الأسفار التصوير المقطعي الجزيئية للتصوير في فيفو لتكثيفها جليوبلاستوما

Jorge A. Benitez; Ciro Zanca; Jianhui Ma; Webster K. Cavenee; Frank B. Furnari

doi:10.3791/57448

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

Summary

قد استخدمت الحقن داخل الجمجمة أورثوتوبيك الخلايا السرطانية في أبحاث السرطان لدراسة البيولوجيا ورم الدماغ والتقدم والتطور والاستجابة العلاجية. نقدم هنا fluorescence الجزيئية التصوير المقطعي لتكثيفها الورم، الذي يوفر التصوير إينترافيتال في الوقت الحقيقي والتحديد الكمي للورم الشامل في نماذج جليوبلاستوما الإكلينيكية.

Abstract

توموريجينيسيتي هو قدرة الخلايا السرطانية على تكوين ورم الجماهيري. نهج مستخدمة على نطاق واسع لتحديد ما إذا كانت الخلايا الورمية بالفئران العوز بالحقن تحت الجلد مع الخلايا السرطانية وقياس كتلة الورم بعد أن تصبح مرئية وملموسة. حقن أورثوتوبيك الخلايا السرطانية تهدف إلى إدخال إكسينوجرافت في المكروية يشبه الأنسجة الأصلية للورم وتجري دراسة أوثق. ويتطلب أبحاث سرطان الدماغ داخل الجمجمة حقن الخلايا السرطانية للسماح بتشكيل الورم والتحليل في المكروية فريدة من نوعها للدماغ. التصوير في فيفو تكثيفها داخل الجمجمة يرصد على الفور كتلة الورم أورثوتوبيكالي انجرافتيد الفئران. هنا نحن تقرير استخدام fluorescence الجزيئية التصوير المقطعي (FMT) لتكثيفها ورم الدماغ. أولاً ترانسدوسيد بالقرب من البروتينات الفلورية الأشعة تحت الحمراء الخلايا السرطانية وحقن ثم في دماغ الفئران المناعة. ثم يتم فحص الحيوانات الحصول على معلومات كمية عن كتلة الورم على مدى فترة ممتدة من الوقت. خلية قبل وسم يسمح للقياس الكمي استنساخه، فعالة من حيث التكلفة وموثوق بها من عبء الورم داخل كل الماوس. علينا التخلص من الحاجة إلى حقن ركازات التصوير، وبالتالي تخفيض الضغط على الحيوانات. ويمثل حد من هذا النهج بعدم القدرة على الكشف عن الجماهير صغيرة جداً؛ ومع ذلك، فقد قرار أفضل للجماهير أكبر من غيرها من التقنيات. يمكن تطبيقها لتقييم فعالية العلاج من تعاطي المخدرات أو التعديلات الوراثية لخطوط الخلايا الدبقي والعينات المستمدة من المريض.

Introduction

السرطان واحد من الأسباب الرئيسية للوفيات الناجمة عن المرض في البشر في العالم الصناعي. مع الوفيات مرتفعة للغاية، علاجات جديدة مطلوبة على وجه الاستعجال. جليوبلاستوما عديدة الأشكال (GBM) نوع الغاية فتاكة سرطان الدماغ، تتألف من السكان غير المتجانسة للورم، اللحمية، ومحصنة من خلايا المخ. وفقا للتسجيل ورم "الدماغ المركزي" للولايات المتحدة الأمريكية، الإصابة بأورام الدماغ الخبيثة وغير الخبيثة الأولية حوالي 22 حالة كل 100 ألف. من المتوقع أن يتم تشخيصها في الولايات المتحدة الأمريكية في عام 2017¹حوالي 000 11 قضية جديدة.

الدراسات الإكلينيكية التحقيق في احتمال المخدرات أو الإجراء، أو العلاج أن يكون فعالاً قبل إجراء التجارب على البشر. واحدة من الخطوات مختبر أقرب في الدراسات الإكلينيكية على تحديد أهداف جزيئية المحتملة للعلاج من تعاطي المخدرات باستخدام الخلايا السرطانية التي زرعها في أحد الكائنات المضيفة، تعريفها كنماذج إكسينوجرافت البشرية. وفي هذا السياق، ورم الدماغ داخل الجمجمة xenograft نماذج استخدام تكثيفها المستمدة من المريض (بدكسس) قد استخدمت على نطاق واسع لدراسة البيولوجيا ورم الدماغ والتقدم والتطور والاستجابة العلاجية، وفي الآونة الأخيرة لتطوير المؤشرات الحيوية، المخدرات الفرز، وشخصية الطب²^،^،من³⁴.

واحدة من أكثر بأسعار معقولة وغير الغازية في فيفو التصوير أساليب رصد تكثيفها داخل الجمجمة هو الإضاءة الحيوية التصوير (BLI)⁵^،⁶^،^،من⁷⁸. ومع ذلك، تتضمن بعض القيود BLI الإدارة الركيزة وتوافر واستقرار الإنزيم، وتبريد الخفيفة والتشتت أثناء التصوير اقتناء⁹. هنا نحن تقرير FMT الأشعة تحت الحمراء كبديل التصوير أسلوب رصد نماذج جليوبلاستوما الإكلينيكية. في هذا الأسلوب، والحصول على إشارة والتحديد الكمي بدكسس إينتراكرانيالي مزروع، معربا عن بروتين القريبة من الأشعة تحت الحمراء فلورسنت iRFP720¹⁰^،¹¹ (يطلق عليها من الآن فصاعدا ك FP720) أو turboFP635 (يطلق عليه من الآن فصاعدا ك FP635)، تتم مع معاهدة المواد الانشطارية نظام التصوير. استخدام تكنولوجيا إنتاج المواد الانشطارية، أورثوتوبيك الأورام يمكن رصدها في فيفو قبل أو أثناء أو بعد العلاج، بطريقة غير الغازية، وخالية من الركازة، والكمية للملاحظات الإكلينيكية.

Protocol

استخدام الحيوانات في البحوث التجريبية والعوامل المعدية، مثل لينتيفيروس ترانسدوسي الخلايا السرطانية، تتطلب موافقة مسبقة قبل البرنامج مؤسسات الرعاية الحيوانية ولجنة السلامة المؤسسية. ويتبع هذا البروتوكول المبادئ التوجيهية رعاية الحيوان من جامعة كاليفورنيا سان دييغو (جامعة كاليفورنيا سان دييغو).

1-تسمية الخلايا جليوبلاستوما مع FP635 أو بناء FP720

إنتاج وتنقية lentivirus وفقا للبروتوكول، المذكورة تيسكورنيا et al. ¹²
الثقافة نحو 2.0 × 10⁶خلايا من خط خلية الدبقي بشرية مع دميم بالإضافة إلى 10% مصل بقرى الجنين (FBS) في صحن 15 سم؛ أو مجالات الثقافة 2.0 × 10⁶ جليوبلاستوما البشرية المستمدة من المريض (GBM-PDX) مع دميم F12 متوسطة 1:1 مع B27 الملحق بالإضافة إلى البشرية عامل النمو الماشوب البشرة (لو؛ 20 نانوغرام/مل) وصندوق الأجيال القادمة (10 نانوغرام/مل) في قارورة T75.
الحفاظ على كافة الخلايا في 5% CO₂, 37 درجة مئوية والرطوبة النسبية 100%.
فصل الخلايا.
1. للخلايا الدبقي: إزالة المادة طافية من اللوحات وإضافة 3-5 مل التربسين 1 X إلى الخلايا الدبقي.
2. للخليج للحاسبات الآلية مجالات: جمع الخلايا من بيبيتينج الخلايا في أنبوب 15 مل.
  1. زيادة ونقصان لأسفل المجالات الخليج للحاسبات الآلية في 200 غ س لمدة 5 دقائق باستخدام أجهزة الطرد مركزي منضدية في درجة حرارة الغرفة.
  2. إزالة المادة طافية وإضافة 3-5 مل من محلول مفرزة الخلية.
3. احتضان كافة الخلايا في 37 درجة مئوية لمدة 10-15 دقيقة.
عناية فصل الخلايا من بيبيتينج صعودا وهبوطاً عدة مرات (ضمان أن يتم الانتهاء من المجالات وخلايا الدبقي نات) وزيادة ونقصان لأسفل في 200 غ س لمدة 5 دقائق.
إزالة المادة طافية وريسوسبيند الخلايا مع 5 مل متوسطة من بيبيتينج صعودا وهبوطاً عدة مرات. تحديد صلاحية خلية باستبعاد تريبان الأزرق.
لوحة 1.0 × 10⁶ خلايا الهدف في صحن 10 سم مع 5 مل متوسطة من بيبيتينج.
ترانسدوسي الخلايا مع lentivirus معربا عن البروتينات الفلورية في تعدد العدوى (وزارة الداخلية) 5 كما يصفها تيسكورنيا et al. ¹² واحتضان عند 37 درجة مئوية.
بعد 24 ساعة، إزالة الوسيطة من الخلايا ترانسدوسيد وإضافة 5 مل متوسطة طازجة واحتضانها ل 48 ساعة إضافية عند 37 درجة مئوية.
فصل الخلايا المصابة في تعليق خلية واحدة كما هو موضح في الخطوات 1، 1، 4-6. زيادة ونقصان لأسفل الخلايا في 200 غ س لمدة 5 دقائق وريسوسبيند في 500 ميليلتر من الفرز الحل (مخزنة الفوسفات المالحة (PBS) مع 1% FBS).
"الماصة؛" تعليق خلية في أنابيب نظام مراقبة الأصول الميدانية. شارك وصمة عار الخلايا مع 1 ميليلتر/مل من 4 ', 6-دياميدينو-2-فينيليندولي (DAPI) هيدروكلوريد استبعاد الخلايا الميتة. عناصر سلبية مطلوبة لإنشاء بوابات تدفق سيتوميتير (غير ترانسدوسيد الخلايا والخلايا غير ترانسدوسيد/DAPI الملون).
فرز الخلايا فلوري-الإيجابية/DAPI-السلبية في الفرز الحل، كما وصفها باسو et al. ¹³، وجمع الخلايا تم فرزها في أنبوب مخروطي 15 مل.
تدور أسفل الخلايا تم فرزها في 200 غ س لمدة 5 دقائق وإزالة المادة طافية، وريسوسبيند في 5 مل من الثقافة المتوسطة. بذور الخلايا تم فرزها في صحن 10 سم من بيبيتينج. احتضان في 37 درجة مئوية لمالا يقل عن 48-72 ح.
توسيع نطاق خلايا تم فرزها بفصل الخلايا اتباع الخطوات 1.4-1.6 والطلاء في أطباق متعددة لإجراء تجارب عليها في فيفو .
ملاحظة: لمزيد من التفاصيل حول الخلية فرز إعداد وتنقية، راجع باسو et al. ¹³

2-داخل الجمجمة حقن الخلايا جليوبلاستوما إيرفب معلم في "الفئران العوز"

ملاحظة: قبل البدء عملية جراحية، تأكد أن غرفة العمليات الجراحية وأدوات نظيفة لهذا الإجراء. استخدام athymic العوز عارية (Foxn1^نو) ذكرا أو أنثى الفئران، بين 4-5 أسابيع من العمر و 17-19 ز للحقن داخل الجمجمة. وينبغي أن يضم الحيوانات لمدة 3 أيام على الأقل بعد وصولهم وقبل الجراحة.

إعداد الخلية
1. الحصاد وفصل الخلايا الدبقي إيجابية فلورسنت في تعليق خلية واحدة (خطوات 1.4-1.6) وريسوسبيند 0.5 أو 1.0 × 10⁶ خلايا في 2-5 ميليلتر من برنامج تلفزيوني للحقنة الواحدة والحيوان. "الماصة؛" تعليق خلية في أنبوب 1.5 مل ميكروسينتريفوجي والمكان على الجليد.
إعداد التخدير والإدارة
1. إعداد 200 ميليلتر من المحلول الملحي الذي يتضمن الكيتامين (100 مغ/كغ) وإكسيلازيني (10 مغ/كغ) في ال 20 غرام من وزن الجسم الماوس. وزن الحيوانات وحساب الجرعة المناسبة من التخدير.
2. توفر داخل حقن التخدير وتطبيق مرهم العيون إلى العيون لمنع الجفاف. للحصول على مزيد من التفاصيل حول هذه الخطوة راجع كاثلين et al. ¹⁴ وضع الحيوان على لوح قبل حرارة مياه حرارية في 37 درجة مئوية.
3. تحقق من أن الحيوانات هي تخديره برصد استجابة قرصه تو (دواسة العاكسة)، عادة ما تكون ضمن 5-10 دقيقة.
الحقن داخل الجمجمة
1. تحميل 5 ميليلتر هاملتون حقنه (إبرة نصيحة كليلة) مع تعليق خلية وجبل في صاحب التحقيق.
2. ضع الماوس في إطار المناظير باستخدام الأشعة حيوانات صغيرة وإصلاح الرأس باستخدام أشرطة الإذن ومحول القاطعة بعد تفاصيل وصف جيتين et al. ¹⁵
3. تطهير الرأس بمحلول الإيثانول وتدين 70%. تأكد من أن يتم إكمال موقع الجراحية المعقمة. تنفيذ شق الأوسط مع مشرط صغير وفصل في الجلد والأنسجة الضامة.
4. مكان حقنه هاملتون على نقطة بريجما في ميكرومانيبولاتور باستخدام.
5. تحريك الصورة 1.0 مم حامل التحقيق و 2.0 مم الأفقي من نقطة بريجما. وضع علامة على هذا الموقف مع قلم رصاص.
6. في هذا الموقع، بدقة جعل ثقب في الجمجمة مع حفر باليد micromotor بتطبيق ضغط طفيف إلى الأسفل حتى الأوعية الدموية تصبح مرئية. إلا يخل لحمه ماطر والمخ العنكبوتي.
7. إدخال الإبرة في ثقب لدغ ودفع 3.0 ملم تحت سطح بيل.
8. قم بإعداد حجم (2-5 ميليلتر) ومعدل التدفق (1 ميليلتر/دقيقة) لحقن حاقن ستيريوتاكسيك إليه باستخدام أو تنفيذ يدوياً الحقن.
9. بعد الحقن، إزالة الإبرة تدريجيا بترتيب تصاعدي 1.0 مم كل 1 دقيقة وتنظيف مكان الحقن مع الإيثانول 70%.
10. إغلاق الجرح بدبابيس جراحية أو عن طريق خيوط الجراحة (غالباً ما يشار إلى غرز) الجلد وانظر كاثلين et al. ¹⁴ لمزيد من التفاصيل.
استرداد الحيوان
1. نقل الحيوانات إلى منصة حرارية المائية (37 درجة مئوية) ورصد درجة حرارة الجسم ومعدل التنفس، ومعدل ضربات القلب، حتى الشفاء التام. إدارة التسكين كل البروتوكولات القياسية.
  ملاحظة: لمزيد من المعلومات حول إجراء المناظير باستخدام الأشعة، الجراحة، وينسق، راجع¹⁴^،^،من⁵تقارير أخرى¹⁵.

3-معاهدة المواد الانشطارية التصوير

ملاحظة: وفقا لهدف التجريبية، جليوبلاستوما إيرفب معلم خلايا يمكن رصدها في فيفو قبل أو أثناء أو بعد العلاج. للتصوير والغرض، تخدير الحيوانات باستخدام دائرة التعريفي isoflurane، الحفاظ على في كاسيت تصوير أثناء المسح الضوئي، والصورة في محطة الإرساء لتصوير معاهدة المواد الانشطارية.

إزالة الحيوان من القفص والمكان في قاعة التعريفي إيسوفلوراني. إغلاق الدائرة وقم بتشغيل تدفق الأكسجين والمبخر إلى 3-5%.
رصد هذا الحيوان حتى أنه تم تخديره تماما، عادة خلال 1-2 دقيقة حتى فقد الوعي الحيوانات ينبغي أن لا تستجيب للمؤثرات الخارجية.
إزالة هذا الحيوان أنيسثيتيزيد من الدائرة ووضع الحيوان في الكاسيت التصوير عن طريق وضع محول الرأس أولاً، متبوعاً بوضع الحيوان إلى الأسفل. تأكد من أن الرأس يقع في وسط الكاسيت.
ضع اللوحة العلوية للكاسيت على أعلى وتشديد المقابض التكيف حتى 17 ملم.
مرة واحدة أن الحيوان أمنا في الكاسيت التصوير، والمضي قدما لتصوير عن طريق إدراج الكاسيت في محطة الإرساء الداخلي لتصوير معاهدة المواد الانشطارية، حيث يتم ضخها في إيسوفلوراني للحفاظ على الحيوان تخديره.
تشغيل برنامج تصوير ومحلل بالنقر المزدوج على أيقونة البرنامج.
في الإطار "التبويب التجريبي"، حدد "قاعدة البيانات" و "دراسة مجموعة".
الانتقال إلى الإطار "تفحص التبويب" وحدد الموضوع إلى صورة بواسطة النقر فوق "حدد الموضوع". أيضا، حدد القناة الليزر في لوحة "الليزر القناة". للخلايا المسماة FP635، حدد "الليزر قناة 635 نانومتر"، والخلايا المسماة FP720، حدد "قناة 680 نانومتر الليزر".
الحصول على صورة بواسطة النقر فوق الخيار "التقاط" في إطار "التبويب المسح الضوئي". ثم ضبط مجال المسح الضوئي بالنقر والسحب ميدان المسح الضوئي في الصورة التي تم التقاطها لعدد محدد من مواقع المصدر، عادة في غضون 20-25 مصادر الجانب عن.
التحقق من الخيار "إضافة إلى قائمة انتظار إعادة الإعمار" وضرب "مسح" في إطار "التبويب المسح الضوئي".
الانتظار حتى الانتهاء من المسح الضوئي ثم قم بإزالة شريط التصوير من محطة الإرساء.
إزالة الصفيحة العلوية للكاسيت وظهره الحيوانات في القفص.
كرر الخطوات من 3.1-3.12 لبقية الحيوانات.

4. تحليل الصورة

من تصوير ومحلل البرامج، حدد الإطار "التبويب تحليل".
تحميل dataset وهذا الموضوع لتحليل بالنقر على زر "+" في لوحة "اختيار Dataset" النافذة "التبويب تحليل".
بمجرد تم تحميل الصورة في نافذة "التبويب تحليل"، أداء المنطقة لتحليل الفائدة (ROI) بتحديد الرمز الاهليلجي، الموجود في الزاوية العلوية اليسرى من إطار "التبويب تحليل".
ضبط عتبة الصفر في لوحة "البيانات الإحصائية" عن طريق النقر على الحق في العمود "العتبة" في إطار "التبويب تحليل".
القيمة الإجمالية في لوحة "البيانات الإحصائية" يمثل الإشارة من الخلايا جليوبلاستوما معلم الفلورية مزروع في المخ الماوس.
كرر الخطوات من 4، 4، 2-4 لبقية الحيوانات. تحميل أو إزالة موضوع جديد عن طريق النقر "+" أو الزر "−"، على التوالي، في لوحة "اختيار Dataset" النافذة "التبويب تحليل".
ملاحظة: لمزيد من المعلومات حول تصوير معاهدة المواد الانشطارية، وتشغيل البرامج، راجع^20-

النتائج

الخلايا جليوبلاستوما U87EGFRvIII كانت مثقف (الخلايا U87 الإفراط التعبير عن مستقبلات لو البديل الثالث) وفقا للخطوة 1.2. وأنتج lentivirus وتنقيتها طبقاً للخطوة 1، 1. تقرر تركيز الفيروسية التي p24 التحليل إليزا. وقد ترانسدوسيد الخلايا مع lentivirus تحمل البروتينات الفلورية الأشعة تحت الحمراء و...

Discussion

تكثيفها الورم وقد استخدمت على نطاق واسع في أبحاث السرطان، وقد تم وضع عدد من تقنيات التصوير الراسخة: BLI؛ الرنين المغناطيسي التصوير (التصوير بالرنين المغناطيسي)؛ بوزيترون التصوير المقطعي (PET)، حسبت التصوير المقطعي (CT)؛ معاهدة المواد الانشطارية. كل من هذه النهوج ويأتي مع إيجابيات وسلبيات، بل ?...

Disclosures

الكتاب يعلن لا تضارب المصالح.

Acknowledgements

ونحن نشكر الدكتور فريدريك لانغ، MD مركز أندرسون للسرطان للخليج للحاسبات الآلية-PDX نيوروسفيريس. وأيده هذا العمل "هزيمة GBM البحوث التعاونية"، تابعة "الدماغ ورم في المجتمع الوطني" (فرانك فورناري)، R01-NS080939 (فرانك فورناري)، مؤسسة ماكدونيل. س. جيمس (فرانك فورناري)؛ وأيده خورخي بينيتيز تحكيم من أمريكا الدماغ ورم رابطة (حلقات)؛ وأيد زانكا سيرو جزئيا زمالة بحثية ما بعد الدكتوراه "مؤسسة مكافحة السرطان" الأمريكية-الإيطالية. فرانك فورناري يتلقى المرتبات وتوفير دعم إضافي من معهد لودفيج "أبحاث السرطان".

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
DMEM/High Glucose	HyClone/GE	SH30022.1
DMEM/F12 1:1	Gibco	11320-082
FBS	HyClone/GE	SH30071.03
Accutase	Innovative cell technologies	AT-104
Trypsin	HyClone/GE	SH30236.01
B27 supplement	Gibco	17504044
human recombinant EGF	Stemcell Technologies	2633
human recombinant FGF	Stemcell Technologies	2634
DPBS	Corning	21-031-00
FACS tubes	Falcon	352235
DAPI	ThermoFisher Scientific	62248
Blasticidin	ThermoFisher Scientific	A1113903
p24 ELISA	Clontech	632200
Xylazine	Akorn	NDC 59399-110-20
Ketamine	Zoetis	NADA 043-403	Controlled substance
Ointment	Dechron	NDC 17033-211-38
Absorbable suture	CpMedical	VQ392
5 ul syringe	Hamilton	26200-U	Catalog number as sold by Sigma-Aldrich
Cell Sorter	Sony	SH8007
Mouse stereotaxic frame	Stoelting	51730
Motorized stereotaxic injector	Stoelting	53311
Micromotor hand-held drill	Foredom	K1070
Mouse warming pad	Ken Scientific Corporation	TP-22G
Fluorescence Tomography System	PerkinElmer	FMT 2500 XL
TrueQuant Imaging Software	Perkin Elmer	7005319
Ultra-centrifuge Optima L-80 XP	Beckman Coulter	392049
Tissue Culture 100mm Dishes	Olympus Plastics	25-202
Tissue Culture 150mm Dishes	Olympus Plastics	25-203
Tissue Culture Flasks T75	Corning	430720U
50 mL conical tubes	Corning	430290
15 mL conical tubes	Olympus Plastics	28-101
Centrifuge Avanti J-20	Beckman Coulter	J320XP-IM-5
Tube, Polypropylene, Thinwall, 5.0 mL	Beckman Coulter	326819
Tube, Thinwall, Polypropylene, 38.5 mL, 25 x 89 mm	Beckman Coulter	326823
Athymic nude mice	Charles River Laboratories	Strain Code 490 (Homozygous)	Prior approval by the Institutional Animal Care Program and by the Institutional Biosafety Committee required.

References

Ostrom, Q. T., et al. CBTRUS Statistical Report: Primary Brain and Other Central Nervous System Tumors Diagnosed in the United States in 2009-2013. Neuro-Oncology. 18 (suppl_5), v1-v75 (2016).
Pauli, C., et al. Personalized In Vitro and In Vivo Cancer Models to Guide Precision Medicine. Cancer Discovery. 7 (5), 462-477 (2017).
Stewart, E. L., et al. Clinical Utility of Patient-Derived Xenografts to Determine Biomarkers of Prognosis and Map Resistance Pathways in EGFR-Mutant Lung Adenocarcinoma. Journal of Clinical Oncology. 33 (22), 2472-2480 (2015).
Gao, H., et al. High-throughput screening using patient-derived tumor xenografts to predict clinical trial drug response. Nat Med. 21 (11), 1318-1325 (2015).
Ozawa, T., James, C. D. Establishing Intracranial Brain Tumor Xenografts With Subsequent Analysis of Tumor Growth and Response to Therapy using Bioluminescence Imaging. J. Vis. Exp. (41), e1986 (2010).
Kondo, A., et al. An experimental brainstem tumor model using in vivo bioluminescence imaging in rat. Child's Nervous System. 25 (5), 527-533 (2009).
Nyati, S., Young, G., Ross, B. D., Rehemtulla, A., Kozlov, S. V. . ATM Kinase: Methods and Protocols. , 97-111 (2017).
Kondo, A., et al. Longitudinal assessment of regional directed delivery in a rodent malignant glioma model. J Neurosurg Pediatr. 4 (6), 592-598 (2009).
Badr, C. E., Badr, C. E. . Bioluminescent Imaging: Methods and Protocols. , 1-18 (2014).
Shcherbakova, D. M., Verkhusha, V. V. Near-infrared fluorescent proteins for multicolor in vivo imaging. Nat Meth. 10 (8), 751-754 (2013).
Filonov, G. S., et al. Bright and stable near-infrared fluorescent protein for in vivo imaging. Nat Biotech. 29 (8), 757-761 (2011).
Tiscornia, G., Singer, O., Verma, I. M. Production and purification of lentiviral vectors. Nat. Protocols. 1 (1), 241-245 (2006).
Basu, S., Campbell, H. M., Dittel, B. N., Ray, A. Purification of Specific Cell Population by Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS). J. Vis. Exp. (41), e1546 (2010).
Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. Principles of rodent surgery for the new surgeon. J Vis Exp. (47), (2011).
Cetin, A., Komai, S., Eliava, M., Seeburg, P. H., Osten, P. Stereotaxic gene delivery in the rodent brain. Nat. Protocols. 1 (6), 3166-3173 (2007).
Benitez, J. A., et al. PTEN regulates glioblastoma oncogenesis through chromatin-associated complexes of DAXX and histone H3.3. Nature Communications. 8, 15223 (2017).
Kirschner, S., et al. Imaging of Orthotopic Glioblastoma Xenografts in Mice Using a Clinical CT Scanner: Comparison with Micro-CT and Histology. PLOS ONE. 11 (11), e0165994 (2016).
Mannheim, J. G., et al. Standardization of Small Animal Imaging-Current Status and Future Prospects. Molecular Imaging and Biology. , (2017).
Engblom, C., et al. Osteoblasts remotely supply lung tumors with cancer-promoting SiglecFhigh neutrophils. Science. 358 (6367), (2017).
Lauber, D. T., et al. State of the art in vivo imaging techniques for laboratory animals. Laboratory Animals. 51 (5), 465-478 (2017).
Zanca, C., et al. Glioblastoma cellular cross-talk converges on NF-κB to attenuate EGFR inhibitor sensitivity. Genes & Development. 31 (12), 1212-1227 (2017).
Villa, G. R., et al. An LXR-Cholesterol Axis Creates a Metabolic Co-Dependency for Brain Cancers. Cancer Cell. 30 (5), 683-693 (2016).
Liu, F., et al. EGFR Mutation Promotes Glioblastoma through Epigenome and Transcription Factor Network Remodeling. Molecular Cell. 60 (2), 307-318 (2015).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

134 Fluorescence FMT

This article has been published

Video Coming Soon

Keep me updated: