تثبيط النمو رشاشيه الخنزير و "إنتاج الأفلاتوكسين" في "الإعراب عن الذرة المعدلة وراثيا" المانع α-الأميليز من purpureus لابلاب ل.

Summary

نقدم هنا بروتوكولا لتحليل نمو رشاشيه الخنزير وإنتاج الأفلاتوكسين في حبات الذرة معربا عن البروتينات المضادة للفطور.  استخدام سلالة الإعراب عن التجارة والنقل (أ) الخنزير نحن رصد العدوى وانتشار الفطريات في حبات ناضجة في الوقت الحقيقي. المقايسة سريعة وموثوق بها، واستنساخه.

Abstract

تلوث الأفلاتوكسين في المحاصيل الغذائية والعلفية يمثل تحديا كبيرا في جميع أنحاء العالم. الأفلاتوكسين، التي تنتجها الفطريات الخنزير رشاشيه (الخنزير (أ)) من المواد المسرطنة القوية التي تقلل إلى حد كبير قيمة محصول الذرة والمحاصيل الغنية النفط الأخرى مثل الفول السوداني إلى جانب مما يشكل تهديدا خطيرا لصحة الإنسان والحيوان. نهج مختلفة، بما في ذلك التربية التقليدية، والتعبير المعدلة وراثيا المقاومة المرتبطة البروتينات، والجيش الملكي النيبالي التدخل ([رني])-على أساس إسكات الجينات التي يسببها المضيف الحرج الخنزير (أ) يجري تقييم أهداف الجينات، زيادة المقاومة الأفلاتوكسين في المحاصيل عرضه. وقد أظهرت الدراسات السابقة دوراً هاما من α-الأميليز في إنتاج المرضية والافلاتوكسين الخنزير (أ) ، مما يشير إلى هذا الجين/الإنزيم هدف محتمل للحد من نمو الخنزير (أ) وإنتاج الأفلاتوكسين. وفي هذا الصدد، وأجريت الدراسة الحالية تقييم تعبير مغايرة (تحت سيطرة المروج 35S كامب التأسيسي) بروتين مثبط مثل α-الأميليز purpureus لابلاب L. (أيلب) في الذرة ضد الخنزير (أ). أيلب هو بروتين 36-كاتشين، الذي هو مثبط تنافسي لأنزيم الأميليز α الخنزير (أ) ، وينتمي إلى أسرة بروتين مثبط يكتين – أرسلان – α-الأميليز المشتركة فول. وقد أثبتت الدراسات في المختبر قبل العمل الحالي دور أيلب في تثبيط النشاط α-الأميليز الخنزير (أ) ونمو الفطريات. وتم رصد نمو الفطريات وإنتاج الأفلاتوكسين في حبات ناضجة في الوقت الحقيقي باستخدام سلالة الإعراب عن بروتينات فلورية خضراء الخنزير (أ) . بسيط جداً لإعداد نواة هذا الفحص المقايسة (المملكة العربية السعودية) ويوفر بيانات موثوقة واستنساخه في الإصابة ومدى انتشار التي يمكن قياسها كمياً لتقييم الأصول الوراثية وخطوط محوره وراثيا. الأسفار من إجهاد بروتينات فلورية خضراء النمو ارتباطاً وثيقا للفطريات، واستطراداً، أنها مرتبطة جيدا لقيم الأفلاتوكسين.  وكان هدف العمل الحالي لتطبيق هذه المعرفة السابقة في محصول تجارياً هاما مثل الذرة لزيادة مقاومة الأفلاتوكسين. نتائجنا تشير إلى انخفاض 35%-72% في نمو الخنزير (أ) في حبات الذرة المعدلة وراثيا معربا عن أيلب التي، بدورها، ترجمت إلى 62%-88% انخفاضا في مستويات الأفلاتوكسين.

Introduction

تلوث ميكوتوكسين من أجناس الفطريات، رشاشيه، تحززو Penicilliumو م هو مشكلة رئيسية للغذاء وتغذية المحاصيل المزروعة في جميع أنحاء العالم^1،،من²³. من بين هذه الفطريات فيتوباثوجينيك، قد رشاشيه أعلى الأثر السلبي على قيمة المحاصيل وصحة الإنسان والحيوان. رشاشيه الخنزير (الخنزير (أ)) هو ممرض مصنع انتهازية التي تصيب المحاصيل الزيتية غنية مثل الذرة والزيت والفول السوداني وينتج المواد المسرطنة القوية، الأفلاتوكسين، فضلا عن العديد من الأيض الثانوية السامة (SMs). الذرة غذاء هاما وتغذية المحاصيل التي تزرع في جميع أنحاء العالم وهو عرضه للتلوث الخنزير (أ). تفقد الآثار الاقتصادية للتلوث الأفلاتوكسين في وانخفاض قيمة في الذرة يمكن أن يكون قدر مبلغ 686.6 مليون في السنة في الولايات المتحدة² مع التغيرات المتوقعة في المناخ العالمي، وتأثير الأفلاتوكسين يمكن أن يسفر عن خسائر اقتصادية أكبر في الذرة مع تقديرات مرتفعة في المستقبل القريب²دولار 1.68 بیلیون عام. ونظرا للآثار الاقتصادية والصحية الضارة من الأفلاتوكسين في البشر والماشية، مراقبة الأفلاتوكسين قبل الحصاد في الذرة قد تكون الطريقة الأكثر فعالية لمنع تلوث الأفلاتوكسين في الأغذية والأعلاف المنتجات.

نهج المراقبة قبل الحصاد الكبرى للمقاومة الأفلاتوكسين في الذرة التي تم استخدامها على نطاق واسع في العقود القليلة الماضية أساسا من خلال تربية، الأمر الذي يتطلب قدرا كبيرا من الوقت⁴. في الآونة الأخيرة، لذالك قد حققت بعض النجاح في الحد من الأفلاتوكسين في نطاق واسع مجال التطبيقات^5،6. وإلى جانب لذالك، تطبيق الأدوات الجزيئية المتطورة مثل '"المضيفة التي يسببها الجينات إسكات"' (هيجس) من خلال [رني] والتعبير المحورة وراثيا من البروتينات المرتبطة بالمقاومة قد حققت بعض النجاح في الحد من نمو الخنزير (أ) والافلاتوكسين الإنتاج في الدراسات المختبرية والميدانية الصغيرة الحجم. ويجري حاليا الأمثل هذه النهج بالإضافة إلى تحديد جديد الخنزير ألف مورثة أهدافا محتملة للتلاعب مستقبلا.

بالإضافة إلى الجينات التي تشارك مباشرة في إنتاج ميكوتوكسين كأهداف محتملة من استراتيجيات مكافحة المحورة وراثيا، أظهرت amylases الفطرية تلعب دوراً حاسما في الحفاظ على النجاح في إنتاج المرضية وميكوتوكسين خلال المراحل المبكرة الإصابة بالنبات المضيف. عدد قليل من الأمثلة على بيثيوم بليروتيكوم (عامل السببية تعفن رهيزومي الزنجبيل)، سولاني الفوزاريوم (وكيل المسببة الذبول قرنبيط)، حيث لوحظ الارتباط الإيجابي بين الإمراضية و α-الأميليز التعبير والنشاط ^7،8. تثبيط النشاط α-الأميليز أما عن طريق خروج المغلوب الجينات أو النهج ضربة قاضية يؤثر تأثيراً سلبيا على إنتاج النمو والسمية الفطرية. وكان المسخ خروج المغلوب α-الأميليز من الخنزير (أ) غير قادر على إنتاج الأفلاتوكسين عندما تزرع في النشا الركيزة أو ديجيرميد حبات الذرة⁹. وبالمثل، في فيرتيسيليويديس مغزلاويه فشل عبئا خروج المغلوب α-الأميليز لإنتاج الفيومونيزين ب₁ (ميكوتوكسين) خلال العدوى من حبات الذرة¹⁰. في دراسة حديثة، أظهر جيلبير et al. (2018) أن تدق على أساس [رني] أسفل الخنزير ألف- α-الأميليز التعبير من خلال هيجس انخفاضا ملحوظا الخنزير (أ) النمو والافلاتوكسين الإنتاج خلال العدوى نواة الذرة¹¹ .

مثبطات محددة من النشاط α-الأميليز قد أسفرت أيضا عن نتائج مماثلة كما تم الحصول عليها من أسفل-تنظيم التعبير α-الأميليز. وجاء التقرير الأول بشأن دور المانع α-الأميليز في مقاومة الفطريات من عزل وتوصيف مثبط التربسين-α-الأميليز كاتشين 14 من خطوط الذرة مقاومة الخنزير (أ)¹². كذلك فحص عدة مئات من الأنواع النباتية فاخوري ووولوشوك أدت إلى تحديد بروتين مثبط مثل α-الأميليز كاتشين 36 (أيلب) من بذور الفول صفير، لابلاب purpureus ل¹³. وأفادت تسلسل الببتيد ليكتينس أيلب تشبه لعائلة المانع يكتين – أرسلان – α-الأميليز المشتركة فول^14،15. أيلب المنقي لا يحمل أي نشاط المثبطة نحو التربسين الثدييات وكذلك توصيف في المختبر أظهرت تثبيط كبيرة الخنزير (أ) النمو والإنبات كونديل¹³. التقارير المقدمة هنا وضوح يظهر α-الأميليز يمكن أن تخدم كهدف في نهج الرقابة للحد من مسببات الأمراض أو الآفات التي تعتمد على تعبئة النشا (من خلال نشاط α-الأميليز) واقتناء السكريات القابلة للذوبان كمصدر للطاقة خلال هذه الممرضة التفاعل مع النباتات المضيفة.

الأميليز ألفا ومن المعروف أن تكون حاسمة في الخنزير (أ) القدرة الإمراضية^9،10،11، ونظرا لأهمية أيلب بوصفها ' مكافحة قوية-الخنزير ألف عامل (α-الأميليز تثبيط/لﻹنصاف)¹³، نحن تولد النباتات الذرة المعدلة وراثيا التي تعرب عن لابلاب أيلب الجينات تحت المروج كامب 35S التأسيسي. وكان الهدف التحقيق إذا كان تعبير مغايرة لهذا المانع α-الأميليز في الذرة فعالة ضد الخنزير (أ) إنتاج المرضية والافلاتوكسين أثناء الإصابة بنواة الذرة. نتائجنا تثبت أن حبات الذرة المعدلة وراثيا معربا عن أيلب إلى حد كبير انخفاض إنتاج الخنزير (أ) النمو والافلاتوكسين أثناء الإصابة بالنواة.

Protocol

1-بلازميد بنيات وتحويل الذرة

1. [بكر] تضخيم لابلاب أيلب إدراج استخدام كبسولة تفجير 5 '-تاتكتاجاكتاجتجاتاككاتجكتكك-3' و 5 '-أتاكتجكاجاتجكاتجكاجاجتاجتاكتج-3'. تتضمن الشروط PCR خطوة أولية تمسخ عند 98 درجة مئوية لمدة 30 s (الخطوة 1)، تليها تمسخ عند 98 درجة مئوية لمدة 10 s (الخطوة 2)، الصلب في 55 درجة مئوية لمدة 30 ق (الخطوة 3)، استطالة عند 72 درجة مئوية 20 s (الخطوة 4)، دورات 31 من الخطوة 2 إلى الخطوة 4 ، وخطوة استطالة نهائي عند 72 درجة مئوية لأدنى 5 استنساخ متجهة المنتج بكر في بكامبيا تعديل 1,300 استخدام Xbaأنا و الباسيفيكيأنا مواقع التقييد. تسلسل ناقل الوجهة المحطة النهائية لتأكيد الاتجاه وتسلسل الجين أيلب المستنسخة في الناقل.
2. تحويل الضغط المتبعة EHA101 مع بناء ناقلات النهائية (الشكل 1) كما سبق وصف ¹⁶.
3. استخدام تحويل المتبعة التي تحتوي على ناقل الوجهة المحطة النهائية لتحويل أجنة الذرة غير ناضجة (ميس زيا L. مرحبا-ثانيا) (يقوم على مصنع تحويل مرفق من جامعة ولاية آيوا) ¹⁶.
4. تنمو النباتات₀ تي في الدفيئة (26-29 درجة مئوية؛ كبيرة ح 16/8 وتستكمل مع "الضغط العالي" نا-مصابيح) وسيلفبوليناتي مرارا وتكرارا للحصول على جيل₆ ر لتحقيق هوموزيجوسيتي للسمات المعدلة وراثيا.

2-بوغ إنبات الإنزيم

1. حصاد نبات العينات وتخزينها في-80 درجة مئوية. طحن عينات أوراق بقذائف الهاون والمدقة باستخدام النتروجين السائل. تزن بها ز 0.5 في أنابيب ميكروسينتريفوجي 2 مل وإضافة 17 ميليلتر من مثبطات البروتياز، ووضع أنابيب على الجليد.
2. الطرد المركزي أنابيب لمدة 10 دقائق في س 16,000 ز. نقل ميليلتر 225 لاستخراج مصنع لأنابيب ميكروسينتريفوجي 0.5 مل ووضع على الجليد.
3. في أنبوب الطرد مركزي 15 مل، إعداد تعليق سبور 5 مل الخنزير رشاشيه 70 – التجارة والنقل في مرق سكر العنب البطاطا 1% (w/v). دوامة وضبط تركيز بوغ إلى⁵ 10 جراثيم/مل مع هايموسيتوميتير.
   تنبيه: الخنزير (أ) ينتج الأفلاتوكسين، ينبغي أن تجري جميع الأعمال مع هذا الفطر في سلامة بيولوجية مجلس الوزراء.
4. احتضان في PDB عند 28 درجة مئوية حتى الثقافة يحقق 50% بدء الإنبات بوغ كما هو مبين بانتفاخ من الجراثيم.
5. استخراج الكوة 25 ميليلتر بوغ حل إلى مصنع ميليلتر 225 ودوامه. احتضان عينات لمدة 20 ساعة في 28 درجة مئوية مع الهز متقطعة.
6. أنابيب ميليلتر 25 الكوة بوغ الحل شريحة المجهر وقياس طول الجرثومية جراثيم استخدام برنامج الكاميرا الرقمية. استخدام الحد ني قياسات 20 تكرار لكل خط.
   ملاحظة: في هذه المرحلة، وضع جميع الثقافات في 4 درجات مئوية لوقف نمو مستعمرة حتى جاهزة الاعتماد.

3-نواة الفحص المقايسة (المملكة العربية السعودية)

1. بناء قبعات السعودية بالالتصاق 4 قبعات المفاجئة (22 مم) في طبق بتري 60 × 15 ملم. تسمح الغراء الجافة عن 48 ساعة قبل استخدام أحرف استهلالية. ويشكل كل كاب السعودية النائب واحد (الشكل 2).
2. في سلامة بيولوجية عقيمة مجلس الوزراء، رش صينية مربعة الحشري (24 سم x 24 سم) مع 70% إيثانول: ح₂س (v/v) والسماح للهواء الجاف. إضافة اللوني العقيمة من الورق إلى علبة الورق. رش 9 السعودية قبعات مع الإيثانول 70%، السماح للهواء الجاف، ووضع في علبة الحشري.
3. لكل خط الذرة المعدلة وراثيا يجري اختبارها، حدد 20 حبات غير التالفة ووضع في أنبوب 50 مل أجهزة الطرد مركزي. إضافة الإيثانول 70% والسماح للجلوس لمدة 4 دقائق. بلطف يهز أنابيب أثناء التعقيم. من أجل إيقاف حبات الإيثانول وشطف ثلاث مرات في العقيمة منزوع H₂o.
4. إعداد تعليق بوغ الخنزير رشاشيه 70 – التجارة والنقل¹⁷ من ثقافة قديمة يوم 6 نمت في المتوسط V8 (5% عصير V8، أجار 2%، 5.2 درجة الحموضة).
   1. إضافة 20 مل العقيمة 0.02% تريتون العاشر-100/منزوع ح₂س (v/v) وإلغاء إيقاف جراثيم مع حلقة عقيمة. بيبيت إيقاف العدوى ومكان في كوب معقم 300 مل.
   2. إعداد 5 إضعاف إضعاف مع 0.02% X-100 تريتون، ثم إجراء إحصاء سبور مع هايموسيتوميتير. تمييع مرة أخرى إذا لزم الأمر للحصول على 100 مل بتركيز 4 × 10⁶ بوغ/مل.
5. ضع حبات في كوب معقم 300 مل مع شريط إثارة. أضف العدوى للكأس.
   تنبيه: تؤدي إضافة حبات للعدوى الحل إلى البداية. ضع الكأس على طبق من إثارة لمدة 3 دقائق. بعد 3 دقائق، من أجل إيقاف العدوى إلى الكأس فارغ.
6. استخدام ملقط، ضع حبات في الطبق الحشري (1 نواة في كاب). إضافة منزوع الماء إلى أسفل كل علبة الحشري 30 مل واحتضان في 31 درجة مئوية في الظلام لمدة 7 أيام.
7. إعداد حبات للتصوير الفوتوغرافي.
   1. خصصت 4 حبات من كل سطر للتحليل المجهري والتصوير الفوتوغرافي.
      ملاحظة: يمكن تخزين حبات عند 4 درجة مئوية لمدة لا تزيد على 5 أيام قبل الانتهاء من التصوير.
   2. التقاط صور لحبات بعد سبعة أيام تطعيم مع الخنزير (أ) (الشكل 3).
   3. نظيفة من الخارج من حبات مع الأنسجة اللينة والمياه. أداء قطاعات طولية من حبات والتقاط صور فوتوغرافية تحت مجهر فلوري فورا.
8. إعداد حبات للتحليل.
   1. نظيفة من الخارج من حبات المتبقية مع الأنسجة اللينة والمياه.
   2. 4 مكان الحبوب، التي تشكل 1 مندوب، في البولي ملولبة 15 مل فيال تحتوي على 2 كرات الصلب المقاوم للصدأ. فورا تجميد قارورة في النتروجين السائل ومخزن في-80 درجة مئوية حتى مزيد من المعالجة والتحليل.
   3. إزالة قنينات من الثلاجة-80 درجة مئوية وطحن الحبوب في الخالطون في 1500 دورة في الدقيقة لمدة 3 دقائق.
      ملاحظة: الاحتفاظ بحبات المجمدة بالنتروجين السائل.

4-بكر فرز حبات الذرة المعدلة وراثيا

1. استخدام مواد عزل الحمض النووي لعزل الحمض النووي (جدنا) من مسحوق حبات الذرة المصابة مع الخنزير (أ) وفقا لإرشادات الشركة المصنعة. بإيجاز، إضافة 280 ميليلتر المخزن المؤقت و و 20 ميليلتر حوزتي 3 ميليلتر ديثيوثريتول (DTT) 10-15 ملغ من مسحوق حبات الذرة. احتضان ويهز في ثيرموميكسير (56 درجة مئوية، 1,200 لفة في الدقيقة، 30 دقيقة). الطرد المركزي في س 10,000 ز لمدة 1 دقيقة ونقل المادة طافية واضحة لعمود متوازن. احتضان في درجة حرارة الغرفة 3 دقيقة وأجهزة الطرد المركزي في 700 x ز لمدة 1 دقيقة الوت جدنا.
2. تأخذ 0.8 ميليلتر من جدنا المستخرجة لإعداد رد بكر 20 ميليلتر لكل عينة باستخدام مجموعة أدوات PCR. اتبع الشروط ثيرموسيكلينج كما أوصى في البروتوكول الخاص بالشركة المصنعة. تتضمن الشروط PCR خطوة أولية تمسخ عند 98 درجة مئوية لمدة 5 دقائق (الخطوة 1) تليها تمسخ عند 98 درجة مئوية 5 s (الخطوة 2)، الصلب في 55 درجة مئوية 5 s (الخطوة 3)، واستطالة عند 72 درجة مئوية 20 s (الخطوة 4)، دورات 40 من الخطوة 2 إلى الخطوة 4 ، وخطوة نهائية استطالة عند 72 درجة مئوية لمدة 1 دقيقة (الخطوة 5).
3. استخدام التمهيدي إلى الأمام 5 '-تاتاككاكككككاتككجتجت-3' وعكس التمهيدي 5 '-أجكتكجاجكاااجاككا-3' للتأكد من وجود لابلاب أيلب الجينات في حبات الذرة المعدلة وراثيا.

5-الجيش الملكي النيبالي العزلة وتوليف كدنا، وشبه كمي RT-PCR

1. خذ تجانس الخنزير ألف إصابة حبات الذرة التي تم تخزينها مسبقاً في-80 درجة مئوية لاستخراج الحمض النووي الريبي. استخراج الحمض النووي الريبي استخدام عدة عزل الحمض النووي الريبي مجموع وفقا للبروتوكول الخاص بالشركة المصنعة ولكن مع تعديل طفيف¹⁸. بعد إضافة 50 ملغم مسحوق نواة الذرة المتجانس في المخزن المؤقت للاستخراج، مزجها جيدا (بدون فورتيكسينج) باستخدام تلميح بيبيت 1 مل وترك الأمر على الجليد لمدة 5-6 دقائق قبل الشروع بالخطوات التالية كما هو موضح في البروتوكول الخاص بالشركة المصنعة.
2. إعداد كدنا استخدام عدة توليف كدنا وفقا للبروتوكول الخاص بالشركة المصنعة ¹⁸.
3. استخدام 0.5 ميليلتر من كدنا غير مخفف كل تفاعل PCR لشبه كمي RT-PCR كما سبق وصف¹⁸. استخدام أجهزة الإشعال إلى الأمام وعكس قايلب إف 5 '-تكككاكاجكاكتاكتج-3' قايلب-ص 5 '-كجتجتكجاجاجاككتاجاتا-3' على التوالي الكشف عن أيلب لابلاب التعبير الجيني، وإلى الأمام وعكس كبسولة تفجير قريب-و 5ʹ-جكتجكتتااجاغت-3ʹ وقريب-R 5ʹ-تكاجتككاكتككاجاتج-3ʹ على التوالي للتعبير عن الذرة ريبوسومال الهيكلية الجينات (الضلع)، GRMZM2G024838¹⁹ كجين حفظ البيت.

6-التجارة والنقل كوانتيتيشن

1. إعداد 50 مل كل من 0.2 M فوسفات الصوديوم (نة₂بو₄) و 0.2 متر مائي فوسفات الصوديوم (Na₂هبو₄·7H₂س) بواسطة H₂o.
2. تشكل 100 مل pH 7.0 سورنسون الفوسفات المخزن المؤقت. لدرجة الحموضة 7.0، إضافة 19.5 مل نة₂بو₄ الأسهم ومل 30.5 نابو₄·7H₂س الأسهم ومنزوع 50 مل ح₂o.
3. تزن 25 ملغ الأرض نواة مواد (الوزن الطازج، مهاجم) ووضع في أنبوب ميكروسينتريفوجي مل 1.0. إضافة 500 ميليلتر الفوسفات العازلة لأنبوب الطرد المركزي ودوامه لمدة 30 ثانية.
4. الطرد المركزي عينات لمدة 15 دقيقة في س 16,000 ز. بيبيت 100 ميليلتر المادة طافية في لوحة سوداء 96 جيدا. قراءة العينات مع فلوروميتير (الإثارة 485 نانومتر، الانبعاثات 528 nm).

7-تحليل الأفلاتوكسين المجموع

1. استخراج عينة والأفلاتوكسين والتجهيز
   1. عينات نواة جافة في فرن هواء قسري لمدة يومين في 60 درجة مئوية. وزن العينات وطرأت 50 مل قارورة Erlenmeyer بسداده زجاجية.
   2. في غطاء دخان، إضافة كلوريد الميثيلين 25 مل لكل قارورة.
      تنبيه: كلوريد الميثيلين شديدة التقلب وتعتبر خطرة (مسرطن مهيجة،). قفازات مطاط لا النتريل آمنة للعمل مع "كلوريد الميثيلين". استخدام قفازات أحجام مقاومة للمذيبات العضوية في تحسن.
   3. هز العينات لمدة 30 دقيقة على شاكر عمل معصم. بعد 30 دقيقة، صب ببطء المقتطف من خلال دائرة مخدد تصفية ورق في الكأس 80 مل. واسمحوا قنينة جافة بين عشية وضحاها في غطاء دخان.
   4. وفي اليوم التالي بخ كلوريد الميثيلين (حوالي 5 مل) حول الداخل ريم من قنينة جافة ودوامه حولها وصب في قنينة زجاجية 2 درام. فتح قارورة إجازة لتجف في غطاء دخان بين عشية وضحاها.
2. تحليل الأفلاتوكسين
   1. إضافة الميثانول 80% مل 4.0: منزوع ح₂س (v/v) في قنينة.
   2. استخدام مجموعة الأفلاتوكسين استخراج مواد لتصفية تنقية الميثانول الحل مع العمود المتوفرة. تحليل مستويات إجمالي الأفلاتوكسين مع فلوروميتير، وفقا لإرشادات الشركة المصنعة.

النتائج

تحويل الذرة والفحص الجزيئي للنباتات المعدلة وراثيا

تم تحويل الأجنة غير ناضجة من الذرة مرحبا-ثانيا خطوط استخدام سلالة EHA101 tumefaciens المتبعة التي تحتوي على ناقل الوجهة المحطة النهائية معربا عن الجين أيلب purpureus لابلاب ?...

Discussion

العائد الخسائر في المحاصيل الزراعية بسبب مسببات الأمراض والآفات هو مشكلة عالمية²⁰. حاليا، هو تطبيق لمبيدات الآفات ومبيدات الفطريات الاصطناعية الوسيلة الغالبة للسيطرة من مسببات الأمراض النباتية والآفات، ولكن سمية المتبقية من هذه بيوشميكلس في الأغذية والأعلاف يمكن أن تشكل ت?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Agar	Caisson
Amazing Marine Goop	Eclectic Products
C1000 Touch CFX96 Real-Time System	Bio-Rad
Corning Falcon Tissue Culture Dishes, 60 mm	Fisher Scientific	08-772F
Eppendorf 5424 Microcentrifuge	Fisher Scientific
Erlenmeyer flask with stopper, 50 mL	Ace Glass	6999-10
Ethanol
FluoroQuant Afla	Romer Labs	COKFA1010
Fluted Qualitative Filter Paper Circles, 15 cm	Fisher Scientific	09-790-14E
Force Air Oven	VWR
FQ-Reader	Romer Labs	EQFFM3010
Geno/Grinder 2010	OPS Diagnostics	SP 2010-115
Improved PolyVinylAlcohol Organic Solvent Resistant Gloves	Ansell	012-15-554
Innova 44 Incubator Shaker	Brunswick Scientific
iScript cDNA Synthesis Kit	Bio-Rad	1708890
liquid Nitrogen
Low Form Griffin Beakers, 100 mL	DKW Life Sciences	14000-100
Methanol
Methylene Chloride
Nexttec 1-step DNA Isolation Kit for Plants	Nexttec	47N
Nikon Eclipse E600 microscope with Nikon DS-Qi1 camera	Nikon
Nikon SMZ25 stereomicroscope with C-HGFI Episcopic Illuminator and Andor Zyla 4.2 sCMOS camera	Nikon
Nunc Square BioAssay Dishes	ThermoFisher Scientific	240835
Phire Plant Direct PCR Kit	ThermoFisher Scientific	F130WH
Polycarbonate Vials, 15 ml	OPS Diagnostics	PCRV 15-100-23
Potato Dextrose Broth
Snap Cap, 22 mm	DKW Life Sciences	242612
Sodium Phosphate dibasic heptahydrate	Sigma-Aldrich
Sodium Phosphate monobasic	Sigma-Aldrich
Spectrum Plant Total RNA Kit	Sigma-Aldrich	STRN50
Stainless Steel Grinding Balls, 3/8''	OPS Diagnostics	GBSS 375-1000-02
Stir Plate
Synergy 4 Fluorometer	Biotek
T100 Thermal Cycler	Bio-Rad
Triton X-100	Sigma-Aldrich	T-9284
V8 juice	Campbell's
Whatman Qualitative Grade Plain Sheets, Grade 3	Fisher Scientific	09-820P
Wrist-Action Shaker	Burrell Scientific