Name: a device for performing cell migration/wound healing in a 96-well plate
Uploaded: 2017-03-07T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate at JoVE.com

Författarna vill tacka Tam Po Leung, Mr Wong Chi Kin och teknisk personal av fakulteten Workshop, Hong Kong Baptist University, för deras tekniska kompetens och råd för att göra en prototyp av denna wounder.

1. Introduktion till de delar av den Wounder (Figur 1) <ol><li> Förbered stifthållaren genom att fastställa skadades stift på lika avstånd. Håll pipettspetsarna och justera spetshöjden genom att flytta de justerbara sårskada stiften upp och ner. </li><li> Montera den justerbara styr-bar på olika märken av 96-brunnsodlingsplattor och se till att såra området är i ett fast läge. </li><li> Fäst justerbara såra stift genom att dra åt sexkantskruven. Fäst leds bar på plats genom att dra åt hex socket he...

<ol>
	<li>Friedl, P., Wolf, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumour-cell+invasion+and+migration:+diversity+and+escape+mechanisms.">Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms.</a> Nat Rev Cancer. 3 (5), 362-374 (2003).</li><li>Friedl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prespecification+and+plasticity:+shifting+mechanisms+of+cell+migration.">Prespecification and plasticity: shifting mechanisms of cell migration.</a> Curr Opin Cell Biol. 16 (1), 14-23 (2004).</li><li>Lampugnani, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+migration+into+a+wounded+area+in+vitro.">Cell migration into a wounded area in vitro.</a> Methods Mol Biol. 96, 177-182 (1999).</li><li>Sholley, M. M., Gimbrone, M. A., Cotran, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+migration+and+replication+in+endothelial+regeneration:+a+study+using+irradiated+endothelial+cultures.">Cellular migration and replication in endothelial regeneration: a study using irradiated endothelial cultures.</a> Lab Invest. 36 (1), 18-25 (1977).</li><li>Gotlieb, A. I., Spector, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Migration+into+an+in+vitro+experimental+wound:+a+comparison+of+porcine+aortic+endothelial+and+smooth+muscle+cells+and+the+effect+of+culture+irradiation.">Migration into an in vitro experimental wound: a comparison of porcine aortic endothelial and smooth muscle cells and the effect of culture irradiation.</a> Am J Pathol. 103 (2), 271-282 (1981).</li><li>Chen, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+migration+chip+for+chemotaxis-based+microfluidic+selection+of+heterogeneous+cell+populations.">Single-cell migration chip for chemotaxis-based microfluidic selection of heterogeneous cell populations.</a> Sci Rep. 18 (5), 9980 (2015).</li><li>Yarrow, J. C., Periman, Z. E., Westwood, N. J., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-throughput+cell+migration+assay+using+scratch+wound+healing,+a+comparsion+of+image-based+readout+methods.">A high-throughput cell migration assay using scratch wound healing, a comparsion of image-based readout methods.</a> BMC Biotechnol. 4, 21 (2004).</li><li>Lauder, H., Frost, E. E., Hiley, C. R., Fan, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+the+repair+process+involved+in+the+repair+of+a+cell+monolayer+using+an+in+vitro+model+of+mechanical+injury.">Quantification of the repair process involved in the repair of a cell monolayer using an in vitro model of mechanical injury.</a> Angiogenesis. 2 (1), 67-80 (1998).</li><li>Yue, P. Y. K., Leung, E. P. Y., Mak, N. K., Wong, R. N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+method+for+quantifying+cell+migration/+wound+healing+in+96-well+plates.">A simplified method for quantifying cell migration/ wound healing in 96-well plates.</a> J. Biomol Screen. 15 (4), 427-433 (2010).</li><li>Yue, P. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elucidation+of+the+mechanisms+underlying+the+angiogenic+effects+of+ginsenoside+Rg(1)+in+vivo+and+in+vitro.">Elucidation of the mechanisms underlying the angiogenic effects of ginsenoside Rg(1) in vivo and in vitro.</a> Angiogenesis. 8 (3), 205-216 (2005).</li><li>Kwok, H. H., Chan, L. S., Poon, P. Y., Yue, P. Y., Wong, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ginsenoside-Rg1+induces+angiogenesis+by+the+inverse+regulation+of+MET+tyrosine+kinase+receptor+expression+through+miR-23a.">Ginsenoside-Rg1 induces angiogenesis by the inverse regulation of MET tyrosine kinase receptor expression through miR-23a.</a> Toxicol Appl Pharmacol. 287 (3), 276-283 (2015).</li></ol>

Vår cell wounder har flera unika egenskaper för att lösa problemen med traditionella cellmigrationsanalyser. Den 8-kanals mekanisk cell wounder är tillverkad av högvärdigt rostfritt stål (stål 304) med en lång livslängd som kan steriliseras genom autoklavering. Nästan alla kommersiella märken av 96-brunnars odlingsplattor som finns på marknaden kan användas med denna mekaniska cell wounder på grund av den justerbara styraxel. Utformningen av den justerbara styraxel säkerställer också att sprätta områ...

Cell migrationen spelar en viktig roll i cellulära processer, såsom embryogenes, neurogenes, angiogenes, sårläkning, mucosal reparation, epitelceller-mesenkymala-övergångar vid normal utveckling och sjukdomssituationen en. Det är en komplicerad process som innebär samordning av många inter- och intra-cellulära händelser, inklusive signalmolekyl interaktioner, cell polarisering, cytoskelettala omorganisation, matrix remodeling, membran utsprång och dynamisk cell-cell adhesion modulering 2. Genom att studera cell migration, kan upptäckten och validering av kemikalier eller biomolekyler som leder till cellrörelse och dess relaterade biokemiska vägar bestämmas. Denna grundläggande process kan med fördel användas som en proxy för olika tillämpningar, såsom behandling av sjukdomar och läkemedel inriktning. Den såra analysen är en av de cellmigrationsanalyser 3. Här, enindividuella prov av celler kommer att delvis avlägsnas på mekanisk väg för att producera en blottlagda område där cellerna kommer att migrera för att täcka området. Procentandelen av återhämtning vid en viss tidpunkt kommer att övervakas. Vid hantering av stort antal prover, kan frågor som den experimentella kostnader och korskontaminering inom proverna vara problematiskt. Även om många kommersiella verktyg och analyser är tillgängliga för att studera cell migration 4, 5, 6, många av dem krävs dyr och avancerad utrustning och fortfarande behövs förbättringar. Av dessa skäl är en 8-kanals mekanisk cell wounder (Figur 1) utvecklats. Vår 8-kanals mekanisk cell wounder har införlivat ett flertal unika egenskaper för att lösa de ovan nämnda problemen. Det ger flexibilitet att utföra cellmigration / såra analyser i 96-brunnars odlingsplattformat. Den justerbara guIding bar design säkerställer att repa området är i den centrala positionen av varje brunn. Dessutom kan höjden på de vägledande barer justeras så att wounder är tillämpbar för olika märken av odlingsplattor. Slutligen, den justerbara såra stift konstruktion möjliggör en jämn kontakt pipettspetsarna med odlingsplatta ytan för att uppnå samtidig och reproducerbar såra 7, 8.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>96-well cell culture plate</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>167008</td>
			<td>Other brands of 96-well cell culture plate can also be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P10 pipette tips</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>301-03-051</td>
			<td>Short P10 pipette tip is more easy to create a clear wound</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wounder</td>
			<td>R&#38;P Technology Limited</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium 199</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M2520-1L</td>
			<td>For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. 
			Use appropirate culture medium and condition for other type of cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>26140079</td>
			<td>For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. 
			Use appropirate culture medium and condition for other type of cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td>For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. 
			Use appropirate culture medium and condition for other type of cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3393</td>
			<td>For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. 
			Use appropirate culture medium and condition for other type of cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin from bovine skin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G9391</td>
			<td>For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. 
			Use appropirate culture medium and condition for other type of cells.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a device for performing cell migration/wound healing in a 96-well plate

Migreringen cell / sårbildning analys är en vanligt använd metod för att studera cellmigrering och andra biologiska processer, såsom angiogenes och tumörmetastas. I denna analys odlas celler till att bilda ett sammanflytande monoskikt och ett mekaniskt sår skapas genom att skrapa med en enhet. Då migreringshastigheten för cellerna mot blottlagda området kan övervakas genom avbildning. Vår 8-kanals mekanisk wounder är utformad för att ta itu med de flesta av de problem som är förknippade med analyscellmigration. För det första kan vår wounder lätt steriliseras genom autoklavering eller med vanliga desinfektionsmedel. För det andra tillåter de individuella justerbara stift även kontakt med cellodlingsplatta så att man kan skapa skarpa och reproducerbara sår. För det tredje, de vägledande barer på båda sidor av wounder säkerställa konsekvent sårskada position i varje brunn. Användningen av engångsplast pipettspetsar för skadade kan ytterligare ge bättre hantering av wounder samt för att minimera kors contaminatJon. Sammanfattningsvis kan vår cell wounder ge forskare en användarvänlig och reproducerbar anordning för att utföra analysen av cellmigration genom att använda standard 96-brunnars odlingsplatta.

Detta 8-kanals mekanisk wounder är konstruerad för att skrapa en cell monoskikt för att utföra analysen cellmigration. Det är ett användarvänligt enhet som kan utföra cell repa analyser in 96-brunnsplattor i mindre än en minut utan speciell träning. Denna wounder kan införa lindade områden på cellmonoskikt med en enhetlig bredd på omkring 600 | j, m och med skarpa kanter (fig 5 och 6). Bredden av såren beror på vilket märke av pipettspet...

Watch this Scientific Journal Video about A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate at JoVE.com

A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate

Här presenterar vi ett protokoll för att utföra en cellmigrationsassay halv hög genomströmning på en 96-brunnars cellodlingsplatta. Detta protokoll är en snabb, enkel och ekonomisk metod att skapa enhetliga skrap sår på ett cellmonolager.

En anordning för utförande Cell Migration / Sårläkning i en platta med 96 brunnar

The cell migration/wounding assay is a commonly used method to study cell migration and other biological processes, such as angiogenesis and tumor ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

Förstå Tidig Organogenesis användning av en förenklad<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisering protokollet<em&gt; Xenopus</em

Organogenesis is the study of how organs are specified and then acquire their specific shape and functions during development.  The Xenopuslaevis embryo ...

Automated Quantification of Hematopoietic Cell &#8211; Stromal Cell Interactions in Histological Images of Undecalcified Bone

Automated Quantification of Hematopoietic Cell ÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬Å“ Stromal Cell Interactions in Histological Images of Undecalcified Bone

Automatiserad Kvantifiering av hematopoetisk cell - stromacells- Interaktioner i Histologiska bilder från Undecalcified Bone

Confocal microscopy is the method of choice for the analysis of localization of multiple cell types within complex tissues such as the bone marrow. ...

Scalable 96-well Plate Based iPSC Culture and Production Using a Robotic Liquid Handling System

Skalbar 96-brunnar Baserat iPSC kultur och produktion med hjälp av en Robotic Vätskehantering System

Continued advancement in pluripotent stem cell culture is closing the gap between bench and bedside for using these cells in regenerative medicine, drug ...

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Inrättande av en kliniskt relevant<em&gt; Ex vivo</em&gt; Mock kataraktoperation Modell för utredning Epithelial sårläkning i en Native mikromiljö

The major impediment to understanding how an epithelial tissue executes wound repair is the limited availability of models in which it is possible to ...

Microinjection for Transgenesis and Genome Editing in Threespine Sticklebacks

Mikroinjektion för genmodifiering och Genome redigering i Threespine sticklebacks

The threespine stickleback fish has emerged as a powerful system to study the genetic basis of a wide variety of morphological, physiological, and ...

Adenoviral Gene Therapy for Diabetic Keratopathy: Effects on Wound Healing and Stem Cell Marker Expression in Human Organ-cultured Corneas and Limbal Epithelial Cells

Adenoviral genterapi för Diabetic keratopati: Effekter på sårläkning och Stamcells Marker Expression in Human Organ-odlade hornhinnor och limbus epitelceller

The goal of this protocol is to describe molecular alterations in human diabetic corneas and demonstrate how they can be alleviated by adenoviral gene ...

Rapid Isolation of BMPR-IB+ Adipose-Derived Stromal Cells for Use in a Calvarial Defect Healing Model

Snabb Isolering av BMPR-IB + Fett-stromala celler för användning i en calvarial defekt Healing Modell

Invasive cancers, major injuries, and infection can cause bone defects that are too large to be reconstructed with preexisting bone from the patient's own ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

En ny mammografisk feta padtransplantationsteknik för att visualisera fartygsgenerering av vaskulära endotelceller

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation av byggnadsställning-fri, tredimensionella Insulin att uttrycka Pancreatoids från mus bukspottskörteln föräldraparets In Vitro

The pancreas is a complex organ composed of many different cell types that work together to regulate blood glucose homeostasis and digestion. These cell ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

Visualisera den noden och Notochordal plattan i Gastrulating musembryon som använder Scanning Electron Microscopy och hela Mount immunofluorescens

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...