طرق "كشف السامة للخلايا أميلويدس التالية العدوى من الرئة خلايا بطانية" الزائفة الزّنجاريّة

Ron Balczon; Michael Francis; Silas Leavesley; Troy Stevens

doi:10.3791/57447

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

Summary

وترد أساليب بسيطة لما أبدته من إنتاج أميلويدس السامة للخلايا بعد إصابة بطانة الرئوية الزائفة الزّنجاريّة.

Abstract

المرضى الذين ينجون من الالتهاب الرئوي يكون ارتفاع معدلات الوفاة في الأشهر التي أعقبت التخريج من المستشفى. قد تم الافتراض بأن العدوى للأنسجة الرئوية أثناء الالتهاب الرئوي يؤدي إلى إنتاج cytotoxins المعمرة التي يمكن أن تؤدي إلى فشل اللاحقة نهاية الجهاز. وقد وضعنا في المختبر فحوصات لاختبار الفرضية القائلة بأن تنتج cytotoxins أثناء الإصابة الرئوية. تستخدم الخلايا غشائي الرئة الفئران المعزولة وبكتيريا الزائفة الزّنجاريّة كنظم نموذجية، وإنتاج سيتوكسينس بعد الإصابة بالخلايا البطانية من البكتيريا هو أثبت استخدام زراعة الخلايا التي تليها كوانتيتيشن المباشر باستخدام فحوصات نازعة لاكتات وطريقة مجهرية جديدة استخدام تكنولوجيا إيماجيج. كان تبين طبيعة هذه cytotoxins اميلويد فحوصات ملزمة تي ثيوفلافين وإيمونوبلوتينج وإيمونوديبليشن باستخدام الأجسام المضادة اميلويد A11. أظهرت تحليلات أخرى باستخدام إيمونوبلوتينج أن تاو oligomeric و Aβ أنتجت وصدر عن خلايا بطانية بعد الإصابة من P. الزّنجاريّة. يجب أن تكون هذه الطرق القابلة للتكييف وفقا لتحليلات للعينات السريرية البشرية.

Introduction

المرضى الذين ينجون من الالتهاب الرئوي يكون ارتفاع معدلات الوفاة في الأشهر التي تلت المستشفى تصريف¹^،²^،^،من³⁴^،^،من⁵⁶. وفي معظم الحالات، تحدث الوفاة بنوع من الفشل نهاية الجهاز بما في ذلك الكلي، الرئة، القلب، أو أحداث الكبد، فضلا عن السكتة الدماغية⁵^،⁶. والسبب في ارتفاع معدل الوفيات في هذا المريض السكان أنشأ ابدأ.

ويصنف الالتهاب الرئوي أما يجري اكتسب المجتمع أو المكتسبة في المستشفى (المستشفيات)، والعوامل التي يمكن أن تسبب الالتهاب الرئوي وتشمل البكتيريا والفيروسات والفطريات والمواد الكيميائية. واحد من الأسباب الرئيسية لالتهاب رئوي المستشفوي هو بكتيريا الزائفة الزّنجاريّة. P. الزّنجاريّة هو كائن الغرام الذي يستخدم نظام إفراز نوع الثالث لنقل مختلف الجزيئات المستجيب، يسمى اكسونزيميس، مباشرة إلى السيتوبلازم للخلايا الهدف⁷^،⁸. خلال عدوى خلايا غشائي الرئة، اكسونزيميس استهداف مختلف البروتينات داخل الخلايا، بما في ذلك شكل من أشكال بطانية من البروتينات المرتبطة microtubule تاو⁹^،¹⁰^،¹¹^،¹²، مما أدى إلى انهيار حاجز غشائي الناتجة في ذمة رئوية حادة، انخفضت وظائف الرئتين، وفي كثير من الأحيان، الموت.

وكما ذكر سابقا، المرضى الذين ينجون من الالتهاب الرئوي الأولى يكون ارتفاع معدلات الوفاة في الأشهر ال 12 الأولى بعد التخريج من المستشفى. إليه ممكنة لتفسير هذه الظاهرة هو أن يتم إنشاء نوع من السمية طويلة الأمد خلال العدوى الأولية التي تؤدي إلى سوء نتائج طويلة الأجل. ملاحظتان تدعم هذه الإمكانية. تفشل خلايا غشائي الرئة أولاً، مثقف التي تعامل في البداية مع P. الزّنجاريّة تنتشر لتصل إلى أسبوع بعد قتل البكتيريا بالمضادات الحيوية من¹³. ثبت البريونات ثانيا، المعمرة والوكلاء مع الخصائص بريون في مختلف الأمراض البشرية والحيوانية، لا سيما الأمراض المرتبطة بال¹⁴^،العصبي¹⁵.

وقد وصف أساليب لدراسة إمكانية إنتاج العوامل السامة للخلايا المعمرة خلال العدوى الرئوية ابدأ. ويرد هنا سلسلة من فحوصات بسيطة في المختبر التي يمكن استخدامها للتحقيق في إنتاج سيتوتوكسين والنشاط بعد الإصابة باستخدام مشتركة الالتهاب رئوي تسبب عامل, P. الزّنجاريّة. ينبغي أن تكون هذه الاختبارات القابلة للتكييف وفقا للتحقيق التعريفي سيتوتوكسين ممكن بعد الإصابة باستخدام العوامل الأخرى التي تسبب الالتهاب الرئوي، وسوبيرناتانتس التي يتم إنشاؤها أيضا ينبغي أن تكون مفيدة للتحقيق في آثار سيتوتوكسينس في الجامعة الأجهزة أو الحيوانات. أخيرا، سوف تكون الاختبارات التي ترد هنا على الأرجح قابلة للتكيف لاختبار السوائل البيولوجية الحيوانية والبشرية لإنتاج cytotoxins أثناء الالتهاب الرئوي.

Protocol

واستعرضت جميع الإجراءات الحيوان ووافق المؤسسية ولجنة العناية بالحيوان من جامعة ألاباما جنوب وأجريت وفقا لجميع اللوائح الاتحادية والولائية والمحلية. تم الحصول على الثقافات الأولية من الفئران خلايا بطانية ميكروفاسكولار الرئوية (بمفيكس) من "مرفق خلية الثقافة الأساسية" في مركز جامعة ألاباما جنوب "البيولوجيا الرئة". وتم إعداد الخلايا استخدام الإجراءات الموصوفة سابقا¹⁶.

1-جيل سوبيرناتانتس السامة للخلايا

ملاحظة: هنا، يمكننا استخدام اثنين من سلالات مختلفة من P. الزّنجاريّة: PA103، الذي يحتوي على نوع سليمة الثالث إفراز نظام قادر على نقل اكسونزيميس أكسو، وعزة إلى الخلايا المستهدفة خلال العدوى، و ∆PcrV، الذي يفتقر إلى نوع نظام إفراز الثالث وهو غير قادر على نقل اكسونزيميس إلى خلايا الهدف بعد التطعيم.

متتالية البكتيريا على لوحات أجار بونر فوغل (VB)¹⁷ وتنمو بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية.
1. لإعداد لوحات، جعل حل الأسهم التالية (أملاح بونر فوجل؛ الأسهم x 10): قياس ز 2 MgSO₄، ز 20 حمض الستريك (حمض الحرة)، 100 غ ك₂بو₄و 35 ز نة₂بو₄. إضافة ddH₂س 1 لتر والاوتوكلاف لمدة 15 دقيقة مع العادم بطيئة.
2. ضع أجار ز 7.5 في 450 مل ddH₂س والاوتوكلاف المذكورة أعلاه.
3. بعد التعقيم، ضع كل الحلول في حمام مائي 50 درجة مئوية لتبرد.
4. إضافة 50 مل من محلول الملح الأسهم 10 في x VB لاجار.
5. إضافة كاربينيسيلين إلى 400 ميكروغرام/مل (للسلالات من P. الزّنجاريّة المستخدمة)، ومزيج جيد من قبل يحوم في قارورة.
6. مل 5 مكان الحل أجار VB في الأطباق الفردية الثقافة العقيمة، والسماح لاجار لترسيخ وتخزينها ثم في 4 درجات مئوية حتى اليوم من البذر البكتيرية.
7. في يوم البذر البكتيرية، قبل الحارة صفيحة إلى 37 درجة مئوية ومتتالية ثم البكتيريا على لوح استخدام حلقة عقيمة. مكان اللوحة في حاضنة 37 درجة مئوية بين عشية وضحاها.
التحقق من النقاء بمفيك تلطيخ إيجابية مع نيون سيمبليسيفوليا جريفونيا يكتين وتلطيخ السلبية مع نيون بوماتيا اللولب يكتين (علامة لخلايا بطانية الشرياني). خلايا الكوة والتجميد في النيتروجين السائل.
للتجارب، والحفاظ على الخلايا في المتوسطة (دميم "تعديل النسر" دولبيكو) وتستكمل مع 10% مصل بقرى الجنين، وتنمو خلايا في حاضنة 37 درجة مئوية التي تحتوي على 5% CO₂. استخدام الخلايا في الفقرات 5-15.
1. لجيل سوبيرناتانتس السامة للخلايا، لوحة 2 × 10⁶ خلايا في الأطباق الفردية 150 سم وتنمو لمدة 3-4 أيام حتى يتم تحقيق التقاء. استخدام لوحات اثنين كل تجربة (انظر أدناه).
2. لتحليل سوبيرناتانتس السامة للخلايا، طبق بلايت 1 × 10⁵ خلايا في الآبار الفردية من 6-بئر وتنمو لمدة أربعة أيام حتى يتم تحقيق التقاء.
لإنتاج المادة طافية، يغسل واحدة من أطباق سم 150 اثنين من بمفيكس من الخطوة 1.3.1 مع الفوسفات مخزنة المالحة، تريبسينيزي، وثم عد الخلايا (نحن استخدام عداد الآلي خلية واتبع البروتوكول الخاص بالشركة المصنعة؛ انظر الجدول للمواد). أغسل الطبق الأخرى من بمفيكس مع موازنة الملح الحل (حبس هانك) وتصيب ثم مع أما سلالة من P. الزّنجاريّة في تعدد العدوى (وزارة الداخلية) من 20:1. ويتحقق ذلك على النحو التالي:
1. P. الزّنجاريّة، التطوير التنظيمي₅₄₀ 0.25 = 2 × 10⁸ كفوس مليلتر. لإعداد هذا التخفيف، إضافة 1 مل حبس إلى 1 مل ومبومو المتاح. تتخلص من البكتيريا كافية الخروج من اللوحة التي أعدت في الخطوة 1، 1 حتى يتم تحقيق التطوير التنظيمي₅₄₀ من 0.25 عندما تقاس باستخدام جهاز المطياف الضوئي. الخطوة التالية سوف توفر حساب كم ستكون هناك حاجة البكتيريا.
2. حالما يتم تحديد العدد بمفيكس في الطبق الثقافة (الخطوة 1، 4 أعلاه)، تحديد العدد المناسب من البكتيريا المراد إضافتها إلى الطبق الثاني، غير تريبسينيزيد والثقافة التي تحتوي على بمفيكس. على سبيل المثال، إذا ما تقرر أن طبق الثقافة بمفيكس تحتوي على 1.3 × 10⁷ الخلايا، ثم إعداد 1.3 × 10⁷ خلايا x 20 البكتيريا/خلية x 1 مل/2 × 10⁸ كفوس = 1.3 مل البكتيريا.
3. تمييع مل 1.3 من البكتيريا إلى حبس لوحدة تخزين نهائي من 20 مل، حيث أن كامل سطح صحن 150 سم يمكن تغطيتها بسائل، ثم إضافة البكتيريا المخفف اللوحة بمفيكس.
4. احتضان بمفيكس تلقيح مع البكتيريا في 37 درجة مئوية في 5% CO₂حاضنة ح 4-5، حتى يمكن رؤية الثغرات تشكيل في أحادي الطبقة الخلية عندما يلاحظ اللوحة مجهريا (انظر الشكل 1 للمستوى المناسب لتكوين الفجوة).
5. جمع المادة طافية، ثم الطرد المركزي لمدة 10 دقيقة في 2,000 ز العاشر في أجهزة الطرد مركزي منضدية لإزالة الحطام الخلوية.
  ملاحظة: أي قادرة على توليد ز كافية للطرد المركزي الجدول أعلى قوة لبيليه أونليسيد الخلايا والخلايا الكبيرة الشظايا التي يمكن استخدامها لهذه الخطوة.
6. من أجل المادة طافية في محقن يحتوي على فلتر 0.2 ميكرون يعلق على نهايته، ثم تمرير المادة طافية من خلال عامل التصفية لإزالة البكتيريا.
7. استخدام قاسمة من المادة طافية العقيمة لاختبار سيتوتوكسيسيتي (انظر 2.1) وتجميد بقية المادة طافية في-80 درجة مئوية لاستخدامها في المستقبل.

2-تحليل سوبيرناتانتس السامة للخلايا

تحليل سيتوتوكسيسيتي
1. النمو بمفيكس في أطباق 6-جيدا حتى التقاء. آبار المياه والصرف الصحي مرة واحدة مع حبس، ثم إضافة 1.5 مل من المادة طافية تعقيم التصفية (التي تم جمعها من الخلايا أما طعمت PA103 أو ∆PcrV) إلى الآبار الفردية. إضافة حبس العقيمة إلى بئر أخرى كعنصر سلبي.
2. ضع اللوحة في حاضنة₂ CO ح 21-24، ثم مراقبة للخلية قتل/سيتوتوكسيسيتي (انظر الخطوة التالية). استخدام سوبيرناتانتس الذي يحمل سيتوتوكسيسيتي لمزيد من التجريب، وتجاهل تلك التي لا تظهر قتل الخلية.
3. كوانتيتيشن لقتل الخلايا
  1. وأوصى قياس لاكتات نازعة (رابطة حقوق الإنسان) الإصدار من الخلايا الميتة باستخدام "مجموعات المقايسة رابطة حقوق الإنسان" متاحة تجارياً والشركة المصنعة للإجراءات.
  2. وبدلاً من ذلك، التحديد الكمي لقتل الخلايا مجهريا باستخدام البرمجيات إيماجيج. لذلك، سجل الصور المجهرية ومجالات الثقافة الطبق الذي يحتوي على خلايا سليمة، ثم تحديد حجم المناطق التي تفتقر إلى الخلايا (يدل على موت الخلايا في أحادي الطبقة) باستخدام ماكرو إيماجيج (المعاهد الوطنية للصحة) مخصص (انظر "ملف الترميز التكميلية" ). إذا رغبت في ذلك، القيام بالخطوات الماكرو يدوياً كما يلي:
    1. إدخال الصور (تنسيق RGB أو Tiff) في الماكرو وضبط التباين إلى 15 ٪ المشبعة بكسل. تكرار الصور ضبط التباين وقم بتنفيذ الأمر "طرح الخلفية" للحصول على صورة عالية التباين للمنطقة كل من الخلية والفجوة داخل مجال الرؤية.
    2. طرح هذه الصورة من الصورة الأصلية، والجمع بين الصورة الناتجة مع الصورة الأصلية باستخدام الحاسبة الصورة الدالة "AND". تحويل الصورة الناتجة إلى الأسود (الثغرات) وقناع أبيض (الخلايا) باستخدام الدالة عتبة (الحد الأدنى 0, 5 كحد أقصى)، واستخدام الدالة "تآكل ثنائي" لإزالة الضجيج من الصورة.
    3. قياس النسبة الأسود إلى الأبيض بكسل داخل الصورة الناتجة باستخدام قياس "منطقة الكسر". الأرض والتعبير عن المجالات كسرى لكل نقطة وقت المعالجة في المئة من مساحة الفجوة القصوى.
    4. حساب الوسائل ومقارنة استخدام ANOVA أحادي الاتجاه مع اختبار توكي للمخصص بعد، مع قيم p أقل من 0.05 تعتبر هامة.
4. استخدام تحليل إيمونوبلوت لإثبات وجود اميلويد وتأو oligomeric Aβ في supernatants ثقافة. إجراء تحليل إيمونوبلوت باستخدام إجراءات معيارية¹⁰^،¹¹^،¹²، باستثناء التركيز supernatants ثقافة الوقت على الأقل قبل التفريد.
  1. تركيز المادة طافية، ضع 1-2 مل من المادة طافية في وحدة الطرد المركزي تصفية الأغشية التي قد وقف وزن الجزيئي كاتشين 10. ثم، ضع وحدة التصفية إلى الجدول أعلى أجهزة الطرد المركزي وأجهزة الطرد المركزي في العاشر 2,000 حقق ز حتى الدرجة المطلوبة من التركيز (عادة ما تكون 45-60 دقيقة).
  2. تحديد كمية البروتين في طافية تتركز¹¹ وتحميل كميات متساوية من العينات في الآبار الفردية من الجل.
  3. تشغيل المواد الهلامية، ونقل البروتينات إلى النيتروسليلوز، ثم التحقيق البقع مع A11 اميلويد المضادة الأجسام المضادة، T22 تاو oligomeric المضادة الأجسام المضادة، أو جسم Aβ مكافحة MOAB2 تليها الأجسام المضادة الثانوية المناسبة. وضع البقع استخدام الإجراءات القياسية تشيميلومينيسسينسي.
5. القيام به ثيوفلافين "ر المقايسة"، استخدام الفلورية ثيوفلافين تي (تي إتش تي) لقياس أميلويدس في سوبيرناتانتس. لهذه القياسات، استخدام تصفية تعقيم سوبيرناتانتس.
  1. إعداد حل أسهم (50 س) ثيوفلافين ر تعليق 8 ملغ ثيوفلافين تي (تي إتش تي) إلى 10 مل الفوسفات مخزنة المالحة (PBS). بعد خلط، تصفية الحل من خلال عامل تصفية 0.22 ميكرون لإزالة الجسيمات.
  2. للقياسات، إضافة 20 ميليلتر من مخزون تي إتش تي إلى 1 مل من برنامج تلفزيوني في ومبومو جهاز المطياف الضوئي 1 مل. ضع العينة المخففة في سبيكتروفلوريميتير.
  3. قياس انبعاثات خط الأساس fluorescence استخدام 425 نانومتر الإثارة ومسح انبعاث الأسفار من شمال البحر الأبيض المتوسط 450-575 2 نانومتر زيادات.
  4. إجراء فحص الوقت الفاصل بين استخدام 425 نانومتر الإثارة واكتسب 482 نانومتر الانبعاثات، مع بيانات كل 0.2 s ل 60 ثانية.
  5. 20 الأولى s للمسح الضوئي الوقت الفاصل بين التدابير fluorescence في ومبومو فارغة. في 20 s، إيقاف المسح الضوئي، وإضافة 10 ميليلتر من المادة طافية تعقيم عامل التصفية إلى ومبومو. مزيج ومبومو واسطة انعكاس ومن ثم ضع مرة أخرى إلى سبيكتروفلوريميتير.
  6. استئناف المسح الضوئي المستندة إلى الوقت، الحصول على 40 نهائي دا بيانات.
  7. عند الانتهاء من المسح الضوئي الوقت الفاصل، إجراء فحص طيف انبعاث fluorescence نهائي باستخدام إعدادات متطابقة، كما هو مفصل في 2.1.5.3.

النتائج

وقد وضعت مقايسة بسيطة في المختبر الاعتداء على وجود سيتوتوكسينس في supernatants الخلايا المصابة ببكتيريا P. الزّنجاريّة. أساسا، تجمع الثقافة المتوسطة من الخلايا المصابة ح 4 بعد إضافة البكتيرية، تتم إزالة البكتيريا بالتعقيم تصفية الثقافة طافية، وثم يتم إضافة المادة ط?...

Discussion

وترد أساليب بسيطة في المختبر هنا، التي تسمح بالمظاهرات لتوليد أميلويدس السامة للخلايا أثناء الإصابة بالالتهاب رئوي التسبب في الكائن الحي. وتشمل هذه الأساليب خلية ثقافة الإنزيم سيتوتوكسيسيتي، إيمونوبلوتينج، كوانتيتيشن خلية القتل باستخدام الأسلوب المجهري الرواية، وربط تي إتش تي. أ?...

Disclosures

لا شيء للتقرير.

Acknowledgements

كان تمويل هذه البحوث في أجزاء من منح المعاهد الوطنية للصحة HL66299 للملخص والممولة من الميزانية العادية و SL، HL60024 للملخص، و HL136869 بوسط.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Rabbit anti beta amyloid	Thermo	71-5800
A11 amyloid oligomer antibody	StressMarq	SPC-506D
T22 anti-tau oligomer antibody	EMD Millipore	ABN454
Thioflavin T	Sigma Aldrich	T3516
HBSS	Gibco	14025-092
PBS	Gibco	10010-023
0.22 micron syringe filters	Millipore	SLGP033RS
DMEM	Gibco	11965-092
HRP Goat antirabbit IgG	Abcam	ab6721-1
Strains PA103 and ΔPcrV			These strains of P. aeruginosa were obtained from Dr. Dara Frank, University of Wisconsin Medical College, Milwaukee, WI
FITC Griffonia lectin	Sigma Aldrich	L9381
TRITC Helix pomatia lectin	Sigma Aldrich	L1261
Agar	Fisher	BP1423-500
0.22 micron nitrocellulose	BioRad	162-0112
Type 2 collagenase	Worthington	LS004176
Fetal bovine serum	Hyclone	SH30898.03IH
PenStrep	Gibco	15070063
Carbenicillin Disodium salt	Sigma	C1389
Microcetrifugation concentrators- 10,000 MW cut-off	Millipore	UFC801008
Potassium phosphate dibasic	Sigma	795496-500G
Magnesium phosphate heptahydrate	MP Biomedicals	MP021914221
Citric Acid	G Biosciences	50-103-5801
Sodium phosphate dibasic heptahydrate	Sigma	S9506-500G
Countess Automated Cell Counter	Invitrogen	C10277

References

Brancati, F. L., Chow, J. W., Wagener, M. M., Vacarello, S. J., Yu, V. L. Is pneumonia really the old man's friend? Two-year prognosis after community-acquired pneumonia. Lancet. 342 (8862), 30-33 (1993).
Hedlund, J. U., Ortqvist, A. B., Kalin, M. E., Granath, F. Factors of importance for the long-term prognosis after hospital treated pneumonia. Thorax. 48 (8), 785-789 (1993).
Meier, C. R., Jick, S. S., Derby, L. E., Vasilakis, C., Jick, H. Acute respiratory tract infections and risk of first-time acute myocardial infarction. Lancet. 351 (9114), 1467-1471 (1998).
Waterer, G. W., Kessler, L. A., Wunderink, R. G. Medium-term survival after hospitalization with community-acquired pneumonia. Am J Resp Crit Care Med. 169 (8), 910-914 (2003).
Yende, S., et al. Inflammatory markers at hospital discharge predict subsequent mortality after pneumonia and sepsis. Am J Resp Crit Care Med. 177 (11), 1242-1247 (2008).
Corrales-Medina, V. F., et al. Association between hospitalization for pneumonia and subsequent risk of cardiovascular disease. J Am Med Assoc. 313 (3), 264-274 (2015).
Frank, D. W. The exoenzyme S regulon of Pseudomonas aeruginosa. Mol Microbiol. 26 (4), 621-629 (1997).
Engel, J., Balachandran, P. Role of Pseudomonas aeruginosa type III effectors in disease. Curr Opin Microbiol. 12 (1), 61-66 (2009).
Ochoa, C. D., Alexeyev, M., Pastukh, V., Balczon, R., Stevens, T. Pseudomonas aeruginosa exotoxin Y is a promiscuous cyclase that increases endothelial tau phosphorylation and permeability. J. Biol. Chem. 287 (30), 25407-25418 (2012).
Balczon, R., et al. Pseudomonas aeruginosa exotoxin Y-mediated tau hyperphosphorylation impairs microtubule assembly in pulmonary microvascular endothelial cells. PLoS One. 8, e74343 (2013).
Morrow, K. A., et al. Pseudomonas aeruginosa exoenzymes U and Y induce a transmissible endothelial proteinopathy. Am J Physiol Lung Cell Molec Physiol. 310 (4), L337-L353 (2016).
Balczon, R., et al. Pseudomonas aeruginosa infection liberates transmissible, cytotoxic prion amyloids. FASEB Journal. 31 (7), 2785-2796 (2017).
Stevens, T. C., et al. The Pseudomonas aeruginosa exoenzyme Y impairs endothelial cell proliferation and vascular repair following lung injury. Am J Physiol Lung Cell Molec Physiol. 306 (10), L915-L924 (2014).
Prusiner, S. B. Creutzfeldt-Jakob disease and scrapie prions. Alzheimer Dis Assoc Disord. 3 (1-2), 52-78 (1989).
Hunter, N. Scrapie: Uncertainties, biology, and molecular approaches. Biochem. Biophys. Acta. 1772 (6), 619-629 (2007).
King, J., et al. Structural and functional characteristics of lung macro- and microvascular endothelial cell phenotypes. Microvasc Res. 67 (2), 139-151 (2004).
Marmont, L. S., et al. Oligomeric lipoprotein PelC guides Pel polysaccharide export across the outer membrane of Pseudomonas aeruginosa. Proc Natl Acad Sci USA. 114 (11), 2892-2897 (2017).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

137 A

This article has been published

Video Coming Soon

Keep me updated: