طريقة جديدة لحمل مثل الاكتئاب وسلوك في الفئران

Summary

ويصف هذا البروتوكول نموذج جديد الذي يمكن أن يتعاقد الفئران صحية الاكتئاب على مدى فترة زمنية معينة بيريودثرو العدوى بالتعرض المزمن يمكن التنبؤ بها وأكد الفئران (CUS).

Abstract

ظاهرة الاكتئاب المعدية التي لم يتم بعد الاعتراف بشكل كامل وهذا نابع من المواد غير كافية في هذا الموضوع. الوقت الحاضر، لا يوجد أي شكل القائمة لدراسة إليه العمل ومنع واحتواء وعلاج الاكتئاب المعدي. ولذلك، كان الغرض من هذه الدراسة، بإنشاء أول نموذج الحيوان من الاكتئاب المعدي.

يمكن عقد الفئران صحية السلوكيات اكتئاب إذا ما تعرضوا للاكتئاب الفئران. هو الناجمة عن الاكتئاب في الفئران بإخضاعها للتلاعب عدة من الإجهاد المزمن لا يمكن التنبؤ بها (CUS) أكثر من 5 أسابيع، كما هو موضح في البروتوكول. وأكد اختبار تفضيل سكروز ناجحة تطوير الاكتئاب في الفئران. ثم تم قفص الفئران المعرضة لسلطات الجمارك مع الفئران ساذجة من مجموعة العدوى (الفئران السذاجة فأر/2 الاكتئاب 1 في قفص) لمدة 5 أسابيع إضافية. تم إنشاء المجموعات الاجتماعية 30 من المزيج من CUS تعرض الجرذان والفئران ساذجة.

هذا البروتوكول المقترح الاكتئاب-العدوى في الحيوانات يتكون أساسا من المساكنات الفئران المعرضة لسلطات الجمارك وصحية لمدة 5 أسابيع. للتأكد من أن يعمل هذا الأسلوب، سلسلة من الاختبارات تجري-أولاً، اختبار التفضيل السكروز عند حمل الاكتئاب للفئران، ثم تفضيل السكروز اختبار، إلى جانب حقل مفتوح واختبارات السباحة أجبر في نهاية فترة المعاشرة. خلال التجربة، يتم إعطاء العلامات الفئران ويتم إرجاعها دائماً إلى اقفاصها بعد كل اختبار.

عدد قليل من القيود لهذا الأسلوب هي ضعيفة الفوارق المسجلة بين التجريبية والتحكم في مجموعات في اختبار التفضيل السكروز ونتائج الاختبار القسري السباحة الصدمة لا رجعة فيه. وهذه قد تكون جديرة بالنظر لمدى ملاءمة قبل أي تطبيق البروتوكول مستقبلا. ومع ذلك، بعد التجربة، الفئران السذاجة نمواً الاكتئاب العدوى بعد 5 أسابيع من مشاركة نفس القفص مع الفئران المعرضة لسلطات الجمارك.

Introduction

وأشارت التجارب التي أجريت في الآونة الأخيرة أن الأمراض النفسية يمكن أن ينتشر بسهولة إلى الأشخاص الأصحاء عن طريق العدوى¹. وفي هذه الحالة، فإنه يسمى العدوى الاجتماعية وينتشر عن طريق تؤثر أو موقف أو سلوك. وهذا يتطلب فقط الاكتئاب الفرد للتفاعل مع واحد أو أكثر من الأشخاص الأصحاء، مما يسهل تقاسم العاطفة. ومن ثم العلاقات الاجتماعية عنصر هام جداً للمزاج، كما أنها تحدد نقل المشاعر من فرد إلى آخر، عن طريق تقليد والعدوى "العاطفية". تختلف الأطر الزمنية لانتقال العدوى المفعول،²حتما تبعاً لشدة العاطفة وقوة المقاومة للمستلم.

وأمنت عواقب كبيرة من العدوى العاطفية أن الدراسات التي قدمت في الماضي أساسا تركز على الجوانب السلبية. ضمان نتيجة الآثار السلبية الاكتئاب العدوى تلقي اهتماما هائلا، مع دراسات تبين أن عدوى الاكتئاب يزيد من احتمال أسر وأصدقاء فرد الاكتئاب العارضة السلوكيات اكتئاب^{3 , 4 , 5 , 6}.

وهناك أسباب شخصية واقتصادية على حد سواء لمعالجة الاكتئاب. عادة يسبب الإصابة بالأمراض؛ وحدوثه في عمر بين 13.3 و 17.1 في المائة في الولايات المتحدة⁷. إظهار ملفات "منظمة الصحة العالمية" أن الاكتئاب هو الرابع في قائمة الأمراض العالمية مع أعباء ضخمة، التي تحدث في الناس من كل الجنسين والإعمار والخلفيات الاجتماعية، وهي أيضا قادرة على التسبب في سوء الحالة الصحية، التي تؤثر على القدرة على التفاعل مع الآخرين^8،،من^910،11، وتسبب العجز الزائد^12،13. حياة 850,000 يقدر أن تضيع إلى الانتحار اكتئاب كل سنة¹⁴. المرضى عادة ما وصفه الأدوية المضادة للاكتئاب أو ينصح بالخضوع للعلاج الإدراكي السلوكي. هذه تريتمينتشيلب حوالي 60-80% مرضى. ومع ذلك، في التعامل مع هذا المرض لا يزال يشكل مشكلة كبيرة؛ لا يتوفر العلاج لجميع مرضى الاكتئاب. لأولئك الذين يحصلون على العلاج، تعاني بعض الآثار الجانبية، بينما آخرون ضعف الامتثال للمبادئ التوجيهية¹⁵. عدد المرضى مقاومة للعلاج ما يصل إلى حوالي 40%¹⁴. مع الاكتئاب، وكثيراً ما عانى الاقتصاد في شكل العلاج باهظة الثمن، وانخفاض في قوة العمل، والتقاعد المبكر¹⁶. خسائر سنوية تقدر بمبلغ 44 بیلیون في الولايات المتحدة بسبب الاكتئاب، وتستأثر بما يقرب من نصف البلاد فقدان الإنتاجية¹⁷. العلاج مكلفة تتطلب عناية طبية، التي تتحمل مجموعة متنوعة من زيادة التكاليف الطبية ويتطلب انتظارا لنتائج غير مرغوب فيها، فضلا عن ضعف الاستجابة للعلاج¹⁸.

قد لا تأتي عبر نموذج حيوان مثبتة مسبقاً لدراسة إليه عدوى الاكتئاب والوقاية، والعلاج، وكان استخدام هذا البروتوكول حيوانية افتراضية للمرة الأولى. وهي تقترح أن الفئران صحية من خلال التعايش مع الفئران المعرضة لسلطات الجمارك، تميل إلى التعبير عن السلوكيات الاكتئاب. وكان الهدف الرئيسي من هذه التجربة إلى وضع إجراءات مختبرات التي سلطت الضوء على نقل الاكتئاب، وعن طريق العدوى، من الفئران المعرضة لسلطات الجمارك بالاصحاء. بعد ذلك، تم تقييم النتائج لتحديد إذا كان عدوى الاكتئاب تقتصر فقط على أعراض الاكتئاب، أو إذا أنه يتصل باضطرابات المزاج الأخرى، مثل القلق. أن الهدف النهائي لهذه التجربة التقرب إلى تحسين فهم إليه عدوى الكساد في السباق لتطوير النهج العلاجية الجديدة¹⁹.

Protocol

وقد أجرى الإجراء التالي طبقاً لتوصيات إعلان هلسنكي وطوكيو والمبادئ التوجيهية "استخدام الحيوانات التجريبية" "الجماعة الأوروبية". وقد أقرت التجارب أيضا اللجنة رعاية الحيوان في جامعة بن غوريون في النقب.

1. إعداد الفئران للإجراء التجريبي

ملاحظة: الإجراء التجريبي، حدد ذكور الفئران سبراغ داولي مع لا أمراض العلني، كل وزنها بين 300 و 350 g.

1. بيت الفئران الثلاثة في قفص، مع تشو والمياه ad متواصلة، متوفرة وتسمح لمدة أسبوعين على الأقل للتكيف، والتناوب بين ح 12 من ضوء النهار وح 12 الظلام.
2. قبل البدء بالتجربة، اختبار جميع الفئران لوجود السلوكيات مثل الاكتئاب التي تستغرق 3 أيام باستخدام اختبار التفضيل السكروز (راجع الخطوة 4)-
3. استبعاد الجرذان التي ينظر إليها لعرض السلوكيات مثل الاكتئاب، وهم أولئك الذين يسكنون في أقفاص نفس الصفة الفئران، تفاديا لاحتمال انتشار الاكتئاب الفئران لم تتأثر قبل بدأ التجربة أولاً، القضاء على فئران اختبار إيجابية بالنسبة الاكتئاب؛ ثم القضاء على الفئران التي يسكن في نفس الأقفاص كالجرذان الاكتئاب.
4. إذا لزم الأمر، استبعاد الفئران إضافية بشكل عشوائي لإنشاء مجموعات النهائي من الفئران 60 تجربة الاكتئاب والفئران 30 مجموعة العدوى 30 مجموعة عنصر التحكم راتسفورثي.
5. العلامة الفئران (باستخدام ملصقات مرقمة)، طوال الإجراءات التجريبية. مؤقتاً نقل الفئران في أقفاص واحدة أثناء التجارب (في نفس الغرفة ودورة الظلام لسلطات الجمارك والسكروز والاختبارات الميدانية مفتوحة، وفي غرفة مختلفة ودورة الظلام للاختبار القسري السباحة وواحد من عوامل الإجهاد (الرجوع إلى 2.1.7)) والعودة إليها الأشعة تحت الحمراء الفئات الاجتماعية الأصلية في النهاية.

2-إجراءات تنظيم دورات تعريفية للاكتئاب في الفئران

ملاحظة: من أجل حمل الاكتئاب، إخضاع الفئران 60 في المجموعة المعرضة لسلطات الجمارك للتلاعب العديد من سلطات الجمارك لمدة خمسة أسابيع²⁰.

1. تعرض الجرذان يوميا إلى أي 2 من الضغوطات 7 التالية، في ترتيب عشوائي؛ لواحد من الضغوطات خلال النهار وأخرى في الليل، لمدة 5 أسابيع متتالية.
   1. بيت الفئران في مجموعات (ستة الفئران، بدلاً من الثلاثة المعتادة، في قفص ح 18)؛
   2. وضع الفئران في قفص مائلة (45 درجة على المحور الرأسي ح 3)؛
   3. تحرم على الفئران للأغذية (ح 18)؛
   4. تحرم على الفئران للمياه (ح 18) وتعرضها لزجاجات المياه الفارغة فورا عقب فترة من الحرمان الحاد من المياه (ح 1)؛
   5. وضع الفئران في قفص رطب الأسرة (مع 300 مل الماء المنسكب في الفراش) ح 8 (دورة الليل)؛
   6. تعرض الفئران لإضاءة مستمرة (24 ساعة)، وعكس اتجاه دورة الضوء/الظلام (ح 12) مرتين في الأسبوع؛
   7. وضع الفئران في بيئة ساخن (40 درجة مئوية، 5 دقيقة-دورة الليل)، مع جهاز آخر يستخدم لزيادة الحرارة.
2. تأكيد وضع الاكتئاب عن طريق إجراء اختبار التفضيل السكروز (راجع الخطوة 4)-
   ملاحظة: يمكن أن يكون مؤقتاً على البروتوكول بعد كل خطوة من الخطوات المذكورة أعلاه. بالإضافة إلى ذلك، إذا كان يتم عرض أي سلوك شاذ بأي فأر، ثم القضاء على الفئران وأي فأر الأخرى قد تأثرت بالفئران خاطئ.

3-الإجراء الخاص بإنشاء الاكتئاب-العدوى في الفئران ساذجة

1. إنشاء 30 الفئات الاجتماعية مع الفئران المعرضة لسلطات الجمارك (60) ومجموعات الاكتئاب-العدوى (30):
   1. بيت الفئران المعرضة لسلطات الجمارك اثنين في قفص في أقفاص مختلفة 30.
   2. إضافة فأر واحد من مجموعة الاكتئاب-العدوى إلى كل قفص يحتوي على اثنين CUS-تعرض الفئران.
2. السماح المعاشرة مدة 5 أسابيع ، تحت الظروف القياسية، مع تشو والمياه المتاحة libitum الإعلانية.
3. بعد 5 أسابيع المعاشرة، موضوع جميع المجموعات إلى تفضيل السكروز وحقل مفتوح، واختبارات السباحة القسري بالترتيب الموضح في الشكل 1.

4-تفضيل السكروز اختبار²¹

1. وخلال دورة الظلام، مكان الفئران في أقفاص فردية في نفس الغرفة السكن.
2. ضع زجاجة 100 مل من محلول السكروز 1% (w/v) في كل قفص ح 24، والسماح للتكيف.
3. إزالة الزجاجات وحرمان الجرذان من الغذاء والماء من أجل ح 12.
4. مكان اثنين زجاجات، واحدة تحتوي على 100 مل من محلول السكروز (1%، w/v)، والآخر، 100 مل ماء الصنبور، في كل قفص ح 4.
5. سجل الحجم (في مل) من محلول السكروز المستهلكة والمياه، وحساب النسب إلى تفضيل السكروز على النحو التالي:
   

5-اختبار حقل مفتوح

ملاحظة: يستخدم اختبار الحقل المفتوح القياسية عادة لتقييم السلوك الحركي واستكشافية، والشبيهة بالقلق، والاستجابات السلوكية للجدة في مختبر الحيوانات^{22، 23}. كما تبين هذا الاختبار لتحليل السلوك الاكتئابي²⁴. ويبحث الاختبار فتح الحقل معلمتين من معلمات معارضة؛ القوارض الخوف من الضوء الساطع المضيء في وسط الميدان ضد رغبتهم معبرة صوب الجدة. عندما حريصة، تميل القوارض لتجنب الاكتشاف والإقامة بطرحها على الجدران (ثيجموتاكسيس). يتحدد هذا القلق بدرجة تفادي الميدان المركزي مضاءة الزاهية. فتح الحقل، تتكون من مربع اﻷكريليك والارجنين الأسود (120 سم × 60 سم × 60 سم)، ينقسم إلى الجزء المركزي (25 في المائة) والباقي من المربع (75%). ويجري هذا الاختبار في نفس الغرفة السكنية خلال دورة الظلام. كاميرا فيديو، أوقفت حوالي 200 سم فوق الميدان، يستخدم لتسجيل^22، اختبار حقل مفتوح ²³.

1. قم بتنظيف الجهاز مع 5 ٪ من الكحول قبل إدخال كل حيوان. وضع الفئران في الزاوية لفتح الحقل مواجهة الحائط.
2. تسجيل السلوك في الفئران مع كاميرا فيديو لمدة 5 دقائق.
3. تحليل التسجيلات بعد المعلمات التالية: مجموع السفر المسافة، والسرعة في الجزء المركزي من الميدان، والوقت الذي يقضيه في الجزء المركزي من الميدان.

6-اختبار السباحة القسري

ملاحظة: مبدأ اختبار السباحة القسري تستند إلى حقيقة أن عند الجرذان يجبرون على السباحة في مكان ضيق، في نهاية المطاف التخلي وتظل غير متحرك، أحياناً تتحرك أجسادهم من أجل تجنب الغرق^{21، 23}. نظراً لضخامة جهاز مجمع بالفعل، أجرى هذا الاختبار في غرفة مختلفة خلال دورة الظلام.

1. للتعود، وضع الفئران في اسطوانة زجاج (100 سم وقطرها 40 سم وعمق 40 سم) يحتوي على الماء في درجة حرارة الغرفة، 15 دقيقة السباحة الدورة.
2. إزالة الفئران من الاسطوانة، الجافة مع مناشف ورقية، ووضعه في قفص حار لمدة 15 دقيقة.
3. عودة الفئران إلى قفصة (الأصلي) المنزلية؛
   ملاحظة: يمكن أن يكون مؤقتاً البروتوكول هنا. أيضا، إذا كان أي فأر أثناء هذا الاختبار هو الغرق، تنسحب فورا.
4. اليوم التالي، شريط فيديو دورة سباحة 5-دقيقة وتحليل التسجيلات بعد المعلمات التالية: الجمود وتسلق والتغوط.

النتائج

اختبار التفضيل السكروز: بعد تعريض الفئران لمدة 5 أسابيع من سلطات الجمارك لتحريض اكتئاب، ومن ثم بعد ذلك تعريض الفئران صحية على الفئران المعرضة لسلطات الجمارك 5 أسابيع أخرى، عرض كل من مجموعتي الفئران مثل الاكتئاب بيهافيورسات نهاية التجربة (الشكل 2). الأدلة على هذا ال...

Discussion

وفقا للنتائج التي تم الحصول عليها بتطبيق هذا البروتوكول، تأثرت الفئران صحية، مثل البشر، سلبا على الفئران الاكتئاب عندما يقيمون معا لفترة طويلة. الفئران كونتاجيوسلي الاكتئاب تأثرت نظيراتها الفعل الاكتئاب بعد خمسة أسابيع المعاشرة، إنشاء نموذج اكتئاب حيوانية متميزة-عدوى لأول مرة. واقترحت...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Rat Cages	Techniplast	2000P	Conventional housing for rodents. Was used for housing rats throughout the experiment
Water	-	-	Common tap water used througout the experiment at different stages
Purina Chow	Purina	5001	Rodent laboratory chow given to rats, mice and hamster is a life-cycle nutrition that has been used in biomedical researc for over 5 decades. Provided to rats ad libitum in this experiment
Bottles	Techniplast	ACBT0262SU	150 ml bottles filled with 100 ml of water and 100 ml 1%(w/v) sucrose solution
Black lusterless perspex box	-	-	(120 cm × 60 cm × 60 cm), divided into a 25% central zone and the surrounding border zone
Video Camera	Canon	-	Digital video camera for high definition recording of rat behavior under open field test
Alcohol	Pharmacy	-	99% pharmaceutical alcohol diluted to 5% and used for lceaning the open field test box before the introduction of each rat
Glass cylinder	-	-	100 cm tall, 40 cm in diameter, and 40 cm deep cylinder used for carrying out the forced swim test
Paper towels	Pharmacy	-	Dry towels used for keeping rats dry after immersing them in water
Bold markers	-	-	Common bold markers used for labeling rats