쥐에서 우울증 같은 행동을 유도 하는 새로운 방법

요약

이 프로토콜은 건강 한 쥐 만성 예측할 수에 노출에 의해 periodthrough 감염 스트레스 (CUS) 쥐 주어진된 시간 동안 우울증을 계약 수 새로운 모델을 설명 합니다.

초록

전염성이 우울증은 아직 완벽 하 게 인식 될 것 이다 현상 그리고이 주제에 부족 한 자료에서 유래한 다. 순간, 행동, 예방, 억제, 및 전염 성 우울증의 치료의 메커니즘을 공부에 대 한 기존 형식이 있다. 따라서,이 연구의 목적은 전염성이 우울증의 첫 번째 동물 모델을 확립 했다.

우울된 쥐에 노출 하는 경우 건강 한 쥐 우울한 행동 계약 수 있습니다. 우울증은 프로토콜에 설명 된 대로 5 주 이상 만성 예측할 수 없는 스트레스 (CUS)의 몇 가지 조작에 그들을 쓰는 하 여 쥐에서 유도 된다. 성공적인 자당 기본 설정 테스트 우울증 쥐에서의 개발을 확인 했다. 노출 CUS 쥐 다음 추가 5 주 감염 그룹 (한 장에 1 순진한 쥐/2 우울 쥐)에서 순진한 쥐로 갇힌 했다. 30 사회 단체 노출 CUS 쥐와 순진한 쥐의 조합에서 창조 되었다.

동물에 제안 된 우울증-질병 프로토콜이 5 주 동안 cohabiting CUS 노출 및 건강 한 쥐의 주로 구성 되어 있습니다. 이 방법은, 일련의 테스트 실시-첫째, 쥐, 우울증 유발에 자당 취향 테스트를 보장 하기 위해, 자당 기본 설정 테스트, 오픈 필드와의 동 거 기간 끝에 강제 수영 검사. 실험을 통해 쥐 태그 주어진 고 각 테스트 후 그들의 감 금 소를 항상 반환 됩니다.

이 방법에는 몇 가지 제한 사항을 실험 사이 기록 약한 차이 자당 기본 테스트 및 강제적인된 수영 시험의 돌이킬 수 없는 충격적인 결과에 그룹을 제어 하 고. 이 프로토콜의 모든 미래의 응용 프로그램 전에 적합성에 대 한 고려 가치가 있을 수 있습니다. 그럼에도 불구 하 고, 다음 실험, 순진한 쥐 감염 노출 CUS 쥐와 같은 케이지를 공유의 5 주 후 우울증을 개발 했다.

서문

최근에 실시 한 테스트 정신 질병 쉽게 감염¹를 통해 건강 한 개인에 게 확산 될 수 있는 제안 했다. 이 경우에, 그것은 사회적 질병 이라고 불린다 고 영향, 태도, 또는 행동을 통해 전염 됩니다. 이 한 우울된 개인 하나 상호 작용을 또는 더 건강 한 개인, 감정의 공유 촉진 함으로써 필요 합니다. 그들은 이전 감정의 한 개인에서 흉내 및 "감정적인 질병"의 다른 정의 사회적 관계 따라서 분위기의 매우 중요 한 구성 요소입니다. 적용 되려면 질병에 대 한 시간 프레임², 필연적으로 감정의 심각도 및 받는 사람의 저항의 강도 따라 다릅니다.

정서적 감염의 중요 한 결과 연구는 과거에 주로 만든 부정적인 측면에 초점을 맞춘 보장입니다. 부정적인 영향의 결과 질병 우울증 연구 보여주는 질병 우울증 증가 가족의 가능성과 우울증 동작³ 전시 우울된 개인의 친구와 함께 엄청난 관심을 받은 보장 ^{, 4 , 5 , 6}.

우울증을 태 클을 위한 개인 및 경제 이유가 있다. 그것은 일반적으로 병 적; 발생 그리고 자사의 평생 발병 률 13.3과 미국⁷에서 17.1% 사이. 세계 보건 기구 파일 표시 우울증 4 모든 성별, 연령, 사회적 배경, 사람들에서 발생 하는 거 대 한 부담과 함께 글로벌 질병의 목록에 동등 하 게 빈약한 건강, 상호 작용 하는 능력에 영향을 주는 수 다른 사용자와^8,,910,11및 일으키는 과잉 장애^12,13. 850000 생활 각 년¹⁴우울증 자살 손실 될 견적 된다. 환자는 일반적으로 처방 하는 항우울제 약물 또는 인지 행동 치료를 받아야 하는 것이 좋습니다. 이러한 treatmentshelp 환자의 약 60-80%. 그러나, 질병을 다루는 여전히 큰 문제; 포즈 모든 우울증된 환자를 치료 하지 않습니다. 치료 하는 사람들을 위해 일부 다른 저조한 지침¹⁵를 준수 하는 동안 부작용, 고통. 환자 치료에 저항력이 약 40%는¹⁴. 우울증, 경제는 비싼 치료, 인력, 그리고 조기 퇴직¹⁶감소의 형태로 자주 고생 했다. 예상된 연간 손실 미국에서 $44 십억의 우울증, 국가의 생산성 손실된¹⁷의 거의 절반에 대 한 회계에 의해 발생 합니다. 비싼 치료 필요 의료 주의 다양 한 의료 비용 증가 초래 하 고 바람직하지 않은 결과, 치료¹⁸가난한 응답의 기대를 필요로 합니다.

우울증-질병 메커니즘, 예방 그리고 치료를 공부 하는 이미 검증 된 동물 모델에 걸쳐 온 데,이 가상 동물 프로토콜은 처음으로 사용 되었다. 그것은 그 노출 CUS 쥐와 동 거를 통해 건강 한 쥐 우울한 행동을 표현 하는 제안. 이 실험의 주요 목적은 감염, 건강 한 사람에 게 노출 CUS 쥐에서를 통해 우울증의 전송을 강조 실험실 절차를 확립 했다. 다음, 결과 우울증-질병 우울증 증상에만 제한 되었다 또는 불안 등 다른 기분 장애에 관련 된 그것을 평가 했다. 실험의 궁극적인 목표는 더 나은 새로운 치료 접근¹⁹개발에 경주에 우울증-질병의 메커니즘을 이해 가까이 그릴입니다.

프로토콜

다음 절차는 유럽 공동체의 실험 동물의 사용에 대 한 헬싱키의 선언 및 도쿄와 지침의 권고에 따라 실시 했다. 실험 동물 관리 위원회 벤-Gurion 대학 네 겝의에 의해 또한 승인 되었다.

1. 쥐 실험 절차에 대 한 준비 하 고

참고: 선택 남성 Sprague-Dawley 쥐가 아무 명백한 병 리 실험 절차에 대 한 각 사이 300 및 350 g 무게.

1. 3 쥐 감 금 소, 차 우와 당 집 하 고 사용 가능한 ad libitum, 물 적응, 일광의 12 h와 어둠의 12 h 사이의 교류의 적어도 2 주에 대 한 허용.
2. 실험의 개시 전에 테스트 3-하루를 사용 하 여 우울증 같은 동작의 존재에 대 한 모든 쥐 자당 기본 시험 (4 단계 참조).
3. 우울증 같은 동작 및 표시를 쥐 실험 처음, 시작 하기 전에 영향을 받지 않는 쥐에 우울증의 가능한 확산을 피하기 위해 같은 동일한 장에 보관 하는 것을 인식 하는 제외 쥐 쥐에 대 한 긍정적인 테스트 제거 우울증; 그런 다음, 우울된 쥐로 동일한 장에 보관 되어 쥐 제거.
4. 필요한 경우, 우울증 실험에 대 한 60 쥐의 마지막 그룹을 임의로 추가 쥐, 감염 그룹 30 쥐 및 30 ratsforthe 제어 그룹 제외.
5. 쥐 (번호 스티커를 사용 하 여), 실험 절차에 걸쳐 태그. 일시적으로 (같은 공간에 어두운 주기 CUS, 자당 및 오픈 필드 테스트, 그리고 다른 방 및 어두운 주기 강제 수영 테스트 및 스트레스 (2.1.7 참조) 중 하나에 대 한) 실험 동안 단일 케이지 쥐 전송 및 반환 하는 ir 끝에 원래 사회 그룹입니다.

2. 쥐에서 우울증의 유도 대 한 절차

참고: 우울증을 유도 하기 위하여 CUS 5 주²⁰의 여러 조작에 노출 CUS 그룹에서 60 쥐를 주제.

1. 쥐; 임의의 순서로 다음 7 스트레스의 2에 매일 노출 한 스트레스 낮과 밤, 5 연속적인 주 동안에 다른 하
   1. 집 쥐 그룹 (6 쥐, 18h 위한 감 금 소 당 보통 3 대신);
   2. 기울어진된 케이지 3 h 수직 축 (45 °);에 쥐를 놓으십시오
   3. 음식 (18h);의 쥐를 박탈
   4. 물 (18h)의 쥐를 박탈 하 고 즉시의 기간 뒤에 심각한 물 부족 (1 시간); 빈 물병에 게 노출
   5. 장소 (침구에서 유출 물 300 mL)와 함께 새 젖은 침구 장에 쥐 8 h (밤 주기);
   6. 연속 조명 (24 시간)에 쥐를 노출 하 고 반대로 두 번 주당; 명암 주기 (12h)
   7. 열을 증가 하는 데 사용 하는 다른 기구와 함께 뜨거운 환경 (40 ° C, 5 분-밤 주기)에서 쥐를 놓습니다.
2. 우울증의 개발을 수행 하 여 확인 한 자당 기본 시험 (4 단계 참조).
   참고: 프로토콜은 각 위의 단계 후 일시 중지 될 수 있습니다. 또한, 어떤 탈 선 행동 어떤 쥐에 의해 표시 되 면 다음, 제거 쥐 및 다른 쥐 수 영향을 받은 엉뚱한 쥐 여.

3. 순 진 쥐에 우울증-질병을 설정 하기 위한 절차

1. 30 노출 CUS (60)에서 쥐를 가진 사회 집단 및 우울증-질병 (30) 그룹 설정:
   1. 30 다른 새 장에 감 금 소 당 두 노출 CUS 쥐 집.
   2. 각 새 장에 포함 된 두 개의 CUS-우울증-질병 그룹에서 한 쥐 쥐 노출 추가.
2. 동서 5 주 , 차 우와 표준 조건 하에서 허용 하 고 사용할 수 있는 광고 libitum물.
3. 5 주 후 동 거, 주제 모든 자당 기본 설정, 오픈 필드와 강제 수영 테스트 그림 1에 표시 된 순서로 그룹화 합니다.

4. 자당 기본 설정 테스트²¹

1. 어두운 주기 동안 주택 같은 방에 개별 장에 쥐를 놓습니다.
2. 24 h에 대 한 각 장에 100 mL 1% (w/v) 자당 해결책의 병을 배치 하 고 적응에 대 한 허용.
3. 병을 제거 하 고 먹이 물을 12 h의 쥐를 박탈.
4. 장소 2 병, 자당 솔루션 (1%, w/v)와 다른, 각 장에 4 h에 대 한 수돗물의 100 mL의 한 포함 100 mL.
5. 소비 자당 솔루션 및 물 (mL)에 볼륨을 기록 하 고 다음과 같이 자당 취향 선호도 계산:
   

5. 오픈 필드 테스트

참고: 표준 열 필드 테스트 운전, 탐험, 및 불안 같은 행동과 행동 응답 실험실 동물^{22, 23}에 참신을 평가 하기 위해 주로 사용 됩니다. 이 테스트 또한 우울한 행동²⁴분석을 보였다. 오픈 필드 테스트 검사 두 반대 매개 변수; 설치류의 참신을 향해 그들의 표현 욕구에 대 한 필드의 중심에서 빛나는 밝은 빛에 대 한 두려움. 불안, 설치류 하는 경향이 발견 및 벽 (thigmotaxis)에 의해 숙박. 이 불안은 밝은 조명된 중앙 필드를 averting의 정도 의해 결정 됩니다. 블랙 무광 아크릴 상자 (120 ㎝ × 60 ㎝ × 60 cm), 구성 된 오픈 필드 중앙 부분 (25%)와 상자 (75%)의 나머지 부분으로 나누어져 있습니다. 이 테스트는 같은 방에 어두운 주기 동안 주택에서 일어난다. 비디오 카메라, 필드 위의 약 200 cm를 정지 오픈 필드 테스트^{22, 23}기록에 사용 됩니다.

1. 각 동물의 도입 전에 5% 알콜을 가진 장치를 청소 하십시오. 쥐 벽을 직면 하 고 오픈 필드의 모서리에 놓습니다.
2. 5 분에 대 한 비디오 카메라와 함께 쥐의 행동을 기록 합니다.
3. 다음 매개 변수 후 녹음 분석: 총 여행 거리, 필드와 시간 필드의 중앙 부분에서의 중앙 부분에 속도.

6. 강제 수영 테스트

참고: 강제 수영 테스트의 원리는 사실에 근거한 쥐가 한정된 된 공간에서 수영 하 때, 그들은 결국 포기 하 고 움직이기 힘 드는, 때때로^{21, 23}익사 피하기 위하여 그들의 시체를 이동 유지. 때문에 이미 조립된 장치의 거 대 함,이 테스트 실행 되었다 다른 방에 어두운 주기 동안.

1. 습관 들 임, 유리 실린더 (키 큰 100 cm, 직경에서 40 cm 및 깊은 40 cm)에 있는 쥐 장소 수영 세션 15 분 동안 실내 온도에 물 포함.
2. 실린더, 종이 타월로 건조에서 쥐를 제거 하 고 15 분 동안 따뜻한 감 금 소에.
3. 반환 쥐의 집 (원래) 감 금 소;
   참고: 프로토콜 수 수 일시 중지 여기. 또한,이 테스트 과정에서 어떤 쥐 익사 하는 경우 그것을 당겨 밖으로 즉시.
4. 다음 매개 변수 후 녹음을 분석 하 고 다음 날에는 5 분 수영 세션 비디오 테이프: 부동, 등반, 그리고 깨끗 하 게 함.

결과

자당 기본 설정 테스트: 쥐의 우울증, 유도 CUS의 5 주에 노출 다음 이후에 노출 CUS 노출 쥐에 건강 한 쥐 더 5 주 후에, 쥐의 두 세트 우울증 같은 behaviorsat 실험 (그림 2)의 끝을 표시. 이 동작의 증거 자당에 대 한 감소 된 환경에 의해 보였다 우울된 쥐 CUS (65 ± 2.8%, p < 0.001, 그림 2), 후 때 제어 그룹 (101 ± 7%, (그림 2)에서 ...

토론

이 프로토콜의 응용 프로그램으로 얻은 결과 따르면 건강 한 쥐, 인간 같이, 부정적인 연장된 기간 동안 함께 지 내게 될 때 우울된 쥐에 의해 영향을 받았다. Contagiously 우울된 쥐 동 거, 처음으로 고유 동물 우울증-질병 모델 수립의 5 주 후에 그들의 이미 우울된 대응에 의해 영향을 받았다. 돼지와 함께 이전 연구도 우울 하 고 건강 한 돼지²⁵사이의 공유 감정적인 법령을 제안 했...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Rat Cages	Techniplast	2000P	Conventional housing for rodents. Was used for housing rats throughout the experiment
Water	-	-	Common tap water used througout the experiment at different stages
Purina Chow	Purina	5001	Rodent laboratory chow given to rats, mice and hamster is a life-cycle nutrition that has been used in biomedical researc for over 5 decades. Provided to rats ad libitum in this experiment
Bottles	Techniplast	ACBT0262SU	150 ml bottles filled with 100 ml of water and 100 ml 1%(w/v) sucrose solution
Black lusterless perspex box	-	-	(120 cm × 60 cm × 60 cm), divided into a 25% central zone and the surrounding border zone
Video Camera	Canon	-	Digital video camera for high definition recording of rat behavior under open field test
Alcohol	Pharmacy	-	99% pharmaceutical alcohol diluted to 5% and used for lceaning the open field test box before the introduction of each rat
Glass cylinder	-	-	100 cm tall, 40 cm in diameter, and 40 cm deep cylinder used for carrying out the forced swim test
Paper towels	Pharmacy	-	Dry towels used for keeping rats dry after immersing them in water
Bold markers	-	-	Common bold markers used for labeling rats