出血の手続きの前に必要なサンプルの種類を決定する必要があります。実験手順は、全血、血漿または血清を必要があります。全血などの抗凝固剤をサンプルに追加されていなければなりません。フィブリノゲンと赤の血液細胞から分離したとき、他の凝固因子を含む血漿高血圧症サンプルから抽出できます。血清は抗凝固剤なしの血のコレクションを通じて取得されます。血栓形成後、血清サンプルの遠心からなります。サンプルはクロテッド クリームてい、フィブリノゲンあるいは他凝固因子血清は含まれません。血漿、血清は 2200-2500 RPM で 15 分の最小値を実行する遠心分離機を使用して取得されます。

全血または血漿をもたらす必要がありますサンプルでは、適切な抗凝固剤を使用する必要があります。実験動物の一般的に使用される抗凝固剤はヘパリン、クエン酸ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸 (EDTA);選択は、リサーチのニーズに基づいています。EDTA、ヘパリン、クエン酸ナトリウムが液状を隔離、表面をコートする注射器に直接読み込みます。これにより、抗凝固薬の接触直接血液を描画すると、凝固の防止で助けます。ほとんどの哺乳類の血よりも高速のラット血液凝固として適切な割合の血液に抗凝固剤の血のコレクションを使用することが不可欠です。

針の選択は、動物のサイズと静脈穿刺のサイトに基づいています。一般的には、穴径が大きいほど針のより急速にサンプルが収集することができます。血液細胞以下のダメージは大きい針にもう一つの利点です。しかし、大口径針の主な欠点は、船が損傷する可能性です。マウス、ラットに 0.5 1.5 20 29 ゲージ針からサイズの範囲の選択肢インチ長さ。針が長すぎる場合だけでなく、使いにくいですが、凝固針で余分なスペースを持っている可能性があります。適切な針のサイズは、プロシージャ セクションのメソッドごとに表示されます。

必要なサンプルのサイズを事前にする必要がありますもはあります。マウスまたはラットのサイズが小さいため生存ブリードの血のコレクションの最大の量を計算する必要があります。25 グラムの重量を量る平均マウスは 1.8 ml の全血液量250 グラムの重量を量る平均ラットは 16 ml の総血液量です。マウスまたはラット水分補給せずに単一の血液サンプル、安全に削除することができます最大血液量は総血液量または 7.7 8 μ l/g の 10% です。 このように平均的なマウスの血液量の 10% は 193-200 μ l です。250 グラムの平均ラット、これは相当に 1.9 2.0 ml. 研究血液量の 15% 以上を削除乏血性ショックを引き起こすことが示されています。^{1, 2}とエンガード、ただし、全血液量の 15% まで- または 12 μ l/g-缶が削除されます。25 グラムのマウス、これは 300 μ l; に相当250 グラムのラットを 3 ml と同じです。水分補給のため流体で暖め、注射は皮下投与します。

複数のサンプルを取るべきだ、描かれた血液量は減少します。週描画可能性があります最大の血液量は総血液量または 6 μ l/g の 7.5% です。 25 グラム マウスこれ、週 145-150 μ l に相当します。250 グラムのラットでは、この、週 1.45 1.50 ml に相当します。 2 週間毎、サンプリングが発生する総血液量 (8 μ l/g) の 10% までが描かれるかもしれません。これは 200 μ l 平均マウスに 2 週間ごとに相当、最大 2.00 ml 250 グラムのラットに 2 週間ごと。250 グラムの平均重量とラットに対して、1 つの研究では、血液量の 15-20% が削除されたときそれは血糖を正常化するため 29 日以上を取ったことを明らかにしました。^{1, 2}繰り返し採血のため水分補給はできません血液量が多いまたはより頻繁に採血のボリュームだけ代わりになります。動物は、血液細胞を補充するための時間を必要があります。

レトロな軌道神経叢の使用は、過去に一般的な練習をされています。ただし、この手順の挫折について多くの懸念が生じています。中には、目の眼に一度置かれてヘマトクリット管の過剰な運動は、まぶたや結膜膜の腫脹をもたらす周囲の組織への損傷を引き起こす可能性が。腫れた組織眼球突出まで十分なので、まぶたの閉鎖は妨げ、角膜乾燥に至るおそれと損傷する可能性があります。腫れの痛みは、傷、自傷による眼球摘出の結果をトリガーできます。レトロな軌道出血中にヘマトクリット管の不適切な配置は、失明の生じる視神経を断ち切ることができます。ヘマトクリット管は不適切な角度で高度な目が眼球の後ろに落下するまぶたをできるように、軌道を外れて強制できます。この場合、ソケットに目を正しく交換する非常に困難です。壊れやすい軌道骨、ガラス質ユーモアの損失または目の圧力のために極度の痛みにつながる目の奥に血腫の形成の結果の眼球の浸透の破砕とその周辺に発生する他の問題が含まれて構造。すべてのこれらの懸念にもかかわらず、熟練した技術者は、手順を実行、動物イソフルレン吸入麻酔などの一般的な麻酔薬で麻酔をかけられ完全にレトロな軌道出血に示されている血の効果的な方法齧歯動物のコレクションです。

マウスとラットとの間は、軌道領域の解剖学的構造が違います。マウスには、眼窩領域の副鼻腔を作成する血管のコレクション洞、レトロな軌道があります。ネズミ目の軌道上では、その目の背後に流れる血管の神経叢です。しかし、彼らはマウスのように、副鼻腔を形成しません。したがって、マウスでこの手順を実行する方が簡単です。レトロ軌道神経叢を介して繰り返しサンプリング コレクション、最低 10 日間の出血を癒すために地区組織を許可する必要です。全身麻酔をお勧めします、プロパラカイン、テトラカインなどの局所点眼麻酔が手続きの前に適用される場合、プロシージャをマウス全身麻酔なしで実行できます。ラットは、レトロな軌道洞を持っていないと、軌道の周りの膜が非常に強いので、この手順のためそれらを麻酔する必須です。

少量のシリアルのサンプルは、尾 clip メソッドを使用して取得できます。尾の最初の切断は尻尾の先端、約 0.5 〜 1.0 mm のマウスとラットの 2.0 mm 長さに制限されなければなりません。かさぶたか元の塊を破壊してシリアル コレクション、採血の尻尾切り取り領域手順¹尾の端でカットします。一般的には、尾の先端の追加の切断は必要ではありません。血液量は、20-100 μ L マウス用とラット用 75 150 μ L から範囲を収集しました。収集量は動物間の変数を年齢、健康状態、および体重の影響を受けます。

尻尾切り取り領域から採取された試料は、組織製品汚染と一緒に、動脈、静脈の血液を含めることができます。尻尾を撫でまたは「搾乳」より多くの血液を取得する場合、サンプルの質が低下します。血流を増やす、温湿布、熱ランプ、または暖かい水に浸された尾を加熱できます。止血、尾の先端に圧力を適用して、動物は、止血が達成されていることを確認するすべての 5 〜 10 分をチェック必要があります。止血が繰り返しサンプリングとよく遅れています。Styptic 粉は止血に使用可能性があります。初期の切断の麻酔 (一般的なまたはローカル) の使用をお勧めします。その後出血は必要麻酔、動物手順に慣れるように特にありません。麻酔血圧、この手法での採血が困難でドロップが発生します。

尻尾切り取り領域する代わりに、尾容器ニック。この手順を簡単にマウスとラットの両方で実行します。ただし、尻尾切り取り領域と同様、サンプルが組織製品、特にマウスと汚染されます。ラットの血管に注射針を挿入し、は採血針のハブから。1 つの研究は、直上の針穿刺血のコレクションを支援する止血帯の使用を認めた。³注射器は注射器から作成された圧力容器は崩壊するでしょう、容器から採血を使いません。このメソッドは、再び出血しサイトを引き起こす血栓を削除できるよう、シリアルのサンプリングで使用もできます。尻尾切り取り領域と同様、サイトに圧力をかけて、5-10 分ごとに動物を再確認して止血を確認することが不可欠です。

多くの場合、研究 nonsurvival、心腔内の出血または後大静脈経由で外れると出血により収集されて大規模な血液サンプルを必要とします。⁴約全体の血液量の半分から収集できますマウスまたはラット心臓穿刺によって。これは 40 μ l/g または平均 25 グラムのマウスの約 1 ml と同じです。250 グラムのラットでは、血液の約 10 ml をもたらすでしょう。急激な多量の麻酔動物必要があります。熟練の技術者による吸入麻酔や CO₂麻酔を使用できます。注射麻酔を使用もできます。ただし、血圧や血液の量を減らすことができる循環の減少があります。

後大静脈メソッドは、動物が外科的血管を公開する深く麻酔が必要です。CO₂麻酔が不十分、心する必要があり、血の撤退中に呼吸動物です。中も血撤退の急速なは遮蔽開口の予防および採血、注射器の傾斜面に崩壊する船を可能性があります。また、血管壁が薄く、破裂や針の穿刺部位からの血液の漏れを防ぐためにこのように手と針の動きを避ける必要があります。針は皮膚を通過しない、このメソッドは、滅菌サンプルのコレクションの結果します。動物が麻酔から回復しないように補助安楽死の方法を用いなければなりません。このメソッドは、多くの場合心臓や大動脈の血流が続きます。

心臓内のメソッドがすることができますそれが麻酔 (閉鎖法) は、または、中心部を手術後大静脈血コレクション法 (オープン法) のためのプロトコルに従って公開すること手動で拘束された動物のいずれかを実行します。クローズ メソッドの針の配置のランドマークまで動物の左側の剣状突起、肋骨で形成される溝です。

マウス、ラットの採血は、さまざまな手法を実現できます。サンプル サイズ、サンプリング、周波数、サイズ、動物の年齢など、多くの要因で影響を及ぼす、最も重要なコンポーネントはサンプルの収集を実行する技術者のスキルレベル。 ここで説明する方法の麻酔薬の適切な使用は、また品質のサンプルと動物の健康のために重要。