Canlı Floresan Mikroskobu Kullanılarak İnsan Kolonik Organoidlerinde Sitokin ile İndüklenen Hücre Ölümünün Miktar Tayini

İnflamatuar sitokinler interferon-gama ve TNF-yüz milyonlarca yıldır var olmuştur ve hücreler arası patojenlere karşı etkili konak savunması için kritik öneme sahiptir. Araştırma grubumuz, bu sitokinlerin bağırsaktaki epitel hücreleri ve kanser hücreleri gibi hücreleri öldürmek için nasıl çalıştığını anlamaya çalışıyor. Bağırsak epitel hücresi ölüm mekanizmalarını incelemek için yaygın olarak kullanılan sistemler arasında fare modelleri ve ölümsüzleştirilmiş kanser hücre dizileri bulunur.

İnsan test organoidleri, doğrudan hasta biyopsilerinden üretildikleri ve ana dokunun birçok fizyolojik ve morfolojik özelliğini korudukları için avantajlıdır. Bu, çeviri değerinin arttığı anlamına gelir. Organ araştırmaları, deneylerin tekrarlanabilirliği ile ilgili sorunlara sahiptir ve geleneksel hücre kültürüne kıyasla çeşitli teknik zorluklara sahiptir.

Organoid hücre ölümünü ölçmek için mevcut tekniklerin de sınırlamaları vardır. Bazıları sadece yarı kantitatiftir, hücre ölümünü doğrudan ölçmez, tek organoid tepkileri ölçemez veya pahalı ekipman ve karmaşık protokoller gerektirir. Organoid hücre ölümünün kantitatif analizi için protokolümüz basit, sağlam ve ucuzdur.

Protokolümüzü, sitotoksik sitokin kombinasyonlarına tek organoid tepkileri ölçmek için kullandık, ancak herhangi bir pertürbagen türünü incelemek için kolayca uyarlanabilir. Bu yöntem, hücre ölümü, epitelyal bariyer fonksiyonu veya mukozal immünoloji üzerine araştırmalar için yararlıdır. Son zamanlarda, interferon-gama ve TNF'nin bağırsak epitel hücrelerinde ve kolon kanseri hücrelerinde inflamatuar hücre ölümünü indüklemek için sinerji oluşturduğunu bildirdik.

Bunu JAK1/2-STAT1 sinyal yolu üzerinden yaparlar. Gelecekteki çalışmalarda, bunun ne tür bir hücre ölümü olduğunu ve JAK1 ve JAK2'nin hücreleri nasıl öldürdüğünü anlamak istiyoruz.