cam slaytların üzerine 1 cm x 1 cm'lik bir alan sürün. Oda sıcaklığında kurumasını bekleyin.</li>
	<li>% 10 KOH çözeltisi yapmak için, 10 g KOH tozunu tartın ( Malzeme Tablosuna bakınız) ve 100 mL çift damıtılmış suda çözün.</li>
	<li>Numune eriyene kadar slaytı bir alkol lambası ile hafifçe ısıtın. Adım 8.1'de hazırlanan slaytları %10 KOH (adım 8.2) ile boyayın ve bir kapak fişi ile örtün. Numuneyi şeffaf hale getirmek için kapak fişine hafifçe bastırın.</li>
	<li>Hif ve maya hücrelerini mikroskop altında görselleştirin.</li>
	<li>Adım 8.1'de hazırlanan slaytları bir damla CFW ile lekeleyin ( Malzeme Tablosuna bakınız), bir lamel ile örtün ve 1 dakika bekleyin.</li>
	<li>100x ve 200x büyütme oranlarında bir floresan mikroskobu kullanarak hifleri görselleştirin. CFW 355 nm'de uyarılır ve 300-440 nm'de tespit edilir. Görüntüleri pozlama süresi altında fotoğraflayın. Yanlış pozitif sonuçları önlemek için 3x tekrarlayın.</li>
</ol>9. Antifungal duyarlılık testi
NOT: Bu test, üreticinin Maya Benzeri Mantar Duyarlılık Kiti (Mikroseyreltme; bkz . Malzeme Tablosu) talimatlarına göre gerçekleştirilir.
<ol><li>% 0.85 NaCl ampul ile 4 günden daha eski Candida kolonilerini (adım 4) hazırlayın (Malzeme Tablosuna bakınız) ve 2 McFarland'a eşdeğer bulanıklığa sahip süspansiyonu elde edin. Bulanıklığı McFarland Standartları Kitine göre belirleyin (bkz. Malzeme Tablosu). Hazırlanan Candida süspansiyonunu anında kullanın.</li>
	<li>Test şeridindeki her bir cupüle 3 x 104 maya hücresi / mL içeren kitte 135 μL ATB F2 besiyerini pipetleyin ve kapağını kapatın. Test şeridini kapalı bir kaba koyun. 35 ° C'de 24 saat kültür.</li>
	<li>Görsel yorumlama ile Candida'nın büyümesini gözlemleyin (kullanım kılavuzuna bakın). Referans değeri (referans aralığı) için kullanım kılavuzuna bakın. Kontrol deliğinin yeterince büyüyüp büyümediğini kontrol edin. Kontrol deliğinin büyümesi yetersizse veya büyümezse, sonuçlar okunamaz ve 24 saatlik bir ekime ihtiyaç duyar.</li>
</ol>

pSS ile İlişkili Oral Kandida'nın Tanısı ve Zorlanmasının Tanımlanması

<ol>
	<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota+dysbiosis+in+primary+Sj&#246;gren's+syndrome+and+the+ameliorative+effect+of+hydroxychloroquine.">Microbiota dysbiosis in primary Sj&#246;gren's syndrome and the ameliorative effect of hydroxychloroquine.</a> Cell Rep. 40 (11), 111352 (2022).</li><li>Humphrey, S. P., Williamson, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+saliva:+normal+composition,+flow,+and+function.">A review of saliva: normal composition, flow, and function.</a> J Prosthet Dent. 85 (2), 162-169 (2001).</li><li>Marsh, P. D., Do, T., Beighton, D., Devine, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+saliva+on+the+oral+microbiota.">Influence of saliva on the oral microbiota.</a> Periodontol 2000. 70 (1), 80-92 (2016).</li><li>Vila, T., Rizk, A. M., Sultan, A. S., Jabra-Rizk, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+power+of+saliva:+Antimicrobial+and+beyond.">The power of saliva: Antimicrobial and beyond.</a> PLoS Pathog. 15 (11), e1008058 (2019).</li><li>Serrano, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+factors+related+to+oral+candidiasis+in+patients+with+primary+Sj&#246;gren's+syndrome.">Risk factors related to oral candidiasis in patients with primary Sj&#246;gren's syndrome.</a> Med Oral Patol Oral Cir Bucal. 25 (5), e700-e705 (2020).</li><li>Nape&#241;as, J. J., Rouleau, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+complications+of+Sj&#246;gren's+syndrome.">Oral complications of Sj&#246;gren's syndrome.</a> Oral Maxillofac Surg Clin North Am. 26 (1), 55-62 (2014).</li><li>Mathews, S. A., Kurien, B. T., Scofield, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+manifestations+of+Sj&#246;gren's+syndrome.">Oral manifestations of Sj&#246;gren's syndrome.</a> J Dent Res. 87 (4), 308-318 (2008).</li><li>Leung, K. C. M., McMillan, A. S., Cheung, B. P. K., Leung, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sj&#246;gren's+syndrome+sufferers+have+increased+oral+yeast+levels+despite+regular+dental+care.">Sj&#246;gren's syndrome sufferers have increased oral yeast levels despite regular dental care.</a> Oral Dis. 14 (2), 163-173 (2008).</li><li>Lundstrom, I. M., Lindstrom, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subjective+and+clinical+oral+symptoms+in+patients+with+primary+Sj&#246;gren's+syndrome.">Subjective and clinical oral symptoms in patients with primary Sj&#246;gren's syndrome.</a> Clin Exp Rheumatol. 13 (6), 725-731 (1995).</li><li>Alam, M. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+identification:+a+journey+from+conventional+to+molecular+methods+in+medical+mycology.">Candida identification: a journey from conventional to molecular methods in medical mycology.</a> World J Microbiol Biotechnol. 30 (5), 1437-1451 (2014).</li><li>Bauters, T. G., Nelis, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+chromogenic+and+fluorogenic+membrane+filtration+methods+for+detection+of+four+Candida+species.">Comparison of chromogenic and fluorogenic membrane filtration methods for detection of four Candida species.</a> J Clin Microbiol. 40 (5), 1838-1839 (2002).</li><li>Soto-Rojas, A. E., Villa, A. R., Sifuentes-Osornio, J., Alarc&#243;n-Segovia, D., Kraus, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+candidiasis+and+Sj&#246;gren's+syndrome.">Oral candidiasis and Sj&#246;gren's syndrome.</a> J Rheumatol. 25 (5), 911-915 (1998).</li><li>Gilchrist, J. E., Campbell, J. E., Donnelly, C. B., Peeler, J. T., Delaney, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spiral+plate+method+for+bacterial+determination.">Spiral plate method for bacterial determination.</a> Appl Microbiol. 25 (2), 244-252 (1973).</li><li>Biomerieux. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATB+FUNGUS+3+Sensitivity+test+for+yeast-like+fungi.+REF+14204.">ATB FUNGUS 3 Sensitivity test for yeast-like fungi. REF 14204.</a> Biomerieux. , (2014).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+widely+used+ATB+FUNGUS+3+automated+readings+in+China+and+its+misleading+high+MICs+of+Candida+spp.+to+Azoles:+Challenges+for+developing+countries'+clinical+microbiology+labs.">The widely used ATB FUNGUS 3 automated readings in China and its misleading high MICs of Candida spp. to Azoles: Challenges for developing countries' clinical microbiology labs.</a> PLoS One. 9 (12), e114004 (2014).</li><li>Hu, L., Zhou, P., Zhao, W., Hua, H., Yan, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+staining+vs.+routine+KOH+smear+for+rapid+diagnosis+of+oral+candidiasis-A+diagnostic+test.">Fluorescence staining vs. routine KOH smear for rapid diagnosis of oral candidiasis-A diagnostic test.</a> Oral Dis. 26 (5), 941-947 (2020).</li><li>Samaranayake, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+krusei+infections+and+fluconazole+therapy.">Candida krusei infections and fluconazole therapy.</a> Hong Kong Med J. 3 (3), 312-314 (1997).</li><li>Lee, Y., Puumala, E., Robbins, N., Cowen, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifungal+drug+resistance:+Molecular+mechanisms+in+Candida+albicans+and+beyond.">Antifungal drug resistance: Molecular mechanisms in Candida albicans and beyond.</a> Chem Rev. 121 (6), 3390-3411 (2021).</li><li>Rihab, B., Lina, E. H., No&#233;mie, S. T., Jean, S., Marjolaine, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+experience+of+dry+mouth+and+screening+for+Sjogren's+syndrome+by+the+dentist:+patient-reported+experiences.">The experience of dry mouth and screening for Sjogren's syndrome by the dentist: patient-reported experiences.</a> BMC Oral Health. 23 (1), 1010 (2023).</li><li>Panpetch, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+Candida+administration+in+a+Clostridium+difficile+mouse+model+worsens+disease+severity+but+is+attenuated+by+Bifidobacterium.">Oral Candida administration in a Clostridium difficile mouse model worsens disease severity but is attenuated by Bifidobacterium.</a> PLoS One. 14 (1), e210798 (2019).</li><li>Alwaily, E. R., Abood, M. S., Al Uobody, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+of+oral+candidiasis+in+patients+under+12+years:+18S+rRNA+as+a+marker+of+molecular+characterization+of+Candida+tropicalis.">Diagnosis of oral candidiasis in patients under 12 years: 18S rRNA as a marker of molecular characterization of Candida tropicalis.</a> Arch Razi Inst. 78 (1), 475-483 (2023).</li><li>Chen, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+infection+as+an+early+sign+of+subsequent+Sj&#246;gren's+syndrome:+A+population-based+matched+cohort+study.">Candida infection as an early sign of subsequent Sj&#246;gren's syndrome: A population-based matched cohort study.</a> Front Med (Lausanne). 8, 796324 (2022).</li></ol>

Yazarların beyan edebilecekleri herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Bu makalede, oral Candida enfeksiyonlarını tespit etmek, Candida suşlarını tanımlamak ve pSS'li hastalarda yaygın olarak kullanılan ilaçların antifungal duyarlılığını test etmek için bir dizi sistematik, basit ve uygulanabilir yöntem sunuyoruz. 
Pratik ortamlarda, bu el yazmasında tanıtılan tüm yöntemler gerekli değildir. Oral Candida tespit yöntemi/yöntemleri, belirli bir amaca göre seçilebilir. KOH smear testleri ve CFW boyama testleri, k...

Kandidiyazis, fırsatçı patojenler olan Candida spp.'den kaynaklanır. Yaygın suşlar arasında Candida albicans, Candida krusei, Candida glabrata, Candida parapsilosis ve Candida dubliniensis1 bulunur. Candida spp.'nin neden olduğu fırsatçı enfeksiyonlar yüzeyel Candida enfeksiyonları ve invaziv kandidiyazis içerir. İnvaziv kandidiyazis esas olarak bağışıklığı baskılanmış kişilerde görülür; örneğin, edinilmiş immün yetmezlik sendromu (AIDS) olan hastalarda, invaziv kandidiyazis yaşam kalitesini ve hatta yaşam süresini önemli ölçüde tehdit edebilir2. Mukokutanöz kandidiyazis gibi yüzeysel Kandida enfeksiyonu hastalarda daha sık görülür3. 
Yüzeysel bir Candida enfeksiyonu olan oral kandidiyazis, insanlarda en sık görülen mantar enfeksiyonudur. Candida albicans ağzın normal bir kommensalidir; Candida spp.'nin taşıma oranının genel popülasyonda herhangi bir semptom olmaksızın %20 ile %75 arasında değiştiği bildirilmiştir4. Candida'nın aşırı büyümesi, hastalarda duyu tadının değişmesi, ağızda yanma hissi, yetersiz beslenmeye bağlı yutma güçlüğü, gecikmiş iyileşme ve uzun süreli hastanede kalış süresi gibi lokal rahatsızlığa yol açabilir. Uzun süreli oral kandidiyazis ciddi invaziv kandidiyazise yol açarak önemli morbidite ve mortalite ile sonuçlanabilir5. Oral kandidiyazis de ağız kanseri riskini artırabilir5. Bozulmuş tükürük bezi fonksiyonu oral kandidiyazis için risk faktörleri arasındadır6. Enfeksiyonun başlaması, Candida'nın epitel hücre duvarlarına yapışmasıdır. Bunu Candida'nın çoğalması ve filamentasyonu ve biyofilm7'nin oluşumu ve olgunlaşması takip eder. Biyofilmlerin eradike edilmesi son derece zordur ve geleneksel antifungal tedaviye dirençlidir, bu da klinik tedaviyi biyofilm ile ilişkili oral Candida enfeksiyonu için bir zorluk haline getirir7.
Primer Sjögren sendromu (pSS), ağız kuruluğu, kuru göz ve diğer sistematik semptomlarla karakterize otoimmün bir hastalıktır8. Ağız kuruluğu, pSS'nin en sık görülen belirtisidir. Tükürük önemli fizyolojik antifungal fonksiyonlara sahiptir. Bir yandan, ağzı seyreltebilir ve ovalayabilir ve daha sonra organizmaları mukozadan uzaklaştırabilir. Öte yandan tükürük, laktoferrin, sialoperoksidaz, lizozim, histidin açısından zengin polipeptitler gibi antimikrobiyal proteinler ve oral mukoza ile etkileşime girebilen ve Candida6'nın aşırı büyümesini önleyebilen spesifik anti-kandidal antikorlar içerir. Azalan tükürük akışı, pSS hastalarını oral kandidiyazise yatkın hale getirebilir. 61 pSS hastasında yapılan gözlemsel kesitsel bir çalışma, pSS hastalarının %13.1'inin oral kandidiyazis belirtileri gösterdiğini ve Candida albicans'ın koloni oluşturan birimi (CFU)/mL'sinin uyarılmamış tam tükürük (UWS) ve uyarılmış tam tükürük (SWS) seviyeleri ile anlamlı ve negatif ilişkili olduğunu bulmuştur9.
Bu yazıda tanıtılan yöntemler, doğrudan yaymada veya kültürlemeden sonra karakterize edilen morfolojik özelliklere (örneğin, hif ve maya hücreleri) dayalı olarak oral Candida enfeksiyonunu tanımlayabilir10. Candida'nın bir Candida tanısal agar kullanılarak suş tanımlaması, türe özgü enzimler11 tarafından kromojenik substratların bölünmesinden kaynaklanan çeşitli morfolojiye sahip farklı renkli kolonilerin oluşumuna dayanır. Bu yazıda, geleneksel oral Candida kültürü ve potasyum hidroksit (KOH) smear testi ve kalkoflor beyazı (CFW) boyama testi10 ile hızlı inceleme dahil olmak üzere oral Candida enfeksiyonunu tespit etmek için sistematik yöntemler tanıtılmaktadır. Ek olarak, klinik oral Candida enfeksiyonu tedavisine rehberlik edebilecek antifungal duyarlılık testi tanıtılmıştır. Gerçek durumlarda, bu yazıda tanıtılan yöntemlerin tümünün uygulanması gerekli değildir; oral Candida tespit yöntem(ler)i amaca göre seçilebilir. Oral Candida enfeksiyonunun incelenmesi ve pSS hastalarında Candida suşlarının belirlenmesi sadece hastalık tedavisine fayda sağlamakla kalmaz, aynı zamanda oral kandidiyazisin karakterizasyonunun ve tür profillerinin değerlendirilmesine de yardımcı olur.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m Syringe Filter</td>
			<td>MERCK</td>
			<td>SLGV004SL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL Centrifuge Tube</td>
			<td>axygen</td>
			<td>MCT-150-C-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 cm Microbiological Culture Dishes</td>
			<td>Jet Bio-Filtration Co. Ltd</td>
			<td>TCD000100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL Centrifuge Tube</td>
			<td>Jet Bio-Filtration Co., Ltd</td>
			<td>CFT011150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Centrifuge Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well Microplates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3599</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>API 0.85% NaCl ampule</td>
			<td>BIOMERIEUX</td>
			<td>20070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcofluor White Stain</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>18909-100ML-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHROMagar Candida</td>
			<td>CHROMagar</td>
			<td>P002860</td>
			<td>Candida diagnostic agar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D(+)-Glucose Monohydrate</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd</td>
			<td>10010518</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>26170035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>McFarland Standards Kit</td>
			<td>BIOMERIEUX</td>
			<td>70900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc precision molded loops&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>254399</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>C10010500BT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Hydroxide</td>
			<td>Aladdin</td>
			<td>P112284-500g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerSoil DNA Isolation Kit&#160;</td>
			<td>MO BIO</td>
			<td>12888-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11875119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sabourand&#39;s Agar Medium</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>S9710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Nitrogen Base Without Amino acids</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>Y8040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast-like Fungal Susceptibility Kit (Microdilution)</td>
			<td>BIOMERIEUX</td>
			<td>14204</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

examination of oral candida infection in primary sj&#246;gren&#39;s syndrome patients

Primer Sjögren sendromu (pSS), ağız kuruluğu, kuru göz ve diğer sistematik semptomlar gibi semptomlarla karakterize otoimmün bir hastalıktır. pSS hastalarının yaşadığı hiposalivasyon nedeniyle, oral dysbacteriosis sıklıkla görülür. pSS'nin yaygın bir komplikasyonu oral Candida enfeksiyonudur. Bu makalede yazarlar, oral Candida enfeksiyonunu etkili bir şekilde teşhis edebilen ve pSS hastalarından tükürük, oral mukozal sürüntüler veya gargara kullanarak Candida suşlarını tanımlayabilen sistematik yöntemleri açıklamaktadır. Oral Candida enfeksiyonunun tanısı için Sabouraud Dekstroz Agar (SDA), hif oluşum testi, potasyum hidroksit (KOH) smear testi ve kalkoflor beyazı (CFW) boyama testi kullanılır. Candida suşlarının tanımlanması için bir Candida tanı agar kullanılır. Son olarak, uygun antifungal ilaç tedavisini belirlemek için antifungal duyarlılık testi kullanılır. Bu standardize edilmiş yöntem, pSS ile ilişkili oral Candida enfeksiyonlarının tanısını, tedavisini ve gelecekteki araştırmalarını geliştirebilir. Bu yöntemi kullanarak erken teşhis, uygun tedavinin alınmasında gecikme nedeniyle ortaya çıkan komplikasyonları da önleyebilir.

Candidiasis is caused by Candida spp., which are opportunistic pathogens. Common strains include Candida albicans, Candida krusei, Candida glabrata, Candida parapsilosis, and Candida dubliniensis1. Opportunistic infections caused by Candida spp. include superficial Candida infections and invasive candidiasis. Invasive candidiasis mainly happens in immunocompromised individuals; for example, in patients with acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), invasive candidiasis can significantly threaten the quality of life or even the life span2. Superficial Candida infection, such as mucocutaneous candidiasis, is more common in patients3. 
Oral candidiasis, a superficial Candida infection, is the most common human fungal infection. Candida albicans is a normal commensal of the mouth; the carriage rate of Candida spp. has been reported to range from 20% to 75% in the general population without any symptoms4. Overgrowth of Candida can lead to local discomfort in patients, such as the altered taste of sensation, burning sensation in the mouth, dysphagia due to poor nutrition, delayed recovery, and prolonged hospital stay. Long-term oral candidiasis can lead to severe invasive candidiasis, resulting in significant morbidity and mortality5. Oral candidiasis can also increase the risk of oral cancer5. Impaired salivary gland function is among the risk factors for oral candidiasis6. The initiation of infection is the adhesion of Candida to epithelial cell walls. This is followed by the proliferation and filamentation of Candida and the formation and maturation of biofilm7. Biofilms are extremely difficult to eradicate and are resistant to conventional antifungal treatment, making clinical treatment a challenge for biofilm-associated oral Candida infection7.
Primary Sj&#246;gren's syndrome (pSS) is an autoimmune disease that is characterized by dry mouth, dry eyes, and other systematic symptoms8. Dry mouth is the most frequent symptom of pSS. Saliva has important physiological antifungal functions. On the one hand, it can dilute and scour the mouth and thereafter remove organisms from the mucosa. On the other hand, saliva contains antimicrobial proteins, such as lactoferrin, sialoperoxidase, lysozyme, histidine-rich polypeptides, and specific anti-candidal antibodies, which can interact with the oral mucosa and prevent the overgrowth of Candida6. The reduced saliva flow may predispose pSS patients to oral candidiasis. An observational cross-sectional study conducted in 61 pSS patients found that 13.1% of pSS patients presented oral signs of candidiasis and colony forming unit (CFU)/mL of Candida albicans was found significantly and negatively correlated with levels of unstimulated whole saliva (UWS) and stimulated whole saliva (SWS)9.
The methods introduced in this manuscript can identify oral Candida infection based on characterized morphological attributes (e.g., the hyphae and yeast cells) in direct smear or after culturing10. The strain identification of the Candida using a Candida diagnostic agar is based on the formation of different colored colonies with varied morphology, which result from the cleavage of chromogenic substrates by species-specific enzymes11. In this manuscript, systematic methods for detecting oral Candida infection are introduced, including traditional oral Candida culture and rapid examination by potassium hydroxide (KOH) smear test and calcofluor white (CFW) staining assay10. Additionally, the antifungal susceptibility test, which can guide clinical oral Candida infection treatment, has been introduced. In actual situations, it is not necessary to perform all of the introduced methods in this manuscript; the oral Candida detection method(s) can be selected according to the purpose. The examination of oral Candida infection and the determination of Candida strains in pSS patients not only benefit the disease treatment but also help assess the characterization of oral candidiasis and the species profiles.

Yazar Spotlight: pSS Hastaları için Klinik Tedavi Rejimini İlerletmek için Oral Kandida Teşhisi

Primer Sjögren Sendromlu Hastalarda Oral Kandida Enfeksiyonunun İncelenmesi

In this research, we present a protocol for the examination of oral candida infection in patients with primary Sjogren syndrome, which can be used for timely treatment to avoid infection-related complications. We provide a series of systematic, simple, and feasible methods for detecting oral candida infections, identifying candida strains, and testing the antifungal susceptibility of commonly-used drugs in patients with primary Sjogren's syndrome. Maybe our focus on the role of oral candida infection in the onset and the progression of primary Sjogren's syndrome pathologists in our future studies.

Bu çalışmada, pSS'li 12 hasta temsili hasta olarak seçildi ve oral Candida enfeksiyonu açısından tarandı (Tablo 1). Bu hastalar arasında, bazı hastalarda açısal keilit (ağız köşelerinde çatlaklar, deskuamasyon ve hiperemi ile karakterize, Şekil 1A), dişeti mukozasında parlak kırmızı ödem, sarımsı beyaz lifli psödo-membran (Şekil 1B), lingual papilla atrofisi ve dilin parlak kırmızı dorsal mukozası (<stron...

Watch this Scientific Journal Video about Author Spotlight: Oral Candida Diagnosis to Advance Clinical Treatment Regimen for pSS Patients at JoVE.com

Burada, primer Sjögren sendromlu hastalarda oral Candida enfeksiyonunun incelenmesi için zamanında tedavi ve daha sonra ilgili komplikasyonlardan kaçınmak için kullanılabilecek bir protokol sunuyoruz.

Primary Sj&#246;gren's syndrome (pSS) is an autoimmune disease characterized by symptoms such as dry mouth, dry eyes, and other systematic symptoms. Due ...

Bu araştırmada, primer Sjögren sendromlu hastalarda oral kandida enfeksiyonunun incelenmesi için enfeksiyona bağlı komplikasyonlardan kaçınmak için zamanında tedavi için kullanılabilecek bir protokol sunuyoruz. Primer Sjögren sendromlu hastalarda oral kandida enfeksiyonlarını tespit etmek, kandida suşlarını tanımlamak ve yaygın olarak kullanılan ilaçların antifungal duyarlılığını test etmek için bir dizi sistematik, basit ve uygulanabilir yöntem sunuyoruz. Belki de gelecekteki çalışmalarımızda oral kandida enfeksiyonunun başlangıcındaki rolüne ve primer Sjögren sendromu patologlarının ilerlemesine odaklanıyoruz.

examination-oral-candida-infection-primary-sjgren-s-syndrome

Research

JoVE Journal

Medicine

Examination of Oral Candida Infection in Primary Sj&#246;gren&#39;s Syndrome Patients

562 Görüntüleme.  Capital Medical University. Bu araştırmada, primer Sjögren sendromlu hastalarda oral kandida enfeksiyonunun incelenmesi için enfeksiyona bağlı komplikasyonlardan kaçınmak için zamanında tedavi için kullanılabilecek bir protokol sunuyoruz. Primer Sjögren sendromlu hastalarda oral kandida enfeksiyonlarını tespit etmek, kandida suşlarını tanımlamak ve yaygın olarak kullanılan ilaçların antifungal duyarlılığını test etmek için bir dizi sistematik, basit ve uygulanabilir yöntem sunuyoruz. Belki ...

Video: Yazar Spotlight: pSS Hastaları için Klinik Tedavi Rejimini İlerletmek için Oral Kandida Teşhisi

Primary Sj&#246;gren's syndrome (pSS) is an autoimmune disease characterized by symptoms such as dry mouth, dry eyes, and other systematic symptoms. Due to the hyposalivation experienced by pSS patients, oral dysbacteriosis often occurs. A common complication of pSS is the oral Candida infection. In this article, the authors describe systematic methods that can effectively diagnose oral Candida infection and identify the Candida strains using saliva, oral mucosal swabs, or mouthwash from pSS patients. The Sabouraud's Dextrose Agar (SDA), hyphal formation assay, potassium hydroxide (KOH) smear test, and calcofluor white (CFW) staining assay are used for the diagnosis of oral Candida infection. A Candida diagnostic agar is used for the identification of Candida strains. Finally, antifungal susceptibility testing is used to determine appropriate antifungal drug treatment. This standardized method can enhance the diagnosis, treatment, and future research of pSS-related oral Candida infections. Early diagnosis, using this method, can also prevent any complications arising due to delay in receiving appropriate treatment.

Here, we present a protocol for the examination of oral Candida infection in patients with primary Sj&#246;gren's syndrome, which can be used for timely treatment and, thereafter, avoiding related complications.

Tıp

Sample Collection for Diagnosis of Oral Candida in pSS Patients

To begin, select the participants based on the framed inclusion criteria. For saliva collection, instruct the patient to hold the tube with a funnel and let the saliva flow gradually into the tube along the lower lip for 15 minutes. At the end, ask the participant to spit all the remaining saliva into the tube.In case of low, unstimulated saliva flow, swab the oral mucosa in infection-suspected areas at least 10 times, and let the patient rinse their mouth with five milliliters of PBS for one minute. Then collect the mouthwash in a 50-milliliter sterile tube and put the swab into it. Add one milliliter of PBS to the collected saliva and vortex the tube for one minute.