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  • 摘要
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摘要

脐带是用来隔离平滑肌细胞,通过不同的方式。在这项工作中,我们使用的孤立的平滑肌细胞的酶处理。

摘要

人类脐带(UC)是刚出生后可以很容易地获得一个生物样品。这是生物样品,大部分时间,丢弃收集并不意味着任何额外风险的新生儿或母亲小号的健康。而且没有提出的伦理问题。 UC是由一个静脉和动脉从两个内皮细胞(ECS)

研究方案

  1. 动脉获得3-7厘米UC件。
  2. 沃顿商学院的果冻周围动脉切割用剪刀小心取出。
  3. 从解剖动脉的一端插入一个钝针,外径0.6 - 1MM约7mm。
  4. 为了清除血管内的剩余血液,动脉垂直举行,约20至40毫升,生理盐水溶液(PSS)灌注,用20 mL注射器连接到一根针。如果有必要,这种洗涤步骤重复多次。
  5. RPMI 1640培养液含10%胎牛血清(FBS),重复使用相同的程序。
  6. 下肢血管之一被关闭。被连接到一个10毫升的注射器针和胶原酶I型(汉克的缓冲盐溶液(HBSS)800单位/毫升)与3毫升灌注。那么其他extremityof的船只也被关闭。
  7. 该船孵育,用磷酸盐缓冲生理盐水溶液(PBS),15 ° C与搅拌37分钟,。
  8. 后该船只的两端分别削减收集免费的校董会。动脉灌注辅以5%FBS和50 mL试管抗生素的DMEM - F12,约20至40毫升。
  9. 在室温(250克,8分钟)离心管,并辅以5%胎牛血清的DMEM - F12 5毫升悬浮细胞沉淀。
  10. 细胞悬液转移到胶原蛋白涂层T型瓶和培养在37℃,5%的CO 2饱和湿度下。
  11. 5月16日H,非贴壁细胞和细胞drebis被拆除后,加入5毫升培养基和细胞培养在37℃,5%的CO 2饱和湿度下。
  12. 细胞培养介质改为每2 3天,直到校董会达到汇合。
  13. 后细胞达到汇合,他们分别接种到两个或三个25 厘米2个 T -烧瓶。

净化

  1. 处置锐器容器针。
  2. 处置中的生物危害大容器的注射器。
  3. 所有组织放入一个小的生物危害袋。关闭袋,并冻结在-20摄氏度,直到焚烧。
  4. 至少10分钟,浸泡在virucide的所有仪器。
  5. 将未使用的媒体冰箱。
  6. 在生物危险废物手套处置。

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讨论

校董会可以被用来作为未来大蟒药物检测模型,分离和结构表征L -型钙通道,血管功能的细胞和分子方面的研究,并在组织工程中使用。平滑肌细胞和内皮细胞是根本,为发展新的生物材料,可用于生产半合成的血液用于人类的船只。

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致谢

医院阿马托西洋,葡萄牙布朗库堡。
医院索萨马丁斯,瓜尔达葡萄牙。

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材料

NameCompanyCatalog NumberComments
DMEM-F12Sigma-Aldrich095K8311
Fetal bovine serum (FBS)Biochrom AG0117T
RPMI 1640GIBCO, by Life Technologies3103806
CollagenSigma-Aldrich067K2302
Antibiotic10 μL/ 1 mL of medium
ScissorsSterilized
NeedleDiameter of 0.6-1mm
Syringe10 - 20 mL
Physiological Saline Solution (PSS)20-40 mL per artery
Collagenase type ISigma-Aldrich047K10523 mL per artery
Hank’s Buffered Salt Solution(HBSS)Diluted collagenase
Phosphate buffered saline solution (PBS)Warmed to 37°C

参考文献

  1. Van Rijen, H. Gap junctions in human umbilical cord endothelial cells contain multiple connexins. The American journal of physiology. 272 (1 PT 1), C117-C117 (1997).
  2. Martín de Llano, J. Procedure to consistently obtain endothelial and smooth muscle cell cultures from umbilical cord vessels. Translational Research. 149 (1), 1-9 (2007).
  3. Jaffe, E. A., Nachman, R. L., Becker, C. G., Minick, C. R. Culture of human endothelial cells derived from umbilical veins. Identification by morphologic and immunologic criteria. J Clin Invest. 52 (11), 2745-2756 (1973).
  4. Cairrão, E., Santos-Silva, A., Alvarez, E., Correia, I., Verde, I. Isolation and culture of human umbilical artery smooth muscle cells expressing functional calcium channels. In Vitro Cellular & Developmental Biology-Animal. 45 (3), 175-184 (2009).

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