Eine neue Methode zur Induktion einer Depression-ähnliches Verhaltens bei Ratten

Zusammenfassung

Dieses Protokoll beschreibt ein neues Modell mit dem gesunde Ratten Depression über einen bestimmten Zeitraum Vertrag könnte Periodthrough Ansteckung durch die Einwirkung von chronischen unberechenbar (CUS) Ratten betont.

Zusammenfassung

Ansteckend, Depression ist ein Phänomen, das noch nicht voll erkannt werden und dies ergibt sich aus nicht genügend Material zu diesem Thema. Im Moment gibt es keine vorhandenen Format für das Studium des Mechanismus der Aktion, Prävention, Eindämmung und Behandlung von Depressionen ansteckend. Der Zweck dieser Studie war daher die erste Tiermodell der ansteckenden Depression.

Gesunde Ratten können depressive Verhaltensweisen zusammenziehen, wenn depressiv Ratten ausgesetzt. Depression wird bei Ratten induziert, indem sie auf mehrere Manipulationen von unvorhersehbaren Dauerstress (CUS) mehr als 5 Wochen wie im Protokoll beschrieben. Ein erfolgreiche Saccharose Präferenz Test bestätigt die Entstehung von Depressionen bei den Ratten. CUS-exponierten Ratten wurden dann mit naiven Ratten aus der Ansteckung-Gruppe (1 naiv Ratte/2 deprimiert Ratten in einem Käfig) für weitere 5 Wochen eingesperrt. 30 soziale Gruppen entstanden aus der Kombination von CUS-exponierten Ratten und naiv Ratten.

Dieses Protokoll vorgeschlagenen Depression-Ansteckung bei Tieren besteht hauptsächlich aus eheähnlicher Gemeinschaft CUS ausgesetzt und gesunden Ratten für 5 Wochen. Um sicherzustellen, dass diese Methode funktioniert, eine Reihe von Tests durchgeführt werden - zuerst, die Saccharose Präferenz Test auf Induktion Depression an Ratten, anschließend die Saccharose-Einstellung testen, neben dem Freiland und gezwungen schwimmen Tests am Ende der Periode Zusammenleben. Während das Experiment Ratten Stichworte gegeben werden und sind immer wieder in ihren Käfigen nach jedem Test.

Ein paar Einschränkungen dieser Methode sind die schwachen Unterschiede zwischen experimentellen und Gruppen in der Saccharose-Präferenz-Test und der irreversiblen traumatische Testergebnisses erzwungenen schwimmen zu kontrollieren. Diese dürfen Überlegung Wert für Eignung vor eine künftige Anwendung des Protokolls. Dennoch entwickelt, das Experiment, naive Ratten Ansteckung Depression nach 5 Wochen den gleichen Käfig mit der CUS-exponierten Ratten teilen.

Einleitung

In jüngster Zeit durchgeführten Tests haben vorgeschlagen, dass psychiatrische Erkrankungen zu gesunden Personen über Ansteckung¹leicht verteilt werden. In diesem Fall es soziale Ansteckung bezeichnet und erstreckt sich über Affekt, Haltung oder Verhalten. Dies erfordert nur eine depressive Person zur Interaktion mit einer oder mehr gesunde Menschen, dadurch erleichtern den Austausch von Emotionen. Soziale Beziehungen sind daher ein sehr wichtiger Bestandteil der Stimmung, wie sie die Übertragung von Emotionen von einem Individuum zum anderen, durch Mimik und "emotionale Ansteckung" definieren. Zeitrahmen für die Ansteckung wirksam variieren², zwangsläufig abhängig von der Schwere der Emotion und die Stärke des Widerstands des Empfängers.

Die erheblichen Folgen der emotionale Ansteckung haben dafür gesorgt, dass Studien, die in der Vergangenheit vor allem auf die negativen Aspekte konzentriert. Das Ergebnis der negativen Effekte sorgte dafür, dass Ansteckung Depressionen erhalten enorme Aufmerksamkeit, mit Studien, die zeigen, dass Ansteckung Depression erhöht die Wahrscheinlichkeit von Familien und Freunden eine depressive Person ausstellen depressive Verhaltensweisen^{3 , 4 , 5 , 6}.

Es gibt persönliche und wirtschaftliche Gründe für die Bekämpfung der Depression. Es verursacht häufig Morbidität; und seine Lebenszeit Inzidenz zwischen 13,3 und 17,1 % in den Vereinigten Staaten-⁷. Die Weltgesundheitsorganisation (WHO) Dateien zeigen, dass Depressionen ist viertens auf der Liste der globalen Krankheiten mit enormen Belastungen auftreten bei Menschen aller Geschlechter, Altersgruppen, sozialen Schichten, und ebenso kann zu schlechten Gesundheit, Auswirkungen auf die Fähigkeit zur Interaktion mit anderen^8,9,10,11und verursachen übermäßige Behinderung^12,13. 850.000 leben schätzungsweise jedes Jahr¹⁴depressive Selbstmord verloren werden. Patienten sind in der Regel Antidepressiva verschrieben oder empfohlen, kognitive Verhaltenstherapie zu unterziehen. Diese Treatmentshelp etwa 60-80 % der Patienten. Umgang mit der Krankheit birgt jedoch nach wie vor ein großes Problem; Behandlung ist nicht für alle depressiven Patienten. Für diejenigen, die behandelt werden, leiden einige Nebenwirkungen, während andere schlecht Richtlinien¹⁵entsprechen. Die Zahl der Patienten, die resistent gegen die Behandlung ist bis zu ca. 40 %¹⁴. Mit Depression leidet die Wirtschaft häufig in Form von teuren Behandlung, eine Abnahme in der Belegschaft und Frühpensionierungen¹⁶. Ein geschätzter jährlichen Verlust von $ 44 Milliarden in den Vereinigten Staaten verursacht durch Depressionen, fast die Hälfte des Landes Produktivitätsverluste¹⁷entfallen. Teure Behandlung erfordert sorgfältige ärztliche Behandlung, die verursacht einer Vielzahl von erhöhten Behandlungskosten und Vorfreude auf unerwünschte Ergebnisse sowie schlechtes Ansprechen auf die Behandlung¹⁸erfordert.

Stoßen, die nicht bereits bewährte Tiermodell der Depression-Ansteckung-Mechanismus, der Prävention und Behandlung zu studieren, war dieses hypothetische Tiere Protokoll zum ersten Mal verwendet. Es deutet darauf hin, dass durch Zusammenleben mit CUS-exponierten Ratten, gesunde Ratten neigen depressive Verhaltensweisen zum Ausdruck bringen. Das Hauptziel dieses Experimentes war, ein Laborverfahren zu etablieren, die die Übertragung von Depression, über Ansteckung von CUS-exponierten Ratten, gesunde Zellen hervorgehoben. Als nächstes wurden Ergebnisse ausgewertet, um festzustellen, wenn Depression-Ansteckung auf depressive Symptome beschränkt war, oder wenn es im Zusammenhang mit anderen affektiven Störungen, wie Angst. Das ultimative Ziel des Experiments ist es, zum besseren Verständnis des Mechanismus der Depression-Ansteckung im Rennen um die Entwicklung neuer Therapieansätze¹⁹nähern.

Protokoll

Das folgende Verfahren wurde entsprechend den Empfehlungen der Deklaration von Helsinki und Tokio und die Richtlinien für die Verwendung von Versuchstieren der Europäischen Gemeinschaft durchgeführt. Die Experimente wurden von Animal Care Committee an der Ben-Gurion-Universität des Negev ebenfalls genehmigt.

1. Vorbereitung Ratten für die Versuchsdurchführung

Hinweis: Für die Versuchsdurchführung, ausgewählten männlichen Sprague-Dawley Ratten mit keine offensichtliche Pathologie, jeweils mit einem Gewicht zwischen 300 und 350 g.

1. Haus drei Ratten pro Käfig, mit Chow und Wasser ad libitum zur Verfügung und ermöglichen für mindestens zwei Wochen zur Anpassung, abwechselnd 12 Stunden Tageslicht und 12 h der Finsternis.
2. Vor Beginn des Experiments, testen alle Ratten auf das Vorhandensein von depressiv-ähnliche Verhaltensweisen mit einem 3-tägigen Saccharose-Präferenz-Test (siehe Schritt 4).
3. Exclude Ratten, die wahrgenommen werden anzuzeigende depressiv-ähnliche Verhaltensweisen und diejenigen, die in den gleichen Käfigen als solche untergebracht Ratten, um mögliche Ausbreitung der Depression unberührt Ratten zu vermeiden, bevor das Experiment zuerst begonnen hat beseitigen Ratten, die positiv auf die Probe Depression; dann, zu beseitigen, Ratten, die in den gleichen Käfigen als depressiven Ratten untergebracht sind.
4. Bei Bedarf schließen Sie zusätzliche Ratten nach dem Zufallsprinzip, die letzte Gruppen von 60 Ratten für die Depression-Experiment zu erstellen, 30 Ratten für die Ansteckung Gruppe und 30 Ratsforthe Kontrollgruppe aus.
5. Kennzeichnen Sie Ratten (mit nummerierten Aufkleber), während die experimentellen Verfahren. Vorübergehend übertragen Ratten in einzelne Käfige während der Experimente (im selben Raum und dunklen Zyklus für die CUS, Saccharose und Freiland-Tests, und in einem anderen Raum und dunklen Zyklus für den gezwungen-schwimmen-Test und für eines der Stressoren (siehe 2.1.7)) und bringt sie zu den IR-original gesellschaftlichen Gruppen am Ende.

(2) die Verfahren für die Induktion von Depressionen bei Ratten

Hinweis: Um Depressionen zu induzieren, vorbehaltlich der 60 Ratten in der CUS-exponierten Gruppe mehrere Manipulationen von CUS für fünf Wochen²⁰.

1. Setzen Sie Ratten täglich zu 2 der folgenden 7 Stressoren in zufälliger Reihenfolge; um ein Stressor während des Tages und zum anderen in der Nacht, für 5 Wochen.
   1. Haus der Ratten in Gruppen (sechs Ratten, statt der üblichen drei pro Käfig für 18 h);
   2. Legen Sie die Ratten in einem geneigten Käfig (45° entlang der vertikalen Achse für 3 h);
   3. Nehmen Sie die Ratten von Lebensmitteln (18 h);
   4. Entziehen Sie die Ratten (18 h) Wasser zu und setzen sie aus, leeren Wasserflaschen, die sofort nach einer Phase der akuten Wasserentzug (1 h);
   5. Legen Sie die Ratten in einem Käfig nasse Bettwäsche (mit 300 mL Wasser verschüttet in der Bettwäsche) für 8 h (Nacht-Zyklus);
   6. Setzen Sie die Ratten auf Dauerlicht (24 h) und umgekehrt hell/dunkel-Zyklus (12 h) zweimal pro Woche;
   7. Legen Sie die Ratten in einer heißen Umgebung (40° C, 5 min - Nacht-Zyklus), mit einem anderen Gerät verwendet, um die Wärme zu erhöhen.
2. Bestätigen Sie die Entstehung von Depressionen durch Ausführen einer Saccharose-Präferenz-Test (siehe Schritt 4).
   Hinweis: Das Protokoll kann nach jedem der oben genannten Schritte angehalten werden. Zusätzlich, wenn kein abweichendes Verhalten durch eine Ratte angezeigt wird, dann, beseitigen Sie die Ratte und andere Ratte, die möglicherweise durch die erratischen Ratte betroffen.

(3) die Verfahren für die Depression-Ansteckung in naiven Ratten

1. Stellen Sie 30 soziale Gruppen mit Ratten aus der CUS-ausgesetzt (60) und Depression-Ansteckung (30):
   1. Haus zwei CUS-exponierten Ratten pro Käfig in 30 verschiedenen Käfigen.
   2. Fügen Sie eine Ratte aus der Depression-Ansteckung-Gruppe, jeder Käfig mit zwei CUS - Ratten ausgesetzt.
2. Lebensgemeinschaft seit 5 Wochen unter Standardbedingungen mit Chow zu ermöglichen und Wasser zur Verfügung Ad Libitum.
3. Nach 5 Wochen des Zusammenlebens Gruppen betrifft alle die Saccharose Präferenz, Freiland und gezwungen schwimmen Tests in der Reihenfolge, die in Abbildung 1dargestellt.

(4) die Saccharose Präferenz Test²¹

1. Während des dunklen Zyklus legen Sie die Ratten in einzelnen Käfigen im gleichen Raum wie das Gehäuse.
2. Stellen Sie eine Flasche 100 mL 1 % (w/V) Saccharose Lösung in jedem Käfig für 24 h, und Anpassung ermöglichen.
3. Entfernen Sie die Flaschen und berauben Sie die Ratten von Nahrung und Wasser für 12 h zu.
4. Legen Sie zwei Flaschen, eine mit 100 mL Zuckerlösung (1 %, w/V) und die anderen 100 mL Leitungswasser in jedem Käfig für 4 h.
5. Das Volumen (in mL) der verbrauchten Saccharoselösung und Wasser aufnehmen und die Affinität zu Saccharose Vorliebe wie folgt zu berechnen:
   

(5) die Freiland-Test

Hinweis: Die standard Freiland-Test dient häufig Bewegungsapparates, Sondierungsgespräche und Angst-wie Verhalten und Verhaltensreaktionen Neuheit im Labor Tiere^{22, 23}bewerten. Dieser Test hat auch gezeigt, um depressive Verhaltensweisen²⁴zu analysieren. Die Freiland-Test prüft zwei gegnerische Parameter; die Nagetiere Angst um das helle Licht in der Mitte des Feldes gegen ihre ausdrucksstarke Wunsch in Richtung Neuheit. Wenn ängstlich, neigen Nager, Entdeckung und Aufenthalt setzen von Mauern (Thigmotaxis) zu vermeiden. Diese Angst wird durch den Grad der Abwendung der hell erleuchteten Mittelfeld bestimmt. Das freie Feld, bestehend aus einem Schwarz Matt Acryl-Box (120 cm × 60 cm × 60 cm), gliedert sich in den zentralen Teil (25 %) und der Rest des Feldes (75 %). Dieser Test findet im gleichen Raum wie das Gehäuse während des dunklen Zyklus. Eine Video-Kamera, ca. 200 cm über dem Feld ausgesetzt dient zur Aufnahme der Freiland-Test^{22, 23}.

1. Reinigen Sie das Gerät mit 5 % Alkohol vor der Einführung eines jeden Tieres. Legen Sie die Ratte an der Ecke des Feldes offen gegen die Wand.
2. Erfassen Sie die Ratte Verhalten mit einer Videokamera für 5 Minuten.
3. Post-Aufnahmen der folgenden Parameter analysieren: vollständige Entfernung, Geschwindigkeit im zentralen Teil des Feldes und Zeitaufwand im zentralen Teil des Feldes.

(6) die gezwungen-schwimmen-Test

Hinweis: Das Prinzip der erzwungenen schwimmen Test ist auf die Tatsache, dass bei Ratten gezwungen sind, in einem geschlossenen Raum zu schwimmen, sie schließlich aufgeben und unbeweglich bleiben, gelegentlich bewegte ihren Körper zur Vermeidung von Ertrinken^{21, 23}. Wegen der Ungeheuerlichkeit der bereits montierte Vorrichtung war dieser Test in den anderen Raum während des dunklen Zyklus durchgeführt.

1. Für Gewöhnung, legen Sie die Ratte in einem Glaszylinder (100 cm hoch, 40 cm im Durchmesser und 40 cm tief) mit Wasser bei Raumtemperatur für eine 15 min schwimmen Sitzung.
2. Entfernen Sie die Ratte aus dem Zylinder, mit Papiertüchern, trocken und in einem warmen Käfig für 15 Minuten.
3. Die Ratte Rückkehr in seine Heimat (original) Käfig;
   Hinweis: Das Protokoll kann hier angehalten werden. Auch, wenn eine Ratte im Verlauf dieses Tests Ertrinken ist, ziehen sie Sie sofort.
4. Am Folgetag, Videoband eine 5-min schwimmen Sitzung Aufzeichnungen und analysieren nach der folgenden Parameter: Immobilität, Klettern und Stuhlgang.

Ergebnisse

Der Saccharose-Präferenz-Test: Beide Gruppen von Ratten angezeigt nach Freilegung Ratten auf 5 Wochen CUS für die Induktion von Depression, und dann anschließend gesunde Ratten, die CUS-exponierten Ratten für weitere 5 Wochen auszusetzen depressiv-wie Behaviorsat das Ende des Experiments (Abbildung 2). Der Beweis für dieses Verhalten wurde in der reduzierten Vorliebe für Saccharose von den depressiven Ratten nach gesehen CUS (65 ± 2,8 %, p < 0,001,

Diskussion

Nach den Ergebnissen, die mit der Anwendung dieses Protokolls waren gesunde Ratten, wie die Menschen negativ deprimiert Ratten, wenn über einen längeren Zeitraum zusammen untergebracht betroffen. Die ansteckend deprimiert Ratten betroffen waren schon depressiv Pendants nach fünf Wochen des Zusammenlebens, eine ausgeprägte tierische Depression-Ansteckung-Modell zu etablieren, zum ersten Mal. Eine frühere Studie mit Schweinen hatte auch gemeinsame emotionale Satzung zwischen depressiven und gesunde Schweine

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
Rat Cages	Techniplast	2000P	Conventional housing for rodents. Was used for housing rats throughout the experiment
Water	-	-	Common tap water used througout the experiment at different stages
Purina Chow	Purina	5001	Rodent laboratory chow given to rats, mice and hamster is a life-cycle nutrition that has been used in biomedical researc for over 5 decades. Provided to rats ad libitum in this experiment
Bottles	Techniplast	ACBT0262SU	150 ml bottles filled with 100 ml of water and 100 ml 1%(w/v) sucrose solution
Black lusterless perspex box	-	-	(120 cm × 60 cm × 60 cm), divided into a 25% central zone and the surrounding border zone
Video Camera	Canon	-	Digital video camera for high definition recording of rat behavior under open field test
Alcohol	Pharmacy	-	99% pharmaceutical alcohol diluted to 5% and used for lceaning the open field test box before the introduction of each rat
Glass cylinder	-	-	100 cm tall, 40 cm in diameter, and 40 cm deep cylinder used for carrying out the forced swim test
Paper towels	Pharmacy	-	Dry towels used for keeping rats dry after immersing them in water
Bold markers	-	-	Common bold markers used for labeling rats