Erken Evre Zebra Balığı Larvalarında Küçük Molekül Taraması ve Toksisite Testi

Başlamak için, erken evre zebra balığı embriyolarını döllenmeden üç gün sonra bir Petri kabında toplayın. 100 mikrolitrelik bir hacme ayarlanmış 1000 mikrolitrelik bir mikro pipetle, 96 oyuklu bir plakanın her bir oyuğuna sağlıklı görünen bir yumurtadan çıkmış embriyo aktarın. Şimdi, gerekli miktarda test kimyasalını 12 oyuklu bir plakanın her bir oyuğuna pipetleyin.

Ardından, E3 ortamı ile toplam hacmi 2,4 mililitreye ayarlayın. Stok test kimyasalını çözmek için kullanılan çözücüye göre araç kontrolünü hazırlayın. 200 mikrolitrelik bir pipetle, 96 oyuklu plakanın her bir oyuğundan mevcut herhangi bir E3 çözeltisini çıkarın.

Her konsantrasyon için hazırlanan test ortamından 100 mikrolitre ile değiştirmek için sekiz kanallı bir mikro pipet kullanın. Konsantrasyon başına toplam 24 larvanın test edildiğinden emin olun. 24 saat sonra, morfolojik puanlama yapmak için bir stereo ışık mikroskobu kullanın.

Morfolojiyi ikili bir yöntem kullanarak puanlayın, burada yokluk normal morfolojiyi ve mevcut morfolojik bir anormalliği gösterir. Puanlama tamamlandığında, her kuyucuktan 50 mikrolitre ortam çıkarın. 50 mikrolitre taze hazırlanmış test ortamı ile değiştirin.

Ölü larvaları çıkarın ve kaydedin, ardından larvaları 14 saatlik ışık ve 10 saatlik karanlık döngü ile 28,5 santigrat derecede kuluçkaya yatırın. Döllenmeden beş gün sonra zebra balığı, iki günlük ilaca maruz kaldıktan sonra çeşitli fenotipler sergiledi. Etkilenmemiş zebra balıkları normal olarak gözlenirken, bazı balıklarda hafif perikardiyal ödem belirgindi.

Diğerlerinde ciddi perikardiyal ödem, yolk kanaması ve yumurta sarısı uzaması kaydedildi. Azalmış pigmentasyon, yüzme kesesi ve toplam uzunluk ile gecikmiş gelişim de gözlendi. Ek fenotipler arasında şişmiş yumurta sarısı ve bükülmüş kuyruk yüzgeci olan zebra balığı, kuyruk yüzgeci yok ve kavisli notokord vardı.

Şiddetli vakalar nekrozlu kesme ve ölüm sergiledi.