نماذج الماوس لتصلب الشرايين الكسب غير المشروع

Summary

نحن تصف بروتوكولات لدينا arteriosclerois الكسب غير المشروع الماوس (GA) نماذج التي تنطوي على مداخلة من شريحة سفينة الماوس إلى المتلقي من نفس السلالة الفطرية. بواسطة backcrossing بتغيرات جينية إضافية إلى الجهة المانحة السفينة، يمكن للنموذج تقييم تأثير جينات معينة على GA.

Abstract

arteriosclerois الكسب غير المشروع (GA)، وتسمى أيضا اعتلال وعائي طعم خيفي، هي آفة مرضية أن يتطور مع مرور أشهر إلى سنوات في الأعضاء المزروعة التي تتميز منتشر، تضيق كفافي من شجرة الأوعية الدموية الكسب غير المشروع بأكمله. العنصر الأكثر أهمية من GA المرضية هو انتشار السلس خلايا تشبه العضلات داخل البطانية. عندما يتم موسط شريحة الشريان التاجي الإنسان في أبهر الأشعة تحت الكلوي من الفئران العوز المناعي، وintimas يمكن توسيع ردا على خلايا T الإنسان نقل adoptively خيفي إلى الجهة المانحة الشريان أو خارجية الإنسان الإنترفيرون γ في غياب الخلايا التائية البشرية. مداخلة من الشريان الأورطي الفار من سلالة واحدة إلى أخرى المستلم سلالة الماوس يقتصر كنموذج لهذا الرفض المزمن في البشر لأن استجابة الرفض الخلية بوساطة الحادة في هذا النموذج الماوس يلغي تماما كل الخلايا المانحة المستمدة من الأوعية الدموية من الكسب غير المشروع في غضون شهرين الى ثلاثة أسابيع. وقد وضعنا مؤخرا اثنين متر جديدة[أوس] نماذج للتحايل على هذه المشاكل. النموذج الأول ينطوي على مداخلة من شريحة سفينة من ماوس الذكور إلى مستلم الإناث من نفس السلالة الفطرية (C57BL/6J). يتم توجيه رفض الكسب غير المشروع في هذه الحالة فقط ضد مستضدات التوافق النسيجي طفيفة المشفرة بواسطة كروموسوم Y (موجودة في الذكور ولكن ليس الأنثى) واستجابة الرفض الذي تستتبعه هو كسلان بما فيه الكفاية للحفاظ على خلايا العضلات الملساء المانحة المستمدة لعدة أسابيع. النموذج الثاني ينطوي فاصلة شريحة الشريان من النوع البري C57BL/6J المانحة الماوس إلى ماوس المضيف من نفس السلالة والجنس التي تفتقر إلى مستقبلات للالإنترفيرون γ تليها إدارة الماوس الإنترفيرون γ (تسليمها عن طريق العدوى من الفأرة الكبد مع متجه الفيروسة الغدانية، وليس هناك رفض في هذه الحالة لأن كلا من الجهات المانحة والمتلقية الفئران هي من نفس السلالة والجنس ولكن الخلايا المانحة العضلات الملساء تتكاثر ردا على خلوى في حين أن الخلايا المشتقة من المضيف، وتفتقر إلى مستقبلات للهذا خلوى، لا تستجيب. بواسطة backcrossing بتغيرات جينية إضافية إلى الجهة المانحة السفينة، كلا النموذجين يمكن استخدامها لتقييم تأثير جينات معينة على GA التقدم. هنا، نحن تصف بروتوكولات مفصلة لدينا الماوس GA النماذج.

Introduction

arteriosclerois الكسب غير المشروع (GA)، وتسمى أيضا اعتلال وعائي طعم خيفي، هي آفة مرضية أن يتطور مع مرور أشهر إلى سنوات في الأعضاء المزروعة التي تتميز منتشر، تضيق كفافي من كامل شجرة الأوعية الدموية الكسب غير المشروع ^7. قد يسبب المراحل المبكرة التضيق غريب الأطوار والتنسيق التي هي أكثر وضوحا في الشرايين، وبالتالي تشبه على نحو أوثق التضيق ينظر في تصلب الشرايين التقليدية. فقدان التجويف السفن الكسب غير المشروع نتائج من التوسع باطنة بسبب تسلل الخلايا T المضيفة والضامة وخصوصا لتراكم المصفوفة خارج الخلية والعضلات الملساء مثل الخلايا نشأت من الكسب غير المشروع، مضيف أو كليهما ^{5، 13، 19،} أن يتم تعويض كاف بواسطة الخارج إعادة عرض السفينة. في المغايرة القلب، الآفات الأكثر أهمية هي تلك سريريا في الشرايين التاجية نخابي وداخل عضلة القلب. في نهاية المطاف، سوف GA الشرايين التاجية يسبب فشل القلب الإقفاري. GA هو السبب الرئيسي في وقت متأخر غرام القلبفقدان الخلف. والتضيق من GA تتوقف عند خطوط الدرز، تورط بقوة استجابة المضيف لalloantigens الكسب غير المشروع في المرضية ويقودنا لتصنيف GA باعتبارها شكلا من أشكال الرفض المزمن ^3. ومع ذلك، قد غيرها من إصابة الشرايين أشكال تزيد من خطر GA، إما من خلال زيادة العبء صافي الإصابة أو عن طريق تكثيف و / أو تحوير استجابة منيع للمستضد الخيفي. يتم الاحتفاظ الخلية (EC) بطانة بطانة الشرايين الكسب غير المشروع في GA الإنسان والمناطق الأكثر سطحية من البطانية المتاخمة للبطانة EC هو موقع تسلل بشدة من المضيف المستمدة من الإنترفيرون γ إنتاج خلايا تي والضامة ^11؛ في بعض المرضى يرتبط GA مع تطور alloantibodies المانحة الخاصة التي تربط لالكسب غير المشروع EC ¹⁶ ولكن الأوعية تظهر أدلة تذكر للنخر فيبرينية الذي هو سمة من الرفض الحاد الأجسام المضادة التي تتوسط فيها ^11.

العنصر الأكثر أهمية من GA المرضية هوانتشار الخلايا على نحو سلس مثل العضلات داخل البطانية، وإذا كان يمكن القبض على هذه العملية، من غير المرجح أن تقدم GA. وكان العمل السابق من مجموعتنا أظهرت أن intimas من قطاعات الشريان التاجي الإنسان موسط في أبهر الأشعة تحت الكلوي من الفئران العوز المناعي توسيع استجابة لخلايا نقل adoptively T الإنسان خيفي إلى الجهة المانحة الشريان وأن هذه العملية يمكن أن تحول دون تحييد الإنسان الإنترفيرون γ ^18. الخارجية علاوة على ذلك الإنسان الإنترفيرون γ يمكن أن تسبب باطنة (وسطي) انتشار الخلايا العضلية الملساء (VSMC) الأوعية الدموية في هذه الطعوم الشريانية في غياب الخلايا التائية البشرية ^{15 و 17.} (من المهم أن نلاحظ أن الإنسان والفأر الإنترفيرون γ لا يعبرون الأنواع، مستبعدا الآثار غير المباشرة على المضيف الماوس في هذا النظام التجريبي.) هذه نماذج الماوس أنسنة والاستفادة من تلخص الإنسان T خلية / التفاعلات الخلية الأوعية الدموية وباطنة وتتكون إلى حد كبير من الآفات الخلايا البشرية (أي الكسب غير المشروع المستمدة)،كما لوحظ في العينات السريرية، لكنها لا تلخص تماما الوضع السريري لأنها تتجاهل دور الضامة المضيف وأنواع الخلايا ربما الأخرى المشاركة في الآفات زرع السريرية. A نموذج الفأر التقليدية من هذه العملية يمكن أن تعالج هذه المشكلة نظريا، استكمال أوجه القصور في نموذج إنساني من خلال إشراك الجهاز المناعي المضيف كاملة وتوفير ميزة إضافية تتمثل في السماح للقوة النهج الوراثية الماوس ليتم تطبيقها على جورجيا. نماذج الماوس الأكثر استخداما على نطاق واسع اثنين تنطوي على زرع القلب والشريان منتبذ مثلي زرع ^1. مصنوعة من الآفات التي تنمي في شرايين القلب ترقيع منتبذ إلى حد كبير من خلايا المضيف، على الأرجح من أصل نخاع العظام، في حين أن الخلايا البطانية في الشرايين في ترقيع قلب الإنسان هي في الغالب من أصل الكسب غير المشروع ^{5، 13، 19.} هذا هو الفرق الكبير الذي أدى بنا إلى تطوير نماذج الماوس بديل. مداخلةوالشريان الأورطي الفار من سلالة واحدة إلى أخرى المستلم سلالة الفأر هو محدود حتى أكثر كنموذج لهذا الرفض المزمن في البشر لأن الخلية بوساطة الحاد استجابة الرفض في هذا النموذج الماوس يلغي تماما كل خلايا الأوعية الدموية المانحة المستمدة من الكسب غير المشروع في غضون شهرين الى ثلاثة ¹⁹ أسابيع. وبالتالي، فإن تغييرات لاحقة شهدت في قطاع سفينة موسط هي وحدها استجابة الخلايا المضيفة التي إسكانها في decellularized سفينة السقالة، وخلق حالة مصطنعة للغاية من أهمية محدودة كنموذج للتغيرات في الأوعية الكسب غير المشروع التي تحدث في العيادة. وقد وضعنا مؤخرا اثنين من نماذج الماوس الجديد للتحايل على هذه المشاكل ^21. النموذج الأول ينطوي على مداخلة من شريحة سفينة من ماوس الذكور إلى مستلم الإناث من نفس السلالة الفطرية (C57BL/6J). النموذج الثاني ينطوي فاصلة شريحة الشريان من النوع البري C57BL/6J المانحة الماوس إلى ماوس المضيف من نفس السلالة والجنس التي تفتقر إلى تفصيلeptor لالإنترفيرون γ (الإنترفيرون γR-KO)، يليه إدارة الماوس الإنترفيرون γ (تسليمها عن طريق العدوى من كبد الفأر مع متجه الفيروسة الغدانية. هنا، نحن تصف بروتوكولات مفصلة ومزايا لدينا الماوس GA النماذج.

Protocol

طعم خيفي مسانج الماوس والكسب غير المشروع نموذج زرع

وقد وافق جميع الدراسات على الحيوانات من قبل المؤسسات ورعاية الحيوان لجان استخدام جامعة ييل. لنموذج طعم خيفي، وموسط شرائح الأبهر الصدري من الذكور، 4-5 الاسبوع WT القديمة (C57BL/6J) أو الفئران الإنترفيرون γR-KO في الشريان الأورطي البطني من المتلقي أنثى، الأسبوع WT القديمة 8-12 باستخدام نهاية إلى نهاية المجهرية تقنية توصيلي (انظر المقبل للحصول على التفاصيل). للحصول على نموذج الكسب غير المشروع مسانج، وموسط شرائح للأبهر الصدري من الذكور، 4-5 الاسبوع الفئران WT القديم إلى أبهر البطن من الذكور، 8-12 أسبوع من العمر الإنترفيرون γR1-KO باستخدام نهاية إلى نهاية المجهرية توصيلي تقنية. في 1 أسبوع بعد العمل الجراحي، تم تلقيح الحيوانات الرابع مع ​​Ad5.CMV الماوس الإنترفيرون γ أو Ad5.CMV-LacZ (Qbiogene) في 1 × 10 ⁹ PFU. مصل الماوس الإنترفيرون γ تم قياس مستويات بواسطة ELISA (eBioscience) في 1 و بعد 5 أسابيع الإدارة اتش. بعض الحيوانات تلقى BrdU(سيغما الدريخ) في 100 ملغ / كغ الشوري لمدة 2 اسابيع قبل التضحية.

نهاية إلى نهاية المجهرية تقنية توصيلي (سيتم اتخاذ فيديو لهذا الجزء):

1. إجراء المانحة

1. تخدير الفئران مع الحقن داخل الصفاق المانحة من الكيتامين (50 ملغ / كلغ) وزيلازين (10 ملغ / كلغ).
2. بعد التأكد من التخدير كافية، ضع الفئران المانحة تحت المجهر التشغيل في X8-30 التكبير على صينية في موقف ضعيف، واستخدام اليود الوسادة الإعدادية والإعدادية الوسادة الكحول لإعداد جدار الصدر.
3. شق جدار الصدر الأمامي من خلال الضلوع والحجاب الحاجز لفضح القلب.
4. فتح الأذين الأيمن، وضخ 10 مل من heparinized (100 U / مل) محلول ملحي في البطين الأيسر لطرد الفئران باستخدام حقنة 10 مل مع إبرة عيار 25.
5. يقطع القلب والرئتين لفضح طول الشريان الأورطي الصدري.
6. تشريح الشريان الأورطي الصدري بعناية لتقليل الصدمة مباشرة، حين إلىه تحديد وligate وتقسيم فروع الخشب باستخدام 11-0 خاط بالقرب من الشريان الأورطي.
7. مرة واحدة في الشريان الأورطي الصدري خال من الأنسجة المحيطة بها، واستئصال الأبهر الصدري كامل للزرع.
8. مسح نهاية قطع من الشريان الأورطي المانحة مع heparinized (100 U / مل) محلول ملحي، وتخزينها في نفس الحل على الجليد (حتى 6 ساعة) حتى الزرع.

2. إجراء المتلقي

1. حقن الفئران المتلقي مع كيتوبروفين الملكية الفكرية (5 ملغ / كلغ) لتسكين الألم، وthenanesthetize الفئران مع الكيتامين IP (50 ملغ / كلغ) وزيلازين (10 ملغ / كلغ). الفئران المتلقية هي تخدير عميق في غضون 10 دقيقة لمدة 60-90 دقيقة. أثناء الجراحة، ويتم تقييم مستوى التخدير كل 15 دقيقة بواسطة معسر جدار البطن الأمامي أو القدم باستخدام ملقط. إذا يتفاعل الحيوان إلى المنبهات الضارة في أي وقت أثناء الجراحة، سيتم من قبل SC أو الدردشة تدار جرعة إضافية من الكيتامين وزيلازين (1/4 أو 1/3 جرعة الأصلي)
2. بعد التأكد من التخدير كافية، يحلق الفراء في جدار البطن الأمامي باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية، وتنظيف الجلد باستخدام اليود الإعدادية الوسادة والكحول الاعداديه منصة، وتغطية العينين باستخدام مرهم للعين. أثناء الجراحة، سيتم استخدام تقنيات العقيم التالية للعمليات، بما في ذلك التنظيف طاولة العمليات مع التبييض 10٪، وارتداء قفازات معقمة وباستخدام أدوات معقمة المجهرية (الصكوك تعقيمها بالبخار لبدء العملية، ثم الزجاج الساخن حبة تعقيم الصكوك بين عمليات متعددة، الخ).
3. وضع الفئران المتلقية تحت المجهر التشغيل في التكبير من X8-30 على صينية في موقف ضعيف.
4. شق جدار البطن في خط الوسط من سيفي الشكل إلى العانة، وانتشرت جدار البطن بصرف النظر باستخدام الصغرى ضام لفضح تجويف البطن.
5. سحب الأمعاء متفوق والتفاف بشاش مبلل بمحلول ملحي. الفئران المتلقية تصبح توترت بسبب فقدان هيئة التعليم العالير من خلال الأمعاء تخريجها. فمن المهم للحفاظ على الدفء الحيوان. ومع ذلك، لا يتم استخدام لوحة التدفئة أثناء الجراحة كما انخفاض حرارة الجسم متواضعة ذات فائدة في منع إصابة في العمود الفقري خلال انسداد تدفق الدم الأبهري وكذلك هناك نقل الحرارة غير فعالة مع تدفق الدم الغائب على النصف السفلي من الجسم الفئران.
6. نقل الأعضاء التناسلية دون المستوى، والتفاف مناطق البطن من الفئران المتلقية بشاش المالحة حل مبلل، واستخدامها لسحب المستقيم إلى الجانب الأيمن من البطن. والمروية الأنسجة تتعرض دوريا مع محلول ملحي خلال الزرع.
7. تشريح بصراحة جزء من الشريان الأورطي infrarenal بين السفينة الكلوي قريب والتشعب الأبهري بشكل أقصى وفصل من الوريد الأجوف السفلي (IVC) بعناية.
8. تحديد وligate كل من الفروع الصغيرة التي تنشأ من هذا الجزء من الشريان الأورطي البطني باستخدام مادة البولي أميد 11-0 خياطة حيدة.
9. عبر المشبك الجزء المعزول منالأبهر bdominal باستخدام اثنين من المشابك الأوعية الدموية المجاورة بشكل مباشر 5 مم وبصرف النظر، واحد في كل نهاية.
10. القطع الشريان الأورطي البطني بين المشابك باستخدام الصغرى مقص حاد لإنشاء مواقع توصيلي.
11. يقطع شريحة صغيرة من الشريان الأورطي البطني (تصل إلى 0.4 ملم في الطول) من واحد قطع الشريان الأورطي نهاية المتلقي مقطوع لاستيعاب الكسب غير المشروع الأبهر المانحة.
12. مسح شرائح الأبهر بين المشابك باستخدام محلول ملحي heparinized لإزالة الدم المتبقي. يتم ري قطاعات الأبهر بين المشابك والكسب غير المشروع الأبهر المانحة دوريا مع heparinized (100 U / مل) محلول ملحي (ما يصل الى 40 مل / كجم) خلال مفاغرة.
13. القطع جانبي الشريان الأورطي المانحة مع الدقيقة مقص حاد لإنشاء الكسب غير المشروع شريحة من 2.5 ملم في الطول للزرع.
14. وضع الكسب غير المشروع الأبهر المانحة في موقف مثلي، يفاغر الدانية والقاصية نهاية الكسب غير المشروع المانحة لالدانية والقاصية قطع نهاية المستلم من الشريان الأورطي البطني، على التوالي، مع وضع حد-Tنمط O-نهاية باستخدام مادة البولي أميد 11-0 خياطة حيدة.
15. لالغرز المستمر، ضع الغرز البقاء في 3 و 09:00 المواقف أولا. بين اثنين من الغرز البقاء في كل جانب من الكسب غير المشروع، يفاغر على حد سواء حواف قطع في غرز 3-4 باستخدام الخيوط الجراحية على التوالي، وربط الغرز تشغيل للبقاء الغرز مع عقدة مزدوجة. لأن كلا طبقات من إغلاق مستمرة، يتم زيادة خطر تفزر. يجب أن يكون الكسب غير المشروع الأبهر المانحة في طول المناسبة للاتصال الدانية والقاصية قطع نهاية المستلم من الشريان الأورطي البطني.
16. لالغرز توقف، بناء أربعة مفاغرة في 3 و 09:00 المواقف في كلا الجانبين من الكسب غير المشروع أولا، ويفاغر على حد سواء حواف قطع في غرز 3-4 بين اثنين من الغرز البقاء في كل جانب من الكسب غير المشروع.
17. الافراج عن المشبك البعيدة للسماح بتدفق الوراء في الكسب غير المشروع، وتحديد مواقع النزيف وجعل غرز إضافية في غضون 3 دقائق.
18. بعد التأكد الارقاء مرضية، والإفراج عن المشبك الداني.
19. تأكيد المباح الكسب غير المشروع من قبل وجود نبض قوي في الكسب غير المشروع والجزء المجاور القريب من الشريان الأورطي البطني الأم، وخاصة في الجزء المجاور القاصي من الشريان الأورطي البطني والشريان المساريقي السفلي. النظر في تخثر في مواقع توصيلي إذا كان نبض يقلل في غضون بضع دقائق بعد استعادة تدفق الدم.
20. إرجاع الأمعاء إلى تجويف البطن.
21. خياطة إغلاق جدار البطن باستخدام 5-0 خياطة النايلون في طبقة العضلات وطبقة الجلد، على التوالي.
22. وضع الفئران المتلقي في قفص نظيفة على الجزء العلوي من وسادة التدفئة، والانتظار 1-2 الموارد البشرية لالفئران ليستعيد وعيه والتعافي من التخدير. فمن المهم للحفاظ على الدفء الكافي الحيوان خلال فترة الانتعاش. الحفاظ على الفئران في قفص دافئ وجاف قبل أعقاب الحيوان من التخدير.
23. تقييم وظيفة الحركة من أطرافه الخلفية بعد الشفاء الفئران، ومرة ​​أخرى في اليوم الثاني. وسوف يتم تأكيد عملية جراحية زرع ناجحة طو يتم احترام أي خلل في الأطراف الخلفية في الفئران المتلقية في اليوم الثاني.
24. إدارة الفئران المتلقي مع كيتوبروفين في مياه الشرب (5 ملغ / كغ / د = 27 ميكروغرام / مل في مياه الشرب) لمدة 48 ساعة. إذا أي الفئران المتلقية تعاني من ألم غير مرتاح من المسكنات بعد العملية الجراحية كما يتضح من فقدان الحركة، وعدم العريس، غير طبيعية تتزاحم الموقف، وغيرها، وسوف يتم التخلص. وسوف يتم التخلص من الحيوانات في نهاية محددة سلفا نقاط بعد 1-60 أيام.

تحليل الكسب غير المشروع

وتم شراء ترقيع الشريان في طعم خيفي في 4 أسابيع والطعوم في نموذج الكسب غير المشروع مسانج كانت 6 أسابيع بعد العملية (بعد 5 أسابيع العدوى الفيروسية) وتحليلها بواسطة تقنيات النسيجية القياسية لالمرنة فان Gieson (EVG) تلطيخ، الهيماتوكسيلين ويوزين (HE) تلطيخ وتلطيخ المناعي. تم التقاط الصور باستخدام نظام المجهر المناعي (زايس). كان العد الخلية نواة محاطة المناعية إيجابية أداءإد تحت التكبير عالية ومتوسط ​​من 5 المقاطع العرضية لكل الكسب غير المشروع. القياسات منطقة الكسب غير المشروع من التجويف (داخل البطانة)، البطانية (بين الصفيحة المرنة البطانة والداخلية، IEL)، ووسائل الإعلام (بين IEL والصفيحة المرنة الخارجية، وثعبان البحر)، سمك الجدار (بين الصفيحة المرنة البطانة والخارجية) وحسبت السفينة كله (داخل ثعبان البحر) من 5 المسلسل المقاطع العرضية، 150 ميكرون وبصرف النظر عن كل الكسب غير المشروع، وذلك باستخدام تحليل الصور بمساعدة الحاسوب والمعاهد الوطنية للصحة الصورة 1.60 ( http://rsbweb.nih.gov/nih-image ).

التحليل الإحصائي

يتم التعبير عن كافة البيانات كما يعني ± SEM. ثنائي الطرف، وأجريت الاختبارات ر الاقتران وتحليل ANOVA اتجاهين باستخدام برنامج حاسوبي بريزم (GraphPad البرمجيات). واعتبرت الاختلافات مع P <0.05 للإشارة إلى الأهمية الإحصائية.

النتائج

الماوس طعم خيفي تصلب الشرايين (GA) نموذج: في هذا النموذج، يتم زرعها في الشريان الأورطي المانحة الذكور إلى الإناث المتلقية بحيث المضيف يدفع alloreactive T الردود منيع للمستضد الخيفي الخلية بوساطة ضد مستضد Y قاصر (القاصر التوافق النسيجي HY المستضد الخاص بالذكور) أعرب ع...

Discussion

وتركز البروتوكولات المذكورة على نماذج GA الماوس. يمكن تطبيق إجراءات لنماذج أخرى زرع الكسب غير المشروع. وتشمل هذه النماذج طعم أجنبي أنسنة (أي قطاعات الشريان التاجي الإنسان موسط في أبهر الأشعة تحت الكلوي من الفئران العوز المناعي)، ورفض نموذج الفأر GA الحادة (أي...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
C57BL/6J (H-2b)	Jackson Laboratories (Bar Harbor, ME)	000664	Donor (5 weeks) Recipient (8-12weeks)
Ketamine Hydrochloride Injection	Hospira Inc.	NDC 0409-2053	Storage Solution(50 mg/ml) Working Solution(5 mg/ml)
Xylazine Sterile Solution	Lloyd Inc.	NADA# 139-236	Storage Solution(100 mg/ml) Working Solution(1 mg/ml)
Ketoprofen	Fort Dodge Animal Health	NDC 0856-4396-01	Storage Solution(100 mg/ml) Working Solution-oral (0.027 mg/ml)
Heparin Sodium	Sagent Pharmaceticals	NDC 25021-400	Storage Solution(1000 U/ml) Working Solution(100 U/ml)
Saline solution (Sterile 0.9% Sodium Chloride)	CareFusion	AL4109
0.9% Sodium Chloride Injection	Hospira Inc.	NDC 0409-4888-10	To prepare the anesthetic
Petrolatum Ophthalmic Ointment	Dechra Veterinary Products	NDC 17033-211-38
Iodine Prep Pads	Triad Disposables, Inc.	NDC 50730-3201-1
Alcohol Prep Pads	McKesson Corp.	NDC 68599-5805-1
Microscope	Leica	MZ95
Micro Scissors	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5693
Spring Scissors	F.S.T	15009-08	To transect the aorta of donor or recipient
Extra Narrow Scissors	F.S.T	14088-10
Needle Holder/Forceps	MICRINS	MI1542	To hold the needle
Fine Forceps	F.S.T	11254-20
Forceps	F.S.T	11251-35
Standard Pattern Forceps	F.S.T	11000-12
Forceps	F.S.T	13011-12
LANCASTER Eye Speculum	Zepf Medical Instruments	42-1209-07
Micro Vascular Clip	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-6472
Micro Clip Applying Forceps With Lock	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5440
Black Polyamide Monofilament Suture	AROSurgical Instruments Corporation	Cat #T4A10Q07	10-0 suture, Needle=70 microns
Black Monofilament Nylon Suture	Syneture (Covidien)	SN-1956	6-0 suture
Non-Woven Songes	McKesson Corp.	Reorder No. 94442000
1 ml Syringe	BD	REF 309659
3 ml Syringe	BD	REF 309657
10 ml Syringe	BD	REF 309604
18G 1 1/2, Hypodermic Needle	BD	REF 305196
25G 7/8, Hypodermic Needle	BD	REF 305124
27G 1/2, Hypodermic Needle	BD	REF 305109
30G 1/2, Hypodermic Needle	BD	REF 305106
Hearting Pad	Sunbeam	Z-1228-001
Trimmer	Wahl	9854-500
Table 2. Specific reagents and equipment.