Method Article
* Estos autores han contribuido por igual
El objetivo de este estudio fue determinar los efectos de la esterilización con gas cloro y el cloro en la germinación de la semilla de un genotipos gama de Arabidopsis crecen en medios estériles. Se han desarrollado protocolos de esterilización optimizado para prevenir el crecimiento de contaminantes microbianos mientras que proporciona la supervivencia satisfactoria de la semilla.
Thaliana de Arabidopsis Plantas (Arabidopsis) a menudo deben ser cultivadas en medios estériles. Esto requiere esterilización previa de la semilla para prevenir el crecimiento de contaminantes microbianos presentes en la superficie de la semilla. Actualmente, las semillas de Arabidopsis se esterilizan utilizando dos técnicas diferentes de esterilización en condiciones que difieren ligeramente entre laboratorios y no han sido estandarizadas, a menudo resulta en la esterilización sólo parcialmente eficaz o en la mortalidad excesiva de semilla. También la mayoría de estos métodos no son fácilmente escalable a un gran número de líneas de semillas de genotipos diversos. Como tecnologías para el análisis de alto rendimiento de Arabidopsis siguen proliferando, técnicas estandarizadas para esterilizar grandes cantidades de semillas de genotipos diferentes se convierten en esenciales para llevar a cabo estos tipos de experimentos. Se evaluó la respuesta de un número de líneas de Arabidopsis a dos técnicas diferentes de esterilización basado en tasa de germinación de la semilla y el nivel de contaminación de la semilla con microbios y otros patógenos. Los tratamientos incluyeron concentraciones de esterilización agentes y tiempos de exposición, para determinar las condiciones óptimas para la esterilización de las semillas de Arabidopsis. Se han desarrollado protocolos optimizados para dos métodos de esterilización diferentes: bleach (fase líquida) y cloro (Cl2) gas (fase vapor), tanto dando como resultado tasas de germinación de semillas alta y mínima contaminación microbiana. La utilidad de estos protocolos se ilustra a través de la prueba de tipo salvaje y mutantes semillas con una gama de potenciales de germinación. Nuestros resultados muestran que las semillas efectivamente esterilizable mediante cualquier método sin la mortalidad excesiva de semilla, aunque se observaron efectos perjudiciales de la esterilización de las semillas con menor potencial de germinación óptima. Además, se desarrolló una ecuación para ayudar a los investigadores aplicar las condiciones de esterilización estándar de cloro gas en envases herméticamente cerrados de diferentes tamaños. Los protocolos descritos aquí permiten la esterilización de semillas fácil, eficiente y económico para un gran número de líneas de Arabidopsis.
Thaliana de Arabidopsis (Arabidopsis) es un organismo modelo principal para investigación básica y aplicada en planta biología1,2,3. Mientras que condiciones estándar para el crecimiento de Arabidopsis se han establecido4, el efecto de la esterilización de las semillas en la viabilidad de la semilla no ha sido rigurosamente probado. Medio sólido en placas o cajas se utiliza habitualmente para facilitar el crecimiento de plántulas de Arabidopsis para muchas aplicaciones experimentales, tales como identificación de homocigotos mutantes letales en una población segregante, observación de fenotipos de brote y raíz a principios etapas, aislamiento de tejido libre de patógeno, colección de grandes cantidades de tejido de la planta de semillero, selección de transformantes o plantas resistentes a los medicamentos y la evaluación de germinación1,2,3,4 . Las semillas cosechan de plantas cultivadas en un invernadero o cámara de crecimiento de vez en cuando están contaminados con microorganismos y polvo. Crecimiento de plántulas de Arabidopsis en diferentes tipos de medios estériles requiere esterilización previa de las semillas para eliminar contaminantes microbianos, tales como hongos y bacterias presentes en la superficie de la semilla. El uso de un régimen de esterilización efectiva semilla es esencial para un equilibrio de alta germinación, mínima contaminación y crecimiento vigoroso de las plantas.
Los dos métodos más comunes utilizados para la esterilización de las semillas de Arabidopsis se basan en lejía comercial (fase líquida) y cloro gaseoso (fase vapor). Varios procedimientos han sido empleados para ambos fase líquida esterilización1,4,5,6,7,8,9 , 10 y en la fase vapor de esterilización de Arabidopsis semillas8,10,11,12,13,14,15 ,16. Sin embargo, aunque estos procedimientos han sido eficaces para lograr la esterilización de las semillas de los genotipos utilizados, un análisis detallado del efecto de los tratamientos de esterilización diferentes sobre las semillas de diferentes genotipos no se ha divulgado. Por lo tanto, la optimización de estos procedimientos de esterilización es necesaria para definir las condiciones en que esterilización eficiente combinada con alta germinación.
La Arabidopsis biológica recursos centro (EE) es una posición única para a) prueba de viabilidad de la semilla de una variedad de diferentes genotipos en la colección y b) tomar ventaja de los procedimientos de control de calidad aplicado internamente y en respuesta a comentarios de los usuarios sobre la germinación de la semilla. Los objetivos de los experimentos aquí presentados fueron determinar los efectos de diferentes métodos de esterilización en la germinación de las semillas de los genotipos de una gama de Arabidopsis. Procedimientos de esterilización optimizado que resultan en tasas de germinación de semilla alta manteniendo la contaminación mínima del patógeno se presentan para la esterilización con gas cloro y el cloro.
1. preparación de 1 x medio de Murashige y Skoog (MS)
2. Esterilización de las semillas de Arabidopsis con Bleach
3. Esterilización de las semillas de Arabidopsis con Gas de cloro
4. Crecimiento de Arabidopsis en placas de MS
Semillas de Arabidopsis de una cámara de crecimiento, invernadero o campo abierta a veces están contaminadas por diversos microorganismos como bacterias y hongos1,4. Así, germinando las semillas en medios estériles puede ser especialmente difícil debido a la contaminación de las placas, especialmente cuando el suministro de semillas es limitado. El protocolo optimizado para esterilización con gas cloro y el cloro, cuyos resultados se presentan a continuación, minimiza este problema y preserva la viabilidad de las semillas necesarias para aplicaciones de alto rendimiento.
Efectos de la esterilización de la lejía en la germinación de semillas de Arabidopsis Col-0
Bleach es el agente más comúnmente utilizado para la esterilización de las semillas de numerosas especies de plantas. La concentración óptima del agente de la esterilización y el tiempo de exposición varía entre especies. Se han empleado un número de protocolos utilizando lejía para la esterilización de las semillas de Arabidopsis1,4,5,6,7,8,9 , 10. cuatro diferentes concentraciones de cloro con el tiempo de exposición diferentes cinco períodos fueron probados y los resultados se presentan en figura 1. Los tratamientos se aplicaron a semillas de Columbia tipo salvaje (Col-0). El efecto de la concentración de cloro en la germinación de semillas de Col-0 varió según el tiempo de esterilización según lo demostrado por una interacción significativa entre la concentración de cloro y tiempo de esterilización (figura 1, P < 0.001, ANOVA-análisis de la varianza).
En los experimentos con tiempos de esterilización entre 5 y 10 min, tratamientos con todas las concentraciones de cloro provocaron igualmente alta germinación de semillas de Col-0 (figura 1). Tasas de germinación alta también fueron observadas para las concentraciones de cloro de 40% y 50% para todos los tiempos de esterilización. Tratamientos con lejía de 80% y 100% para periodos de más de 10 minutos resultaron en una significativa disminución de la tasa de germinación en comparación con los tiempos más cortos de remojo (P < 0.01, ANOVA). Además, para 80% y 100% bleach tratamientos por 20 min, germinación fue significativamente disminuida en comparación con los correspondiente 40% y 50% blanqueador tratamientos (P < 0,001, ANOVA).
Semillas muestran diversos niveles de blanqueamiento y arrugamiento al usar blanqueador de alta concentración durante 15 minutos o más. Además de relativamente alta (hasta un 32%) la mortalidad de semilla, las semillas germinadas esterilizadas en estas condiciones a menudo demostradas defectos de crecimiento, reflejados en una falta de cotiledones los hypocotyls para desplegar y alargado, dando por resultado la detención del desarrollo. Mayoría de los tratamientos (14 de 20) fueron completamente libres de molde, resultando en general molde nivel promedio de 0.21% ± 0.003 (tabla 1).
Un tratamiento con lejía 50% y un tiempo de remojo de 10 minutos fue seleccionado como el mejor régimen de esterilización porque combinó el porcentaje de germinación alto con buena inhibición del crecimiento de la superficie del patógeno. Este tratamiento fue seleccionado para probar el efecto de la esterilización de bleach en diferentes líneas mutantes como se describe a continuación.
Efectos de la esterilización con gas cloro en la germinación de semillas de Col-0
Para optimizar las condiciones de esterilización de gas cloro, tres diferentes concentraciones de cloro gas se utilizan para esterilizar semillas de Col-0 para dos periodos de tiempo (tabla 2). La concentración de gas se calculó con base en el volumen de HCl concentrado y el volumen del recipiente de esterilización mediante la siguiente ecuación:
Esta ecuación fue derivada usando la ley del gas ideal asume 12,3 M de HCl, una temperatura de 23 ° C y presión atmosférica normalizada de 101,3 kPa.
El efecto de la concentración de gas de cloro en la germinación de semillas de Col-0 mostró depende del tiempo de esterilización según lo indicado por una interacción significativa entre el tiempo y los factores de concentración (figura 2A, P < 0.01, ANOVA) . Concentración de gas de cloro no tuvo efectos significativos sobre germinación de semillas de Col-0 sometido a la esterilización de 1 h. Con este tiempo de esterilización, todas las concentraciones de cloro gaseoso promovieron igualmente altos niveles de germinación superior al 85% (P > 0.05, ANOVA). Por otro lado, esterilización 3 h de duración resultó en una disminución significativa en la tasa de germinación para la mayor concentración de cloro gas, en comparación con las dos concentraciones de gas inferiores (P < 0.05, ANOVA). Estos resultados indican que los tratamientos de semillas de Arabidopsis con cualquiera de las concentraciones de gas cloro probados durante 1 hora, o con concentraciones de gas debajo del 16.5% durante 3 horas, son igualmente eficaces para preservar la viabilidad de la semilla ya que las tasas de germinación fueron siempre mayores de 82%. Sin embargo, esterilizar las semillas por 3 h con 16.5% de gas era perjudicial para la germinación de la semilla.
La incidencia de moho también fue dependiente de la concentración de gas y tiempo de exposición. Crecimiento de moho se inhibió eficazmente con las relativamente altas concentraciones de gas cloro 6.1% y 16,5% para 1 h de duración de tratamiento y con todas las concentraciones de gas de 3 h (figura 2B).
Basado en estos resultados, un tratamiento con una concentración de gas de 6.1% para 1 h (tabla 2) fue seleccionado como la mejor condición de esterilización de fase de vapor para probar el efecto de la esterilización con gas en diferentes líneas mutantes, ya que combina alta germinación () tasa 85%) con muy bajo nivel de contaminación de moho (0,02%).
Efectos de la esterilización con gas cloro y cloro en semillas con germinación diferentes potenciales
El análisis estadístico demostró que la respuesta de germinación a los métodos de esterilización era dependiente en el potencial de germinación de las líneas (Figura 3A, P < 0.01, ANOVA). La esterilización con gas ni lejía ni cloro reduce tasa de germinación de semillas con potencial de germinación alta (grupos 4 y 5). Ningún tratamiento tuvo un efecto sobre la tasa de germinación ya bajo del grupo con la menor germinaciónpotencial (Grupo 1). En cambio, la esterilización con gas cloro resultó en una reducción significativa en aproximadamente 12-18% (P < 0.01, ANOVA) en la germinación de semillas con potencial de germinación intermedio (grupos 2 y 3). Esterilización de lejía también disminuyó tasa de germinación en un 13% del grupo 2, pero no disminuyó la tasa de germinación del grupo 3. Aunque no hubo ninguna diferencia significativa en la tasa de germinación entre el cloro y el cloro tratamientos de gas en cualquier grupo de germinación (Figura 3A, P > 0.442, ANOVA), semillas de esterilizado con lejía tenía ligeramente por encima de germinación de semillas esterilizado por el gas en todos los grupos de germinación.
Tratamientos de esterilización alterados (P < 0,001, ANOVA) el porcentaje de semillas afectadas por molde (figura 3B). Ambos esterilización de gas y el blanqueador de cloro resultaron en menos crecimiento de moho (P < 0.05, ANOVA) en comparación a la no esterilización. No hubo diferencias en nivel de molde detectado entre gas y cloro esterilización en cualquier grupo (figura 3B, P > 0.4, ANOVA).
Figura 1: efectos de la lejía concentración y tiempo de esterilización en la germinación de semillas de Arabidopsis Col-0. Los valores son medio ± SD de 5 repeticiones independientes del experimento. * indica diferencias significativas en relación a lo 5 min remojo duración para una gama de concentraciones de cloro (P < 0.01, ANOVA). #indica diferencias significativas de 80% y concentraciones de bleach 100% en comparación con 40% y 50% para 20 minutos período de tiempo (P < 0.01, ANOVA). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 2: efectos de cloro gas de concentración y tiempo de esterilización de las semillas de Arabidopsis Col-0. (A) (B) molde nivel y tasa de germinación. Barras de error representan medio ± SD de 5 biológica y 5 técnicos repeticiones del experimento. Medios que no comparten una letra son significativamente diferentes (P < 0.05, ANOVA). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 3: efectos de la esterilización con gas cloro y cloro en semillas con potencial de germinación diferentes. (A) (B) molde nivel y tasa de germinación. Las 100 líneas de SALK T-DNA fueron clasificadas en cinco grupos según su potencial de germinación de define como la tasa de germinación en ausencia de cualquier agente de esterilización. Los grupos basados en la tasa de germinación fueron los siguientes: Grupo 1 (0-20%), grupo 2 (21-50%), grupo 3 (51-70%), grupo 4 (71-90%) y Grupo 5 (91-100%). Las líneas fueron elegidas al azar y su germinación potencial no depende del genotipo. Los valores son medio ± SD Obtenido de tres repeticiones independientes del experimento. Letras ("a", "ab", "c", etc.) por encima de cada valor indican las agrupaciones estadísticas de medios de la categoría. Medios que no comparten una letra son significativamente diferentes (P < 0.05, ANOVA). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Tiempo de esterilización (min) | Concentración de cloro (%) | |||
40 | 50 | 80 | 100 | |
5 | 0.00% | 0.00% | 0.00% | 2.13% |
8 | 0.00% | 0.00% | 0.00% | 0.00% |
10 | 0.00% | 0.50% | 0.00% | 0.36% |
15 | 0.00% | 0.00% | 0.00% | 0,68% |
20 | 0,19% | 0.28% | 0.00% | 0.00% |
Tabla 1: Nivel de molde de semillas de Col-0 blanqueador-esterilizado.
Bleach | JC. | Tiempo | % Cloro gas (mol Cl2/mol total de gas) |
(mL) | (mL) | (h) | |
25 | 1 | 1 | 2.1 |
25 | 1 | 3 | 2.1 |
100 | 3 | 1 | 6.1 |
100 | 3 | 3 | 6.1 |
200 | 9 | 1 | 16.5 |
200 | 9 | 3 | 16.5 |
Tabla 2: Cloro (Cl2) tratamientos de esterilización de semillas de tipo salvaje de Columbia usando un contenedor de 7 L de gas.
1 mesa adicional: Una hoja de cálculo programada para llevar a cabo el cálculo para diferentes volúmenes de contenedor y % Cl2. Haga clic aquí para descargar este archivo.
Al crecer las semillas de Arabidopsis en medios estériles, debe aplicarse algún tipo de esterilización. Tratamientos de esterilización de gas cloro y cloro provocar similares germinación tasa y molde de inhibición del crecimiento. Ningún método de esterilización causa una reducción significativa en tasa de germinación para las semillas con germinación alto potencial; sin embargo, se recomienda la esterilización de lejía para las líneas con menor potencial de germinación (20-70%), debido a la pequeña, aunque no significativa, mejoría en la tasa de germinación en comparación con la esterilización con gas (Figura 3A).
Esterilización de las semillas de Arabidopsis con concentraciones de cloro de 40-100% hasta 10 min ofrece porcentajes de germinación satisfactoria y la supresión de molde eficaz. Aunque las concentraciones de cloro menos que el 40% ofrecer esterilización adecuada para la mayoría los lotes de semillas, usando una concentración de 40% o mayor garantiza esterilización eficaz de incluso los lotes de semillas fuertemente contaminadas. Es importante no superar los 10 minutos de esterilización usando blanqueador con concentraciones iguales o superiores al 80% para evitar defectos en el desarrollo de la plántula y semilla alta mortalidad.
Tratamiento de semillas de Arabidopsis con concentraciones de gas cloro de 16,5% para resultados 1 h en tasas de germinación alta y eliminación de molde adecuada o 6.1%. Concentración de gas de cloro bajo (2,1%) puede ser utilizado con éxito por aumento de la duración de la esterilización 3 h.
Cuando algunas líneas deben ser esterilizados, se recomienda esterilización líquida en una solución de lejía de 50% durante 10 minutos. Para un mayor número de líneas, la esterilización con gas con una concentración de gas de 6.1% para el 1 h es una mejor opción ya que muchas líneas se pueden esterilizar fácilmente y rápidamente con la menos manipulación.
Nuestros resultados proporcionan condiciones estandarizadas para esterilizar gran cantidad de semillas de diferentes genotipos y las semillas con germinación más baja posibles. La única limitación de estas técnicas de esterilización es que no se puede aplicar a las semillas con las tasas de germinación inferior al 20% debido a la mortalidad extensa de semillas. Métodos alternativos, como sonicación17, para aumentar la tasa de germinación en la ausencia de esterilización podrían ser beneficiosos en estos casos.
Los autores no tienen nada que revelar.
Nos gustaría agradecer a Gauri Datta por su asistencia en la preparación de materiales experimentales. También estamos agradecidos a Bettina Wittler y James Mann por la revisión crítica del manuscrito. Este trabajo fue apoyado por la NSF becas DBI-1049341 y MCB-1143813.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.65 mL Microcentrifuge tubes | GeneMate | C-3260-5 | Tube in which Arabidopsis thaliana seeds are placed to perform sterilization |
1.7 mL Microcentrifuge tube | GeneMate | C-3262-1 | Tube in which Arabidopsis thaliana seeds are placed to perform sterilization |
7 L plastic container | Sistema | 1016265438 | Container in which gas sterilization is performed |
Concentrated HCl | Sigma-Aldrich | 320331 | Chemical used in the process of creating chlorine gas |
Disposable sterile inoculating loop | Fisher Scientific | 22-363-603 | Loop is used to spread or position Arabidopsis seeds on MS plates |
Gamborg’s vitamin solution | Sigma-Aldrich | G1019 | Vitamin solution used in the process of making MS media |
Household bleach | Clorox | Regular-Bleach | Chemical used in the process of creating chlorine gas and liquid sterliziation |
MES hydrate | Sigma-Aldrich | M2933 | Chemical used in the process of making MS media |
Micropore surgical tape | 3M | 1530-1 | Microporous surgical paper tape used to seal MS plates |
Murashige and Skoog basal salt mixture (MS) | Sigma-Aldrich | M5524 | Chemical used in the process of making MS media |
Parafilm M | Bemis Company | #PM996 | Parraffin film used to seal sterilization container |
Petri dish 100 X 15 mm | Fisher Scientific | FB0875713 | Petri dishes in which MS media is poured for the purpose of growing Arabidopsis thaliana |
pH indicator strips | Whatman | 2613991 | Used to check pH of neutralizied chlorine and sodium bicarbonate solution |
Phytoagar | Fisher Scientific | 50-255-212 | Used to aid in the suspension of Arabidopsis seeds in the process of plating seeds |
Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S5761 | Chemical used in the process of neutralizing chlorine gas reaction |
Sucrose | Sigma-Aldrich | S0389 | Chemical used in the process of making MS media |
Tween 20 | Fisher BioReagents | BP337-100 | Chemical used in the process of liquid sterilization |
Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | CS70000 (Col-0) | Arabidopsis wild-type seeds |
Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_037606C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1 |
Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_041402C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1 |
Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_059101C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1 |
Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_063470C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1 |
Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_072048C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1 |
Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_072240C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1 |
Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_081989C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1 |
Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_084124C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1 |
Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_085049C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1 |
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Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_107354C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1 |
Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_110111C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1 |
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Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_113109C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1 |
Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_114702C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1 |
Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_114872C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1 |
Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_115657C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1 |
Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_116803C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 1 |
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Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_048556C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2 |
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Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_081770C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2 |
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Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_083630C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2 |
Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_084635C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2 |
Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_085337C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2 |
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Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_093049C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2 |
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Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_111424C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 2 |
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Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_019535C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 3 |
Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_026478C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 3 |
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Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_018261C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 4 |
Arabidopsis thaliana seeds | ABRC; order through TAIR www.arabidopsis.org | SALK_062509C | Arabidopsis seeds used in testing as a part of Group 4 |
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