A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Method Article
Galleria mellonella يخدم كنموذج اللافقاريات لداء المبيضات نشرها. هنا، نحن بالتفصيل العدوى البروتوكول وتقديم البيانات الداعمة لفعالية هذا النموذج.
أنواع المبيضات هي commensals الفطرية المشتركة للبشر استعمار الجلد والأسطح المخاطية، والجهاز الهضمي. تحت ظروف معينة، يمكن أن كسا المبيضات منافذها الطبيعية أدى المنهكة التهابات الأغشية المخاطية الانتانات الجهازية جيدا كما تهدد الحياة، ومحور رئيسي للتحقيق بسبب معدلات وفيات عالية المرتبطة بها. وتوجد نماذج حيوانية لنشر العدوى لدراسة تطور المرض وتشريح خصائص المبيضات الإمراضية. هذه، يوفر النموذج العدوى واكسوورم Galleria mellonella أداة تجريبية فعالة من حيث التكلفة للتحقيق الفائق من ضراوة الجهازية. كثيرة أخرى البكتيرية وحقيقية النواة العوامل المعدية تم فعالاً درسوا في ميلونيلا G. فهم الإمراضية، مما يجعل من نظام نموذج مقبول على نطاق واسع. حتى الآن، يمكن أن يغير النتائج المظهرية الاختلاف في الأسلوب المتبع لتصيب G. mellonella وتعقيد تفسير النتائج. هنا، فإننا مخطط مزايا وعيوب نموذج واكسوورم الدراسة النظامية المبيضات المرضية واتباع نهج لتحسين إمكانية تكرار نتائج بالتفصيل. تمييز نطاق حركية الوفيات في ميلونيلا G. نتائجنا وتصف المتغيرات التي يمكن أن تعدل هذه الحركية. في نهاية المطاف، يقف هذا الأسلوب كنهج الأخلاقية وسريعة وفعالة من حيث التكلفة لدراسة ضراوة في نموذج لداء المبيضات نشرها.
أنواع المبيضات هي كومينسالس البشرية المشتركة التي قادرة على الظهور كمسببات الأمراض الانتهازية في خيم والمرضى ديسبيوتيك. على الرغم من أن العديد من أنواع المبيضات يمكن أن يسبب المرض، المبيضة السبب الأكثر شيوعاً لداء المبيضات نشرها1،2. الأمراض الجهازية النتائج من المبيضة الوصول إلى مجرى الدم عن طريق أما الاختراق المباشر من الحواجز المضيفة سابقا تقييداً أو مقدمة في مواقع العمليات الجراحية وانتهاكات أخرى ل الجسم3. أنواع المبيضات الاستفادة من مجموعة من العمليات المسببة للأمراض أن تسبب الأمراض الجهازية داخل البلد المضيف بما في ذلك فيلامينتيشن وتشكيل بيوفيلم والتهرب من الخلايا المناعية والهروب والحديد الكسح4. في المختبر النهج الموجودة للتحقيق في الآليات المسببة للأمراض الفردية، ولكن النماذج الحيوانية تواصل تقديم أفضل خيار للتحقيق بأكملها المرض نتيجة5،6. بحوث سابقة مفصلة حالات كثيرة واعدة في المختبر التحقيقات من ضراوة الفشل في إعادة إنتاج في فيفو7،8. وهكذا، نماذج حيوانية لا يزال يتعين تقييم فوعة المجراة في. معظم الأمراض نماذج تعتمد على الفئران لتكون بمثابة بديل للإصابات البشرية على الرغم من عجز المبيضة بطبيعة الحال استعمار أنظمة مورين ك commensal9. نماذج اللافقاريات لداء المبيضات نشرها تشمل ديدان أسطوانية ايليجانس كاينورهابديتيس، الثمرة ذبابة melanogaster المورفولوجية، وواكسورم Galleria mellonella، على الرغم من المخاوف حول الخلافات الأساسية في الفسيولوجيا الأساسية، أعاقت درجات حرارة الجسم المضيف، وطرق التعرض على قبول واسع10،11.
وفي الآونة الأخيرة، اتخذ نموذج العدوى واكسورم ميلونيلا G. لنموذج القدرة الإمراضية لمجموعة واسعة من مسببات الأمراض البكتيرية والفطرية12،،من1314. مزايا هذا النموذج تشمل تكلفة منخفضة نسبيا، وزيادة الإنتاجية، وسهولة الاستخدام، وتقليل الشواغل الأخلاقية فيما يتعلق بالحيوانات اللبنة مقارنة بنماذج مورين. للباحثين، وهذا يترجم إلى زيادة القدرة على اختبار متعددة المتغيرات وفواصل الثقة أقوى والتجريب أكثر سرعة وتجاوز بروتوكولات الحيوان. زاي-ميلونيلا كانت بمثابة منصة لتقييم سرعة الفوعة المبيضة بعد اضطراب الجينات المطلوبة لتنظيم بيوفيلم تشكيل، وفيلامينتيشن، والجينات عبر يعزل السريرية11،15 ،16. أدرجت الدراسات الأخيرة تحقيق الفعالية المضادة للفطور استخدام mellonella زاي- تقييم الدوائية لنشاط المخدرات والمقاومة تحت في فيفو الإعدادات، وهي تتحدى خلاف ذلك ومضيعة للوقت 17،18. حتى الآن، قد تعقدت دراسات ضراوة المبيضة في ميلونيلا زاي- يقال أن ارتفاع مستويات التباين داخل التجارب وبروتوكولات غير متناسقة بين المجموعات البحثية التي تنتج تباين فوعة تعمل بين الفئران وواكسورمس11،،من1319،،من2021. هنا، فإننا مخطط بروتوكول ميلونيلا G. لتوحيد المبيضة العدوى، زيادة إمكانية تكرار نتائج التجارب الفوعة، وإثبات الاتساق مع دراسات تم وصفه مسبقاً من ضراوة في الفئران نماذج.
أظهرت الدراسات السابقة أن ينظم المبيضة التزاوج مثل نوع (MTL) موقعا على الكروموسوم 5 هوية الخلية والتزاوج اختصاص مماثلة إلى Saccharomyces cerevisiae وغيرها الفطريات أسكوميسيتي22. أن غالبية عزل المبيضة متخالف في محور MTL ، ترميز واحد من كل من MTL و MTLα الآليلات (MTL/α)، و عقيمة وبالتالي15، 23 , 24-فقدان واحد من الآليلات MTL من خلال فقدان هيتيروزيجوسيتي (لوه) أو طفرة يؤدي إلى متماثل MTL أو سلالات α MTLالتي يمكن أن تخضع لتبديل المظهرية من الدولة 'أبيض' عقيمة التزاوج المختصة في الدولة 'معتمة'25. وقد أبرزت أعمال سابقة أن فقدان هيتيروزيجوسيتي MTL يقلل أيضا من ضراوة في نماذج موريني العدوى الجهازية عبر سلالة مختلفة الخلفيات26. هنا، نحن التفصيل نموذج ميلونيلا G. داء المبيضات نشرها باستخدام مجموعة تجريبية مماثلة وراثيا لتصور مساهمة هيتيروزيجوسيتي MTL بضراوة في ميلونيلا غ. نظهر أن التكوين MTL تتأثر القدرة الإمراضية المبيضة ، حيث كانت MTLα سلالات أقل ضراوة فيما يتعلق MTL/α و MTL الخلايا، مماثلة للنتائج التي توصل إليها ضمن نموذج العدوى موريني26.
تعتمد على استخدام تستضيف اللافقاريات جميع الأساليب المذكورة ولا تتطلب موافقة "رعاية الحيوان المؤسسية" واستخدام اللجنة (إياكوك).
1-"اليرقات واكسورم" galleria mellonella
2-الثقافة الإعداد للإصابة Galleria mellonella
ملاحظة: يجب أن تلبس الزي مختبر السليم في جميع أنحاء هذا الجزء من البروتوكول بما في ذلك القفازات ومعطف مختبر، وسلامة النظارات.
3-الإصابة بيرقات Galleria mellonella مع الثقافات المبيضات
ملاحظة: يجب أن تلبس الزي مختبر السليم في جميع أنحاء هذا الجزء من البروتوكول بما في ذلك القفازات ومعطف مختبر، وسلامة النظارات.
هنا، علينا أن نظهر أسلوب استنساخه لاستخدام ميلونيلا G. واكسورمس للتحقيق في نموذج نشر داء المبيضات العدوى استخدام المبيضة. التخزين المناسبة، والصيانة، واختيار يرقات للعدوى عنصر حاسم في تأمين إمكانية تكرار نتائج في وفيات G. ميلونيلا (الشكل 1
نموذج واكسورم ميلونيلا G. تقف كأداة فعالة لتحليل سريع واستنساخه من ضراوة المبيضة . هذا البروتوكول مفصلاً يعتمد على التسليم متسقة من جرعة المعدية المحددة إلى نفس الموقع عبر دفعة يرقات. الجرعة المعدية تأثيراً عميقا على وفيات ميلونيلا G. بينما استخدام اليرقات بين وصولهم الأولى ...
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
الكتاب تود أن تقر مساعدة واشنطن باميلا وأندرسون ليا في الحصول على Galleria mellonella لاستخدامها في هذه الدراسة.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Galleria mellonella | Snackworms.com | Buy twice as many worms as expected to use | |
10 uL, Model 1701 N SYR Cemented needle, 26G, type 2 syringe | Hamilton | 80000 | |
Petri dish, 100X15 mm, 500 pack | Fisher | FB0875712 | |
Microcentrifuge tube, 1.7 mL, 500 pack | VWR | 87003-294 | |
Phosphate Buffered Saline (Biotechnology grade), 500 mL | VWR | 97062-818 | |
Ethanol absolute, ≥99.5% pure, 500 mL | Millipore Sigma | EM-EX0276-1S | |
autoclaved ddH2O |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved