人脐动脉平滑肌细胞的分离（HUASMC）

摘要

脐带是用来隔离平滑肌细胞，通过不同的方式。在这项工作中，我们使用的孤立的平滑肌细胞的酶处理。

摘要

人类脐带（UC）是刚出生后可以很容易地获得一个生物样品。这是生物样品，大部分时间，丢弃收集并不意味着任何额外风险的新生儿或母亲小号的健康。而且没有提出的伦理问题。 UC是由一个静脉和动脉从两个内皮细胞（ECS）

研究方案

1. 动脉获得3-7厘米UC件。
2. 沃顿商学院的果冻周围动脉切割用剪刀小心取出。
3. 从解剖动脉的一端插入一个钝针，外径0.6 - 1MM约7mm。
4. 为了清除血管内的剩余血液，动脉垂直举行，约20至40毫升，生理盐水溶液（PSS）灌注，用20 mL注射器连接到一根针。如果有必要，这种洗涤步骤重复多次。
5. RPMI 1640培养液含10％胎牛血清（FBS），重复使用相同的程序。
6. 下肢血管之一被关闭。被连接到一个10毫升的注射器针和胶原酶I型（汉克的缓冲盐溶液（HBSS）800单位/毫升）与3毫升灌注。那么其他extremityof的船只也被关闭。
7. 该船孵育，用磷酸盐缓冲生理盐水溶液（PBS），15 ° C与搅拌37分钟，。
8. 后该船只的两端分别削减收集免费的校董会。动脉灌注辅以5％FBS和50 mL试管抗生素的DMEM - F12，约20至40毫升。
9. 在室温（250克，8分钟）离心管，并辅以5％胎牛血清的DMEM - F12 5毫升悬浮细胞沉淀。
10. 细胞悬液转移到胶原蛋白涂层T型瓶和培养在37℃，5％的CO ₂饱和湿度下。
11. 5月16日H，非贴壁细胞和细胞drebis被拆除后，加入5毫升培养基和细胞培养在37℃，5％的CO ₂饱和湿度下。
12. 细胞培养介质改为每2 3天，直到校董会达到汇合。
13. 后细胞达到汇合，他们分别接种到两个或三个25 ^厘米2个 T -烧瓶。

净化

1. 处置锐器容器针。
2. 处置中的生物危害大容器的注射器。
3. 所有组织放入一个小的生物危害袋。关闭袋，并冻结在-20摄氏度，直到焚烧。
4. 至少10分钟，浸泡在virucide的所有仪器。
5. 将未使用的媒体冰箱。
6. 在生物危险废物手套处置。

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讨论

校董会可以被用来作为未来大蟒药物检测模型，分离和结构表征L -型钙通道，血管功能的细胞和分子方面的研究，并在组织工程中使用。平滑肌细胞和内皮细胞是根本，为发展新的生物材料，可用于生产半合成的血液用于人类的船只。

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材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
DMEM-F12	Sigma-Aldrich	095K8311
Fetal bovine serum (FBS)	Biochrom AG	0117T
RPMI 1640	GIBCO, by Life Technologies	3103806
Collagen	Sigma-Aldrich	067K2302
Antibiotic			10 μL/ 1 mL of medium
Scissors			Sterilized
Needle			Diameter of 0.6-1mm
Syringe			10 - 20 mL
Physiological Saline Solution (PSS)			20-40 mL per artery
Collagenase type I	Sigma-Aldrich	047K1052	3 mL per artery
Hank’s Buffered Salt Solution(HBSS)			Diluted collagenase
Phosphate buffered saline solution (PBS)			Warmed to 37°C