عزل الشريان السري الإنسان خلايا العضلات الملساء (HUASMC)

Summary

يتم استخدام الحبل السري لعزل خلايا العضلات الملساء بطرق مختلفة. في هذا العمل استخدمنا العلاج الأنزيمية لعزل خلايا العضلات الملساء.

Abstract

الحبل السري البشري (جامعة كاليفورنيا) هو عينة البيولوجية التي يمكن الحصول عليها بسهولة بعد الولادة. هذه العينة البيولوجية ، معظم الوقت ، وتجاهل جمعها لا ينطوي على أي خطر إضافة إلى صحة الأطفال حديثي الولادة أو والدة. وعلاوة على ذلك لا تثار مخاوف أخلاقية. وتتألف لجامعة كاليفورنيا واحد واثنين من الشرايين الوريد من الخلايا البطانية التي على حد سواء (ECS)

Protocol

1. ويتم الحصول على قطع الشرايين من جامعة كاليفورنيا من 3-7 سم.
2. تمت إزالة بعناية هلام وارتون الذي يحيط بقطع الشرايين مع المقص.
3. تم إدخال إبرة حادة في نهاية وجود القطر الخارجي لل1MM 0.6 - 7mm حول واحدة من نهاية تشريح الشرايين.
4. لإزالة ما تبقى في الدم داخل الأوعية ، وتعقد عموديا الشرايين وperfused مع حوالي 20 إلى 40 مل ، المحلول الملحي الفيزيولوجي (PSS) ، وذلك باستخدام الحقنة 20 مل متصلة إبرة. إذا لزم الأمر ، وتكرر هذه الخطوة الغسيل لعدة مرات.
5. وتكرر نفس الإجراء باستخدام RPMI 1640 تستكمل مع 10 ٪ من مصل بقري جنيني (FBS).
6. وأغلقت واحدة من أقصى الأوعية الدموية. تم توصيل حقنة 10 مل إلى الإبرة وperfused مع 3 مل من كولاجيناز النوع الأول (800 وحدة / مل في محلول ملح التخزين المؤقت للهانك (HBSS)). ثم extremityof الأخرى كما أغلقت السفينة.
7. وقد حضنت السفينة مع الفوسفات مخزنة المحلول الملحي (PBS) ، لمدة 15 دقيقة عند 37 درجة مئوية مع الانفعالات.
8. بعد أن ينتهي من قطع السفينة إلى جمع SMCs الحرة. ويروي شرايين مع ما يقرب من 20 حتي 40 مل من DMEM - F12 تستكمل مع 5 ٪ من FBS والمضادات الحيوية لأنبوب 50 مل.
9. وكان طرد الأنبوب في درجة حرارة الغرفة (250 غرام ، 8 دقائق) ، وكان بيليه معلق الخلية في 5 مل من DMEM - F12 تستكمل مع 5 ٪ من FBS.
10. تم نقل تعليق خلية إلى المغلفة الكولاجين T - القارورة والمحتضنة في 37 درجة مئوية ، في ظل مناخ 5 ٪ CO ₂ مرطب.
11. بعد إزالة 5 16 ساعة ، والخلايا غير ملتصقة وdrebis الخلوية ، واضافة 5 مل من المتوسط ​​الثقافة وحضنت الخلايا عند 37 درجة مئوية ، في ظل مناخ 5 ٪ CO ₂ مرطب.
12. تم تغيير ثقافة وسائل الإعلام كل خلية 2 3 أيام ، حتى وصلت SMCs التقاء.
13. بعد تحقيق التقاء الخلايا أنها كانت المصنفة 25 سم الى اثنين أو ثلاثة من ² T - القوارير.

تنظيف

1. تخلص من الإبر الحادة في حاويات.
2. تخلص من المحاقن في حاوية بيولوجية كبيرة.
3. تطرح جميع الأنسجة داخل حقيبة صغيرة بيولوجية. إغلاق الكيس والتجميد في -20 درجة مئوية حتى الحرق.
4. نقع في جميع الصكوك مبيد للفيروس على الأقل 10 دقيقة.
5. عودة إلى البراد وسائط غير مستخدمة.
6. التخلص من النفايات في قفازات واقية.

Discussion

يمكن استخدام SMC كنماذج لفحوصات المخدرات في المستقبل مع المضيقة ، لعزل وتوصيف هيكليا قنوات الكالسيوم من نوع L ، لدراسة الجوانب الخلوية والجزيئية وظيفة الأوعية الدموية واستخدامها في هندسة الأنسجة. ECS SMCs وأساسية لتطوير المواد الحيوية الجديدة التي يمكن استخدامها في إنت?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
DMEM-F12	Sigma-Aldrich	095K8311
Fetal bovine serum (FBS)	Biochrom AG	0117T
RPMI 1640	GIBCO, by Life Technologies	3103806
Collagen	Sigma-Aldrich	067K2302
Antibiotic			10 μL/ 1 mL of medium
Scissors			Sterilized
Needle			Diameter of 0.6-1mm
Syringe			10 - 20 mL
Physiological Saline Solution (PSS)			20-40 mL per artery
Collagenase type I	Sigma-Aldrich	047K1052	3 mL per artery
Hank’s Buffered Salt Solution(HBSS)			Diluted collagenase
Phosphate buffered saline solution (PBS)			Warmed to 37°C