Yenidoğan sıçan yavrularının sinir gelişimi Refleks Testleri

Özet

Davranışsal test beyin hasarı aşağıdaki sonuçlarını belirlemek için altın standarttır ve bebeklerde ve çocuklarda gelişimsel engelli varlığı tespit edilebilir. Nörogelişimsel refleksler bu anomalilerin erken göstergesidir. yenidoğan kemirgen kolayca gerçekleştirilebilir gelişimsel refleks testlerin bir konak geliştirilmiş ve burada tarif edildi.

Özet

Nörogelişimsel refleks testi genel olarak sinir sisteminin olgunlaşma değerlendirmek için klinik uygulamada kullanılır. Nörogelişimsel refleksleri de ilkel refleksleri adlandırılır. Bunlar duyarlı ve sonraki sonuçlarla tutarlıdır. Anormal refleksleri nöro hastalıklar için yüksek risk altında olan bebeklerin prediktif bir indeksi olan refleksleri yokluğu, kalıcılığı, yeniden ortaya çıkma ya da gecikme olarak tanımlanır. İnsan bebeklerde görülebilir gibi beyin felci gibi nörogelişimsel engelli, hayvan modelleri, çoğu zaman, anormal gelişim refleksleri gösterir. tarif edilen teknikler yenidoğan sıçanlarda nöro refleksleri çeşitli değerlendirmek. Nörogelişimsel refleks testi Araştırmacı böyle genç hayvanlarda aksi bulunmayan bir test yöntemi sunmaktadır. Burada sunulan metodoloji tespit erken başlangıçlı br yöntemi olarak yenidoğan sıçanlarda gelişimsel kilometre taşları incelerken araştırmacılar yardımcı hedefliyorain yaralanması ve / veya terapötik müdahalelerin etkisini belirlemek. Burada sunulan metodoloji araştırmacıları için genel bir rehber sunmayı amaçlamaktadır.

Giriş

Nörogelişimsel refleksler ya gelişimsel kilometre taşları, insan Yenidoğan ve süt kullanılan en erken değerlendirmelerin biridir. Nörolojik refleksler beyin sapı ve omurilik refleksleri göstermek istemsiz ve tekrarlayan hareketler vardır. Göç, miyelinasyonu ve sinaptogenez gelişen karakterize yüksek kortikal ağların Olgunlaşma istemli kontrolün ve kortikal inhibisyonunu teşvik eder. merkezi sinir sistemi evrim normal ilerleme değişiklikler nöro refleks gecikme ve devamsızlığı neden anormal kortikal kablo, işleyişi ve miyelinasyon sonuçlanan beyin gelişimi bozabilir. nörogelişimsel sakatlık açısından yüksek risk İnsan bebekler genellikle anormal erken refleksleri gösterir. Anormal refleksler sonraki yaşamında bir edinim, yokluğunda gecikme, uzun süreli varlığı veya yeniden ortaya çıkma olarak sunmak, gelişim bozuklukları önemlibelirleyicilerindendir edebilirsiniz. ^{1, 2} DolayısıylaNörogelişimsel engelli deneysel modellerinde refleks gecikmeleri taklit etmek önemlidir.

Kemirgenler yaygın deneysel model olarak kullanılmaktadır. Sıçan yavrular nedenle spesifik veya karmaşık motoru, duyu ve / veya bilişsel davranışsal görevleri üstlenmek için çok olgunlaşmamış doğan zaman altricial, ve. Bu bağlamda, onların gelişimsel gelişmemişlik hem fiziksel ve organ gelişimine ilgilidir. Sıçanlar, thermoregulate bir yetersizlik ile tüysüz dünyaya kör ve yürüyemez edilir. beyin gelişimine ilişkin olarak, önemli kortikal olgunlaşma doğum sonrasında ortaya çıkar. PD7-10 yavrular yakın-eşdeğer ise, 28 haftalık gebelik - 23 arasında bir erken insan beyninin benzer olduğu bir beyin olgunlaşma seviyesine ulaşmak için önerilmiştir, Yenidoğan sıçan yavrularının (PD1 doğum günü doğum sonrası gün 1 olarak da adlandırılır) terimi insan beyni. ^{3, 4, 5, 6}Bu korelasyon brüt anatomik analizlere dayanmaktadır, ancak, böyle miyelinasyon ve genlik entegre elektroensefalogramlar olarak beyin olgunlaşması diğer tedbirler de tarif edilmiştir. Örneğin, ^{5, 7,} ön oligodendrosit 23 gelişen insan fetal beyninde baskın hücrelerdir - rahimde 32 hafta ve bu olgunlaşma aşaması bir PD1-3 kemirgen karşılık gelir. Sıçan yavrularının o PD7-10 çevresinde ön beyin görünür ise ^{5, 8, 9, 10} Ayrıca, miyelinasyon insanlarda in utero başlar; Yenidoğan kemirgen beyin büyük ölçüde un-miyelinli kalır. ^{11, 12} Tucker ve ark. P1 sıçan genliği entegre elektroansefalogram deseni 23 haftalık GESTA benzer olduğu bulunmuşturtion insan fetus bir PD7 ve PD10 yavru 30 benzer ise - sırasıyla 32 hafta süreli bebek. ⁷ Bu nedenlerle, yenidoğan sıçan yavrularında yenidoğan refleks testi ontogeny ve / veya beyin gelişiminin bozulması yakalamak için bir fırsat sunar.

Aşağıda tarif edilen refleksleri pil WM Fox farede refleksleri ontogeny göre ilk araştırmacılar biri WM Fox ve A. Lubics ^{13, 14} tarafından yapılan çalışmalardan elde uyarlanmıştır. ¹³ Bu refleksler içerir, ancak, yürüme, işitsel irkilme, duruş ve göz açıklığı, doğrultma, bacak kavranmasına ve yerleştirme, yamaç kaçınma, bunlarla sınırlı değildir doğrulma hızlandırılmış. Hem ön ayak ve arka ayak kavramak (sırasıyla, insanlarda palmar ve plantar kavramak olarak da adlandırılır), spinal refleks olmayan primer motor alanlarından kortikospinal inhibisyonu ile kolaylaştırılmaktadır. ^{15, 16} Arka ayağın verilmesi (plantar refleks) kortikospinal sistem olgunlaşmasını yansıtır. ^{16, 17, 18} Cliff kaçınma (koruyucu tepkiler), (labirent) doğrulma ve (örneğin, burun kılı ve vestibüler sistemleri ile ilgili olanlar gibi) duyusal giriş ve adaleleri harekete geçirici çıkış arasında entegrasyon ve arasında iletişim doğrulma hızlandırılmış. ^{19, 20, 21} Yürüme lokomosyonunu yansıtır. ¹⁴ İşitsel irkilme çekirdeği Pontis caudalis reticularis akustik uyarımı ve dev nöronların sinaptik bağlantıları değerlendirir. ²¹ Duruş uygun kortikal spinal / spinal kortikal projeksiyonlar, kas gücünü ve kas inervasyonu içerir. ^{22, 23} Magama-aminobütirik asit reseptörlerinin turation göz açıklığı ile ilişkili olabilir. ²⁴ refleksler çok daha karmaşık bir ağ yansıtır ve burada verilen genel bir korelasyon olduğunu akılda tutmak önemlidir. Ayrıca, bu refleksler daha karmaşık davranışsal testler mümkün değildir çok genç yaşlarda nörolojik gelişimini değerlendirmek hızlı ve kolay bir yöntem sağlar.

Bu çalışmanın amacı, kolaylıkla deneysel yenidoğan sıçan çalışmalarında dahil edilebilir nöro refleks testi için genel bir rehber sağlamaktır. tarif edilen metodoloji Long-Evans yenidoğan sıçan yavrularının içinde gerçekleştirilmiştir ve sonuçlar ölçümü görünümünü ilk günü dayanıyordu. test refleks gün sonra başlatılır ve kullanılan ekipman daha iyi (örneğin, farklı cins, gibi), farklı deneysel model göre modifiye edilebilir. ref normal fizyolojik ilerlemesini kurarakBelirli bir hayvan modelinde Lex olgunlaşma, araştırmacılar dış koşullara endojen manipülasyonu ve / veya neonatal sıçan modellerinde nöro üzerindeki terapötik müdahalelerin etkisini değerlendirmek. Genel olarak, beyin olgunluk tayini olarak reflekslerin kullanımı perinatal beyin hasarı tahmin etmede avantajlıdır, daha sonra nörogelişimsel sonuçların yansımasıdır.

Protokol

Alberta Üniversitesi'nde Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi, Sağlık Bilimleri bütün hayvan çalışmaları onayladı.

Not: Bu protokol, diğer türler ve suşlar için uyarlanmış olsa da, bu protokol Long-Evans sıçanlarda için yazılmıştır. Bu sıçanlar, diğer kemirgen suşlara kıyasla daha üstün, motor performans ve görme keskinliği sahip olduğu gösterilmiştir. Aşağıdaki gibi zamanlanmış gebelik, beslenme takviyesi, anne inflamasyon ve nörogelişimsel reflekslerin ^{25, 26} protokoldür.

1. Deney Hayvanları

1. Sıçanlar hayvan barındırma tesisine geldiğinde, onların yeni ortamına alışmaya izin vermek için bir veya iki gün boyunca herhangi bir etkileşim kaçınmalıdır. acclimatization ardından, yaklaşık beş gün boyunca her gün fareler işlemek veya sıçanlar olduğunda artık stres belirtileri gösteren. İnsan kaynaklı stres testi sonuçları ve le değiştirebilirabortusta reklam.
2. Sıçanlar rahat olduğunda, ıslah başlar. (- 08:00 15:00) iki dişi ve bir çift katlı üreme kafeste bir erkek sıçan (h = 38 cm, 1800 ^cm2 zemin alanı), gece boyunca yerleştirin. Bu kafesler stres ve aşırı kalabalık önlemek. Sabah, bir transfer pipeti kullanılarak, tuzlu su içinde yaklaşık 0.25 mL ile dişi sıçanların vajina yıkayın. mikrosantrifüj tüpü içine çözeltisini.
3. geri kendi geleneksel kafeslere iki dişi ve erkek koyun.
4. Sıçan yaşandığı ve sperm olup olmadığını mevcut östrus döngüsü hangi aşamada belirlemek için bir ışık mikroskobu (100 X) altında Bölüm 1.2'de elde çözelti gör. Sperm varsa, embriyonik gün (E1) (Şekil 1) olarak tarih kaydedecektir. Hamile Eğer dişi E14 onu kendi kafesini ver.
   NOT: Vajinal yaymasında hücreler açık, dolayısıyla düşük ışık ayarını kullanın. kondansatör en düşük ayara ayarlanmış olduğundan emin olunuz. ilanSadece parlaklık kontrolü loş ışıkta. Bir parlaklık kadranı varsa, 1 olarak ayarlayın.

2. Diyet takviyesi

NOT: Bu protokol gebeliğin son haftasında diyet brokoli filizi tüketiminin terapötik etkilerini değerlendirmek amaçlanmıştır. Wu ve arkadaşlarına göre lahanası büyütün. ^27.

1. 3 saat - 2 brokkoli filizleri tohum bekletin. Bir tezgah tohum Sprouter kutuyu tohumlarını yaymak ve çimlenmesi için sıcak yüzey üzerinde ayarlayın.
2. (- 09:00 8) ve bir kez PM (3-4 PM) bir kere AM olmak üzere günde iki kez tohumlarını sulayın.
3. Beşinci günde gün için bir pencere tarafından lahanası yerleştirmek (lahanası iki yaprak her olmalı ve gün boyunca yeşil hale gelecektir).
4. Günün sonunda, yavaşça elenmiş kutudan brokoli çekerek lahanası hasat ve kuruması için düz bir yüzey üzerinde uzanır.
5. lahanası tamamen kurutulur sonra, ağırlıkkapalı bir plastik torba içinde eigh üzerinden 200 mg yer.
6. E14 başlayarak, PD21 (yavrular sütten gün) kadar günlük olarak kurutuldu, brokkoli filizlerinin her gebe fare 200 mg besleme.

3. Enflamasyon

1. inflamasyonu neden ile çocukta beyaz cevher hasarı çoğaltamaz, lipopolisakarit (LPS) E19 ve E20 üzerinde her 12 saat gebe sıçanlar enjekte etmek. Enjeksiyon gününde, konut tesisinden laboratuvarına kafesi getirmek. Hamile sıçan acclimate ve en az 1 saat sakin olmaya izin verin. Bir sıçan sürekli sistemik ya da böbrek hasarı klinik belirtileri gösteriyorsa, hemen ötenazi ve çalışma kaldırılır.
2. Hamile baraj tartılır.
3. tuzlu su, 100 uL: LPS 200 ug / kg (B8 serotip 0127) içinde çözülür. 30 G ½ iğne ile donatılmış bir 1 ml şırınga içinde çözelti aspire.
   1. Her enjeksiyon için yeni bir iğne kullanın. Çözelti rahatsızlığı en aza indirmek için birkaç dakika ısınmasını bekleyin.
4. Tutanak zamanı ve karın içinden hamile baraj enjekte edin. taraflar arasındaki Alternatif enjeksiyonlar eşit dağılımını sağlamak için.
   NOT: Machholz vd. Uygun kısıtlama ve enjeksiyon işlemlerini açıklamaktadır. ²⁸

4. Gelişim Refleks Testleri

1. PD1 (doğum günü) günü, baraj ve kayıt doğum ağırlıkları yavrular kaldırın. geri kendi kafeslerine yavrular yerleştirin ve PD3 kadar hayvan tesisine taşıyın. Bu baraj ve yavru arasında anne yapışmasını sağlar.
   1. Güvenilir değerlendirme için refleks testi kaydedin. Bu çerçeve kare analizi (1/1000 ler) için en yüksek çekim hızında şekilde video kamera ayarlayın. Yukarıda veya sıçan yavru ve her refleks için kullanılan tüm malzemeler hemen yanında olacak şekilde video kamera yerleştirin. Örneğin, arka pençe yerleştirme için, kaldırma ve arka bacağın yerleştirerek yakalanır sağlamak için sıçan yavru yanında kamera yerleştirin.
   2. hızlandırılmış doğrulma için, havada sağa yavru yeteneğini kaydetmek için sıçan yavru ve iniş pad üzerinde kamera yerleştirin.
2. Deney sonunda kadar günlük Tutanak ağırlıkları. PD3 üzerinde, nöro refleks testi (Şekil 4) başlar. Çevreye iklimlendirme sağlamak için test edilmeden önce 1 saat en az bir sessiz odaya kafesleri taşıyın.
3. Sıçanlar gece olduğu gibi her gün tutarlı bir anda nörogelişimsel refleks testini gerçekleştirin. Örneğin, 9 saatleri arasında deney - Günlük 12:00. 36.5 ° C arasında sabit bir vücut ısısını korumak için, direkt olarak, her zaman bir ısıtma lambası altında veya ısı pedi üzerinde yavrular tutun; Bu çağın sıçan yavrular kolayca ısı kaybeder. bir rektal sıcaklık probu ile ölçülür. verimli yapılırsa bunlar baraj ve yeterince uzun çöp kaldırılmaz, çünkü yavrular vücut sıcaklıkları değişmez. NOT: 37 ° C'yi aşmayacak sağlamak için ısı lambanın sıcaklığı izleyin.
   1. Olumlu bir yanıt gözlemlendiğinde kadar her gün her refleksin puan kaydedin. yavru iki ardışık günlerde görevi yerine getirebilecek hale pozitif refleks tepki oluşur. Olumlu bir yanıtın ilk geçtiği tarih ölçümü için kullanılır. Hiçbir ileri testler pozitif tepkinin ardından gereklidir. Dolayısıyla her refleks için bitiş tarihi değişkendir.
4. forelimb Grasping
   1. PD3 başlayarak, ön ayakları kavramak refleks testi yapması gerekmektedir. Her Forepaw avuç karşı künt çubuk yerleştirin ve elle hafif basınç uygulayın. Işık basıncı hafifçe yapılmış olduğunu temasını sağlamak için forepaw yerinden olmalı ve yavrular çubuk hissedebilirsiniz. Grasping çubuğun etrafında tamamen rakamlardan fleksiyon olarak görünecektir. Her iki forepaws üst üste iki gün boyunca çubuk kavramak bu refleksin başarılı edinimi oluşur.
   2. ön ayakları kavrayışa Skoru:
      bir kavrama için 0
      Başarılı sol bir ön pençe kavraması (veya r 1ight Forepaw) burada belirtilebilir
      Her iki ön ayakların başarılı kavrama için 2
5. hindlimb Grasping
   1. PD3 başlayarak, arka pençe kavramak refleks testi yapması gerekmektedir. her deneğin, tek karşı bir künt çubuk yerleştirin ve elle hafif basınç uygulayın. Işık basıncı hafifçe yapılmış olduğunu temasını sağlamak için arka pençenin yerinden olmalı ve yavrular çubuk hissedebilirsiniz. Çubuğun başarılı kavrama çubuğunun çevresinde basamak fleksiyon olarak görünür. Her iki arka pençeler üst üste iki gün boyunca çubuk kavramak bu refleksin başarılı edinimi oluşur.
   2. hindlimb kavrayışa Skoru:
      bir kavrama için 0
      1 tek taraftaki pençe ile kavrama başarılı için (sol veya sağ arka pençe burada belirtilebilir)
      her iki arka pençe başarılı kavrama için 2
6. toparlayan
   1. PD3 gününden itibaren doğrulma refleksi testi başlar. dört ayağı dik sıkıca, yatar pozisyonda yavru tutun. o gitsinyavru f ve hemen zamanlayıcıyı başlatın. yavru / çevirme Dört bacak üzerine devrilme mümkün olduğunda doğrulma elde edilir, ve her bir pençe gövdeye diktir. Her yavru bu hedefe ulaşmak için 15 sn maksimum verin.
   2. düzgün bir hale getirmesine Skoru:
      0 (en fazla verilen süre boyunca ya da 15 s) arkasında yatan için
      1 yan yatarken için (sol veya sağ tarafı burada belirtilebilir) veya (maksimum ayrılan süre veya 15 sn) yanlış duruş sağa ama yavru yeteneği
      Başarılı doğrulma ve uygun duruş için 2
7. hindlimb yerleştirme
   1. PD4 gününden itibaren refleks testi yerleştirerek hindlimb başlar. gövde tarafından, havada dikey yavru tutun. Yavaşça inme, kör bir yüzey ile arka ayaklarının sırt (örneğin, bir masanın kenarına gibi). sıçan yavrusuna aşağı yüzey üzerinde arka bacağın yerleştirilmesi ve ardından stimüle hindlimb, geri çekmesi halinde doğru bir yerleştirme refleks.
   2. hindlimb pl Skorurefleksini acing:
      Hiçbir başarıların 0
      1, bir arka ayağın yerleştirmek için (sol veya sağ arka pençe burada belirtilebilir)
      her iki arka pençe için başarılı bir arka bacak yerleştirme için 2
8. Cliff kaçınma
   1. PD4 tarihinden itibaren, uçurum kaçınma Teste başlamak. yavru forepaws ve burun kenar üzerinde olacak şekilde bir düz yüzeyin kenarında, sıçan yavru yerleştirin. Doğru sonuç sıçan yavrusuna yamacın kenarından uzakta döner koruyucu bir cevap olarak, bir. deneycinin eli veya bir köpük iniş düşüşün yavru yakalamak için uçurumun altına yerleştirilir.
   2. Uçurum kaçınma Skoru:
      0 hiçbir hareket için veya kenarı düşme
      uzakta uçurumdan taşımak için girişimleri için değil asılı uzuvları 1
      uzakta uçurumdan başarılı hareket için 2
9. yürüyüş
   1. PD6 üzerinde yürümenin değerlendirilmesi başlayın. 15 cm'lik bir Diamet merkezinde yer yavrularer daire ve görevi tamamlamak için yavru 30 s bekleyin. Sıçan yavrusuna az 30 s daire dışında, her iki ön ayakların hareket edebilir olduğu zaman ¹⁴ başarılı bir yürüme gerçekleştirilir.
   2. o çemberin dışında hareket etmesine sıçan yavru alır saniye cinsinden olarak yürüyüşü Skoru. o çemberin dışında her iki forepaws taşımak için yavruyu gereken süreyi kaydedin. Tutanak 30 s yavru verilen süre içinde görevi tamamlamak mümkün değilse
10. işitsel irkilme
    1. PD10 üzerinde işitsel irkilme analizini başlayın. Bir irkilme tepkisi mevcut olup olmadığını değerlendirmek için doğrudan yavru üzerinde bir gürültü (çan) sunun. yavru uzak sesi, bir "sıçrama hareketini gösterir zaman pozitif bir irkilme tepkisi gözlenir.
    2. işitsel irkilme Skoru:
       (Veya hiç) bir irkilme yanıtı
       (Ya evet) pozitif irkilme yanıtı için
11. Duruş
    1. PD üzerinde duruş analizi başlayın12. Talep olmayan bir kaygan yüzeyinde elde yavrular, ve hareket ederken yavru sahip duruş izleyin. Olgunlaşmamış duruş hareket karın ve gövdeye göre forepaws ve arka pençelere hem dikey işaret eden sürükleyerek yansıtılır. Hareketli gövde için yavru yüzeyinden karın asansör ve forepaws ve arka pençeler hem düz hem de işaret edilir, ya da paralel olduğunda bir olgun duruş elde edilir.
    2. duruş Skoru:
       bir hareket için 0
       Olgunlaşmamış duruş için 1 hareket
       olgun duruş için 2 taşırken
12. Göz Açılış
    1. PD12 tarafında göz açma analizini başlayın. Her iki göz kapakları açık gün kaydedin:
       Görünür gözler için 0
       1 bir görünür gözü için (sol veya sağ tarafı burada belirtilebilir)
       2 iki görünür gözler için
13. Hızlandırılmış Altı düzeltilmesi
    1. PD14 gününden itibaren hızlandırılmış doğrulma test başlar. bir yatay pozisyon 30.48 c yavru yerleştirinBir köpük iniş üzerinde entimeters. yavru atıp kendisi sağ yeteneğini gözlemleyin. Doğrulma yavru onun ayaklarında üzerinde pozisyonda ve karaya teslim getirebilecek hale anlamına gelir.
    2. hızlandırılmış düzgün bir hale getirmesine Skoru:
       sırtında düşen 0
       1 yan düşen (sol veya sağ tarafında burada belirtilebilir)
       Bunu pençelerinde inişe 2

Not: reflekslerin ölçümü farklı türlerde müfettişlerin sorusuna bağlı olarak mevcuttur. refleksleri miktarının ilk refleks gözlenmesi, refleks kaybolana kadar görünümünü kadar ilk günü, bu görevi başarıyla gerçekleştirilmesi için geçen süre, performans hızı ve / veya zaman içinde performansın iyileştirilmesi gibi yapılabilir. C için ^{13, 14, 29, 30, 31}eçerli çalışma, görünüm ilk günü skorla olarak kullanılmıştır. Multiparlarda modeller kullanırken, aynı soydan yavrular genellikle rahim ve doğum sonrası çevre ve beslenme durumu içinde, nedeniyle genetik yapısına benzer şekilde davranır. ³² Bu nedenle, tek bir yavru nedeniyle çöp önyargıya bir n = 1 olarak değerlendirilmesi mümkün değildir. Her çöp bir n temsil eder, böylece, bir çöp içinde incelenen yavrular = 1 ortalaması alınabilir. ^{32, 33} alternatif olarak, aynı çöp içinde çeşitli yavrular aynı çöp içinde hesap yavrular içine alır karışık etki modeli kullanılarak analiz edilebilir. ^{32, 33}

Sonuçlar

Bu deneysel tasarımın zaman çizelgesi Şekil 2'de sunulmuştur. ³⁰ yöntemleri ve sonuçları önceden yayınlanmıştır. Çalışmanın ³⁰ hedefi brokoli gebelik sırasında lahanası ve sütten kesim öncesi dönemle diyet takviyesi LPS ın utero maruz kalma tarafından uyarılan nörogelişimsel gecikme gelen yavrular korumalı olup olmadığını araştırmaktır. Zamana bağl?...

Tartışmalar

Nörogelişimsel refleks testi açık nöropatoloji belirgin değildir koşullar altında anlamlı olabilir anormal kortikal gelişme ve olgunlaşma öngörücü ölçüsüdür. nörogelişimsel Test sırasında, yavruların günlük aynı anda incelenir sağlamak için kritik öneme sahiptir. Sıçanlar gece ve test gün boyunca farklı zamanlarda gerçekleştirilir, bu nedenle, kendi sirkadyen ritim performansını değiştirebilir. Yüksek ses yavrulara stres ekleyebilir olarak ³⁴ Test sessiz ...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Breeding
Transfer pipettes	Fisherbrand	12-711-9AM	Used for vaginal flushes.
Sterile Saline	Hospira	7983254	The solution used to collect cells during vaginal flushes.
400 µl Microcentrifuge tubes	Fisherbrand	05-408-120	Used to hold the saline solution.
Light microscope	Leica	Leica ATC 2000	For observation of the saline solution. Can be any light microscope used in the lab.
Slides	Fisherbrand	12-552-5	The saline solution is placed on the slide. Can be any slides used in the lab.
Coverslips	Fisherbrand	12-545-F	To coverslip the slides. Can use any coverslips used in the lab.
Dietary  Supplementation
Broccoli Sprouts seeds	Mumm's Sprouting Seeds		Broccoli sprouts seeds are ordered and grown in the lab.
Countertop Seed Sprouter Box	Mumm's Sprouting Seeds		A box is used to germinate and grow the seeds prior to harvest.
250 mL beaker			The beaker is used to soak the seed. Any size beaker that would fit can be used.
Maternal Inflammation
Lipoplysaccharide (LPS)	Sigma	L3129	The endotoxin used to mimic maternal inflammation.
1 mL Syringe	BD Syringe	309659	Used to inject the pregnant rat.
Gauge (30G X 1/2)	BD PrecisionGlide Needle	305106	Use the smallest needle to avoid pain and discomfort.
Sterile Saline (0.9% Sodium Chloride, USP)	Hospira		Saline is used to dissolve LPS.
Weights
Scale	Denver Instrument		For recording the weights. Can be any scale with 2 decimal places used in the lab.
Neurodevelopmental Reflexes
Thin blunt rod			Can be a paperclip or toothpick. This is for forelimb and hindlimb grasping.
Round filter paper	Whatman	1001 150	15 cm diameter paper used for gait analysis.
Timer	Fisher Scientific	06-662-51	For timing the time allocated to righting and gait.
Blunt surface			Can be an edge of a table. This is for hindlimb placing and cliff avoidance.
Foam landing			For when the pups perform accelerated righting.
Video recorder	Sony	VCT-D580RM	To record all reflexes tested. Must be able to record at 1/1000 fps
Bell			For auditory startle.
Heat lamp or pad			To maintain the body temperature of the pups underoing examination.