Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

تشكل الخلايا الكيراتينية البشرة حاجز الجلد وظيفية ويتم وضعها في الخط الأمامي للدفاع المضيف ضد الشتائم البيئية الخارجية. هنا نحن تصف أساليب العزلة والثقافة الأولية من الخلايا الكيراتينية البشرة من حديثي الولادة والجلد الماوس الكبار، وتحريض من التمايز الطرفية والاستجابة الالتهابية أوفب أثارت من الخلايا الكيراتينية.

Abstract

الكيراتين (كك) هو نوع الخلية السائدة في البشرة، الطبقة الخارجية من الجلد. البشرة تلعب كك دورا حاسما في توفير دفاع الجلد عن طريق تشكيل حاجز الجلد سليمة ضد الإهانات البيئية، مثل الأشعة فوق البنفسجية التشعيع أو مسببات الأمراض، وأيضا عن طريق الشروع في استجابة التهابية على تلك الشتائم. هنا نحن تصف طرق لعزل ككس من جلد الماوس حديثي الولادة ومن الكبار الجلد ذيل الماوس. نحن أيضا وصف ظروف زراعة باستخدام مكملات النمو المحددة (دغس) بالمقارنة مع مصل الدم البقري الجنيني (كفبس). وظيفيا، وتبين لنا أن كل من كونات حديثي الولادة والكبار تستجيب للغاية إلى ارتفاع التوليف محطة الناجم عن الكالسيوم، وتشكيل تقاطع ضيق وطبقية. بالإضافة إلى ذلك، ككس الكبار مثقف عرضة للإصابة بالخلايا التي تسببها أوفب ويمكن أن يطلق كميات كبيرة من تنف على الأشعة فوق البنفسجية الأشعة فوق البنفسجية. معا، فإن الطرق الموصوفة هنا تكون مفيدة للباحثين عن إعداد نموذج في المختبرق لدراسة البيولوجيا البشرة في الماوس حديثي الولادة و / أو الماوس الكبار.

Introduction

الجلد هو أكبر جهاز في الجسم مع البشرة كما الخارجي معظم طبقة. البشرة تلعب دورا حاسما في تشكيل حاجز البشرة سليمة لفصل الجسم من البيئة، وبالتالي يمنع فقدان المياه ويوفر الحماية من الإهانات البيئية، مثل مسببات الحساسية، مسببات الأمراض والتعرض أوفب. البشرة تتطور من طبقة واحدة من الخلايا الكيراتينية القاعدية غير المتمايزة (ككس) في ظهارة طبقية متعددة الطبقات تتكون من طبقة القاعدية، تليها طبقة سبينوس، طبقة الحبيبية، وطبقة القرنية. بسال ككس، تتكون من كل من الخلايا الجذعية للبشرة وخلايا تضخيم العبور، هي التكاثري وغير متمايزة. كما كك القاعدية الخروج من دورة الخلية، وتلتزم الخلايا إلى التمايز وتهاجر تدريجيا نحو سطح البشرة، يرافقه نضوج تقاطعات الخلايا الخلوية وتشكيل حاجز نفاذية البشرة (إب). و ككس في الطبقة الشائكة التعبير عن الاختلافات في وقت مبكرعلامات أيون مثل الكيراتين 10 (K10). كما تهاجر ككس إلى الطبقة الحبيبية، والخلايا تعبر عن علامات التمايز المتأخر مثل فيلاغرين (فلغ)، لوريكرين (لور) و إنفولوكرين (إنف). في الطبقة القرنية، و كك تصبح متباينة كورنيوسيتس متباينة، والتي تسقط في نهاية المطاف من خلال التقشر كما خلايا جديدة محلها.

ويعتبر الكالسيوم العامل الأكثر فسيولوجية في البشرة ويؤدي التمايز في المختبر وفي الجسم الحي بطريقة مماثلة. في البشرة العادية البشرة، أيونات الكالسيوم تشكل مميزة "تركيز التدرج"، وزيادة في التركيز نحو سطح الجلد 1 ، 2 ، 3 . ويرتفع تركيز الكالسيوم من المستويات المنخفضة في الطبقات الفرعية الدنيا (الطبقات القاعدية والسبينوس) إلى ذروة الطبقة الحبيبية العليا ثم ينخفض ​​إلى مستويات لا تذكر في الطبقة السطحية الأكثر (الطبقة القرنية). يتطور التدرج الكالسيوم أيضا من قبيل الصدفة مع ظهور حاجز نفاذية المكون، والذي يدعم أن إشارات الكالسيوم تلعب دورا حاسما في التمايز كك. في المختبر ، والكالسيوم منخفض (0.02-0.1 ملم) يحافظ على انتشار كك القاعدية كما أحادي الطبقة، في حين أن ارتفاع الكالسيوم (> 0.1 ملم) يدفع التزام سريع ولا رجعة فيه من الخلايا إلى التمايز الطرفية كما يتضح من تشكيل تقاطع ضيق والتحريض من لور و إنف على ارتفاع الكالسيوم العلاج إلى ككس القاعدية 4 ، 5 .

بالإضافة إلى تشكيل حاجز، كك البشرة هي أيضا عنصرا هاما من نظام المناعة الفطرية في الجلد. استجابة لمسببات الأمراض أو أنماط الجزيئية المرتبطة التالفة (دامبس) صدر على أشعة أوفب أو إصابة، ككس يمكن أن تنتج كميات كبيرة من السيتوكينات الالتهابية، مثل TNFα، IL6 و IFNβ، مما يؤدي إلى تنشيط جهاز المناعة> 6 ، 7 ، 8 ، 9 . على الرغم من أن الإشارات الالتهابية المناسبة من ككس مطلوبة للتخلص من الممرض، والاستجابة الالتهابية غير المنضبط قد تؤدي إلى تطوير الأمراض الجلدية للالتهابات، مثل الصدفية والوردية 6 ، 8 .

عموما، كك تلعب دورا حيويا في الحفاظ على حاجز الجلد سليمة والشروع في استجابة مناعية على غزو الممرض أو الإهانات البيئية. ولذلك، والثقافة الأولية من كك البشرة هي تقنية مفيدة لدراسة البيولوجيا الظهارية، والتمايز كك، فضلا عن استجابات المناعة الفطرية تحفيز كك. العزلة والثقافة الأولية كوز البشرة الماوس يمكن أن يكون عملية صعبة بسبب حساسية كك وحساسية لمختلف المنبهات الخارجية. هنا نحن تصف طريقة لعزل والثقافة ككس إما من جلد الماوس حديثي الولادة أوبالغ، ذيل الفأر، جلد. للكبار كك العزلة، ونحن لا تستخدم الجلد الظهري الماوس لعزل كميات كافية من كك قابلة للحياة من هذا النسيج يمكن أن يكون صعبا للأسباب التالية: أولا، الجلد الظهرية الكبار في مرحلة يستريح من دورة الشعر (تيلوجين) يتكون من رقيقة البشرة مع 1-2 طبقات فقط من الخلايا، مما يؤدي إلى انخفاض العائد الخلية وفصل غير فعال للبشرة من الأدمة، والتي هي الخطوة الحاسمة لنجاح عزل كك. ثانيا، ارتفاع كثافة بصيلات الشعر الذي هو موجود على الجلد الظهرية الكبار يزيد من صعوبة في فصل البشرة من الأدمة. بدلا من ذلك، نحن بشكل روتيني استخدام الجلد الذيل كمصدر للكبار الماوس الماوس كك هذه الظهارة هي أكثر سمكا مع 3-5 طبقات من كك البشرة. كما أن لديها أقل كثافة بصيلات الشعر، والتي لا تتداخل مع الانفصال البشرة، مما يسمح عزل كك من أي الكبار الجلد ذيل الماوس بغض النظر عن العمر ومرحلة ركوب الدراجات الشعر من الماوس. نينا معزولةتصنف ككس تال للأطباق ثقافة الجيلاتين المغلفة، في حين يتم استخدام الأطباق المغلفة الكولاجين للبذور معزولة ككس الكبار بسبب ضعف القدرة من الخلايا الكبار على الانضمام إلى نظرائهم حديثي الولادة. لثقافة الماوس ككس، ويستكمل منخفض الكالسيوم المتوسطة القاعدية مع دغس، الذي يحتوي على عامل نمو البشرة (إغف)، ترانسفيرين البقري، مثل الأنسولين النمو IGUC1 (IGF1)، البروستاجلاندين E2 (PGE2)، ألبومين المصل البقري (بسا) والهيدروكورتيزون. بين 2-4 أيام بعد الطلاء الأولي، يمكن أن تغسل معظم ككس متباينة خلال التغييرات المتوسطة اليومية، وتبين الخلايا الملتصقة المتبقية التشكل المرصوف بالحصى النموذجي 4 ، تتكاثر، ولا تعبر عن التمايز المبكر علامة K10.

Protocol

تمت الموافقة على جميع التجارب على الحيوانات من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسية أوسد.

1. الابتدائي الماوس كك العزلة والثقافة من الجلد حديثي الولادة

  1. التضحية بعد الولادة الولادة 0-2 الولدان من سلالة الماوس C57B / 6 ويلديب بواسطة قطع الرأس باستخدام مقص. قطع أطرافه فقط فوق المعصم والكاحل المفاصل، ثم قطع الذيل تماما، وترك حفرة صغيرة.
  2. لتقشير الجلد كله، إدراج أول مقص حاد من خلال ثقب في الذيل وقطع الجلد على طول خط الوسط الظهرية من الجسم لافتتاح على الرقبة. بعد ذلك، استخدم ملقط واحد لفهم الجسم المكشوف وملقط أخرى لفهم الجلد، وقشر بلطف الجلد كله من الجسم وعلى جذوع الساق مع حركة مستمرة واحدة.
    1. تقشر الجلد كما قطعة واحدة سليمة ويجب الحرص على عدم كسر الجلد إلى قطع لأن هذا سوف يؤدي إلى فقدان الخلية خلال الخطوة ديسباس.
    3. <لي> شطف الجلد المقشر مع 15 مل من برنامج تلفزيوني العقيمة في طبق بتري 10 سم، ثم وضع الجلد من كل الجرو في أنبوب 2 مل مليئة الباردة الباردة ديسباس العازلة الهضم، والذي يحتوي على 4 ملغ / مل ديسباس في وسط النمو كك (كك المتوسطة القاعدية لديها 0.06 ملي كاكل 2 ، دغس، والمضادات الحيوية / أنتيميكوتيكش).
    ملاحظة: يمكن الجمع بين العزلات متعددة الجلد وحضنت في أنبوب واحد 15 مل (تصل إلى 5 جلود في أنبوب) تحتوي على 12 مل من محلول ديسباس. احتضان أنبوب الجلد بين عشية وضحاها في الثلاجة 4 درجات مئوية على المدورة.
    1. تأكد من أن الجلد غير مطوية في الأنبوب لأن هذا سوف يؤدي إلى التعرض الكافي للمنطقة مطوية إلى حل ديسباس.
  3. في اليوم التالي (بعد 12-18 ساعة في ديسباس)، ونقل الجلد جنبا إلى جنب مع حل ديسباس في طبق بتري. نقل كل قطعة الأنسجة إلى طبق بتري جديد مع 15 مل برنامج تلفزيوني العقيمة لغسل بعيدا ديسباس الزائدة.
  4. باستخدام اثنين من أزواج من ملقط، فهم الجلد من برنامج تلفزيوني،ورفع الجلد، ونقل إلى طبق بتري جديد مع الجانب البشرة إلى أسفل والجانب الأدمة حتى. تمدد بعناية طيات الجلد بحيث يتم تمديده بشكل كامل على طبق بتري.
  5. مكان 500 ميكرولتر من حل الهضم القائم على التربسين لكل الجلد في طبق بتري الجديد. باستخدام ملقط، ورفع ببطء الأدمة حتى وبعيدا عن البشرة، في حين عقد البشرة إلى أسفل. التخلص من الأدمة كما المواد بيوهازاردوس. نقل البشرة فصل وتطفو على كل قطرة من حل التربسين مع الطبقة القاعدية النزولي.
    1. إذا تم طي البشرة على الحل التربسين، وإزالة أي طيات باستخدام ملقط لضمان كفاءة الهضم من كك القاعدية من ظهارة.
  6. احتضان الجلد على طبق بتري في حل التربسين في درجة حرارة الغرفة (مع غطاء مغطى) على شاكر الأفقي مع الإثارة لطيف لمدة 20 دقيقة.
  7. إضافة 2 مل من مكمل النمو كك المتوسطة للبشرة (حوالي 1 بوصة مربعة في الحجم لكلالبشرة) إلى طبق بتري. فهم البشرة باستخدام ملقط، وفرك بقوة البشرة ذهابا وإيابا للافراج عن خلايا واحدة من ورقة البشرة.
    1. مشاهدة بدوره المتوسطة عكر بشكل متزايد كما يتم فصل الخلايا من البشرة. إمالة طبق بتري لجمع ونقل تعليق خلية إلى أنبوب جديد ترك ورقة البشرة المتبقية على الطبق.
  8. كرر مرتين أكثر من فرك ورقة البشرة بعد إضافة 2 مل وسط النمو كك، والجمع بين تعليق الخلية في نفس الأنبوب.
  9. الماصة حل الخلية صعودا وهبوطا بلطف عدة مرات لكسر أي كتل خلية باستخدام ماصة المصلية المناسبة، ثم تمريره من خلال مرشح 100 ميكرون إلى 50 مل أنبوب الطرد المركزي الجديد.
  10. أجهزة الطرد المركزي الخلايا التي تمت تصفيتها لمدة 5 دقائق في 180 × ز.
  11. نضح قبالة طاف و ريسوسبيند بلطف بيليه الخلية في 1 مل الباردة النمو كك المتوسطة / البشرة.
  12. عد الخلايا عن طريق عدادة الكريات.
    ملاحظة: ككس يمكن أن تفرق تلقائيا في تعليق، لذلك يجب أن تكون مطلية الخلايا في أقرب وقت ممكن بعد العزلة لضمان الأداء الأمثل للخلايا. نوصي وضع الخلايا على الجليد في حين عد وهذا سوف يقلل من معدل كك التمايز عفوية.
  13. البذور الخلايا بكثافة 5 × 10 4 / سم 2 في وسط النمو كك في أطباق الثقافة المغلفة مسبقا مع المصفوفة خارج الخلية (إسم) المنتج الذي يعزز مرفق الخلية.
    ملاحظة: نحن نستخدم التجارية المتاحة (على سبيل المثال عامل التعلق، وهي مادة الطلاء القائم على الجيلاتين (انظر جدول المواد لمزيد من التفاصيل) تم استزراع الخلايا في حاضنة ترطيب مع 5٪ كو 2 عند 37 درجة مئوية، وكانت المتوسطة الطازجة تجدد كل يوم.
    1. للطلاء، معطف أطباق الثقافة مع المواد خلية مرفق الطلاء تحسنت لدرجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقيقة إلى 2 ساعة قبل البذر الخلية. قم بإزالة عامل التعلق مباشرةمضيفا تعليق الخلية.
  14. تغيير المتوسطة 24 ساعة بعد الطلاء الأولي لإزالة الخلايا غير المرفقة، وتغيير المتوسطة يوميا حتى تصل الخلايا كونفلنسي المطلوب قبل التجربة.

2. الابتدائي الماوس كك العزلة من الجلد الذيل الكبار

  1. التضحية الكبار C57BL / 6 الماوس (يفضل أن يكون بين 6-15 أسابيع من العمر، سواء من الذكور أو الإناث) وفقا للوائح منشأة الحيوان. قطع ذيل قبالة الجسم من قاعدة الذيل، وقطع ~ 2 ملم من طرف الذيل بحيث يكون هناك ثقب مرئي في طرف.
  2. لقشر الجلد الذيل قبالة، أولا استخدام شفرة حادة لقطع على طول الجلد الذيل من القاعدة إلى طرف الذيل. بعد ذلك، استخدم ملقط واحد لفهم عظم الذيل المكشوفة وملقط أخرى لفهم الجلد، وقشر بلطف الجلد الذيل قبالة العظام مع حركة واحدة مستمرة. قطع الجلد المقشر من منتصف خط بحيث كل قطعة هو أقل من 2-3 سم طويلة.
  3. شطف الطرافة الجلد مقشرح 15 مل من برنامج تلفزيوني العقيمة في طبق بتري 10 سم، ثم وضع الجلد من كل ذيل إلى أنبوب 2 مل مليئة الباردة الباردة ديسباس العازلة الهضم (4 ملغ / مل ديسباس في وسط النمو كك).
    ملاحظة: ويمكن أيضا قطع الجلد متعددة مجتمعة وحضنت في أنبوب واحد 15 مل (تصل إلى 5 ذيول لكل أنبوب) تحتوي على 12 مل من محلول ديسباس.
    1. احتضان أنبوب الجلد بين عشية وضحاها في الثلاجة 4 درجات مئوية على المدورة.
  4. تنفيذ الخطوات 1.4 إلى 1.13 لعزل تعليق خلية واحدة من البشرة الذيل.
  5. البذور الخلايا البالغة بكثافة 10 × 10 4 / سم 2 (تحسب عن طريق مقياس كريات الدم) في وسط النمو كك في أطباق الثقافة المغلفة مسبقا مع الكولاجين.
    ملاحظة: نحن نستخدم المتاحة تجاريا مجموعة طلاء القائم على الكولاجين (انظر جدول المواد لمزيد من التفاصيل). تم تربيتها الخلايا في حاضنة ترطيب مع 5٪ كو 2 عند 37 درجة مئوية، وتم تجديد المتوسطة الطازجة كل يوم. بشكل عام، جيجب أن تكون مغلفة الأطباق ثقافة مع الكولاجين لمدة 30 دقيقة إلى 1 ساعة قبل البذر الخلية. نلاحظ أن هناك تعزيز كبير من مرفق كك الكبار إلى الطبق عندما المغلفة مع الكولاجين بالمقارنة مع عامل التعلق، وهو مادة الطلاء القائم على الجيلاتين.
  6. تغيير المتوسطة 24 ساعة بعد الطلاء الأولي لإزالة الخلايا غير المرفقة، وتغيير المتوسطة يوميا حتى تصل الخلايا كونفلنسي المطلوب قبل التجربة.

3. في التمايز في المختبر ككس من قبل الكالسيوم عالية

  1. للحث على التمايز الطرفية، إضافة كاكل 2 إلى 0.2 ملم في وسط الاستزراع.
  2. بدلا من ذلك، تجويع كك مثقف بين عشية وضحاها دون مكملات النمو المضافة في انخفاض الكالسيوم وسط كك القاعدي قبل إضافة الكالسيوم عالية.
    ملاحظة: سوف عامل النمو المجاعة تعزيز التزام الخلية إلى التمايز المبكر وتحريض علامات التمايز في وقت مبكر، مثل K10 5 .

4. أوفب التشعيع بوساطة خلية الموت و TNFα الإصدار من ككس

  1. ثقافة ككس الماوس في وسط النمو كك (في حاضنة مرطب مع 5٪ كو 2 في 37 درجة مئوية) مع تغيير المتوسطة يوميا حتى تصل الخلايا كونفلنسي. مباشرة قبل الأشعة فوق البنفسجية التشعيع، وإزالة المتوسطة النمو واستبدالها مع 500 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني. ثم تخضع الخلايا إلى 25 ميجا جول / سم 2 أوفب أو السيطرة وهمية (لا أوفب).
    ملاحظة: يتم تنفيذ أوفب التشعيع باستخدام المصابيح أوفب المحمولة مع اثنين من 8 W لمبات (312 نانومتر) كما هو موضح سابقا 10 . بعد أشعة أوفب، يتم استنشق بس ويضاف المتوسطة الطازجة.
  2. قياس وقياس بقاء الخلية من قبل كك-8 فحص بقاء الخلية في 6 و 8 و 24 ساعة بعد العلاج أوفب بعد تعليمات الشركة الصانعة 11 .
  3. جمع المتوسطة مكيفة من ككس تعامل مع أوفب في نقاط الوقت المطلوب وقياس TNFα صدرفي وسيلة مكيفة من قبل ماوس تنف (مونو / مونو) إليسا عدة بعد تعليمات الشركة المصنعة 7 ، 12 .

النتائج

ارتفاع الكالسيوم التمايز محطة الناجم عن ككس حديثي الولادة والكبار. كروس البشرة الأساسية الأولية مطلي والحفاظ عليها في 0.06 ملي كاكل 2 نمت باعتبارها أحادي الطبقة، وكانت الخلايا الفردية شكل مضلع مع الفضاء بين الخلايا متميزة، والتي تبين ...

Discussion

البشرة البشرة وظائف كحاجز حاسم لفصل وحماية الجسم من البيئة الخارجية والضرر من فقدان المياه، مسببات الأمراض، الحرارة والأشعة فوق البنفسجية التشعيع. و ككس هي سلالة الخلايا السائدة من البشرة، والثقافة الأساسية لل كك البشرة هي أداة مفيدة لدراسة وفهم العمليات البيولوج?...

Disclosures

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

Acknowledgements

وأيد هذا العمل من قبل المعهد الوطني لأمراض المفاصل والأمراض العظمية والسكري والجسم منح (R01AR069653 لتشانغ لج)، والمعاهد الوطنية للدعم الصحي (5T32AR062496-03 إلى كا).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
C57BL/6 neonates or adult wildtype miceJackson Laboratory000664Wildtype mice (originally purchased from Jackson Laboratory) are breeded and maintained in animal vivarium at UCSD.
KC basal medium (EpiLife)Invitrogen, Carlsbad, CAMEPICF500basal medium for keratinocyte culture with 0.06 mM CaCl2
Defined Growth Supplement (dGS)Invitrogen, Carlsbad, CAS0125defined growth supplements for culture medium
Dispase powderInvitrogen, Carlsbad, CA17105041enzyme to dissociate the epidermis from dermis
Attachment FactorInvitrogen, Carlsbad, CAS006100gelatin-based coating material
Coating MatrixInvitrogen, Carlsbad, CAR011KCollagen-based coating material
TrypLEInvitrogen, Carlsbad, CA12604-013A gentle trypsin-like enzyme to dissociate keratinocytes from epidermal sheet
100 μm Cell Strainer Nylon meshCorning352360
CCK-8 cell viability KitDojindo Molecular Technologies, Rockville, MDCK04-11
Mouse TNF (Mono/Mono) ELISA Set IIBD Biosciences, San Jose, CA555268
Corded Hand-Held UV LampsSpectronics, Westbury, NYEB-280C
8-watt UV tubesSpectronics, Westbury, NYBLE-8T312
Light Inverted Microscope for cell cultureZEISS, Jena, GermanyAxio Observer
Fluorescent MicroscopeOlympusBX41

References

  1. Mauro, T., et al. Acute barrier perturbation abolishes the Ca2+ and K+ gradients in murine epidermis: quantitative measurement using PIXE. J Invest Dermatol. 111 (6), 1198-1201 (1998).
  2. Menon, G. K., Grayson, S., Elias, P. M. Ionic calcium reservoirs in mammalian epidermis: ultrastructural localization by ion-capture cytochemistry. J Invest Dermatol. 84 (6), 508-512 (1985).
  3. Elias, P. M., et al. Formation of the epidermal calcium gradient coincides with key milestones of barrier ontogenesis in the rodent. J Invest Dermatol. 110 (4), 399-404 (1998).
  4. Hennings, H., et al. Calcium regulation of growth and differentiation of mouse epidermal cells in culture. Cell. 19 (1), 245-254 (1980).
  5. Zhang, L. J., Bhattacharya, S., Leid, M., Ganguli-Indra, G., Indra, A. K. Ctip2 is a dynamic regulator of epidermal proliferation and differentiation by integrating EGFR and Notch signaling. J Cell Sci. 125 (Pt 23), 5733-5744 (2012).
  6. Lai, Y. P., et al. Commensal bacteria regulate Toll-like receptor 3-dependent inflammation after skin injury. Nat Med. 15 (12), 1377-1382 (2009).
  7. Bernard, J. J., et al. Ultraviolet radiation damages self noncoding RNA and is detected by TLR3. Nat Med. 18 (8), (2012).
  8. Zhang, L. J., et al. Antimicrobial Peptide LL37 and MAVS Signaling Drive Interferon-beta Production by Epidermal Keratinocytes during Skin Injury. Immunity. 45 (1), 119-130 (2016).
  9. Borkowski, A. W., et al. Toll-Like Receptor 3 Activation Is Required for Normal Skin Barrier Repair Following UV Damage. J Invest Dermatol. 135 (2), 569-578 (2015).
  10. Borkowski, A. W., et al. Toll-like receptor 3 activation is required for normal skin barrier repair following UV damage. J Invest Dermatol. 135 (2), 569-578 (2015).
  11. Zillessen, P., et al. Metabolic role of dipeptidyl peptidase 4 (DPP4) in primary human (pre)adipocytes. Sci Rep. 6, 23074 (2016).
  12. Wells, C. A., et al. The macrophage-inducible C-type lectin, mincle, is an essential component of the innate immune response to Candida albicans. J Immunol. 180 (11), 7404-7413 (2008).
  13. Vasioukhin, V., Bauer, C., Yin, M., Fuchs, E. Directed actin polymerization is the driving force for epithelial cell-cell adhesion. Cell. 100 (2), 209-219 (2000).
  14. Zhuang, L., et al. TNF receptor p55 plays a pivotal role in murine keratinocyte apoptosis induced by ultraviolet B irradiation. J Immunol. 162 (3), 1440-1447 (1999).
  15. Lichti, U., Anders, J., Yuspa, S. H. Isolation and short-term culture of primary keratinocytes, hair follicle populations and dermal cells from newborn mice and keratinocytes from adult mice for in vitro analysis and for grafting to immunodeficient mice. Nat Protoc. 3 (5), 799-810 (2008).
  16. Dlugosz, A. A., Glick, A. B., Tennenbaum, T., Weinberg, W. C., Yuspa, S. H. Isolation and utilization of epidermal keratinocytes for oncogene research. Methods Enzymol. 254, 3-20 (1995).
  17. Jones, J. C. Isolation and culture of mouse keratinocytes. CSH Protoc. 2008, (2008).
  18. Pirrone, A., Hager, B., Fleckman, P. Primary mouse keratinocyte culture. Methods Mol Biol. 289, 3-14 (2005).
  19. Yuspa, S. H., Kilkenny, A. E., Steinert, P. M., Roop, D. R. Expression of murine epidermal differentiation markers is tightly regulated by restricted extracellular calcium concentrations in vitro. J Cell Biol. 109 (3), 1207-1217 (1989).
  20. Yuspa, S. H., et al. Signal transduction for proliferation and differentiation in keratinocytes. Ann N Y Acad Sci. 548, 191-196 (1988).
  21. Fang, N. X., et al. Calcium enhances mouse keratinocyte differentiation in vitro to differentially regulate expression of papillomavirus authentic and codon modified L1 genes. Virology. 365 (1), 187-197 (2007).
  22. Kolly, C., Suter, M. M., Muller, E. J. Proliferation, cell cycle exit, and onset of terminal differentiation in cultured keratinocytes: pre-programmed pathways in control of C-Myc and Notch1 prevail over extracellular calcium signals. J Invest Dermatol. 124 (5), 1014-1025 (2005).
  23. Marcelo, C. L., Gold, R. C., Fairley, J. A. Effect of 1.2 mmol/l calcium, triamcinolone acetonide, and retinoids on low-calcium regulated keratinocyte differentiation. Br J Dermatol. 111, 64-72 (1984).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

125

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved