Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciência Natural da China (Grant No. 91643203, 91543208, 81502835).

Todos os procedimentos descritos foram aprovados pelo Comitê Institucional de Atenção e Uso de Animais (IACUC) da Universidade de Qingdao. Em nosso laboratório, os ovos foram incubados em duas incubadoras. Os ovos eram mantidos eretos na incubadora e colocados aleatoriamente nas prateleiras. As condições de incubação dos ovos foram as seguintes: a temperatura de incubação começou em 37,9 °C, e gradualmente diminuiu para 37,1 °C à medida que a incubação prosseguia; a umidade começou em 50% e aumentou grad...

<ol>
	<li>Kain, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chick+embryo+as+an+expanding+experimental+model+for+cancer+and+cardiovascular+research.">The chick embryo as an expanding experimental model for cancer and cardiovascular research.</a> Developmental Dynamics. 243 (2), 216-228 (2014).</li><li>Menna, T. M., Mortola, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+posture+on+the+respiratory+mechanics+of+the+chick+embryo.">Effects of posture on the respiratory mechanics of the chick embryo.</a> Journal of Experimental Zoology. 293 (5), 450-455 (2002).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> Journal of Morphology. 88 (1), 49-92 (1951).</li><li>Yamamoto, F. Y., Neto, F. F., Freitas, P. F., Oliveira Ribeiro, C. A., Ortolani-Machado, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadmium+effects+on+early+development+of+chick+embryos.">Cadmium effects on early development of chick embryos.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 34 (2), 548-555 (2012).</li><li>Lv, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+roles+of+bone+morphogenetic+protein+2+in+perfluorooctanoic+acid+induced+developmental+cardiotoxicity+and+l-carnitine+mediated+protection.">The roles of bone morphogenetic protein 2 in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity and l-carnitine mediated protection.</a> Toxicology and Applied Pharmacology. 352, 68-76 (2018).</li><li>Kmecick, M., Vieira da Costa, M. C., Oliveria Ribeiro, C. A., Ortolani-Machado, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+evidence+of+neurotoxic+effects+in+chicken+embryos+after+exposure+to+perfluorooctanoic+acid+(PFOA)+and+inorganic+cadmium.">Morphological evidence of neurotoxic effects in chicken embryos after exposure to perfluorooctanoic acid (PFOA) and inorganic cadmium.</a> Toxicology. 4227, 152286 (2019).</li><li>Jiang, Q., Lust, R. M., Strynar, M. J., Dagnino, S., DeWitt, J. 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C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfluorooctanoic+acid+induced-developmental+cardiotoxicity:+are+peroxisome+proliferator+activated+receptor+alpha+(PPARalpha)+and+bone+morphorgenic+protein+2+(BMP2)+pathways+involved.">Perfluorooctanoic acid induced-developmental cardiotoxicity: are peroxisome proliferator activated receptor alpha (PPARalpha) and bone morphorgenic protein 2 (BMP2) pathways involved.</a> Journal of Toxicology and Environmental Health, Part A. 76 (11), 635-650 (2013).</li><li>Jiang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+levels+of+l-carnitine,+acetyl-l-carnitine+and+propionyl-l-carnitine+are+involved+in+perfluorooctanoic+acid+induced+developmental+cardiotoxicity+in+chicken+embryo.">Changes in the levels of l-carnitine, acetyl-l-carnitine and propionyl-l-carnitine are involved in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity in chicken embryo.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 48, 116-124 (2016).</li><li>Zhao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+PPAR+alpha+in+perfluorooctanoic+acid+induced+developmental+cardiotoxicity+and+l-carnitine+mediated+protection-Results+of+in+ovo+gene+silencing.">The role of PPAR alpha in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity and l-carnitine mediated protection-Results of in ovo gene silencing.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 56, 136-144 (2017).</li><li>Jiang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Particulate+Matter+2.5+Induced+Developmental+Cardiotoxicity+in+Chicken+Embryo+and+Hatchling.">Particulate Matter 2.5 Induced Developmental Cardiotoxicity in Chicken Embryo and Hatchling.</a> Front Pharmacol. 11, 841 (2020).</li><li>Molina, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+air+cell+injection+of+perfluorooctane+sulfonate+before+incubation+on+development+of+the+white+leghorn+chicken+(Gallus+domesticus)+embryo.">Effects of air cell injection of perfluorooctane sulfonate before incubation on development of the white leghorn chicken (Gallus domesticus) embryo.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 25 (1), 227-232 (2006).</li><li>Crump, D., Chiu, S., Williams, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bis-(3-allyl-4-hydroxyphenyl)+sulfone+decreases+embryonic+viability+and+alters+hepatic+mRNA+expression+at+two+distinct+developmental+stages+in+chicken+embryos+exposed+via+egg+injection.">Bis-(3-allyl-4-hydroxyphenyl) sulfone decreases embryonic viability and alters hepatic mRNA expression at two distinct developmental stages in chicken embryos exposed via egg injection.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 37 (2), 530-537 (2018).</li><li>Franci, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potency+of+polycyclic+aromatic+hydrocarbons+in+chicken+and+Japanese+quail+embryos.">Potency of polycyclic aromatic hydrocarbons in chicken and Japanese quail embryos.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 37 (6), 1556-1564 (2018).</li><li>Rand, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+exposure+to+methylmercury+and+resultant+muscle+mercury+accumulation+and+adult+motor+deficits+in+mice.">Developmental exposure to methylmercury and resultant muscle mercury accumulation and adult motor deficits in mice.</a> Neurotoxicology. 81, 1-10 (2020).</li><li>Tanaka, T., Suzuki, T., Inomata, A., Moriyasu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+effects+of+maternal+exposure+to+fungicides+on+behavioral+development+in+F1+-generation+mice:+2.+Fixed-dose+study+of+thiabendazole.">Combined effects of maternal exposure to fungicides on behavioral development in F1 -generation mice: 2. Fixed-dose study of thiabendazole.</a> Birth Defects Research. , (2020).</li><li>Kofman, O., Lan, A., Raykin, E., Zega, K., Brodski, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+and+social+deficits+and+enhanced+sensitivity+to+prenatal+chlorpyrifos+in+PON1-/-+mouse+pups+and+adults.">Developmental and social deficits and enhanced sensitivity to prenatal chlorpyrifos in PON1-/- mouse pups and adults.</a> PLoS One. 15 (9), 0239738 (2020).</li><li>Kischel, A., Audouard, C., Fawal, M. A., Davy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ephrin-B2+paces+neuronal+production+in+the+developing+neocortex.">Ephrin-B2 paces neuronal production in the developing neocortex.</a> BMC Developmental Biology. 20 (1), 12 (2020).</li><li>Okolo, F., Zhang, G., Rhodes, J., Gittes, G. K., Potoka, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-Amniotic+Sildenafil+Treatment+Promotes+Lung+Growth+and+Attenuates+Vascular+Remodeling+in+an+Experimental+Model+of+Congenital+Diaphragmatic+Hernia.">Intra-Amniotic Sildenafil Treatment Promotes Lung Growth and Attenuates Vascular Remodeling in an Experimental Model of Congenital Diaphragmatic Hernia.</a> Fetal Diagnosis and Therapy. , 1-13 (2020).</li><li>Vyslouzil, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subchronic+continuous+inhalation+exposure+to+zinc+oxide+nanoparticles+induces+pulmonary+cell+response+in+mice.">Subchronic continuous inhalation exposure to zinc oxide nanoparticles induces pulmonary cell response in mice.</a> Journal of Trace Elements in Medicine and Biology. 61, 126511 (2020).</li><li>Wahle, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+neurological+effects+of+cerium+dioxide+nanoparticles+doped+with+different+amounts+of+zirconium+following+inhalation+exposure+in+mouse+models+of+Alzheimer's+and+vascular+disease.">Evaluation of neurological effects of cerium dioxide nanoparticles doped with different amounts of zirconium following inhalation exposure in mouse models of Alzheimer's and vascular disease.</a> Neurochemistry International. 138, 104755 (2020).</li><li>Tanabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-Dimensional+Echocardiography-+Role+in+Clinical+Practice+and+Future+Directions.">Three-Dimensional Echocardiography- Role in Clinical Practice and Future Directions.</a> Circ J. 84 (7), 1047-1054 (2020).</li></ol>

Os autores não declaram conflito de interesses.

O embrião de frango é um modelo clássico em estudos de desenvolvimento há 200 anos1. Nossos métodos apresentados neste manuscrito têm sido utilizados na avaliação de diversos contaminantes ambientais, incluindo ácido perfluorooctanóico, material particulado e escapamento diesel com sucesso5,7,8,9,10,<sup class="xref...

O embrião de frango é um modelo clássico de desenvolvimento, que tem sido usado por mais de duzentos anos1. O modelo de embrião de frango tem várias vantagens em relação aos modelos tradicionais. Em primeiro lugar, já há mais de 70 anos, o desenvolvimento normal do embrião de frango havia sido ilustrado muito claramente no guia de estadiamento hamburger-hamilton2, no qual foram definidos um total de 46 estágios durante o desenvolvimento de embriões de frango com tempo preciso e características morfológicas, facilitando detecções de desenvolvimento anormal. Além disso, o modelo de embrião de frango tem outras características, como ser relativamente de baixo custo e redundante em quantidade, controles relativamente precisos de dose de exposição, um sistema independente e fechado dentro da concha e fácil manipulação do embrião em desenvolvimento, o que garante seu potencial de ser usado como um poderoso modelo de avaliação toxicológica. 
Na cardiotoxicidade, o embrião de frango apresenta um coração de quatro câmaras, semelhante aos corações de mamíferos, mas com paredes mais grossas, permitindo avaliações morfológicas mais fáceis. Além disso, o embrião de frango permite a exposição à inalação de desenvolvimento, o que não é possível em modelos de mamíferos: durante o estágio posterior de desenvolvimento, o embrião de frango passará da respiração interna para a respiração externa (obtendo oxigênio através do pulmão); Este último requer que o embrião penetre a membrana celular de ar com o bico, e começa a respirar ar3, tornando a célula de ar uma mini-câmara de inalação. Utilizando esse fenômeno, os efeitos toxicológicos dos contaminantes gasosos no coração (e em outros órgãos) podem ser avaliados sem a necessidade de instrumentos dedicados de câmara de inalação. 
Neste manuscrito, são descritos vários métodos de avaliação de exposição/ponto final, todos os quais servem para tornar o embrião de frango uma ferramenta poderosa na avaliação da cardiotoxicidade do desenvolvimento após a exposição a contaminantes ambientais.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4% phosphate buffered formaldehydefixative</td>
			<td>Biosharp, Hefei, China</td>
			<td>REF: BL539A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% ethanol</td>
			<td>Guoyao,Shanghai,China</td>
			<td>CAS:64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosignaling monitor BL-420E+</td>
			<td>Taimeng, Chengdu, China</td>
			<td>BL-420E+</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Candling lamp</td>
			<td>Zhenwei, Dezhou, China</td>
			<td>WZ-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable syringe</td>
			<td>Zhiyu, Jiangsu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Egg incubator</td>
			<td>Keyu,Dezhou, China</td>
			<td>KFX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical balance</td>
			<td>OHAUS, Shanghai, China</td>
			<td>AR 224CN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electro-thermal incubator</td>
			<td>Shenxian, Shanghai, China</td>
			<td>DHP-9022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Guoyao,Shanghai,China</td>
			<td>CAS:64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fertile chicken egg</td>
			<td>Jianuo, Jining, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin Staining Kit</td>
			<td>Beyotime, Bejing, China</td>
			<td>C0105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histology paraffin</td>
			<td>Aladdin, Shanghai, China</td>
			<td>P100928-500g</td>
			<td>Melt point 52~54&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histology paraffin</td>
			<td>Aladdin, Shanghai, China</td>
			<td>P100936-500g</td>
			<td>Melt point 62~64&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IV catheter</td>
			<td>KDL, Zhejiang, China</td>
			<td></td>
			<td>The catheters have to be soft, plastic ones.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lentivirus</td>
			<td>Genechem, Shanghai, China</td>
			<td></td>
			<td>The lentivirus were individually designed/synthesized by Genechem.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masson&#39;s trichrome staining kit</td>
			<td>Solarbio, Beijing, China</td>
			<td>G1340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal probe</td>
			<td>Jinuotai, Beijing, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjector (5 uL)</td>
			<td>Anting,Shanghai, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>CAIKON, Shanghai, China</td>
			<td>XSP-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica, Germany</td>
			<td>HistoCore BIOCUT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome blade</td>
			<td>Leica,Germany</td>
			<td>Leica 819</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbitual sodium</td>
			<td>Yitai Technology Co. Ltd.,&#160; Wuhan, China</td>
			<td>CAS: 57-33-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetter(10ul)</td>
			<td>Sartorius, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone iodide</td>
			<td>Longyuquan, Taian, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor</td>
			<td>Anqisheng,Suzhou, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile saline</td>
			<td>Kelun,Chengdu, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sunflower oil</td>
			<td>Mighty Jiage, Jiangsu, China</td>
			<td></td>
			<td>Any commerical sunflower oil for human consumption should work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape</td>
			<td>M&#38;G, Shanghai, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tedlar PVF Bag (5L)</td>
			<td>Delin, Dalian, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex mixer</td>
			<td>SCILOGEX, Rocky Hill, CT, US</td>
			<td>MX-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Guoyao,Shanghai,China</td>
			<td>CAS:1330-20-7</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using chicken embryo as a powerful tool in assessment of developmental cardiotoxicities

Embriões de frango são um modelo clássico em estudos de desenvolvimento. Durante o desenvolvimento de embriões de frango, a janela de tempo do desenvolvimento cardíaco é bem definida, e é relativamente fácil alcançar exposição precisa e oportuna através de múltiplos métodos. Além disso, o processo de desenvolvimento cardíaco em embriões de frango é semelhante aos mamíferos, resultando também em um coração de quatro câmaras, tornando-se um modelo alternativo valioso na avaliação das cardiotoxicções de desenvolvimento. Em nosso laboratório, o modelo de embrião de frango é rotineiramente utilizado na avaliação de cardiotoxicções de desenvolvimento após exposição a diversos poluentes ambientais, incluindo substâncias per e polifluoroalquila (PFAS), material particulado (PMs), escape diesel (DE) e nanoestá materiais. O tempo de exposição pode ser livremente selecionado com base na necessidade, desde o início do desenvolvimento (dia embrionário 0, ED0) até o dia anterior ao eclosão. Os principais métodos de exposição incluem injeção de células de ar, microinjeção direta e inalação de células de ar (originalmente desenvolvidas em nosso laboratório), e os pontos finais disponíveis atualmente incluem função cardíaca (eletrocardiografia), morfologia (avaliações histológicas) e avaliações biológicas moleculares (imunohistoquímica, qRT-PCR, mancha ocidental, etc.). É claro que o modelo de embrião de frango tem suas próprias limitações, como a disponibilidade limitada de anticorpos. No entanto, com mais laboratórios começando a utilizar esse modelo, ele pode ser usado para fazer contribuições significativas para o estudo das cardiotoxicções do desenvolvimento.

Resultados de exposição Injeção de células de ar A injeção de células de ar pode efetivamente expor o desenvolvimento de embriões de frango a vários agentes, que podem ser posteriormente detectados nas amostras coletadas (soro, tecido, etc.) de embriões/galinhas filhotes. Aqui está um exemplo, no qual o ácido perfluorooctanóico (PFOA) foi injetado por células de ar, e as concentrações de PFOA sérico foram então determinadas com espectrometria de massa líquida ultra-performance. As concentraçõe...

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Using Chicken Embryo as a Powerful Tool in Assessment of Developmental Cardiotoxicities

Embriões de frango, como modelo de desenvolvimento clássico, são usados em nosso laboratório para avaliar cardiotoxicções de desenvolvimento após a exposição a vários contaminantes ambientais. Métodos de exposição e métodos de avaliação morfológica/funcional estabelecidos estão descritos neste manuscrito.

Usando embrião de frango como ferramenta poderosa na avaliação de cardiotoxi cidades do desenvolvimento

Chicken embryos are a classical model in developmental studies. During the development of chicken embryos, the time window of heart development is ...

Olá a todos. Sou Qixiao Jiang, Professor Associado do Departamento de Toxicologia da Escola de Saúde Pública da Universidade de Qingdao. Em nome do meu grupo de pesquisa, vou apresentar os ativos do uso do embrião de frango no desenvolvimento da nossa avaliação de toxicidade cardio.O embrião de frango é um modelo clássico de desenvolvimento que tem múltiplas vantagens como fácil manipulação, alta acessibilidade, sistema independente fechado, etc. Trabalhando com múltiplos poluentes ambientais, como o ácido tânnico fenólico. Escapamento diesel, particularmente a matéria nos nano tubos de carbono.Temos um múltiplo método de exposição estabelecido em laboratório, mas para uma causa maior, as avaliações funcionais também são realizadas rotineiramente. Neste vídeo, vou mostrar os detalhes dos métodos de exposição e os métodos de avaliação funcional morfológica para você. Sinta-se livre para entrar em contato conosco se você estiver interessado.Obrigado. Aqui estão nossos métodos de exposição que posso apresentar a você. Agora, o primeiro método que vou introduzir é uma injeção de célula de ar, onde você vai injetar diretamente na célula de ar.Limpe a superfície dos ovos com solução de poli-iodeto. Esta é uma solução de poli-iodeto comercialmente disponível, diluída com água deionizada, 1/5. E então, eu seco a casca de ovo com papel de tecido, sem esfregar.É importante porque esfregar vai quebrar seu revestimento de camada protetora na parte externa da concha. Limpei todos os ovos na sala escura e a marca da célula de ar com um lápis. Exclua ovos com rachaduras na casca.Também exclua ovos com células de ar ao lado. Se isso tem uma ponta cega, esses são altamente improváveis de chocar normalmente. Higienize a área da célula aérea, bem como a sonda metálica, com 75% de álcool.Limpe-os e faça um pequeno buraco no centro da área da célula de ar com a sonda. Não enfie a sonda profundamente na célula de ar. Em vez disso, só quebre a casca com a ponta da sonda.Se o orifício ainda não for grande o suficiente, quebre a casca novamente nas proximidades do orifício existente, até que seja grande o suficiente para permitir a inserção da ponta. Insira a ponta da pipeta no orifício com a ponta tocando a membrana interna. Lentamente, injete a mistura e segure-a lá por pelo menos 10 segundos.Isto é para permitir que o óleo dispensado seja totalmente dispensado. E então remova a ponta. Agora, sele o buraco com um pincel e uma gota de parafina derretida.Tenha cuidado para não pingar parafina derretida na memória interna. Uma vez selados, coloque os ovos na incubadora até atingirem o estágio embrionário desejado. O segundo, o método que vou introduzir é a injeção micro.Em primeiro lugar, os ovos precisam ser limpos e manuseados como descrito na seção de injeção de ar. Este procedimento precisa ser realizado em capô esterilizado. Esterilize a área da célula de ar e os instrumentos com acetona.Faça um pequeno buraco no centro da área da célula aérea com a sonda metálica. Não coloque a sonda profundamente na célula de ar, ou a memória interna pode estar danificada. Em seguida, use o mesmo processo para ampliar cuidadosamente o orifício até que o diâmetro seja de aproximadamente dois milímetros.Isso pode permitir a confirmação da razão da memória interna. Em seguida, carregue a solução no micro injetor e insira cuidadosamente a agulha através do orifício na membrana interna por aproximadamente três milímetros. Dispense suavemente a solução e, em seguida, remova a agulha.Mantenha a agulha o mais perpendicular possível. Sele o orifício com um pequeno pedaço de fita. Cubra completamente o orifício para evitar a desidratação e a morte do embrião durante a incubação subsequente.O terceiro método que vou introduzir é a infusão de células aéreas. onde você incutir um contaminante de gás na célula de ar. Limpe e manuseie os ovos conforme descrito na seção de injeção de células de ar.E então você pode ler ovos até o dia 17. Manuseie os ovos no dia 17 para marcar a área da célula aérea. No dia 18, retire os ovos da incubadora, esterilize a área da célula de ar e os instrumentos, com acetona.E então cuidadosamente fazer dois pequenos buracos em dois lados da célula de ar. Uma é para injeção de gás ou aerossol. A outra é para expandir nosso ar.Controle cuidadosamente o tamanho dos orifícios, de modo que o lado do orifício de injeção seja suficiente para que a agulha do cateter seja inserida, enquanto o diâmetro do orifício em expansão deve ser um pouco maior. Aproximadamente um milímetro de diâmetro. Este é o saco de amostra que usamos para segurar o gás alvo ou aerossol.Você pode substituir com qualquer dispositivo que você usar. Despeje suavemente 10 mL de gás ou aerossol em uma seringa. E então, cuidadosamente anexar a seringa à nossa agulha de cateter com o controle remoto da agulha interna para que ela seja macia.Insira suavemente esta agulha do cateter no orifício de infusão. Uma vez lá, aplique pressão contra a agulha do cateter. Isto é para minimizar o vazamento do local da injeção.Outro dedo pode ser colocado ao redor com o orifício de expulsão para a sua confirmação de infusão. Se você fizer a infusão suavemente, o fluxo de ar do orifício de expulsão deve ser facilmente sentido. É o ar original na célula aérea sendo expulso.Quando a infusão estiver pronta, sele os dois orifícios imediatamente. Essas fitas e o retorno dos ovos à sua incubadora. Posso apresentar nosso processo de avaliação de ponto final.Anestesiar totalmente os animais com pentobarbital de 33 mg/kg. Injeção ip testada pelas aberturas. Em seguida, coloque galinhas na mesa de operação.Esterilize a área do abdômen e os eletrodos com etanol. Em seguida, insira dois eletrodos de agulha de dois lados do abdômen sub continuamente. Certifique-se de que as agulhas não entram na cavidade do abdômen levantando um pouco a pele.E insira a agulha de lá. Uma vez inserida, empurre cuidadosamente a agulha para a frente até atingir o lado da cavidade torácica. Certifique-se de que a agulha não vá fundo no corpo ou se retire da pele.Em seguida, faça as medições com um instrumento eletrocardiográfico. Outros instrumentos de seminário capazes de ECG também podem ser usados. Este é o nosso segundo método de avaliação de pontos finais é mapear para Motrin.Esta é a seção transversal do coração no caminho do HME. Este é o ventrículo certo com o que vamos medir. Para fazer isso, usamos duas réguas.Régua 1, e régua 2. Agora nós apenas copiamos a régua um para a tela e redimensioná-lo para o tamanho apropriado e, em seguida, girar isso. E nós movemos para que as duas extremidades da linha horizontal repousam nas duas extremidades das 3 paredes do ventrículo direito.E agora temos sete linhas de medição que atravessam nossa parede de ventrículo direito. Agora nós copiamos a régua secundária para a imagem também. Nós também redimensioná-lo um pouco e girar e substituir isso para que ele seja colocado da mesma forma.Esta linha horizontal vai paralelamente com a parede externa do ventrículo direito. E o perpendicular atravessaria o ponto onde as linhas de matéria branca do governante se encontram com a parede interna ou o ventrículo direito. E então fazemos pontos de medição para que possa ser medido mais tarde com imagem J.Repetimos esse processo 7 vezes por amostra, de modo que nossa medição representativa do ventrículo direito.Vou te mostrar um resumo dos resultados atuais. Esta é a injeção de PFOA no ovo antes da incubação, e você pode ver que com o aumento dos da injeção a concentração de soro LPF no soro aumentou efetivamente. Pela demonstração, a eficácia da micro injeção.Você pode ver que A é controle, e o B, é onde o antivírus expresso em grande fluorescência q proteína foi injetado. Você pode ver uma forte fluorescência. E esta é a demonstração para a eficácia da infusão de epitélio.Você pode ver que com a infusão, mudanças dramáticas de fibra óptica foram observadas no tecido do miocárdio. Ok. E você também pode ver que os intervalos R-R das galinhas incubadoras 0, 1 e 2 semanas. Também mudou significativamente após a infusão com escapamento diesel.Indicando que você leva em conta isso, este método. Aqui, você também pode ver que a eficácia da infusão de epitélio neste exemplo. você pode ver que os ventrículos certos do coração efetivamente aumentaram depois de ser aerossol infundido com escape diesel.E também, claro, aqui estamos usando os métodos histomorfométricos. Nós apenas mostramos a você. Isso é bastante eficaz. Ok.Estes são todos os métodos que vou apresentar a você. Espero que isso possa facilitar o trabalho de outras pessoas com embriões de frango como uma poderosa ferramenta de pesquisa na Toxicologia do Desenvolvimento. Tenha um bom dia.

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Research

JoVE Journal

Developmental Biology

3.9K Views.  Qingdao University. Hello everyone. I am Qixiao Jiang, Associate Professor at Department of Toxicology, School of Public Health at Qingdao University. On behalf of my research group, I am going to present the assets of using the chicken embryo in development of our cardio toxicity assessment.Chicken embryo is a classical developmental model that has multiple advantages like easy manipulation, high accessibility, closed independent system, et cetera. Working with multiple environmental pollutants, such as ...