طريقة موحدة للتعقيم الفائق من بذور نبات

Summary

وكان الهدف من هذه الدراسة لتحديد آثار التبييض والكلور غاز التعقيم على إنبات البذور الأنماط الجينية طائفة من نبات يزرع في وسائل الإعلام العقيمة. وقد وضعت بروتوكولات التعقيم الأمثل لمنع نمو الملوثات الميكروبية مع توفير البذور مرضية البقاء على قيد الحياة.

Abstract

التمويل نبات غالباً ما تحتاج شتلات (نبات) زراعتها في وسائل الإعلام العقيمة. وهذا يتطلب تعقيم البذور السابقة لمنع نمو الملوثات الميكروبية موجودة على سطح البذور. حاليا، يتم تعقيم بذور نبات استخدام تقنيات التعقيم مميزة اثنين في ظروف تختلف اختلافاً طفيفا بين مختبرات ولا تم توحيد، وغالباً ما يؤدي إلى في التعقيم الفعالة الوحيدة جزئيا أو في الوفيات البذور المفرط. معظم هذه الطرق أيضا ليست قابلة بسهولة لعدد كبير من خطوط البذور من الأنماط الجينية المتنوعة. كما لا تزال تقنيات التحليل الفائق لنبات تتكاثر، أصبحت تقنيات موحدة لتعقيم أعدادا كبيرة من بذور الأنواع الوراثية المختلفة الضرورية لإجراء هذه الأنواع من التجارب. وتم تقييم استجابة عدد من خطوط أعطيت لتقنيات التعقيم مختلفة اثنين على أساس معدل إنبات البذور ومستوى تلوث البذور مع الجراثيم ومسببات الأمراض الأخرى. وتشمل العلاجات تركيزات مختلفة لتعقيم وكلاء وأوقات التعرض، جنبا إلى جنب لتحديد الظروف المثلى لتعقيم بذور نبات. تم وضع البروتوكولات الأمثل لأسلوبين من أساليب التعقيم المختلفة: التبييض (المرحلة السائلة) وغاز الكلور (Cl₂) (بخار-المرحلة)، سواء نتج عنه معدلات إنبات البذور عالية، والحد الأدنى من التلوث الميكروبي. الأداة المساعدة هذه البروتوكولات تجلى من خلال اختبار نوع البرية وبذور متحولة مع طائفة من الإمكانات الإنبات. وتظهر النتائج التي توصلنا إليها أن بذور يمكن فعالية التعقيم استخدام أي من الطريقتين دون وفيات البذور المفرطة، وعلى الرغم من أن لوحظت آثار ضارة للتعقيم للبذور مع أقل من إمكانات إنبات الأمثل. وباﻹضافة إلى ذلك، وضعت معادلة لتمكين الباحثين من تطبيق شروط التعقيم غاز الكلور موحدة إلى محكم حاويات ذات أحجام مختلفة. تسمح البروتوكولات المذكورة هنا تعقيم البذور سهلة وفعالة وغير مكلفة لعدد كبير من خطوط نبات.

Introduction

التمويل نبات (نبات) كائن نموذج الرئيسي للبحوث الأساسية والتطبيقية في مصنع بيولوجيا^1،،من²³. بينما كانت الشروط القياسية لنمو نبات راسخة⁴، تأثير تعقيم البذور على صلاحية البذور لم يتم اختبار صارم. وسائط صلبة في لوحات أو مربعات تستخدم بشكل روتيني لتسهيل نمو شتلات نبات للعديد من التطبيقات التجريبية، مثل تحديد طفرات مميتة متماثل في فصل سكان، المراقبة تعمل تبادل لإطلاق النار والجذرية في وقت مبكر مراحل، وعزله أنسجة خالية من مسببات الأمراض، وجمع كميات كبيرة من أنسجة الشتلات، واختيار ترانسفورمانتس أو النباتات المقاومة للعقاقير، وتقييم لإنبات^1،2،3،4 . تحصد البذور من النباتات التي نمت في دفيئة أو دائرة النمو أحياناً ملوثة بالغبار والكائنات الدقيقة. يتطلب نمو شتلات نبات في أنواع مختلفة من الوسائط معقمة تعقيم البذور السابقة إزالة الملوثات الميكروبية مثل الفطريات والبكتيريا الموجودة على سطح البذور. استخدام نظام تعقيم البذور الفعالة أمر بالغ الأهمية لتحقيق توازن لإنبات عالية، والحد الأدنى من التلوث، ونمو النبات قوية.

تستند الطريقتين الأكثر شيوعاً المستخدمة لتعقيم بذور نبات التبييض التجارية (المرحلة السائلة) وغاز الكلور (بخار-المرحلة). وقد استخدمت مختلف الإجراءات لكلا التعقيم السائل-المرحلة^{1،4،5،6،7،،}من^{89 , 10} وبخار-مرحلة التعقيم من نبات بذور^{8،10،11،،}من^1213،،من^{1415 ،16}. ومع ذلك، بينما كانت هذه الإجراءات فعالة في إنجاز تعقيم البذور من الأنماط الجينية المستخدمة، تحليلاً مفصلاً لتأثير العلاجات المختلفة التعقيم على البذور من الأنماط الجينية المختلفة لا أبلغ. ولذلك، مطلوب الاستفادة المثلى من هذه الإجراءات التعقيم لتحديد الشروط التي يتم الجمع بين كفاءة التعقيم مع معدل إنبات عالية.

أعطيت البيولوجي الموارد مركز (أبرك) في موقع فريد يمكنها أ) اختبار صلاحية البذور لمجموعة متنوعة من الأنماط الجينية المختلفة في جمع وب) الاستفادة من إجراءات مراقبة الجودة المطبقة داخليا واستجابة لتعليقات المستخدمين عن إنبات البذور. وتمثلت أهداف التجارب المقدمة هنا لتحديد آثار مختلف أساليب التعقيم على إنبات البذور الأنماط الجينية طائفة من نبات. وترد إجراءات التعقيم الأمثل الذي يؤدي إلى معدلات إنبات البذور عالية مع المحافظة على التلوث الممرض الحد الأدنى للتبييض والكلور غاز التعقيم.

Protocol

1-إعداد 1 × المتوسطة Murashige وسكوغ (مللي ثانية)

حمض

1. ز 4.31 إضافة خليط الملح القاعدي مرض التصلب العصبي المتعدد والسكروز 10 جرام 0.5 غ من اثانيسولفونيك 2-(N-Morpholino) (MES) لكوب يحتوي على 0.8 لتر من الماء المقطر ويقلب حل. فحص وضبط الأس الهيدروجيني إلى 5.7 استخدام 1 M هيدروكسيد البوتاسيوم (KOH). إضافة الماء المقطر لجعل 1 ل.
2. تقسيم وسائل الإعلام إلى زجاجتين 1 لتر، 500 مل. إضافة 5 غ أجار لكل زجاجة. الحفاظ على الغطاء فضفاضة.
3. اﻷوتوكﻻف لمدة 20 دقيقة في 121 درجة مئوية، 15 psi مع شريط إثارة مغناطيسية في الزجاجة.
4. بعد التعقيم، ضع الزجاجات على طبق من إثارة على سرعة منخفضة، وتسمح المتوسطة MS لتبريد إلى 45-50 درجة مئوية (حتى يمكن عقد الزجاجة بأيديهم العارية).
5. ابتداء من هذه الخطوة، تنفيذ كافة الخطوات في ظروف معقمة في غطاء الاندفاق الصفحي. إضافة 500 ميليلتر جامبورج ' s "حل فيتامين" لكل زجاجة ويقلب المتوسط مرض التصلب العصبي المتعدد بالتساوي بتوزيع الحل فيتامين.
6. صب ما يكفي من وسائل الإعلام في لوحات لتغطية ما يقارب نصف عمق اللوحة.
7. السماح بلوحات لتبرد في درجة حرارة الغرفة لحوالي 1 ح للسماح لاجار ترسيخ.
   ملاحظة: إذا كانت اللوحات ليس لاستخدامها فورا، التفاف عليها في البلاستيك وتخزينها عند 4 درجة مئوية (درجة حرارة الثلاجة). ويمكن تخزين ألواح مغطاة أو مربعات، أو أنابيب مع أجار طدت لعدة أسابيع في 4 درجات مئوية في وعاء محكم.

2. التعقيم من "بذور نبات" مع التبييض

1. لوحات إعداد MS وفقا للمادة 1 من البروتوكول. اﻷوتوكﻻف 100 مل ماء المقطر وفي الوقت نفسه كمرض التصلب العصبي المتعدد الوسائط. استخدم هذا في وقت لاحق كماء الشطف والمساعدة في وقف البذور للمعونة في الطلاء.
   ملاحظة: إذا رغبت في ذلك، مزيج أجار 0.8% (w/v) (مثل فيتاجار) يمكن أيضا أن يعقم في هذه الخطوة. مزيج أجار يمكن أن تكون بديلاً للماء المقطر أثناء الطلاء (الخطوة 2.5.3.). لزوجة مزيج أجار إضافي يجعل من الأسهل لبذور الفضاء على لوحة أو مصنع في الصفوف إذا لزم الأمر.
2. تحضير 50% (v/v) التبييض الحل لاستخدامها لتعقيم البذور. لتمييع التبييض، إضافة 100 مل التبييض إلى 100 مل ماء المقطر. إضافة 50 ميليلتر من المنظفات 20 توين إلى الحل التبييض.
   ملاحظة: يمكن تخزين حل التبييض مستعدا لتصل إلى شهر طالما أنه مفتوح فقط في ظروف معقمة.
3. بذور الكوة 100 في أنبوب 1.5 مل ميكروسينتريفوجي.
4. تعقيم البذور استخدام حل التبييض 50%-
   1. في غطاء الاندفاق الصفحي، إضافة 500 ميليلتر من الحل التبييض 50% إلى أنبوب ميكروسينتريفوجي التي تحتوي على البذور. اضغط على الجزء السفلي من الأنبوب تعليق البذور في محلول التبييض.
      ملاحظة: بدلاً من ذلك، المدورة أو منصة شاكر قد تستعمل للحفاظ على بذور تعليق.
5. شطف الحل التبييض من الأنبوب.
   1. بعد 10 دقيقة، إزالة الحل التبييض من أنبوب ميكروسينتريفوجي باستخدام ماصة أو المضخة مزودة بطرف ماصة في النهاية.
   2. إضافة 500 ميليلتر من الماء المقطر المعقم للأنبوب. إغلاق الأنبوب وعكس إلى المزيج. تسمح بذور لتسوية إلى الجزء السفلي من الأنبوب. حالما استقر البذور إلى الجزء السفلي من الأنبوب بعناية إزالة الحل التبييض بيبيتينج. كرر هذا الإجراء الشطف العملية 6 مرات.
   3. إضافة 1 مل ماء المقطر يعقم إلى أنبوب لتعليق البذور.
6. لوحة بذور معقمة في لوحات MS.
   1. في غطاء الاندفاق الصفحي، تسمية الجزء السفلي من لوحة MS مع اسم الأسهم والتاريخ الحالي.
   2. من أجل البذور من أنبوب ميكروسينتريفوجي على لوح مرض التصلب العصبي المتعدد. نشر البذور حول لوحة مرض التصلب العصبي المتعدد باستخدام حلقة إينوكولاتينج العقيمة، وتستخدم مرة واحدة أو تلميح ماصة معقمة.
      ملاحظة: إذا كانت البذور تزرع في الصفوف، يمكن استخدام ماصة مع تلميح 200 ميليلتر لوضع البذور على حدة في المواقف المطلوبة. لتحسين تدفق البذور، يمكن أن يتم اقتطاعها نهاية طرف الماصة من 3-5 ملم باستخدام مقص. يمكن ثم يتم إعادة تحديد موضعها أو فصلها باستخدام حلقة إينوكولاتينج معقمة تستخدم مرة واحدة أي البذور في غير محله أو مجموعات من بذور.
   3. وضع لوحة مرض التصلب العصبي المتعدد في الجزء الخلفي من هود الاندفاق الصفحي مع غطاء نصف مغلقة. السماح للمياه الزائدة تتبخر من لوحة MS.
   4. ضع الغطاء على لوحة مرض التصلب العصبي المتعدد. ختم الشريط لوحة MS بالتفاف اللوحة مع ورقة microporous الجراحية (انظر الجدول للمواد)-

3. التعقيم من بذور نبات مع "غاز الكلور"

1. لوحات إعداد MS وفقا للمادة 1 من البروتوكول. اﻷوتوكﻻف 100 مل ماء المقطر وفي الوقت نفسه كمرض التصلب العصبي المتعدد الوسائط؛ سيتم استخدام هذا في وقت لاحق للمساعدة في وقف بذور للمعونة في الطلاء.
   ملاحظة: إذا رغبت في ذلك، مزيج أجار 0.8% (w/v) (مثل فيتاجار) يمكن أيضا أن يعقم في هذه الخطوة. مزيج أجار يمكن أن تكون بديلاً للماء المقطر أثناء الطلاء (الخطوة 3.6.2.). لزوجة مزيج أجار إضافي يجعل من الأسهل لبذور الفضاء على لوحة أو مصنع في الصفوف إذا لزم الأمر.
2. قبل البدء في التعقيم، حساب المبالغ للتبييض وحامض الهيدروكلوريك (HCl) اللازمة لإنتاج غاز الكلور-
   1. حساب كمية HCl اللازمة لإنتاج 6.1% Cl ₂ المطلوبة للتعقيم.
   2. استخدام الصيغة التالية:
      
      مع مل 7,000 كحجم الحاوية التعقيم و 6.1% Cl ₂؛ ويحسب حجم HCl لتكون مل 3.
      ملاحظة: يتم توفير جدول بيانات مبرمجة للقيام بحساب لكميات مختلفة من Cl حاوية و % ₂ تكميلية الجدول 1-
3. 100 الكوة البذور في أنبوب ميكروسينتريفوجي 0.5 مل. إغلاق القبعات لكل قنينة، ووضع في قارورة في رف بلاستيك وجانبا.
   ملاحظة: يمكن تخزين البذور لفترة ممتدة من الوقت في هذه المرحلة طالما يتم تخزينها في ظروف ملائمة. ويمكن الاطلاع على ظروف التخزين في الفرع 3.3.2 البروتوكول ريفيرو والزملاء ⁴. يمكن أيضا استخدام تنسيق لوحة 96-جيدا-
4. إعداد المواد اللازمة لإجراء التعقيم غاز الكلور-
   1. الحصول على التبييض و HCl من مواقعها التخزين.
   2. قص الفيلم قطاع من البارافين كبيرة (انظر الجدول للمواد) للاستخدام في الخطوة 3.5.3. لختم الحاويات التعقيم.
   3. مكان حاوية بلاستيكية مع غطاء عملية التعقيم التي سوف تجري داخل غطاء دخان. فتح القبعات على كل قنينة البذور ووضع على الرف البذور كاملة داخل الحاوية البلاستيكية.
5. إجراء التعقيم غاز الكلور في درجة حرارة الغرفة.
   تنبيه: العمل مع التبييض والأحماض بشكل منفصل. لا تترك الزجاجة أما أزم للحد من مخاطر الانسكابات. استخدام معدات الوقاية الشخصية المناسبة (معدات الوقاية الشخصية) بما في ذلك القفازات ومعطف معمل. إذا كانت البقع التبييض أو حمض قفازات، تغيير القفازات قبل التعامل مع المواد الأخرى. إزالة القفازات دائماً في غطاء الدخان في حالة التلوث بالتبييض أو حمض.
   1. وضع كوب 250 مل داخل الحاوية وإضافة 100 مل التبييض.
      ملاحظة: يتطلب رد فعل بين HCl والتبييض فائض وحدات التخزين على الأقل 22 من التبييض. أن رد الفعل سوف تستهلك HCl والتبييض عن طريق الإفراج عن الغاز ₂ Cl مع كلوريد الصوديوم (NaCl) والمياه تركات. يسمح باستخدام فائض كبير من التبييض استهلاك إضافية HCl ديورنغ فترة التنفيس، مما يقلل من مقدار بيكربونات الصوديوم (ناكو ₃) اللازمة لتحييد الحل للتخلص منها.
      تنبيه: ينبغي أن يكون الكأس مرتين على الأقل إجمالي حجم السائل للتبييض + HCl. وهذا ما يمنع البقع الهروب الكأس أثناء الخطوة التالية، التي يمكن إتلاف البذور والتبييض الملابس أو حرق الجلد.
   2. أضف 3 مل HCl للكأس التي تحتوي على المبيض.
      تنبيه: رد الفعل الأولى سوف تنتج فقاعات، ولا سيما في تركيزات الغاز أعلى من 6.1 في المائة. معطف مختبر اكمام طويلة ضروري لهذه الخطوة.
   3. إغلاق الحاوية التعقيم، وختم ذلك مع الفيلم البارافين فورا.
   4. رصد الحاوية التعقيم زمن التعقيم لضمان تراكم الغاز؛ وتراكم غاز الكلور يجب أن تكون مرئية كضباب أصفر خافت داخل الحاوية.
      تنبيه: فحص دوري للحاوية التعقيم لضمان أن الضغط داخل قد أقصت لا الغطاء أو البارافين الفيلم. إذا أصبح الغطاء مقعده أو الفيلم البارافين قد تأتي فضفاضة، أغلق الغطاء والتفاف بعناية الحاوية مع طبقة إضافية من الفيلم البارافين.
   5. ح بعد 1-التعقيم الفترة، فتح الحاوية بإزالة الفيلم البارافين وفتح غطاء على زاوية واحدة. يسمح الحاوية للتنفيس عن ح 3 لإتمام التفاعل والقضاء على غاز الكلور-
   إغلاق
   6. قبعات جميع ميكروسينتريفوجي الأنابيب في الرف البذور.
      ملاحظة: يمكن تخزين بذور معقمة حتى وقت تصفيح طالما يتم تخزينها في حالة جفاف.
   7. إزالة رف البذور ووضعها في غطاء الاندفاق الصفحي.
   8. تحييد تفاعل غاز الكلور
      1. ز 1.5 إضافة مسحوق ₃ ناكو ببطء للكأس التي تحتوي على الحل التبييض/HCl ويقلب بقضيب زجاج يذوب ناكو ₃ في الحل. استمر في إضافة NaHCO ₃ حتى توقف فقاعات غاز ثاني أكسيد الكربون (CO ₂) تشكيل.
         تنبيه: أضف ببطء لمنع البقع. استخدام معدات الوقاية الشخصية الملائمة بما في ذلك القفازات ومعطف معمل.
      2. اختبار الرقم الهيدروجيني للحل باستخدام شرائح الأس الهيدروجيني أو مقياس الأس الهيدروجيني. إضافة إضافية ناكو ₃ إذا كان ضروريا حتى الرقم الهيدروجيني للحل محايد (الرقم الهيدروجيني 7.0). عند هذه النقطة يمكن إزالتها من غطاء الدخان الحل والتخلص منها وفقا لجميع المبادئ التوجيهية المطبقة التخلص.
         تنبيه: إذا لاحظت أي رائحة أثناء التخلص منها، ثم الحل ينبغي أن يكون أعيد على الفور إلى غطاء الدخان.
6. لوحة بذور معقمة في لوحات MS.
   1. في غطاء الاندفاق الصفحي، تسمية الجزء السفلي من لوحة MS مع اسم الأسهم والتاريخ الحالي.
   2. إضافة 500 ميليلتر من الماء المقطر المعقم لكل أنبوبة ميكروسينتريفوجي تعليق البذور. من أجل البذور إلى لوحة مرض التصلب العصبي المتعدد وتنتشر البذور بالتساوي حول لوحة باستخدام حلقة إينوكولاتينج العقيمة، وتستخدم مرة واحدة أو تلميح ماصة معقمة.
   3. وضع لوحة مرض التصلب العصبي المتعدد في الجزء الخلفي من هود الاندفاق الصفحي مع غطاء نصف مغلقة. السماح للمياه الزائدة تتبخر من لوحة MS.
   4. ضع الغطاء على لوحة مرض التصلب العصبي المتعدد. ختم اللوحة مرض التصلب العصبي المتعدد بالتفاف اللوحة مع الشريط الجراحي ورقة microporous.

4. نمو نبات على لوحات MS

1. بوضع اللوحات مع الغطاء على أعلى لمدة ثلاثة أيام في 4 ˚C والرطوبة المحيطة.
   ملاحظة: هذه العملية تسمى التقسيم الطبقي، ويعمل على مزامنة إنبات البذور الفردية-
2. نقل اللوحات لبيئة النمو. كبيرة
   1. المحافظة على درجة حرارة 23 درجة مئوية وكثافة الضوء في 120-150 µmol/م ² s مع الضوء ح 16/8 ح الظلام. وضع لوحات شقة في البيئة ينمو مع غطاء على الأعلى حيث تنمو الجذور في المتوسط-
3. تمكنك من زراعة الشتلات في لوحات لمدة 8 أيام-
   ملاحظة: يسمح فترة نمو يوم 8 متأخر الإنبات البذور على الإنبات. يمكن سجل لوحات عاجلاً من 8 أيام إذا قد نامي كل البذور.
4. نقاط معدلات الإنبات.
   1. سجل عدد البذور التي لها نامي والتي قد لا نامي. حساب معدل الإنبات بقسمة عدد البذور التي نامي بالعدد الكلي للبذور على اللوحة-
      ملاحظة: يحسب الإنبات عندما يتوقع جذير خارج المعطف البذور و cotyledons اثنين مرئية.
   2. أيضا حساب عدد البذور المتأثرة بالقالب لتحديد مدى فعالية شروط التعقيم.

النتائج

بذور نبات جمعت من دائرة مفتوحة لحقل أو الاحتباس الحراري أو النمو في بعض الأحيان ملوثة بمختلف الكائنات الحية الدقيقة مثل الفطريات والبكتيريا^1،4. وهكذا، الإنبات البذور على وسائط العقيمة يمكن أن يشكل تحديا كبيرا بسبب التلوث لوحات، وخصوصا عندما يقتصر الإمداد بالبذور. البروتوكول الأمثل للتبييض والكلور غاز التعقيم، النتائج التي ترد أدناه، يقلل من هذه المشكلة ويحافظ على بقاء البذور اللازمة للتطبيقات عالية الإنتاجية.

تأثيرات التبييض التعقيم على إنبات بذور نبات Col-0

التبييض هو عامل الأكثر استخداماً لتعقيم البذور في العديد من الأنواع النباتية. يختلف تركيز عامل تعقيم ووقت التعرض الأمثل بين الأنواع. وقد استخدمت عددا من البروتوكولات باستخدام التبييض للتعقيم من بذور نبات^1،4،5،،من^67،،من^{89 , 10}-وتعرض أربعة تركيزات مختلفة للتبييض مع وقت التعرض مختلفة خمس فترات تم اختبارها والنتائج في الرقم 1. تم تطبيق العلاجات كولومبيا البرية من نوع البذور (Col-0). تأثير تركيز التبييض في إنبات البذور Col-0 تختلف باختلاف وقت التعقيم كما يتضح من وجود تفاعل كبير بين الوقت للتعقيم وتركيز التبييض (الشكل 1، ف < 0.001، ANOVA-تحليل التباين).

في التجارب مع تعقيم مرات بين 5 و 10 دقيقة، أسفرت العلاجات مع جميع التبييض تركيزات التساوي إنبات عالية معدل البذور Col-0 (الشكل 1). ولوحظت أيضا معدلات الإنبات عالية للتبييض المنزلية تركيزات 40% و 50% لجميع الأوقات التعقيم. العلاج بالتبييض 80% و 100% لفترات أطول من 10 دقائق أدى كبير الانخفاض في معدل إنبات مقارنة بالأوقات مغطس أقصر (ف < 0.01، ANOVA). وعلاوة على ذلك، عن 80% و 100% التبييض علاجات لمدة 20 دقيقة، الإنبات قد تناقص بصورة كبيرة المقابلة 40% وعلاجات التبييض 50% بالمقارنة مع (ف < 0.001، ANOVA).

بذور عرض مستويات مختلفة من التبييض وشريفلينغ عند استخدام تركيزات عالية من التبييض لمدة 15 دقيقة أو أكثر. بالإضافة إلى عالية نسبيا (تصل إلى 32 في المائة) ووفيات البذور، ونبتت بذور معقمة في هذه الظروف غالباً ما أظهرت عيوب النمو، ينعكس في عدم كوتيليدونس وهيبوكوتيلس العيان وتمديد، أسفرت عن اعتقال التنموية. كانت معظم العلاجات (14 من أصل 20) تماما خالية العفن، أسفر عن العفن المستوى المتوسط الإجمالي ± 0.21 في المائة 0.003 (الجدول 1).

علاج بالتبييض 50% ووقت حوضاً من 10 دقيقة اختير كأفضل نظام التعقيم نظراً لأنها تجمع بين نسبة إنبات عالية مع تثبيط النمو الممرض السطحية جيدة. واختير هذا العلاج اختبار تأثير التعقيم التبييض على خطوط متحولة مختلفة كما هو موضح أدناه.

تأثيرات التعقيم غاز الكلور في إنبات البذور Col-0

لتحسين ظروف التعقيم غاز الكلور، استخدمت ثلاثة تركيزات مختلفة من غاز الكلور في تعقيم البذور Col-0 لفترتين من الزمن (الجدول 2). وكان حساب تركيز الغاز استناداً إلى حجم HCl مركزة وحجم الحاوية التعقيم باستخدام المعادلة التالية:

استمدت هذه المعادلة باستخدام قانون الغازات المثالية افتراض 12.3 M HCl، درجة حرارة 23 درجة مئوية وضغط جوي قياسي 101.3 كيلو باسكال.

كان سيظهر تأثير تركيز غاز الكلور في إنبات البذور Col-0 يعتمد على وقت التعقيم كما هو مبين بوجود تفاعل كبير بين الوقت وعوامل التركز (الشكل 2A، ف < 0.01، ANOVA) . وكان تركيز غاز الكلور أي تأثير كبير على إنبات البذور Col-0 تخضع للتعقيم ح 1. مع هذا الوقت التعقيم، شجعت جميع تركيزات غاز الكلور وبالمثل مستويات عالية من الإنبات، أكثر من 85 في المائة (ف > 0.05، ANOVA). من ناحية أخرى، أدى تعقيم ح طوله 3 انخفاضا كبيرا في معدل إنبات لأعلى تركيز لغاز الكلور، بالمقارنة مع تركيزات الغاز أقل اثنين (ف < 0.05، ANOVA). تشير هذه النتائج إلى أن علاجات بذور نبات مع أي من تركيزات غاز الكلور اختبار ح 1، أو مع تركيزات غازات أقل نسبة 16.5 في المائة ح 3، نفس القدر من الفعالية في الحفاظ على بقاء البذور حيث أن معدلات الإنبات كانت دائماً أكبر من 82 في المائة. ومع ذلك، تعقيم بذور ح 3 مع الغاز 16.5 في المائة كان ضار لإنبات البذور.

وكان أيضا الإصابة بالعفن اعتماداً على تركيز الغاز ومدة التعرض. كانت فعالية أعاقت نمو العفن بتركيزات عالية نسبيا من 6.1 في المائة و 16.5 في المائة من غاز الكلور لعلاج دام ح 1 ومع جميع تركيزات غاز ح 3 (الشكل 2).

استناداً إلى هذه النتائج، اختير علاج بتركيز غاز من 6.1 في المائة ح 1 (الجدول 2) كأفضل حالة التعقيم مرحلة البخار اختبار تأثير غازات التعقيم على خطوط متحولة مختلفة، نظراً لأنها تجمع بين (معدل إنبات عالية 85 في المائة) مع المستوى المنخفض جداً للتلوث العفن (0.02 في المائة).

تأثيرات التبييض والكلور غاز التعقيم على البذور الإنبات المختلفة المحتملة

التحليل الإحصائي أظهرت أن الاستجابة الإنبات بأساليب التعقيم يعتمد على إمكانية إنبات خطوط (الشكل 3 ألف، ف < 0.01، ANOVA). التعقيم غاز الكلور ولا التبييض خفض معدل إنبات البذور الإنبات المرتفعة المحتملة (المجموعات 4 و 5). لا علاج لها أثر على معدل إنبات المنخفضة بالفعل للفريق مع إنبات أدنىإمكانيات (المجموعة 1). وفي المقابل، أسفر التعقيم غاز الكلور تخفيضاً كبيرا بحوالي 12-18% (ف < 0.01، ANOVA) في إنبات البذور مع إمكانية إنبات الوسيطة (المجموعات 2 و 3). التعقيم التبييض انخفض أيضا معدل الإنبات بنسبة 13% من المجموعة 2، بل أنها لم تقل معدل إنبات المجموعة 3. على الرغم من أن كان هناك أي اختلاف كبير في معدل إنبات بين التبييض والكلور علاجات الغاز في أي مجموعة الإنبات (الشكل 3 ألف، ف > 0.442، ANOVA)، بذور تعقيمها باستخدام التبييض لديها أعلى قليلاً معدل إنبات البذور غازات التعقيم في جميع مجموعات إنبات.

التعقيم العلاج تغيير كبير (ف < 0.001، ANOVA) النسبة المئوية للبذور التي تتأثر العفن (الشكل 3B). كلا التعقيم الكلور التبييض والغاز أدى إلى نمو العفن أقل (ف < 0.05، ANOVA) مقارنة لا التعقيم. لم يكن هناك فرق في مستوى العفن اكتشفت بين الغاز والتبييض التعقيم في أي مجموعة (الشكل 3B، ف > 0.4، ANOVA).

رقم 1: آثار التبييض وقت تركيز والتعقيم على إنبات بذور نبات Col-0- القيم هي وسائل ± التنمية المستدامة التي تم الحصول عليها من تكرار التجربة المستقلة 5. * تشير إلى اختلافات كبيرة بالنسبة إلى 5 دقائق مغطس المدة لمجموعة من تركيزات التبييض (ف < 0.01، ANOVA). ^#يشير إلى اختلافات كبيرة من 80 في المائة، وتركيزات التبييض 100% مقارنة بنسبة 40 في المائة و 50 في المائة بالنسبة 20 دقيقة فترة زمنية (ف < 0.01، ANOVA). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

رقم 2: آثار الكلورين الغاز وقت تركيز والتعقيم على بذور نبات Col-0- (أ) معدل الإنبات ومستوى العفن (ب). أشرطة الخطأ تمثل وسائل ± التنمية المستدامة التي تم الحصول عليها من 5 البيولوجية وتكرار التجربة التقنية 5. يعني أن عدم مشاركة رسالة تختلف اختلافاً كبيرا (ف < 0.05، ANOVA). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

الشكل 3: آثار التبييض والكلور غاز التعقيم على البذور الإنبات المختلفة المحتملة. (أ) معدل الإنبات ومستوى العفن (ب). خطوط سالك تي-دنا 100 صنفت إلى خمس مجموعات حسب ما إنبات المحتملة يعرف معدل الإنبات في غياب أي عامل التعقيم. مجموعات على أساس معدل الإنبات على النحو التالي: المجموعة 1 (0-20%)، المجموعة 2 (21-50%)، والمجموعة 3 (51-70 في المائة)، والمجموعة 4 (71-90 ٪) والمجموعة 5 (91-100%). الخطوط التي تم اختيارها عشوائياً وعلى إنبات المحتملة لا تتوقف على النمط الوراثي. القيم هي وسائل ± التنمية المستدامة التي تم الحصول عليها من تكرار التجربة المستقلة الثلاثة. تشير الأحرف ("a"، "ab"، "ج"، إلخ) فوق كل قيمة إلى المجموعات الإحصائية لوسائل الفئة. يعني أن عدم مشاركة رسالة تختلف اختلافاً كبيرا (ف < 0.05، ANOVA). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

التعقيم الوقت (دقيقة)	بليتش تركيز (%)
	40	50	80	100
5	0.00%	0.00%	0.00%	2.13 في المائة
8	0.00%	0.00%	0.00%	0.00%
10	0.00%	0.50%	0.00%	0.36 في المائة
15	0.00%	0.00%	0.00%	0.68%
20	0.19 في المائة	0.28 في المائة	0.00%	0.00%

الجدول 1: مستوى العفن للتبييض تعقيم البذور Col-0.

بليتش	قائمة توافق الأجهزة	الوقت	% غاز الكلور (مول Cl2/mol إجمالي الغاز)
(mL)	(mL)	(ح)
25	1	1	2.1
25	1	3	2.1
100	3	1	6.1
100	3	3	6.1
200	9	1	16.5
200	9	3	16.5

الجدول 2: الكلور (Cl₂) غازات التعقيم العلاج في كولومبيا البرية من نوع البذور باستخدام حاوية ل 7-

تكميلية الجدول 1: جدول بيانات مبرمجة للقيام بحساب لكميات مختلفة من Cl حاوية و %₂. اضغط هنا لتحميل هذا الملف.

Discussion

عندما تنمو بذور نبات في وسائل الإعلام العقيمة، يجب تطبيق بعض أشكال التعقيم. التبييض والكلور غاز التعقيم العلاج يؤدي إلى إنبات مماثلة معدل والعفن تثبيط النمو. طريقة التعقيم لا يسبب انخفاض كبير في معدل إنبات البذور الإنبات المرتفعة المحتملة؛ مع ذلك، ينصح تعقيم التبييض لخطوط مع انخفاض احتمال إنبات (20-70 في المائة)، سبب الصغيرة، أن كان ذلك غير ذي، تحسن في معدل إنبات بالمقارنة مع غازات التعقيم (الشكل 3A).

تعقيم بذور نبات مع تركيزات التبييض من 40-100% لتصل إلى 10 دقيقة توفر نسب الإنبات مرضية وقمع العفن فعالة. على الرغم من أن التبييض تركيزات أقل من 40% توفر التعقيم كافية لمعظم البذور الكثير، تستخدم بتركيز 40% أو أعلى الضمانات التعقيم الفعالة حتى القرعة البذور الملوثة بشكل كبير. فمن المهم لا تتجاوز 10 دقائق للتعقيم عند استخدام التبييض تركيزات تساوي أو تزيد عن 80% لتجنب الوفيات البذور عالية والعيوب في التنمية الشتلات.

معاملة بذور نبات مع تركيزات غاز الكلور من 6.1 في المائة أو نسبة 16.5 في المائة لنتائج ح 1 في معدلات الإنبات عالية، والقضاء على العفن كافية. تركيز غاز الكلور منخفض (2.1%) يمكن أن تستخدم بنجاح عن طريق زيادة مدة التعقيم إلى ح 3.

عندما أسطر قليلة تحتاج إلى التعقيم، ينصح بالتعقيم السائل في إيجاد حل للتبييض 50% لمدة 10 دقائق. للحصول على عدد أكبر من خطوط، غازات التعقيم بتركيز غاز من 6.1 في المائة ح 1 خيار أفضل نظراً للعديد من خطوط يمكن تعقيمها بسرعة وسهولة مع أقل التلاعب.

النتائج التي توصلنا إليها توفير الشروط الموحدة لتعقيم عدد كبير من البذور من مختلف الأنماط الجينية والبذور مع احتمال انخفاض الإنبات. القيد الوحيد لهذه التقنيات التعقيم أنه لا يمكن تطبيقها للبذور مع معدلات الإنبات أقل من 20% بسبب وفيات البذور واسعة النطاق. أساليب بديلة، مثل سونيكيشن¹⁷، إلى زيادة معدل الإنبات في غياب التعقيم قد تكون مفيدة في هذه الحالات.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.65 mL Microcentrifuge tubes	GeneMate	C-3260-5	Tube in which Arabidopsis thaliana seeds are placed to perform sterilization
1.7 mL Microcentrifuge tube	GeneMate	C-3262-1	Tube in which Arabidopsis thaliana seeds are placed to perform sterilization
7 L plastic container	Sistema	1016265438	Container in which gas sterilization is performed
Concentrated HCl	Sigma-Aldrich	320331	Chemical used in the process of creating chlorine gas
Disposable sterile inoculating loop	Fisher Scientific	22-363-603	Loop is used to spread or position Arabidopsis seeds on MS plates
Gamborg’s vitamin solution	Sigma-Aldrich	G1019	Vitamin solution used in the process of making MS media
Household bleach	Clorox	Regular-Bleach	Chemical used in the process of creating chlorine gas and liquid sterliziation
MES hydrate	Sigma-Aldrich	M2933	Chemical used in the process of making MS media
Micropore surgical tape	3M	1530-1	Microporous surgical paper tape used to seal MS plates
Murashige and Skoog basal salt mixture (MS)	Sigma-Aldrich	M5524	Chemical used in the process of making MS media
Parafilm M	Bemis Company	#PM996	Parraffin film used to seal sterilization container
Petri dish 100 X 15 mm	Fisher Scientific	FB0875713	Petri dishes in which MS media is poured for the purpose of growing Arabidopsis thaliana
pH indicator strips	Whatman	2613991	Used to check pH of neutralizied chlorine and sodium bicarbonate solution
Phytoagar	Fisher Scientific	50-255-212	Used to aid in the suspension of Arabidopsis seeds in the process of plating seeds
Sodium bicarbonate	Sigma-Aldrich	S5761	Chemical used in the process of neutralizing chlorine gas reaction
Sucrose	Sigma-Aldrich	S0389	Chemical used in the process of making MS media
Tween 20	Fisher BioReagents	BP337-100	Chemical used in the process of liquid sterilization
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	CS70000 (Col-0)	Arabidopsis wild-type seeds
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_037606C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_041402C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_059101C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_063470C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_072048C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_072240C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_081989C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_084124C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_085049C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_089717C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_107354C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_110111C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_111322C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_113109C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_114702C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_114872C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_115657C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_116803C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_039445C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_039782C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_043037C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_045828C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_048556C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_049514C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_049725C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_080816C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_081176C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_081770C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_082262C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_082289C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_082702C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_083630C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_084635C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_085337C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_085656C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_093049C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_103332C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_105336C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_105704C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_106388C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_109575C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_110580C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_110617C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_111424C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_111584C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_112097C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_113339C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_115837C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_019535C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 3
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_026478C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 3
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_046565C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 3
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_049258C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 3
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_049339C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 3
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_056307C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 3
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_081292C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 3
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_081597C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 3
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_083488C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 3
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_110573C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 3
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_112793C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 3
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_113658C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 3
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_113904C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 3
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_114673C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 3
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_114709C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 3
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_115455C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 3
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_013186C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 4
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_018261C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 4
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_062509C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 4
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_080639C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 4
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_088586C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 4
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_096651C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 4
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_106900C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 4
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_110131C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 4
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_111051C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 4
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_111245C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 4
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_113223C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 4
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_121391C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 4
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_125097C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 4
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_201905C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 4
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_210001C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 4
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_000662C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 5
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_029335C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 5
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_047760C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 5
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_071275C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 5
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_080530C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 5
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_103881C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 5
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_110864C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 5
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_120294C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 5
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_124390C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 5
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_132808C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 5
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_137036C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 5
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_139519C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 5
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_140643C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 5
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_142288C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 5
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_143304C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 5
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_147597C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 5
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_209076C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 5
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_081081C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Groups 5 and 1
Arabidopsis thaliana seeds	ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org	SALK_107487C	Arabidopsis seeds used in testing as a part of Groups 5 and 2