Эта модель была разработана при финансовой поддержке Министерства науки и технологий Тайваня (MOST 109-2320-B-030-006-MY3). Эта рукопись была отредактирована Wallace Academic Editing.

Все эксперименты на животных проводились в соответствии с Руководством по уходу и использованию лабораторных животных, опубликованным Национальными институтами здравоохранения США (публикация NIH No 85-23, пересмотрена в 1996 году). Протокол исследования был одобрен и в соответствии с ...

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов в связи с публикацией данной статьи.

Предлагаемый двусторонний протокол ИК-ОПП подходит для изучения механизма гипоперфузионного и реперфузионного повреждения обеих почек. Протокол предполагает, что легкие мыши, общая анестезия изофлураном, дорсолатеральный подход к операции и поддержание температуры тела во время оп?...

Остановка сердца происходит более 80 000 раз в годв Соединенных Штатах 1,2. Смертность от остановки сердца чрезвычайно высока 3,4,5,6. ОПП является основным фактором риска, связанным с высокой смертностью и неблагоприятными неврологическими исходами у пациентов с остановкой сердца после ROSC 7,8,9,10,11,12,13. Выздоровление после ОПП является хорошим предиктором благоприятных неврологических исходов и выписки из стационара14,15,16. Тем не менее, эффективные методы лечения ИК-ОПП до сих пор отсутствуют 15,16,17,18,19. Для дальнейшего улучшения клинических исходов заболевания требуются дополнительные терапевтические стратегии.
ИК-ОПП с двусторонней ишемией почки является одной из животных моделей, используемых для исследования ОПП 20,21,22,23,24,25,26. Модели ИК-ОПП почек на животных менее сложны, чем модель ИК-повреждения всего тела для изучения ОПП у пациентов с внезапной остановкой сердца после ROSC 6,27,28,29,30. Это означает, что стабильных результатов на почечной модели ИК-ОПП на животных легче достичь из-за наличия меньшего количества искажающих факторов в экспериментах. Кроме того, протоколы ИК-ОПП почек обычно включают одностороннюю или двустороннюю окклюзию ножки почки. Условия в экспериментах по двустороннему почечному ИК-ОПП сопоставимы с клиническими условиями ОПП после ROSC у пациентов с внезапной остановкой сердца после успешной сердечно-легочной реанимации. Несмотря на то, что патологические характеристики почек в обеих моделях отражают патологические характеристики ИР-повреждения почек человека 31,32,33, подход с двусторонней ишемией почек более актуален для ОПП при патологических состояниях человека, таких как сердечная недостаточность, вазоконстрикция и септический шок 35. Двусторонние почечные модели ИК-ОПП на животных подходят для исследований, посвященных почечным ИК-повреждениям при остановке сердца после ROSC.
Двусторонние почечные модели ИК-ОПП связаны с техническими трудностями, сложностью эксперимента и длительностью операции 23,26,32,33,35,36. Для преодоления этих технических трудностей в настоящем исследовании был разработан надежный протокол двустороннего исследования ИК-ОПП на мышах путем внесения некоторых технических изменений. Предложенный протокол привел к меньшему количеству хирургических осложнений, меньшему повреждению тканей и снижению вероятности летальности во время операции. Таким образом, он может быть использован для изучения патофизиологических процессов ОПП после ROSC для разработки новых терапевтических стратегий против гипоперфузионного и реперфузионного поврежденияпочек 37,38,39.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Absorbable Suture, 6-0</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J510G-BX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine solution</td>
			<td>Shineteh Istrument</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>PHR1452</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton balls</td>
			<td>Shineteh Istrument</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11051-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Shineteh Istrument</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal Critical Care Inc.</td>
			<td>26675-46-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moria Vessel Clamp</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18320-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olsen-Hegar needle holder</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12002 - 12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>Shineteh Istrument</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blades</td>
			<td>Shinva</td>
			<td>s2646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Animal Anesthesia Machine</td>
			<td>Sheng-Cing Instruments Co.</td>
			<td>STEP AS-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14072 - 10</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

technical refinement of a bilateral renal ischemia-reperfusion mouse model for acute kidney injury research

Остановка сердца представляет собой серьезное бремя для общественного здравоохранения. Острое повреждение почек (ОПП) является неблагоприятным маркером у людей, перенесших остановку сердца после восстановления спонтанного кровообращения (ROSC) после успешной сердечно-легочной реанимации. И наоборот, восстановление функции почек после ОПП является предиктором благоприятных неврологических исходов и выписки из стационара. Тем не менее, эффективное вмешательство для предотвращения повреждения почек, вызванного остановкой сердца после ROSC, отсутствует, что позволяет предположить, что требуются дополнительные терапевтические стратегии. Почечная гипоперфузия и реперфузия являются двумя патофизиологическими механизмами, которые вызывают ОПП после остановки сердца. Животные модели ишемически-реперфузионно-индуцированного ОПП (ИК-ОПП) обеих почек сопоставимы с пациентами с ОПП после РОСК в клинических условиях. Тем не менее, анализ ИК-ОПП обеих почек технически сложен, поскольку модель связана с высокой смертностью и широкими вариациями повреждения почек, что может повлиять на анализ. Были отобраны легкие мыши, помещены под общий наркоз изофлураном, подвергнуты хирургическому вмешательству с дорсолатеральным доступом, и температура их тела поддерживалась во время операции, тем самым уменьшая повреждение тканей и устанавливая воспроизводимый протокол исследования острого почечного ИК-ОПП.

Перед дальнейшим микроскопическим или молекулярным анализом необходимо оценить качество двусторонней почечной операции ИК-ОПП. Во время операции ишемия почки должна быть подтверждена путем наблюдения за тем, изменила ли почка цвет с розового на темно-красный вскоре после того, как но...

Watch this Scientific Journal Video about Technical Refinement of a Bilateral Renal Ischemia-Reperfusion Mouse Model for Acute Kidney Injury Research at JoVE.com

Technical Refinement of a Bilateral Renal Ischemia-Reperfusion Mouse Model for Acute Kidney Injury Research

В этом исследовании был разработан протокол, ориентированный на техническое усовершенствование мышиной модели двусторонней почечной ишемии-реперфузии для исследования острого повреждения почек.

Техническое уточнение двусторонней мышиной модели почечной ишемии-реперфузии для исследования острого повреждения почек

Cardiac arrest poses a large public health burden. Acute kidney injury (AKI) is an adverse marker in survivors of cardiac arrest following the return of ...

Острое повреждение почек является основным фактором риска, связанным с высокой смертностью у пациентов с остановкой сердца после восстановления кровообращения. Эта процедура может быть выполнена для того, чтобы вызвать острое повреждение почек. Этот протокол заключается в том, чтобы вызвать реперфузию ишемии почки точно, безопасно и последовательно.Демонстрировать процедуру будет Хуан Ченг-Вэй, ассистент из моей лаборатории. Для начала поместите восьминедельного самца мыши C57BL/6 под наркозом в положение лежа на операционной платформе с электрическим одеялом для поддержания температуры тела. Затем коснитесь спины, найдите поясничный отдел позвоночника и найдите реберно-вертебральные углы под обеими сторонами последнего ребра.Нанесите лосьон для удаления волос для бритья и потрите волосы по обеим сторонам реберно-тебрального угла. Продезинфицируйте операционную область с помощью раствора Бетадина и 75%-ного спирта с помощью ватных шариков. Используйте щипцы с тонким кончиком, чтобы осторожно приподнять кожу ниже левого реберно-вертебрального угла.Затем ножницами сделайте сантиметровый косой дорсолатеральный разрез по линиям натяжения кожи от поясничной срединной линии на левом боку. Затем разрежьте мышечную стенку левого бока, чтобы визуализировать левую почку. Осторожно надавите и отделите левую почку от окружающих тканей щипцами.Затем определите ножку почки. Зажмите левую почечную ножку микрососудистым зажимом. Подтвердить ишемию можно видимым изменением цвета почек от розового до темно-красного.Чтобы избежать пересыхания во время пережатия, накройте почку стерильными ватными шариками, смоченными солевым раствором. Через 25 минут откройте левый микрососудистый зажим, чтобы начать реперфузию левой почки. Верните почку в брюшную полость.Закройте брюшную полость рассасывающимся шовным материалом 6/0. Наблюдайте за мышью до тех пор, пока она не начнет свободно двигаться и питаться. Здесь показана ишемия почки после пережатия ножки почки.Изменение цвета почек с розового на темно-красный свидетельствует о том, что перфузия почек стала недостаточной. По сравнению с контрольной группой, сывороточные уровни азота мочевины и креатинина в крови повышались через два дня после почечной реперфузии. Этот метод прокладывает исследователям путь к изучению новых терапевтических подходов против острого повреждения почек.

technical-refinement-bilateral-renal-ischemia-reperfusion-mouse-model

Research

JoVE Journal

Medicine

1.8K Views.  Fu Jen Catholic University. Acute kidney injury is a major risk factor associated with high mortality in patients with cardiac arrest after return of circulation. This procedure can be performed to induce acute kidney injury. This protocol is to induce renal ischemia reperfusion accurately, securely, and consistently.Demonstrating the procedure will be Huang Cheng-Wei, an assistant from my laboratory. To begin, place an anesthetized eight-week-old C57BL/6 male mouse in the prone position on a surgery platform wit...