التطور العصبي رد الفعل اختبار في الأطفال حديثي الولادة الجرذ الجراء

Summary

الاختبار السلوكي هو المعيار الذهبي لتحديد النتائج التالية إصابات الدماغ، ويمكن التعرف على وجود العاهات الخلقية في الأطفال الرضع والأطفال. ردود الفعل العصبية النمائية هي مؤشرا مبكرا على هذه التشوهات. وقد وضعت مجموعة كبيرة من إنجازه بسهولة اختبارات المنعكس التنموية في القوارض حديثي الولادة وصفها هنا.

Abstract

يستخدم النمو العصبي اختبار رد الفعل شيوعا في الممارسة السريرية لتقييم نضج الجهاز العصبي. ويشار إلى ردود الفعل العصبية النمائية أيضا أن ردود الفعل كما البدائية. فهي حساسة ومتسقة مع النتائج في وقت لاحق. ووصف ردود الفعل غير الطبيعية باعتبارها غياب والمثابرة، ظهور، أو الكمون من ردود الفعل، والتي هي المؤشرات التنبؤية للأطفال التي هي عرضة للاضطرابات النمو العصبي. نماذج حيوانية من الإعاقات النمائية العصبية، مثل الشلل الدماغي، وغالبا ما تظهر ردود الفعل التنموية الشاذة، كما هو الملاحظ في الرضع الإنسان. وصف تقنيات تقييم مجموعة متنوعة من ردود الفعل العصبية النمائية في الفئران حديثي الولادة. النمو العصبي اختبار رد الفعل يقدم المحقق طريقة الاختبار الذي لا يتوفر إلا في مثل هذه الحيوانات الصغيرة. منهجية المعروضة هنا تهدف لمساعدة المحققين في دراسة المعالم التنموية في الفئران حديثي الولادة كوسيلة من وسائل الكشف المبكر ر بدايةإصابة العين و / أو تحديد فعالية التدخلات العلاجية. منهجية المعروضة هنا تهدف إلى توفير توجيهي عام للمحققين.

Introduction

ردود الفعل العصبية النمائية، أو المعالم التنموية، هي واحدة من أقدم تقييم استخدامها على الأطفال حديثي الولادة والرضع الإنسان. ردود الفعل العصبية هي حركات لا إرادية ومتكررة التي تثبت جذع الدماغ والحبل الشوكي ردود الفعل. نضوج شبكات القشرية أعلى يتسم بالتطور والهجرة، وتكون الميالين، وsynaptogenesis تعزيز الرقابة الطوعية وتثبيط القشرية. تغييرات في تطور طبيعي لتطور الجهاز العصبي المركزي يمكن أن يحدث خللا نمو الدماغ، مما يؤدي إلى الأسلاك غير طبيعي القشرية وأداء، وتكون الميالين، مما تسبب في تأخير رد الفعل العصبية النمائية أو الغياب. الرضع الإنسان عرضة للإعاقة النمو العصبي غالبا ما تظهر ردود الفعل المبكرة غير طبيعية. يمكن أن ردود الفعل غير الطبيعية تقديم وتأخير في الاستحواذ، غياب، وجود لفترات طويلة، أو ظهور في وقت لاحق في الحياة، وهي التنبؤي من العاهات الخلقية. ^{1، 2} لذلكومن المهم لتقليد تأخر رد الفعل في نماذج تجريبية من الإعاقات النمائية العصبية.

ويعمل القوارض عادة كنماذج تجريبية. الفئران الوليدة هي altricial عندما ولد، وبالتالي غير ناضجة جدا للقيام محرك معين أو معقدة، والمهام السلوكية الحسية و / أو المعرفية. وفي هذا الصدد، عدم النضج نموهم يتعلق كلا من النمو البدني والجهاز. ولدت الفئران أصلع مع عدم القدرة على thermoregulate، مصابون بالعمى، وغير قادر على المشي. مع الإشارة إلى نمو الدماغ، يحدث النضج القشرية كبير بعد الولادة. الفئران الوليدة حديثي الولادة (يوم الولادة ويشار إلى اليوم ما بعد الولادة 1؛ PD1) وقد اقترح للوصول إلى مستوى النضج الدماغ مشابه لدماغ الإنسان قبل الأوان 23-28 أسبوعا من الحمل، في حين PD7-10 الجراء تعادل الادنى الدماغ البشري المدى. ^{3، 4، 5، 6}وتستند هذه العلاقة على التحليلات التشريحية الإجمالية، ولكن، كما تم وصفها تدابير أخرى من نضوج الدماغ مثل الميالين والسعة متكاملة electroencephalograms. ^{5 و 7} على سبيل المثال، قبل قليلة التغصن هي الخلايا السائدة في تطوير دماغ الجنين البشري 23-32 أسابيع في الرحم، وهذه المرحلة يجرونها يتوافق مع القوارض PD1-3. ^{5 و 8 و 9 و 10} وعلاوة على ذلك، يبدأ تكون الميالين في الرحم لدى البشر في حين أنه في الفئران الوليدة يبدو في الدماغ الأمامي حول PD7-10. يبقى الدماغ القوارض حديثي الولادة الامم المتحدة والعصبي إلى حد كبير. ^{11، 12} تاكر وآخرون. وجدت أن السعة متكاملة النمط الكهربائي من الفئران P1 لتكون مشابهة لغيستا-23 أسبوعنشوئها الجنين البشري، في حين أن PD7 وPD10 الجرو هو أقرب إلى 30-32 أسبوع، وعلى المدى الرضع، على التوالي. ⁷ لهذه الأسباب، اختبار رد الفعل حديثي الولادة في الفئران الوليدة حديثي الولادة يوفر فرصة لالتقاط تطور الجنين و / أو اختلال نمو المخ.

يتم تكييفها البطارية من ردود الفعل هو موضح أدناه من الدراسات التي ويم فوكس وA. Lubics ^{13 و 14} كان ويم فوكس واحد من أقرب المحققين فيما يتعلق تطور الجنين من ردود الفعل في الماوس. وتشمل ¹³ ردود الفعل هذه، ولكن لا تقتصر على استيعاب الأطراف ووضع، وتجنب الهاوية، المقوم، تسارع المقوم، مشية، جفل السمعي، والموقف، وفتح العين. وسهلت كل من forelimb hindlimb وفهم (ويشار إلى الراحي الأخمصي وفهم في البشر، على التوالي) من خلال ردود الفعل في العمود الفقري وتثبيط القشري من مناطق السيارات غير الأساسية. ^{15، 16} Hindlimb وضع (منعكس أخمصي) يعكس نضوج الجهاز القشري. ^{16، 17، 18} تجنب كليف (ردود وقائية)، المقوم (المتاهة)، وتسارع تصحيح تنطوي على التكامل والتواصل بين المدخلات الحسية والحركية الانتاج (مثل تلك التي تتعامل مع vibrissae وأنظمة الدهليزي). ^{19، 20، 21} يعكس مشية الحركة. ¹⁴ جفل السمعي يقيم التحفيز الصوتية واتصالات متشابك من الخلايا العصبية العملاقة في النواة الشبكية للجسر الذنبية. ويشمل ²¹ الموقف / العمود الفقري-القشرية التوقعات المناسبة-القشرية الشوكي، وقوة العضلات، وتعصيب العصبي العضلي. ^{22، 23} ماturation من مستقبلات حمض غاما -aminobutyric قد ترتبط مع فتح العين. ²⁴ ومن المهم أن نأخذ في الاعتبار أن ردود الفعل تعكس شبكة أكثر تعقيدا من ذلك بكثير، وقدمت هنا هو ارتباط العام. وعلاوة على ذلك، توفر هذه المنعكسات طريقة سريعة وسهلة لتقييم نمو الجهاز العصبي في سن مبكرة جدا حيث التجارب السلوكية أكثر تعقيدا ليس ممكنا.

والهدف من هذه الورقة هو توفير مبادئ توجيهية عامة لاختبار رد الفعل العصبية النمائية التي يمكن إدراجها بسهولة في دراسات الفئران حديثي الولادة التجريبية. تم تنفيذ المنهجية الواردة في لونغ إيفانس الفئران الوليدة حديثي الولادة واستند تقدير النتائج في اليوم الأول من المظهر. يبدأ اليوم الذي منعكس الاختبار والمعدات المستخدمة يمكن تعديلها لتناسب أفضل نموذج تجريبي مختلفة (مثل لسلالات مختلفة والأنواع). من خلال إنشاء التقدم الفيزيولوجي الطبيعي للالمرجعنضوج قانونا في نموذج حيواني معين، يمكن أن المحققين تقييم آثار الضغوطات الخارجية، والتلاعب الذاتية، و / أو التدخلات العلاجية على النمو العصبي في نماذج الفئران حديثي الولادة. وعموما، فإن استخدام ردود الفعل بمثابة تقرير من النضج الدماغ هو مفيد في توقع إصابات الدماغ فترة ما حول الولادة، وليس تعبيرا عن النتائج النمائية العصبية في وقت لاحق.

Protocol

وافق رعاية الحيوان واستخدام اللجنة، العلوم الصحية في جامعة ألبرتا جميع الدراسات على الحيوانات.

ملاحظة: في حين أن هذا البروتوكول يمكن تكييفها لأنواع وسلالات أخرى، يتم كتابة هذا البروتوكول بالنسبة للفئران لونغ إيفانس. وقد تبين أن هذه الفئران أن يكون أداء المحرك العالية والبصر بالمقارنة مع سلالات القوارض الأخرى. ^{25، 26} بروتوكول لحالات الحمل في الوقت المناسب، المكملات الغذائية، والتهاب الأمهات، وردود الفعل العصبية النمائية على النحو التالي.

1. حيوانات التجارب

1. عند وصول الفئران إلى منشأة سكنية الحيوان، الامتناع عن أي تفاعل لمدة يوم أو يومين للسماح لهم يتأقلم مع البيئة الجديدة. وبعد التأقلم والتعامل مع الفئران كل يوم لمدة خمسة أيام تقريبا، أو عندما تكون الفئران لم تعد تظهر عليها علامات الإجهاد. الإجهاد الناجم عن الإنسان يمكن أن يغير نتائج اختبار ولوإعلان لفقدان الحمل.
2. وبمجرد أن الفئران مريحة، تبدأ التكاثر. وضع اثنين من الإناث والذكور الفئران واحد في تربية قفص ذات الطابقين (ع = 38 سم، 1800 سم ² المساحة الطابقية) بين عشية وضحاها (03:00 حتي 08:00). هذه أقفاص تمنع التوتر والاكتظاظ. في الصباح، وذلك باستخدام ماصة نقل، مسح المهبل من إناث الفئران مع ما يقرب من 0.25 مل من المياه المالحة. نقل الحل في أنبوب microcentrifuge.
3. وضع الإناث اثنين وذكر مرة أخرى في أقفاص التقليدية الخاصة بكل منها.
4. عرض حل جمعها في القسم 1.2 تحت المجهر الضوئي (100X) لتحديد أي مرحلة من مراحل دورة داقية الفئران تعاني وما إذا الحيوانات المنوية أم لا موجودة. إذا كان هناك الحيوانات المنوية، وتسجيل التاريخ كيوم الجنينية (E1) (الشكل 1). إذا الحوامل، وإعطاء الأنثى لها القفص الخاص على E14.
   ملاحظة: الخلايا في مسحة مهبلية واضحة، وبالتالي استخدام إعداد الإضاءة الخافتة. تأكد من أن المكثف وتعديلها لوضع أدنى مستوياته. ميلاديمجرد سيطرة سطوع لضوء خافت. إذا كان الطلب السطوع متاحة، لأنها مجموعة 1.

2. الغذائية التكميلية

ملحوظة: تم تصميم هذا البروتوكول لتقييم الآثار العلاجية من البروكلي الغذائية استهلاك تنبت خلال الأسبوع الأخير من الحمل. تنمو براعم وفقا لوو وآخرون. ^27.

1. نقع بذور براعم البروكلي عن 2-3 ساعات. نشر بذور الخروج على مربع sprouter البذور كونترتوب ووضع على سطح دافئ لإنبات.
2. الماء والبذور مرتين يوميا، مرة واحدة في AM (8-9 AM) ومرة ​​واحدة في PM (3-4 م).
3. في اليوم الخامس، ووضع براعم بنافذة لليوم (يجب أن يكون براعم اثنين من يترك كل وسوف تصبح خضراء على مدار اليوم).
4. في نهاية اليوم، حصاد براعم عن طريق سحب بلطف براعم البروكلي من خارج منطقة الجزاء منخول ووضع على سطح مستو لتجف.
5. مرة واحدة يتم تجفيفها براعم تماما، ثييغ من 200 ملغ وضعها في كيس من البلاستيك مختوم.
6. تبدأ في E14، وإطعام كل حامل الفئران 200 ملغ من براعم البروكلي المجفف يوميا حتى PD21 (اليوم مفطوم الجراء).

3. التهاب

1. للحث على التهاب وتتكاثر إصابة المادة البيضاء في نسل، حقن الفئران الحوامل مع lipopolysaccharide في (LPS) كل 12 ساعة على E19 E20 و. في يوم من الحقن، وجلب قفص في المختبر من منشأة سكنية. السماح للالفئران الحوامل حتى يتأقلم وتصبح هادئة لمدة 1 ساعة على الأقل. إذا يظهر الفئران علامات سريرية للضرر النظامية أو كلوي دائم، ويتم التخلص فورا وإزالتها من الدراسة.
2. وزن السد حامل.
3. حل 200 ميكروغرام / كغ من LPS (المصلي 0127: B8) في 100 ميليلتر من المياه المالحة. نضح الحل في حقنة 1 مل مجهزة 30 G ½ الإبرة.
   1. استخدام إبرة جديدة لكل الحقن. يسمح الحل في عملية الاحماء لدقائق قليلة للحد من عدم الراحة.
4. تسجل الوقت وحقن السد حامل البريتونى. حقن بديلة بين الجانبين لضمان التوزيع العادل.
   ملاحظة: Machholz وآخرون. يصف إجراءات ضبط النفس وحقن المناسبة. ²⁸

4. الاختبارات التنموية رد الفعل

1. على PD1 (يوم الولادة)، وإزالة الجراء من السد وسجل أوزان المواليد. وضع الجراء العودة إلى أقفاصها منها ونقلها إلى منشأة الحيوان حتى PD3. وهذا ما يضمن الترابط بين الأم السد والجرو.
   1. تسجيل اختبار رد الفعل لتقييم موثوق بها. ضبط كاميرا فيديو بحيث يكون في سرعة مصراع القصوى لتحليل الإطار حسب الإطار (1/1000 ق). وضع كاميرا فيديو بحيث يكون مباشرة فوق أو بجانب الجرو الفئران وجميع المواد التي تستخدم في كل المنعكس. على سبيل المثال، للوضع hindlimb، ضع الكاميرا بجانب الجرو الفئران لضمان القبض على رفع ووضع من hindlimb.
   2. لالمقوم المتسارع، ضع الكاميرا فوق الجرو الفئران ومهبط لتسجيل قدرة الجرو إلى صحيحا في الجو.
2. أوزان قياسية يوميا حتى نهاية التجربة. على PD3، يبدأ النمو العصبي لا ارادي اختبار (الشكل 4). نقل الأقفاص في غرفة هادئة مدة لا تقل عن 1 ساعة قبل الاختبار للسماح التأقلم مع البيئة.
3. أداء اختبار رد الفعل النمو العصبي في وقت ثابت كل يوم كما الفئران هي ليلى. على سبيل المثال، اختبار بين 09:00 حتي 12:00 يوميا. الحفاظ على الجراء مباشرة تحت مصباح التدفئة أو على وسادة الحرارة في جميع الأوقات، للحفاظ على درجة حرارة الجسم ثابتة من 36.5 درجة مئوية. الفئران الوليدة في هذه السن يفقد الحرارة بسهولة. قياس مع تحقيق درجة حرارة المستقيم. إذا فعلت بكفاءة، لا تتغير درجات الحرارة الجراء الجسم لأنها لا تتم إزالة من السد والقمامة طويلة بما فيه الكفاية. ملاحظة: مراقبة درجة حرارة مصباح الحرارة للتأكد من أنه لا يتجاوز 37 درجة مئوية.
   1. تسجيل النتيجة من كل رد الفعل كل يوم حتى لوحظ استجابة إيجابية. تحدث استجابة رد الفعل الإيجابية عندما الجرو هو قادرة على أداء مهمة في يومين متتاليين. يستخدم تاريخ وقوع أول من رد فعل إيجابي لتقدير. لا يلزم إجراء مزيد من التجارب بعد استجابة إيجابية. ومن هنا جاءت تاريخ انتهاء كل المنعكس هو متغير.
4. Forelimb استيعاب
   1. تبدأ في PD3، وإجراء اختبار رد الفعل forelimb فهم. وضع قضيب حادة ضد كف كل forepaw وتطبيق الضغط الخفيف يدويا. والضغط الخفيف يجب أن تحل قليلا من forepaw للتأكد من أن الاتصال يتم ويمكن الجراء يشعر قضيب. سوف تظهر استيعاب كما انثناء من كافة الأرقام حول قضيب. يحدث الاستحواذ الناجح لهذا المنعكس عندما اغتنام كل من الأرجل الأمامية للقضيب لمدة يومين على التوالي.
   2. يسجل فهم forelimb:
      0 لعدم استيعاب
      1 لاستيعاب الناجحة التي قام بها forepaw واحد (من اليسار أو صforepaw آيت يمكن أن يذكر هنا)
      2 لاستيعاب الناجحة التي قام بها كل من الأرجل الأمامية
5. Hindlimb استيعاب
   1. تبدأ في PD3، وإجراء اختبار رد الفعل hindlimb فهم. وضع قضيب حادة ضد وحيد من كل hindpaw وتطبيق الضغط الخفيف يدويا. والضغط الخفيف يجب أن تحل قليلا hindpaw للتأكد من أن الاتصال يتم ويمكن الجراء يشعر قضيب. يبدو استيعاب الناجح للقضيب كما انثناء من الأرقام حول قضيب. يحدث الاستحواذ الناجح لهذا المنعكس عندما فهم كلا hindpaws قضيب لمدة يومين على التوالي.
   2. يسجل فهم hindlimb:
      0 لعدم استيعاب
      1 لاستيعاب ناجحة من خلال hindpaw واحد (من اليسار أو اليمين hindpaw يمكن أن يذكر هنا)
      2 لاستيعاب الناجحة التي قام بها كل من hindpaws
6. المقوم
   1. تبدأ في PD3، بدء الاختبار المنعكس المقوم. اعتقادا راسخا الجرو في موقف ضعيف، مع كل الكفوف أربعة في وضع مستقيم. ترك سو الجرو وعلى الفور بدء موقت. ويتحقق المقوم عندما الجرو قادرة على الوجه / يتدحرج على جميع الكفوف الأربعة، ولكل مخلب هو عمودي على الجسم. إعطاء كل الجرو بحد أقصى 15 ثانية لتحقيق هذا الهدف.
   2. يسجل المقوم:
      0 الكذب على الظهر (أو 15 ثانية لأقصى تخصيص الوقت)
      1 عن الكذب على الجانب (الجانب الأيمن أو الأيسر يمكن أن يذكر هنا) أو قدرة الجرو إلى اليمين ولكن في الموقف الخطأ (أو 15 ثانية لأقصى تخصيص الوقت)
      2 لالمقوم الناجح والموقف المناسب
7. Hindlimb وضع
   1. تبدأ في PD4، يبدأ hindlimb وضع اختبار رد الفعل. عقد الجرو عموديا في الهواء، من خلال الجذع. بلطف السكتة الدماغية ظهر من hindpaw مع سطح حادة (مثل حافة الطاولة). A وضع رد الفعل الصحيح هو عندما ينسحب الجرو الفئران وhindlimb حفز، تليها موضع hindlimb الخناق على ذلك السطح.
   2. يسجل رر hindlimbالتفوق لا ارادي:
      0 لعدم النجاحات
      1 لوضع من hindpaw واحد (من اليسار أو اليمين hindpaw يمكن أن يذكر هنا)
      2 لنجاح وضع hindlimb لكلا hindpaws
8. جرف تجنب
   1. تبدأ في PD4، بدء اختبار جرف فسخ العقد. وضع الجرو الفئران على حافة سطح مستو، بحيث الأرجل الأمامية وخطم من الجرو هي على الحافة. نتائج الصحيحة هي استجابة وقائية، حيث يتحول الجرو الفئران بعيدا عن حافة الهاوية. يتم وضع يد المجرب أو الهبوط رغوة تحت الهاوية للقبض على الجرو من السقوط.
   2. يسجل تجنب الهاوية:
      0 لأي حركة أو السقوط في الهاوية
      1 لمحاولات الابتعاد عن حافة الهاوية ولكن مع أطرافه شنقا
      2 لحركة ناجحة بعيدا عن الهاوية
9. مشية
   1. بدء تقييم مشية على PD6. مكان ولادتها في وسط 15 سم diametإيه الدائرة وتسمح الجرو 30 ثانية لإكمال المهمة. يتم تنفيذ ¹⁴ ألف مشية ناجحة عندما الجرو الفئران قادرة على نقل كل الأرجل الأمامية خارج دائرة في أقل من 30 ثانية.
   2. يسجل مشية كما الوقت بالثواني الذي يستغرقه الجرو الفئران على التحرك خارج دائرة. تسجيل الوقت الذي يستغرقه الجرو لنقل كل الأرجل الأمامية خارج الدائرة. سجل 30 ثانية إذا كان الجرو غير قادر على إكمال المهمة في وقت معين
10. السمعية باغت
    1. بدء تحليل جفل السمعي على PD10. تقديم ضوضاء عالية (جرس) مباشرة على الجرو لتقييم ما إذا كانت ردود الفعل المفاجئة موجودة. لوحظ استجابة جفل إيجابية عندما يعرض الجرو حركة "الرجيج، بعيدا عن الصوت.
    2. يسجل جفل السمعي:
       (أو لا) لا لردود الفعل المفاجئة
       (أو نعم) لردود الفعل المفاجئة الإيجابية
11. وضع
    1. بدء تحليل الموقف على PD12. مكان الجراء على سطح مفتوح غير زلق، ومراقبة الموقف الجرو له عندما تتحرك. وينعكس موقفا غير ناضجة عن طريق سحب البطن عندما تتحرك، ومشيرا عمودي كل من الأرجل الأمامية وhindpaws النسبية للجسم. ويكتسب موقف ناضجة عندما الجرو يمكن رفع البطن من على سطح الأرض، وأشار كل من الأرجل الأمامية وhindpaws على التوالي، أو موازية للجسم، وعندما تتحرك.
    2. تسجيل الموقف:
       0 لعدم الحركة
       1 لموقف غير ناضجة عندما تتحرك
       2 لموقف ناضج بينما تتحرك
12. افتتاح العين
    1. يبدأ التحليل فتح العين على PD12. تسجيل يوم الجفنين المفتوحة:
       0 لا لعيون مرئية
       1 العيون مرئية واحد (الجانب الأيمن أو الأيسر يمكن أن يذكر هنا)
       2 لعينان مرئية
13. المقوم المعجل
    1. تبدأ في PD14، يبدأ تسارع اختبار تصحيح. وضع الجرو في مستلق موقف 30.48 جentimeters فوق الهبوط الرغوة. إسقاط الجرو ومراعاة قدرته على الحق نفسه. يشير المقوم إلى عندما الجرو هو قادرة على تحويل أكثر من وضعية الانبطاح والأرض على الكفوف.
    2. يسجل المقوم المعجل:
       0 لتسقط على ظهرها
       1 لتسقط على جانبها (الجانب الأيمن أو الأيسر يمكن أن يذكر هنا)
       2 للهبوط على الكفوف

ملاحظة: هي أنواع مختلفة من تقدير حجم ردود الفعل المتاحة اعتمادا على مسألة المحققين. تقدير حجم ردود الفعل يمكن القيام به الملاحظة الأولى من رد الفعل، اليوم الأول من ظهور حتى اختفاء منعكس، والوقت المستغرق لتنفيذ المهمة بنجاح، وسرعة الأداء، و / أو تحسين الأداء مع مرور الوقت. ^{13، 14، 29، 30، 31} لجدراسة urrent، وكان يستخدم في اليوم الأول من ظهور باعتباره النتيجة. عند استخدام نماذج متكررة الولادات، الجراء من نفس القمامة عادة تتصرف بالمثل بسبب التركيبة الجينية الخاصة بهم، في الرحم والبيئة ما بعد الولادة، وتوفر التغذية. ³² لذلك، الجرو واحد لا يمكن أن تمثل باعتبارها ن = 1 بسبب التحيز القمامة. الجراء فحص داخل القمامة يمكن متوسط بحيث تمثل كل القمامة ون = 1. ^{32 و 33} بدلا من ذلك، العديد من الجراء داخل نفس القمامة يمكن تحليلها باستخدام نموذج الآثار المختلطة، والتي تأخذ في الاعتبار الجراء داخل نفس القمامة. ^{32 و 33}

النتائج

يتم تقديم جدول زمني لهذا التصميم التجريبي في الشكل 2. سبق نشر ³⁰ الأساليب والنتائج. وكان ³⁰ والهدف من هذه الدراسة هو تقييم ما إذا كانت مكملات الغذائية مع براعم البروكلي أثناء الحمل وفترة preweaning حماية الن...

Discussion

النمو العصبي اختبار رد الفعل هو قياس التنبؤي للتنمية القشرية غير طبيعية والنضج، والتي قد تكون ذات أهمية في ظل الظروف التي الأعصاب العلني ليس واضحا. أثناء الاختبار النمو العصبي، فمن الأهمية بمكان لضمان أن يتم فحص الجراء في نفس الوقت يوميا. الفئران هي ليلى، وبالتالي، ?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Breeding
Transfer pipettes	Fisherbrand	12-711-9AM	Used for vaginal flushes.
Sterile Saline	Hospira	7983254	The solution used to collect cells during vaginal flushes.
400 µl Microcentrifuge tubes	Fisherbrand	05-408-120	Used to hold the saline solution.
Light microscope	Leica	Leica ATC 2000	For observation of the saline solution. Can be any light microscope used in the lab.
Slides	Fisherbrand	12-552-5	The saline solution is placed on the slide. Can be any slides used in the lab.
Coverslips	Fisherbrand	12-545-F	To coverslip the slides. Can use any coverslips used in the lab.
Dietary  Supplementation
Broccoli Sprouts seeds	Mumm's Sprouting Seeds		Broccoli sprouts seeds are ordered and grown in the lab.
Countertop Seed Sprouter Box	Mumm's Sprouting Seeds		A box is used to germinate and grow the seeds prior to harvest.
250 mL beaker			The beaker is used to soak the seed. Any size beaker that would fit can be used.
Maternal Inflammation
Lipoplysaccharide (LPS)	Sigma	L3129	The endotoxin used to mimic maternal inflammation.
1 mL Syringe	BD Syringe	309659	Used to inject the pregnant rat.
Gauge (30G X 1/2)	BD PrecisionGlide Needle	305106	Use the smallest needle to avoid pain and discomfort.
Sterile Saline (0.9% Sodium Chloride, USP)	Hospira		Saline is used to dissolve LPS.
Weights
Scale	Denver Instrument		For recording the weights. Can be any scale with 2 decimal places used in the lab.
Neurodevelopmental Reflexes
Thin blunt rod			Can be a paperclip or toothpick. This is for forelimb and hindlimb grasping.
Round filter paper	Whatman	1001 150	15 cm diameter paper used for gait analysis.
Timer	Fisher Scientific	06-662-51	For timing the time allocated to righting and gait.
Blunt surface			Can be an edge of a table. This is for hindlimb placing and cliff avoidance.
Foam landing			For when the pups perform accelerated righting.
Video recorder	Sony	VCT-D580RM	To record all reflexes tested. Must be able to record at 1/1000 fps
Bell			For auditory startle.
Heat lamp or pad			To maintain the body temperature of the pups underoing examination.