نموذج النمس من التهاب-حساسة في وقت متاخر الخدج-أصابه الدماغ الدماغية

Summary

يصف الأسلوب التهاب--حساسية نقص الأكسجين--الدماغية وإصابات الدماغ فرط الاكسده في النمس P17 لنمذجة التفاعل المعقد بين التهاب المطول وإصابات المخ المؤكسدة التي تعاني منها في عدد من الرضع الخدج الراحل.

Abstract

هناك حاجه مستمرة للنماذج ذات الصلة سريريا من العدوى في فتره ما قبل الولادة ونقص الأكسجين-نقص التروية (HI) التي لاختبار التدخلات العلاجية للرضع مع المضاعفات العصبية من قبل النضج. وتعد الشركات المرشحة المثالية لنمذجة الدماغ البشري قبل الأوان ، لأنها تولد العقول الحية وتطور الادمغه المهبلية بعد الولادة. عند الولادة ، ونمو الدماغ النمس يشبه الجنين 13 أسبوعا الإنسان ، مع يوم بعد الولادة (P) 17 مجموعات تعتبر مساويه للرضع في الحمل 32-36 أسبوعا. نحن وصف نموذج الاصابه في النمس P17 ، حيث يتبع أداره عديد السكاريد الثنائية نقص التروية الدماغية ، نقص الأكسجين ، و hyperoxia. يحاكي هذا التفاعل المعقد بين التهابات المطولة ، ونقص التروية ، ونقص الأكسجين ، والاكسده التي يعاني منها عدد من الولدان الذين يصابون بإصابات دماغيه. تعرض الماشية المصابة مجموعه من شده الاصابه الاجماليه ، مع التغيرات المورفولوجية في الدماغ بما في ذلك تضييق الجيروسكوبات القشرية المتعددة والكبريت المصاحب. كما تظهر الإصابات التي أصيب بها المصابون تباطؤ النمو المنعكس ، وسرعه إبطا وأكثر تنوعا في التنقل في المنصة اليه ، وانخفاض الاستكشاف في حقل مفتوح. يوفر هذا النموذج منصة لاختبار العلاجات المفترضة للرضع المصابين باعتلال الدماغ حديثي الولادة المرتبطة بالتهاب ومرحبا ، ودراسة أليات الاصابه التي تؤثر علي التنمية القشرية ، والتحقيق في المسارات التي توفر المرونة في غير متاثر الحيوانية.

Introduction

هناك حاجه مستمرة لنماذج الحيوانية الكبيرة التي تعكس الفيزيولوجيا المرضية من قبل النضج ونقص الأكسجين في فتره ما قبل الولادة-نقص التروية التي يمكن اختبار التدخلات العلاجية للرضع. في 2017 ، 9.93 ٪ من الرضع 382,726 ولدوا في الولايات المتحدة ولدوا الخدج ، و 84 ٪ من هؤلاء الرضع ولدوا بين 32 و 36 أسابيع من الحمل¹. في الأطفال الخدج ، يكون التعرض للعدوى أو التهابات في الولادة أمرا شائعا ، حيث يمكن للتنشيط المناعي للأمهات بسبب مسببات الامراض الفيروسية أو البكتيرية ان يبدا المخاض قبل الأوان. بعد الولادة ، يتعرض الرضع الخدج لخطر الاصابه بالإنتان المبكر أو المتاخر². وكثيرا ما يعاني الأطفال الخدج أيضا فترات من نقص الأكسجين ، وانخفاض ضغط الدم ، وفرط الأكسجين بسبب نظامهم القلبي الرئوي غير الناضج ، وارتفاع توتر الأوكسجين في الجو بالنسبة لأولئك الذين يعانون من الرحم ، والتعرض الضموري. بالاضافه إلى ذلك ، في الخدج ، الدفاعات المضادة للاكسده غير ناضجه³ والعوامل الموالية لابوتوتيك طبيعيا اوبريجولاتيد⁴. يؤدي الاكسده وموت الخلايا إلى تنشيط الجهاز المناعي والتهاب العصبي. ويعتقد ان هذه العوامل مجتمعه للمساهمة في النمو والضعف الفسيولوجي للدماغ, ويؤدي إلى أو تفاقم اعتلال الدماغ المرتبطة بالنتائج التنموية الفقيرة في الخدج^5,6,7.

نظرا لأوجه التشابه المادية والتنموية ان الدماغ النمس سهم مع الدماغ البشري ، والنمس هو الأنواع الجذابة التي لنموذج أصابه الدماغ^{8،9،10،11،12}. وكذلك المرشحون المثاليون لنمذجة الدماغ البشري قبل الأوان ، لأنهم يولدون العقول المصابة بالشيخوخة ويطورون الادمغه المهبلية ، والتي توفر نافذه لفضح الدماغ النامي إلى الإهانات التي تحاكي الأطفال الذين يولدون قبل الأوان. عند الولادة ، ونمو الدماغ النمس يشبه الجنين 13 أسبوعا الإنسان ، مع يوم بعد الولادة (P) 17 مجموعات تعتبر مساويه للرضع في 32-36 أسابيع من الحمل¹³.

وقد نشرت مجموعتنا مؤخرا نموذجا من الخدج للغاية (< 28 أسبوعا الحمل) أصابه في الدماغ النمس P10 من خلال الجمع بين الحساسية التهابيه مع القولونية الليبوكوليساكاريد (lps) مع التعرض اللاحق لنقص الأكسجين و فرط التاكسج ¹². في البروتوكول التالي ، نقوم الآن بوصف نموذج الخداج المتاخر في النمس P17 ، حيث يتبع التحسس LPS بنقص التروية الدماغية الثنائية ، ونقص الأكسجين ، و hyperoxia. وهذا يؤدي إلى أصابه أكثر شده في مجموعه فرعيه من الكائنات ، وأكثر دقه نماذج التفاعل المعقد للالتهابات لفترات طويلة ، نقص التروية ، نقص الأكسجين ، والاكسده التي تعاني منها في عدد من الخدج الذين يصابون باصابه في الدماغ.

Protocol

وقد أجريت الإجراءات وفقا لدليل المعاهد القومية للصحة لرعاية واستخدام المختبرات الحيوانية وكجزء من البروتوكول المعتمد من قبل لجنه الرعاية والاستخدام المؤسسي للحيوانات في جامعه واشنطن.

1. الاعداد وأداره LPS

ملاحظه: راجع الشكل 1 للجدول الزمني للإجراءات.

1. قبل البدء في الاجراء ، ختم ، تعقيم والاوتوكلاف جميع الاداات الجراحية والستائر الجراحية. اعداد الادويه قبل الجراحة في قوارير معقمه. احسب معدل التدفق المطلوب لاستبدال الهواء في غرفه نقص الأكسجين/hyperoxia مع الغاز التجريبي في 8 – 10 دقيقه.
2. اعداد عديد السكاريد (lps من e. كولاي 055: B5) في محلول ملحي معقم لإنتاج تركيز 1 مغ/مل. أزاله P17 النمس مجموعات من الجعلل بهم. تزن وعدد لهم. العشوائية الحيوانية عن طريق القمامة والجنس للسيطرة أو الجرحى (أو العلاج) الجماعات.
3. باستخدام حقنه الانسولين 300 μL, أداره 3 مغ/كغ من LPS داخل الصفاق إلى مجموعات في مجموعه الاصابه, وحجم مكافئ من المركبات الملحية المعقمة (3 μL/g) للسيطرة علي الماشية.
4. وضع الماشية في غرفه داخل حمام مائي في 37 – 40 درجه مئوية من أجل الحفاظ علي درجه حرارة المستقيم المستهدف من 36-37 درجه مئوية في جميع انحاء العمليات الجراحية.

2-التخدير

1. خلال العملية ، ومراقبه باستمرار درجه الحرارة ، ومعدل التنفس ، ومعدل ضربات القلب من الحيوانية.
2. أداره البوبرينورفين (0.05 مغ/كغ) جلد 30 دقيقه قبل العملية الجراحية. الحث علي التخدير في خليط من 3 ٪ ايزوفلواني متوازنة مع 100 ٪ الأكسجين. أزاله الطقم من الغرفة التعريفي ووضعه ضعيف علي بطانية المياه الجراحية رايات تعيين إلى 37 درجه مئوية. انقل التخدير إلى مخروط الأنف وقلل مستوي الايزوفلواني إلى 2 – 3%.

3. التحضير الجراحي

1. باستخدام مقص الحيوانية الصغيرة أزاله جميع الشعر في منطقه الرقبة بطني. حلق في نمط مستطيل مع الحرص علي تجنب خداع الجلد أو توليد طفح الحلاقة. أداره التخدير الموضعي إلى المنطقة الحليقة باستخدام داخل الادمه يدوكائين (4 مغ/كغ) وبوبيفاكايين (2.5 ملغم/كغ).
2. اعداد الرقبة عن طريق التناوب تطبيق povidone-اليود و 70 ٪ الايثانول فرك مع مسحات القطن المعقمة. كرر فرك مثل ان povidone-اليود و 70 ٪ الايثانول كل تطبيق 3x في الأزياء بالتناوب.
3. تاكيد عمق التخدير عن طريق عدم وجود منعكس اصبع القدم. الحفاظ علي مستوي ايزوفلواني عند الحد الأدنى المطلوب للمستوي الجراحي للتخدير. باستخدام عقيمه القابل للتصرف قطع الستائر التي تكشف المنطقة الرقبة ، ثني الحيوانية.

4. ربط الشريان السباتي الثنائي

1. مع شفره مشرط #11 أحاديه الاستخدام ، قم باجراء شق منتصف الخط النصفي 1.5 سم في وسط الرقبة. باستخدام الاصبغه الدموية الدقيقة والملقط المنحني ، تشريح بصراحة وصولا إلى الشريان السباتي الأيسر. تشريح الشريان بعيدا عن حزمه الوعائية العصبية المرتبطة.
2. باستخدام زوج من ملقط الناعمة المنحنية ، وتمرير يحلق طول 10 سم من خياطه الحرير 5-0 العقيمة تحت الشريان. اقطع الخيط إلى النصف Ligate الشريان عن طريق ربط بشكل أمن كلا أطوال خياطه ، وترك ما لا يقل عن 2 ملم بين عقده. الشريان السباتي الأيسر بين الغرز ، مع الحرص علي ترك العصب سليمه.
3. كرر تشريح علي الجانب الأيمن. نربط الشريان السباتي الأيمن مع واحده معقمه 1/8 بوصه التعادل السري. اغلقي الجرح مع المشابك الجلدية الجراحية.
4. السماح للحيوان للتعافي في حمام المياه التي تسيطر عليها درجه الحرارة لمده 30 دقيقه علي الأقل قبل نقص الأكسجين.
   ملاحظه: إذا لم يتم عزل الشرايين بشكل كامل من بقية حزمه الاوعيه الدموية ، وزيادة معدل الوفاات يمكن ان ينظر اليه قبل أو خلال نقص الأكسجين في وقت لاحق.

5. نقص الأكسجين متتابعة ، Hyperoxia ، ونقص الأكسجين

1. خلال نقص الأكسجين و hyperoxia ، وتغيير درجه حرارة حمام الماء حسب الضرورة للحفاظ علي درجه حرارة المستقيم اثناء نقص الأكسجين في 37 درجه مئوية في الحيوانية الحارس (ق).
2. ضع الماشية في مجموعه الإصابات في غرفه محكمه الغلق داخل حمام مائي. مراقبه تركيز الأكسجين بشكل مستمر داخل الغرفة ، وكذلك درجه حرارة المستقيم في واحد علي الأقل الحارس الحيوانية. مسح الغرفة مع رطوبة 9 ٪ الأكسجين (91 ٪ النيتروجين) ثم الحفاظ علي معدل تدفق من 3 – 5 لتر/دقيقه ، اعتمادا علي حجم الغرفة. مره واحده وقد وصلت إلى تركيز الأكسجين في الغرفة 9 ٪ ، وتستمر لمده 30 دقيقه.
3. بعد 30 دقيقه ، والتبديل إمدادات الغاز إلى 80 ٪ الأكسجين المرطب (20 ٪ النيتروجين) ، والسماح للغرفة للوصول إلى تركيز الهدف علي أساس معدل التدفق وحجم الغرفة. استمر لمده 30 دقيقه من hyperoxia. فتح الغرفة للسماح لها بسرعة أكبر الوصول إلى normoxia بواسطة تولد مع هواء الغرفة.
4. ختم الغرفة ، ودافق مع 9 ٪ الأكسجين المرطب. مراقبه باستمرار جميع الكائنات بصريا ، مع العلم من الكائنات التي تعرض bradypnea. مره واحده وقد وصلت إلى تركيز الأكسجين في الغرفة 9 ٪ ، وتستمر لمده 30 دقيقه. إذا كان ينظر إلى الوفاات داخل الأكسجين (السكتة التنفسية) في اي من الكائنات قبل نهاية فتره 30 دقيقه ، وإنهاء نقص الأكسجين علي الفور.

6. عكس ربط الشريان السباتي الأيمن

1. العودة الحيوانية إلى منطقه الجراحة ، والحث علي التخدير في خليط من 3 ٪ ايزوفلواني متوازنة مع 100 ٪ الأكسجين. انقل التخدير إلى مخروط الأنف وقلل مستوي الايزوفلواني إلى 2 – 3%. أزاله مقاطع الجرح الجراحية وأعاده اعداد منطقه الجرح مع povidone-اليود. تاكيد عمق التخدير عن طريق عدم وجود منعكس اصبع القدم. الحفاظ علي مستوي الايزوفلوان في النسبة المئوية الدنيا المطلوبة لطائره جراحيه من التخدير. باستخدام عقيمه القابل للتصرف قطع الستائر التي تكشف المنطقة الرقبة ، ثني الحيوانية.
2. باستخدام ملقط منحني ، وتحديد وفك الشريط السري من الشريان السباتي الأيمن. اغلقي الجرح مع المشابك الجلدية الجراحية.

7. الانتعاش وأداره درجه الحرارة

1. أعاده جميع مجموعات إلى جيلس بهم ل 60 دقيقه ، للتمريض والانتعاش. بعد 60 دقيقه ، وأعاده الجرحى الحيوانية إلى حمامات المياه في 37-40 درجه مئوية ل 6 ساعة ، وضبط درجه حرارة الماء حسب الحاجة من أجل الحفاظ علي درجه حرارة المستقيم في 36-37 درجه مئوية. مجموعات العودة إلى الجعلل بهم.
2. أزاله المقاطع الجراحية 10 – 14 يوما بعد الجراحة (P27 – P31).

8. اختبار منعكس

1. اجراء جميع الاختبارات المنعكسة يوميا من P21 – P28 ، وعلي الأقل 3x في الأسبوع من P28 – P42 ، في حين تبقي اعمي للتعرض (أو العلاج) المجموعة. قبل الاختبار المنعكس ، وضع مجموعات في غرفه مع المساعدة الحرارة (37 درجه مئوية حمام المياه ، وساده الحرارة ، الخ) لمده 1 ساعة. لكل اختبار ، واستكمال جميع المحاكمات لكل مجموعه قبل اختبار مجموعه المقبل.
2. المحور الجغرافي السالب (25 درجه)
   1. وضع لوحه مسطحه (16 1/2 في. x 12 في.) ملفوفه في حامي السطح ماصه ضد كائن بحيث يشكل المجلس زاوية 25 درجه مع الجدول. وضع عده علي متن المعرض ومواجهه انحدار ، حوالي 75 ٪ من الطريق حتى المجلس.
   2. تاكد من ان جسم الطقم مستقيم وان كل الكفوف الاربعه سيطرت علي المجلس قبل إطلاقه. حالما يتم وضع مجموعه ، بدء تقييم الوقت.
   3. تسجيل الوقت عندما تدير عده لتدوير الجسم 90 درجه مئوية بالنسبة إلى موقفها البداية. تسجيل الوقت الذي تدور فيه عده الجسم 180 ° وياخذ خطوه كامله نحو الجزء العلوي من المجلس. اجراء 3 المحاكمات في المنحدر 25 درجه قبل الانتقال إلى الاختبار التالي.
3. المحور الجغرافي السالب (45 درجه)
   1. قم باجراء 3 تجارب للاختبار الجغرافي السلبي الموصوف مسبقا مره أخرى ، وهذه المرة مع تعيين اللوحة إلى زاوية 45 درجه.
4. النفور من الهاوية
   1. وضع منصة مبطن حول 1 قدم تحت الحافة للتقليل من الاصابه إلى مجموعات إذا كانت تقع.
   2. وضع مجموعه التي تواجهها ، ومتعامدة علي ، حافه مقعد المختبر. تاكد من ان جسم الطقم مستقيم ، مع تدفق الكفوف الاماميه مع الحافة. بدء تقييم الوقت من لحظه وضع الطقم. الحرص علي التفريق بين الحركة واعيه بعيدا عن الهاوية وغيرها من الحركات العفوية التي لا تنطوي علي المشي المنسق.
   3. تسجيل الوقت عندما يتحرك الطقم جسمه بعيدا عن الحافة (يعرف بأنه النسخ الاحتياطي ، وتحول جسمه ، أو تحريك أطرافه الاماميه بعيدا عن الحافة). سجل الوقت الذي تكمل فيه المجموعة خطوتها الاولي في الاتجاه المعاكس للحافه (التي تعرف بأنها اي اتجاه أو زاوية في الماضي بدوران 90 درجه من موقف بدايتها الذي يواجه الحافة).
   4. اجراء 3 تجارب النفور من الهاوية لكل مجموعه قبل الانتقال إلى الاختبار التالي.
5. انعكاس اليمين
   1. وضع عده ضعيف علي مقاعد البدلاء ، وعقد بلطف في هذا الموقف قبل الإفراج عنها وفي وقت واحد بدء ساعة توقيت. تسجيل الوقت الذي الطقم يجلب نفسه للراحة مع جميع الكفوف الاربعه في وقت واحد شقه ضد مقاعد البدلاء في المواقف الحاملة للوزن. تسجيل الوقت عندما ياخذ الطقم خطوه كامله في اي اتجاه (يعرف بأنه موضع كل الكفوف الاربعه لتحقيق التقدم في اتجاه معين مع عدم الغزل أو سحب الجسم).
   2. اجراء 5 تجارب لاختبار منعكس اليمين لكل الحيوانية.
   3. بعد ان أكملت كل مجموعه المحاكمات المنعكسة الخمسة اليمينية ، أعد الفضلات إلى الجيل.

9. اختبار المنصة

1. علي P42 ، وأزاله مجموعات من جيل. وضع مجموعات في أقفاص بلاستيكية حوالي 10 دقيقه قبل الاختبار ، حتى يتمكنوا من التاقلم مع البيئة. أطفئ الأنوار في غرفه الاختبار للتاكد من ان الاضاءه المحيطة لا تؤثر علي وظيفة المنصة.
2. إنشاء تجربه جديده في البرامج ذات الصلة. ضبط الإعدادات التجريبية بحيث لا يتجاوز الحد الأقصى لمده التشغيل 10.00 s والحد الأدنى لمده التشغيل لا تقل عن 1.50 s. تعيين الحد الأقصى للتغير السرعة بحيث لا يتجاوز 60 ٪. تعيين شرط الحد ادني من ثلاثه أشواط متوافقة لكل الحيوانية.
3. ضبط عرض الممشى نسبه إلى حجم الحيوانية بحيث تكون قادره علي الحركة بحريه دون لمس الجدران في حين تبقي ضيقه بما يكفي لتثبيط تحول. أضافه اعداد كشف جديد في علامة التبويب إعدادات الكشف عن التشكيلات الجانبية باستخدام الكشف التلقائي. استخدام نفس إعدادات الكشف لجميع الصغار والحيوانية في سن معينه.
4. تنظيف الممشى تماما مع النسيج ورقه منخفضه الوبر و 70 ٪ الايثانول قبل وبعد كل الحيوانية. تنظيف الكفوف النمس بانتظام لتحسين دقه الكشف والتصنيف. بمجرد ان يتم اعداد الممشى والحيوانية ، والبدء في اكتساب المحاكمة.
5. وقفه الاستحواذ لتنظيف المنصة إذا تراكمت اثار الاقدام علي الزجاج ، أو إذا كانت الكائنات تمر البول أو البراز. توقف عن الاستحواذ بمجرد ان يتعرف برنامج المنصة علي ثلاثه تشغيلات متوافقة استنادا إلى إعدادات التجربة المحددة مسبقا.

10. الاختبار الميداني المفتوح (P42)

1. استخدام مربع الأكريليك غير المساميه (55 سم × 55 سم × 40 سم عاليه) رسمت ماتي الأبيض. ضع الكاميرا بحيث يتم توسيطها مباشره فوق المربع ويتم التقاط جميع الجدران الاربعه. تنظيف الساحة الاختبار مع 70 ٪ الايثانول قبل الاستخدام الأول وبين الحيوانية.
2. في البرامج ذات الصلة ، حدد جديد من قالب وتطبيق قالب محدد مسبقا. متابعه اجراء الاعداد عن طريق تحديد نوع الموضوعبشكل تسلسلي: غير ذلك ؛ قالب الساحة: حقل مفتوح ، مربع ؛ قالب المنطقة: المركز ، الحدود ، الزوايا. الميزات التي يمكن تتبعها: نقطه الوسط.
3. فتح الساحة إعدادات وانتزاع صوره الخلفية من مدخلات الكاميرا ، والتاكد من ان قمم الجدران الساحة مرئية. معايره ابعاد الساحة باستخدام أداه المقياس.
4. ضبط مناطق الساحة المحددة مسبقا عن طريق تغيير حجم الخطوط العريضة لتناسب مناطق الجدار (NW ، NE ، SW ، SE) ومناطق الكلمة (اعلي اليسار ، الأعلى الأوسط ، الأعلى الأيمن ، الأوسط الأيسر ، الوسط ، اليمين الأوسط ، أسفل اليسار ، أسفل الوسط ، أسفل اليمين). التحقق من صحة الاعداد للتاكد من عدم تداخل المناطق.
5. افتح نافذه الاستحواذ واضغط علي بدء الاستحواذ. وضع النمس في مركز الساحة الاختبار الموجهة في مثل هذه الطريقة التي هي متسقة لكل موضوع الاختبار. السماح لنمس للتحرك بحريه في جميع انحاء الساحة لمده 5 دقائق. في نهاية فتره الاختبار ، اضغط علي إيقاف الاستحواذ. كرر الاجراء مع النمس المقبل.
   ملاحظه: وينبغي لجميع المجربين في الغرفة وضع أنفسهم لتكون غير قابله للملاحظة من قبل النمس وتبقي هادئه خلال فتره الاختبار.

11. التثبيت-perfusion

1. علي P42 ، تخدير عميق مجموعات مع 5 ٪ ايزوفلواني. أداره جرعه زائده بنتوباربيتال (120-150 مغ/كغ i.p.). ضمان التخدير العميق بسبب عدم الاستجابة لقرصه اصبع القدم وفقدان الحركات التنفسية.
2. نقل الحيوانية إلى غطاء الدخان. فتح الصدر والمشبك الاورطي التنازلي باستخدام الأرقاء الغرامة. اقطع الأذين الأيمن باستخدام مضخة ترويه ، حقنت البطين الأيسر مع 60 مل من المحلول الملحي المعقم بمعدل 30 مل/دقيقه. حقنت مع 60 مل من فورالين (10 ٪ الفورمالديهايد) بمعدل 30 مل/دقيقه.
3. قطع راس الذبيحة ، وأزاله الدماغ من الجمجمة باستخدام مقص ، ملقط ، rongeurs ، وملعقة. التقط صورا عاليه الدقة للجوانب الظهرية والبطنية والجانبية لكل دماغ. بعد إصلاح الدماغ في الفورمالين علي الأقل 48 h.

12. السابق فيفو قياس الدماغ

1. أزاله الدماغ من الفورمالين (الخطوة 11.3) ووضع علي منشفه ورقيه لامتصاص السوائل الزائدة.
2. باستخدام الفرجار الكترونيه ، وقياس ارتفاع الدماغ عن طريق وضع نصائح من الفرجار في الجوانب الظهرية والبطنية للدماغ. قياس طول الدماغ عن طريق وضع نصائح من الفرجار في لمبة حاسة الشم والحدود الخلفية الأكثر من الفص القذالي. قياس عرض الدماغ عن طريق وضع نصائح من الفرجار في الأجزاء الجانبية الأكثر من الفصوص الصدغية. وزن المخ
3. قياس الشق الطولي (الامامي والخلفي إلى sulcus الصليبية) ، sulcus الجانبية ، سوبراسيلفيان sulcus ، sulcus الاكليليه ، sulcus الكاذبة ، sulcus ansinate ، sulcus صليبي ، sulcus presylvian ، تلافيف الجانبي ، سوبراسيلفيان تلافيف ، قولون تلافيف ( الامامي والخلفي) ، الاكليليه تلافيف ، ectosylvian تلافيف (الامامي والخلفي) ، والمداري تلافيف. قياس كل التلم من بداية ونهاية الجزء الأكثر تميزا من التلم المقابلة. قياس جميع تلافيف من أوسع جانب من كل تلافيف المقابلة.
4. قياس كميه المخيخ المكشوفة عن طريق وضع طرف واحد من الفرجار في النقطة الخلفية الأكثر من الشق الطولي ووضع الطرف الآخر من الفرجار في الجزء الخلفي الأكثر من المخيخ.
   ملاحظه: النمس دماغ أطلس, بما ان يؤسس في علم الاحياء وامراض من نمسا¹⁴, كان استعملت ان يطور السابقة [فيفو] نمس دماغ قياسات.

13. تسجيل الإصابات الاجماليه

1. باستخدام الصور الملتقطة في الخطوة 11.3 ، تطبيق معايير التهديف في الخطوات 13.2 – 13.4 لتقييم أصابه الدماغ الاجماليه (من 0 إلى 9 مقياس) مع الإبقاء علي العمي لمجموعات التعرض (أو العلاج).
2. تقييم الشق الطولي. إذا كان يبدو طبيعيا ، تعيين درجه من 0. إذا تم توسيعه بشكل معتدل (تقريبا 2x العرض العادي) ، ولكن الزيادة في العرض غير مكتملة علي طول الشق ، وتعيين درجه من 1. إذا تم توسيعه باعتدال (تقريبا 2-3x العادي) ، تعيين درجه من 2. إذا تم توسيعه بشكل ملحوظ ، مع وجود فجوه واضحة > 3x العرض العادي علي طول معظم طول الشق ، وتطبيق درجه من 3.
3. تقييم sulci الجانبية. إذا كانت تظهر التعريف العادي ، مع الفصل بين تلافيف الجانبي و سوبراسيلفيان تلافيف ، تعيين درجه من 0. إذا كان ينظر إلى التعريف المخفف الأحادي أو الثنائي المعتدل للكبريت ، خاصه في الجزء الصغير ، مع تضييق الحد الأدنى من الفصوص الجبهية والصدغية بالنسبة إلى الفصوص القذالي ، قم بتعيين درجه 1.
   1. إذا تم النظر إلى انخفاض معتدل تعريف التلم ، مع الاكتئاب من سوبراسيلفيان gyri ، تضييق الاكليليه والجيروسكوب ، وتضييق معتدل من الفصين الجبهي والصدغي نسبه إلى فصوص القذالي ، وتعيين درجه من 2. إذا كان ينظر إلى انحطاط الكيسي من جانب واحد ، مع الحد الأدنى من التغيير في نصف الكره الارضيه المعاكس ، وتعيين درجه من 3. إذا كان التعريف الضعيف لل التلم الجانبية موجودا ، مع الثنائية الكيسية أو انحطاط شديد من الفصوص القذالي والزمانيه ، وتعيين درجه من 4.
4. تقييم الجزء المرئي من المخيخ. إذا كان يبدو طبيعيا ، مع (< 75 ٪ من vermis و < 66 ٪ من نصفي الكره المرئية ، وتعيين درجه من 0. إذا 75-90 ٪ من vermis و ≥ 66 ٪ من نصفي الكره التي تكون مرئية ، وتعيين درجه من 1. إذا كان معظم المخيخ مرئية ، وعرض كل من vermis و ≥ 66 ٪ من نصفي الكره الواحدة ، وتعيين درجه من 2.

14. تحليل البيانات

1. بالنسبة لبيانات اختبار المنعكسات ، قم بتعيين حالات فشل بمعدل 61 s للسماح لها بالمقارنة مع النجاحات في نهاية الوقت (60 s) ، ولكن بترتيب اسوا في التحليل الإحصائي. حساب منطقه تحت المنحني لكل الحيوانية مع مرور الوقت في كل من الاختبارات منعكس.
2. ضبط البيانات المنصة التي تنطوي علي حجم مخلب من الضغط من وزن الحيوانية.
3. تحليل البيانات باستخدام الطرق الاحصائيه غير الحدودية ، واصفا البيانات باستخدام النطاق المتوسط والربع المشترك (IQR).

النتائج

من 34 (ن = 18 الذكور, ن = 16 إناث) الحيوانية من سته الصغار المعرضين للاهانه, ثمانيه الماشية (24%; n = 4 الذكور, ن = 4 الإناث) في المجموعة المصابة توفي خلال فتره نقص الأكسجين الثاني (ن = 5), خلال أداره درجه الحرارة (ن = 2) في المجموعة المصابة ، تسعه من 26 ناج (35%) إصابات إجماليه ظاهره. وأصيبت خمسه من الماشية (ن = 5 ?...

Discussion

ونظرا لأوجه التشابه المادية والتنموية المشتركة بين الدماغ النمس والدماغ البشري ، فان النمس يستخدم بشكل متزايد لنمذجة إصابات الدماغ البالغة والتنموية. ^{8،9،10،11،12}. ومع ذلك ، تشير البحوث حتى الآن إلى ان ...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
80% Oxygen	Praxair
9% Oxygen	Praxair
Absorbent benchtop protector	Kimtech	7546
Automated catwalk	Noldus
Betadine surgical scrub
Bupivacaine	Patterson Veterinary	07-888-9382
Buprenorphine
Calipers	SRA Measurement Products	ME-CAL-FP-200	200 mm range, 0.01 mm resolution
Cotton Gauze Sponge	Fisher Scientific	22028556
Curved fine hemostat	Roboz	RS-7101
Curved forceps	World Precision Instruments	501215
Curved suture-tying hemostat	Roboz	RS-7111
Ethovision tracking software	Noldus
Eye Lubricant	Rugby	NDC 0536-1970-72
Ferrets (Mustela putorius furo)	Marshall Biosciences		Outbred (no specific strain)
Formalin	Fisher Scientific	SF100-4	10% (Phosphate Buffer/Certified)
Hair Clippers	Conair	GMT175N
Insulin Syringes	BD	329461	0.3 cc 3 mm 31 G
Isoflurane	Piramal	66794-017-25
Lidocaine	Patterson Veterinary	07-808-8202
LPS	List Biological	LPS Ultrapure #423
Oxygen sensor	BW Gas Alert	GAXT-X-DL-2
Pentobarbital
Plastic chamber	Tellfresh	1960	10 L; 373 x 270 x 135 mm3
Saline Solution, 0.9%	Hospira	RL-4492
Scalpel blade	Integra Miltex	297
Scalpel handle	World Precision Instruments	500236	#3, 13 cm
Sterile suture	Fine Science Tools	18020-50	Braided Silk, 5/0
Surgical clip applicator	Fine Science Tools	12020-09
Surgical clip remover	Fine Science Tools	12023-00
Surgical drapes	Medline Unidrape	VET3000
Surgical gloves	Ansell Perry Inc	5785004
Surigical clips	Fine Science Tools	12022-09
Thermometer (rectal)	YSI	Precision 4000A
Thermometer (water)	Fisher Scientific	14-648-26
Umbilical tape	Grafco	3031	Sterile
Water bath	Thermo Scientific	TSCOL19	19 L