JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

نموذج الحيوانية فشل الكبد الحاد وضعت في الدراسة الحالية يقدم بديلا ممكنا لدراسة العلاجات المحتملة. يستخدم النموذج الحالي التاثير المشترك للإصابات الكبدية الناجمة عن المخدرات والفيزيائية ويوفر نافذه زمنيه مناسبه لدراسة إمكانات العلاجات الجديدة.

Abstract

فشل الكبد الحاد (الفا) هو حاله سريريه تسببها مسببات مختلفه مما ادي إلى فقدان وظائف الأيض ، البيوكيميائية ، توليف ، ومزيل السموم من الكبد. في معظم حالات تلف الكبد التي لا رجعه فيها ، تظل عمليه زرع الكبد التقويمية هي العلاج الوحيد المتاح. ولدراسة الإمكانيات العلاجية لعلاج المؤسسة ، فان الاختبار السابق لها في نموذج حيواني لمؤسسه الفا هو أمر أساسي. في الدراسة الحالية ، تم تطوير نموذج الفا في الفئران من خلال الجمع بين 70 ٪ استئصال الكبد الجزئي (PHx) وحقن اسيتامينوفين (APAP) التي توفر نافذه علاجيه من 48 h. تمت أزاله الفصوص الجانبية الوسطي واليسرى من الكبد إلى المكوس 70 ٪ من كتله الكبد وأعطيت APAP 24 ساعة بعد جراحيا لمده 2 أيام. تم العثور علي البقاء علي قيد الحياة في الحيوانية التي يسببها الف التي انخفضت بشده. وأكد تطوير الف من المستويات المصل المتغيرة من الانزيمات الأنين الامينيه المنقولة (ALT) ، اسبارتات الامينيه ترانسفيراز (AST) ، الفوسفاتيز القلوية (ALP) ؛ التغيرات في وقت البروز (PT); وتقييم المعدل الدولي الموحد (INR). كشفت دراسة عن التعبير الجيني من قبل qPCR زيادة في مستويات التعبير من الجينات المشاركة في موت الخلايا المبرمج, التهاب, وفي تطور أصابه الكبد. وقد لوحظ انحطاط منتشر من الخلايا الكبدية وتسلل للخلايا المناعية من قبل التقييم النسيجي. وقد تاكدت قابليه هذه المؤسسة للانعكاس من خلال استعاده مستويات البقاء والمصل لل ALT و AST و ALP بعد الزرع داخل الكلية لخلايا الكبد السليمة المتزامنة. ويقدم هذا النموذج بديلا موثوقا لنماذج الحيوانية المتاحة لدراسة الفيزيولوجيا المرضية لمؤسسه الفا وكذلك لتقييم إمكانات العلاج الجديد لمؤسسه الفا. كما ان استخدام نهجين مختلفين يجعل من الممكن دراسة الأثر المشترك للاصابه بالكبد الناجم عن الإصابات الجسدية والدوائية. استنساخ وجدوى الاجراء الحالي هو فائده اضافيه من النموذج.

Introduction

يتم تعريف فشل الكبد الحاد (الف) من قبل الجمعية الامريكيه لدراسة امراض الكبد والتطور السريع للاصابه الكبدية الحاده دون اي علامات الضرر السابقة ويتميز بضعف شديد من الاصطناعية, الأيض, والوظائف المزيلة للسموم من الكبد1. الف يختلف عن فشل الكبد المزمن حيث يحدث الفشل نتيجة لأصابه الكبد الناجمة علي مدي فتره طويلة من الزمن ومن فشل الكبد المزمن الحاد (aclf), حيث يحدث تلف مفاجئ في الكبد نتيجة لامراض الكبد المزمنة2,3,4. العلاج الوحيد المتاح لمؤسسه الفا هو زرع الكبد التقويمي ، أو قد يحدث الموت. ونظرا لنقص المتبرعين بالكبد ، فان معدل الوفاات في المرضي الذين يعانون من المؤسسة مرتفع جدا.

ولدراسة إمكانيات النهج العلاجية البديلة ولفهم الفيزيولوجيا المرضية لمؤسسه الفا علي نحو أفضل ، هناك حاجه إلى نماذج حيوانيه يمكن ان تعكس المؤسسة التي تحدث في البشر. العديد من نماذج الحيوانية المتاحة أصلا لديها عده عيوب. اثار اسيتامينوفين (APAP) من الصعب ان تتكاثر ولكن لديها أوجه التشابه الأقرب من حيث الزمانيه, السريرية, البيوكيميائية, والمعلمات المرضية. نماذج الحيوانية المستحثة apap كثيرا ما تواجه مشاكل بسبب وجود ميتهيموغلوبينيه الناجمة عن أكسده الهيموغلوبين بواسطة apap ووسيطه5,6,7. وهناك مشكله أخرى تتمثل في عدم وجود استنساخ تنعكس في ردود الجرعات غير المتوقعة ووقت الوفاة. نماذج الحيوانية الف المنتجة باستخدام الكربون رباعي كلوريد (سي سي4) لديها الفقراء استنساخ8،9،10،11. Concavalin a (يخدع a) و ليبوبليساكاريد (lps)-التي يسببها الف نماذج الحيوانية لا تعكس النمط السريري للمرض البشري ، علي الرغم من ان لديهم مزايا في دراسة أليات الخلوية المشاركة في امراض الكبد المناعة الذاتية وفي دراسة الانتان علي التوالي12،13،14،15. المثل ، ثيواسيتاميد (التاء) يتطلب أيضا التحول الإحيائي إلى المستقلب النشط ثيواسيتاميد سولفوكسيد ويظهر الأنواع الاختلافات16،17،18،19. د-galactosamine (د-غال) تنتج بعض التغيرات البيوكيميائية والايضيه والفسيولوجية مماثله للف ولكنها ليست قادره علي التعبير عن الحالة المرضية الفا كامله20،21،22،23. وكانت هناك محاولات قليله جدا للجمع بين اثنين أو أكثر من هذه الأساليب لتطوير نموذج لمؤسسه التنمية التي يمكن ان تعكس متلازمة الفا بطريقه أفضل13. ولذلك ، هناك حاجه إلى مزيد من الدراسات لتطوير نموذج يمكن ان تعكس المعلمات المرض ، وأفضل استنساخ ، ويوفر الوقت الكافي لدراسة اثار التدخل العلاجي.

في الدراسة الحالية ، تم إنشاء نموذج بديل للفا في الفئران من خلال الجمع بين اثار استئصال الكبد الجزئي (PHx) والجرعات المنخفضة من كاشف سميه كبديه. Apap له دور راسخ في التسبب في أصابه الكبد5,24,25. وهو مسكن يستخدم علي نطاق واسع وهو سام للكبد في الجرعات العلاجية بتشكيل الأيض السامة. والمعهد هو سبب العديد من الوفاات في البلدان المتقدمة النمو. الاصابه الجسدية الناجمة عن استئصال الكبد الجزئي يبدا تفعيل العمليات المختلفة التي تنطوي علي التهاب وكذلك تجديد الكبد. حقن العامل الكبدي APAP يسبب بيئة عدائيه في الكبد, منع انتشار الخلايا الكبدية. وهذا يقلل من فتره الإجهاد علي الحيوانية ، والتي عندما يقترن مع جرعات صغيره من السمية الكبدية ، يؤدي إلى استنساخ أفضل من الاجراء. لذلك ، باستخدام هذا النموذج ، تمت دراسة تاثير توافقي لنوعين من إصابات الكبد. وقد تمت دراسة المعلمات الفسيولوجية والبيوكيميائية لتوصيف النموذج الحيواني المطور لمؤسسه الفا. وقد تاكدت القابلية الناجحة لعمليه التحقق من الصحة من خلال زرع خلايا كبد الفئران الصحية المتزامنة.

Protocol

وقد تمت الموافقة علي الاجراء الموصوف أدناه من قبل لجنه الأخلاقيات الحيوانية المؤسسية للمعهد الوطني لعلم المناعة ، نيودلهي. الرقم المرجعي التسلسلي للموافقة هو IAEC # 355/14.

1-الاعداد

  1. التحضير للإجراءات الجراحية كما هو موضح سابقا من قبل Das B وآخرون26.
  2. استخدام 6-8 أسابيع من العمر الفئران Wistar الفطرية مع وزن الجسم من 200-250 غرام.
  3. منزل الماشية تحت شروط الرعاية الحيوانية القياسية وإطعامهم مع الفئران تشاو و حسب قبل وبعد الاجراء.
  4. عند أداء 70% PHx ، استخدم مزيج كوكتيل قياسي من هيدروكلوريد الكيتامين (100 ملغم/كغ من وزن الجسم) و اكسيليازين (10 ملغم/كغم من وزن الجسم) ، والذي يتم حقنه داخل الصفاق.
    ملاحظه: يمكن ان يكون نوع التخدير المستخدمة اثار ما بعد الجراحة علي الوفاات والاعتلال.
  5. اثناء عمليه زرع الخلايا ، استخدم ايزوفلوران التخدير (2-كلورو-2-(ديفلوميثوكسي)-1 ، 1 ، 1-تريفلورو-إيثان) لتقليل وقت استعاده الحيوانية بعد عمليه الزرع.
  6. الحث علي التخدير المستنشق والحفاظ عليه باستخدام نظام تخدير مخصص. الحفاظ علي تدفق الأكسجين في 4 لتر/دقيقه. للاستخدام التعريفي ايزوفلوذان في 4 ٪ ولاستخدام الصيانة 2-3 ٪ خلال العملية الجراحية.

2-إجراءات ما قبل الجراحة

  1. تخدير الجرذ عن طريق حقن خليط الكيتامين-اكسيليازين الموصوفة في الخطوة 3.1 داخل الصفاق. تاكيد التخدير الكامل عن طريق معسر اصبع القدم من الحيوانية. ويتم إجراءات أخرى فقط عندما لا يكون هناك منعكس دواسة.
  2. للوقاية من جفاف القرنية ، ضعي قطره العين التي تعتمد علي الكربوكسي ميثيل السليلوز علي كلتا العينين.
  3. تقييد الحيوانية تخدير إلى مجلس الجراحية باستخدام الشريط الأبيض. وضع الحيوانية مع الجانب البطني في مواجهه ، وضمان الفم علي الجانب البعيد من الشخص الذي يقوم بالعملية.
  4. أزاله الشعر من المنطقة العلوية اليمني الجراحية البطن باستخدام المقص الكهربائية.
  5. تطهير الموقع الجراحي من قبل ثلاثه الدعك بالتناوب من اليود البوفيدون و 70 ٪ الايثانول باستخدام منصات القطن المعقم في حركه دائريه.

3. استئصال الكبد الجزئي (PHx) لأزاله 70 ٪ من كتله الكبد

ملاحظه: اجراء العملية الجراحية بأكملها تحت بيئة معقمه في غطاء التيار الرقائقي. استخدام الاداات الجراحية العقيمة فقط للتقليل من خطر العدوى بعد الجراحة. أزاله 70 ٪ من كتله الكبد ، واسمه 70 ٪ استئصال الكبد الجزئي (70 ٪ PHx) ، تم تنفيذها علي النحو الموصوف من قبل c. ميتشل و h. Willenbring ، 200827.

  1. قبل بدء العملية الجراحية ، تاكد من تخدير كامل للحيوان عن طريق معسر أخمص قدميه. ويتم إجراءات أخرى فقط عندما لا يكون هناك منعكس دواسة.
  2. وضع علامة علي الجلد ليتم قطع تحت القص فقط ، عمودي علي xiphoid ، وموازيه لقفص الصدرية.
  3. وضع ورقه ثني معقمه وجود فتح حوالي 3 سم × 1 سم علي الجلد ملحوظ.
  4. اجراء شق عرضي من حوالي 2-3 سم علي طول خط ملحوظ مع مشرط. استخدام شفره الجراحية رقم 22. قم بازاله مرفق الجلد برفق إلى طبقه العضلات الاساسيه في المنطقة المجاورة للمنطقة المحفورة باستخدام نصائح قطنية مبلله معقمه.
  5. بعد ذلك ، اجراء شق عرضيه من خلال طبقه البريتوني فقط تحت عمليه الخنجري.
  6. مع مساعده من اثنين من القطن المالحة مبلله نصائح ، وفضح الفص الأيسر من الكبد عن طريق تطبيق ضغط لطيف علي الصدر. ضع طرفا واحدا من القطن علي المنطقة الحجاب الحاجز من الجزء المنقوش والطرف القطني الآخر أسفل المنطقة المحفورة لرفع فص الكبد.
  7. زلة 8-10 سم طويلة الخيوط النايلون العقيمة حلقه (حجم 4-0 ، 0.15 مم قطرها) حول الفص الكبد المكشوفة. خذ الحلقة إلى قاعده الفص بالقرب من الهلالي بمساعده ملقط التشريح المجهري أو براعم القطن المبللة.
  8. بمساعده حامل ابره الجراحة المجهرية والملقط المجهري ، اربط طرفي الحلقة ، ووضع العقدة علي مقربه من قاعده الفص قدر الإمكان لعزل الاوعيه الدموية وتقليل النزيف بعد أزاله فص الكبد. اربط عقدتين إضافيتين علي الجانب الآخر
  9. اتخاذ الاحتياطات اللازمة لعدم ربط عقده قريبه جدا من الاوعيه الدموية القريبة ، والتي قد تسبب خلاف ذلك انسداد وريدي (تضيق).
  10. استخدم مقص الجراحة المجهرية لقطع الفص المربوط فوق العقدة مباشره ، والذي يترك كتله مشوه من الانسجه تسمي الجذع الدماغي بدلا من الفص.
    ملاحظه: يتم تقسيم الكبد الفئران ، مثل تلك الفئران ، إلى أربعه فصوص متميزة: الفص المتوسط ، الفص الجانبي الأيمن ، الفص الجانبي الأيسر ، وفص العين ، الذي يمثل حوالي 40 ٪ ، 20 ٪ ، 30 ٪ ، و 7 ٪ من إجمالي كتله الكبد ، علي التوالي. يمكن أزاله اي مزيج من هذه الفصوص إلى المكوس 70 ٪ كتله الكبد. في الدراسة الحالية ، تمت أزاله الفص الوسطي والفصوص الجانبية اليسرى.
  11. حدد موقع الفص الوسيط بعناية دون اتلاف الجذع المتبقي من الفص الجانبي الأيسر. اسحبه برفق للخروج من تجويف البطن ، وعند قاعده الفص ، اربط خيط نايلون طوله 8 – 10 سم (الحجم 4 – 0) عقده كما ذكر سابقا. اربط عقدتين إضافيتين علي الجانب الآخر المكوس بعناية وأزاله الفص الوسيط المربوط مع اتخاذ جميع الاحتياطات المذكورة.
  12. بعد أزاله الفصوص ، يمكنك خياطه الصفاق باستخدام خيط قابل للامتصاص من الكروم 4 – 0 مع غرز مستمرة تليها خياطه الجلد بالخيط المتقطع.
  13. تطبيق اليود البوفيدون علي الجلد المحيطة الغرز لمنع العدوى.
  14. أزاله ورقه ثني وأزاله الحيوانية من مجلس الجراحة.

4. الرعاية بعد الجراحة في الحيوانية

  1. داخل الصفاق حقن الحيوانية مع جرعه من 12 ملغ سيفوتوكسيم المضادات الحيوية في 1 مل من محلول الجلوكوز 5 ٪ مع حقنه 1 مل لحمايته من خطر العدوى بعد الجراحة.
  2. أداره حقن تحت الجلد من ميلوكسيكام مسكن (1 مغ/كغ وزن الجسم) لتخفيف الم بعد الجراحة ومتابعته من قبل اثنين من جرعات أخرى, الحفاظ علي نظام جرعه واحده يوميا.
  3. منزل الكائنات التي تعمل تحت ظروف قياسيه من 12 ح ضوء/دوره الظلام ورصد علي فترات منتظمة.

5. حقن المخدرات في الكائنات الكبدية جزئيا للحث علي فشل الكبد

  1. بعد 24 ساعة بعد الجراحة ، عندما الكائنات قد تعافي بنجاح من 70 ٪ PHx ، قياس وزن الجسم من الحيوانية تليها الحقن.
  2. حقن 750 ملغ/كغ من وزن الجسم من APAP داخل الخلايا الكبدية جزئيا 24 ح بعد 70% PHx بعد الشفاء الناجح للحيوانات من العملية الجراحية. كرر الجرعة مره أخرى بعد 24 ساعة.
    ملاحظه: يتم إعطاء جرعتين من APAP داخل الصفاق إلى الحيوانية (اي ، 24 h و 48 h آخر الاجراء 70% PHx ، علي التوالي).
  3. في كل نقطه زمنيه بعد حقن APAP ، قياس وزن الجسم من الحيوانية يتعافى.
    ملاحظه: يتم حقن APAP (بيوتيمول) في الحيوانية باعتبارها 150 ملغ/مل محلول في 2 ٪ البنزيل الكحول.

6. زرع خلايا الكبد الصحية في نماذج الحيوانية الف

ملاحظه: لدراسة القابلية للانعكاس من الف في الفئران ، زرع الخلايا الكبدية الفئران الصحية السليمة بشكل كلي في الحيوانية التي يسببها الف معالجرعة الاولي من apap. في الدراسة الحالية ، لتوفير الوقت الكافي للخلايا المزروعة لتوجيه والتطعيم ، وقد تم زرع فقط بعد إعطاءالجرعة الاولي من apap. يتم عزل خلايا الكبد الفئران بواسطة بروتوكول نشرت لأول مره من قبل بيري والأصدقاء وآخرون28 وتكييفها في وقت لاحق في مختلف الدراسات الأخرى29,30,31 مع بعض التعديلات. لزرع الخلايا داخل النموذج الحيواني لمؤسسه الفا ، اتبع الخطوات المذكورة أدناه.

  1. وضع الفئران في بولي (ميثيل ميثاكريلات) غرفه لتحريض التخدير مع 4 ٪ ايزوفلونان و 4 لتر/دقيقه تدفق الأكسجين لجرذ من 250-350 ز وزن الجسم. التحقق من عمق التخدير بسبب عدم وجود ردود فعل دواسة عندما معسر اصبع القدم من الحيوانية.
  2. ضع الجرذ التخدير علي اللوحة الجراحية بحيث يواجه الجزء الجانبي الأيسر. الحفاظ علي التخدير عند 2 – 3% من استنشاق الايزوفلواني من خلال فم مناسب.
  3. حلق الجلد علي المنطقة الجانبية اليسرى وتعقيمها بمحلول اليود البوفيدون.
  4. اجراء شق عرضي علي المنطقة حليق من الجلد.
  5. جعل 1-2 سنتيمتر قطع في طبقه البريتوني لفضح الطحال.
  6. اخرج برفق الطحال من التجويف البريتوني ورفعه بمساعده اثنين من نصائح القطن مبلل.
  7. الحفاظ علي الخلايا (عاده 107 لكل الحيوانية) ليتم زرعها معلقه في 50 ΜL imdm الوسائط في حقنه الانسولين 1 مل مع ابره 29 G.
  8. يخترق الابره برفق في قشره الطحال ويطلق تعليق الخلية في الطحال في غضون 2 – 3 دقائق.
  9. بعد الانتهاء من زرع الخلايا ، بعناية إخراج الابره والداب منطقه ثقب ابره مع طرف القطن مبلله لتجنب تسرب من تعليق الخلية من الموقع.
  10. اغلق الصفاق والجلد بواسطة خياطه قابله للامتصاص بمقدار 4 – 0 مع الغرز المستمرة والمتقطعة علي التوالي.
  11. تطبيق محلول اليود البوفيدون علي الجلد في مكان الغرز لمنع العدوى في موقع تشغيلها.
  12. حقن داخل 1 مل حجم من 12 ملغ/مل من المضادات الحيوية (علي سبيل المثال ، سيفاوتوسيم) حل وجلد حقن مسكن (علي سبيل المثال ، meloxicam) 1 مغ/كغ وزن الجسم للحيوان كجزء من الرعاية بعد الجراحة. نقل الحيوانية إلى قفص يتعافى الدافئة.
  13. الحفاظ علي الحيوانية تعمل في عزله في ظل الظروف العادية من 12 ح الضوء/دوره الظلام حتى تلتئم الجروح الجراحية تماما. قد يستغرق هذا 3-4 أيام.

7-توصيف تنميه المؤسسة

  1. موت ببطء الحيوانية بجرعة زائده من محلول الكيتامين-اكسيليازين 2 ح بعد الجرعةالثانية من apap العلاج وجمع عينات الدم والانسجه.
  2. جمع المصل من الدم للدراسات البيوكيميائية32.
  3. عمليه عينات انسجه الكبد للدراسات النسيجية والجينات التعبير33،34،35.

النتائج

نسبه البقاء علي قيد الحياة في نماذج الحيوانية من الف
وقد تم توحيد الجرعة المثلي من APAP لتسبب الفا في تركيبه مع 70 ٪ PHx كما 750 مغ/كغ من وزن الجسم. بدا نظام العلاج 24 ساعة بعد 70 ٪ PHx ، عندما كانت الماشية قد تعافي تماما من الجراحة ، وتتكون من جرعتين APAP في فترات 24 ساعة. ولوحظت وفيات بمعدل 80 في...

Discussion

تطوير نموذج الحيوانية المناسبة لمؤسسه الفا هو أمر بالغ الاهميه لفهم أفضل لتولد المرض وتطور الف. كما يوفر نموذج الحيوانية المميز لمؤسسه الفا فرصه لتطوير ومحاكمه النهج العلاجية الجديدة ضد مؤسسه المؤسسة. وقد بذلت محاولات كثيره لتطوير نموذج ذي صله سريريا من الف6،...

Disclosures

وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.

Acknowledgements

وكان هذا العمل مدعوما بالمنحة الاساسيه التي تلقتها من أداره التكنولوجيا الحيوية ، حكومة الهند ، إلى المعهد الوطني للمناعة في نيودلهي.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Acetaminophen (Biocetamol)EG PharmaceuticalsNo specific Catalog Number (Local Procurement)
Alkaline Phosphatase Kit (DEA)Coral Clinical System, IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
Automated analyserTulip, Alto Santracruz, IndiaScreen Maaster 3000Biochemical analyser for liver functional test
Betadine (Povidon-Iodine Solution)Win-Medicare; IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
Biological safety cabinet (Class I)Kartos international; IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
Bright Field MicroscopeOlympus, JapanLX51
Cefotaxime (Taxim®)AlKem; Indiacefotaxime sodium injection, No specific Catalog Number (Local Procurement)
Cell StrainerSigma; USCLS431752
Collagenase Type IGibco by Life Technologies17100-017
Cotton BudsPure Swabs Pvt Ltd; IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
Drape SheetJSD Surgicals, Delhi, IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
DPX MountantSigma; US6522
Eosin Y solution, alcoholicSigma; USHT110132
ForcepsMajor Surgicals; IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
Gas Anesthesia SystemUgo Basile; Italy211000
GlucoseHimedia, IndiaGRM077
Hair removing cream (Veet®)Reckitt Benckiser, IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
Hematoxylin Solution, Mayer'sSigma; USMHS16
Heparin sodium saltHimedia; IndiaRM554
Hyaluronidase From Sheep TestesSigma; USH6254
I.V. Cannula (Plusflon)Mediplus, IndiaRef 1732411420
Insulin SyringesBD; USREF 303060
Isoflurane (Forane®)Asecia QueenboroughNo B506Inhalation Anaesthetic
Ketamine (Ketamax®)Troikaa Pharmaceuticals Ltd.Ketamine hydrochloride IP, No specific Catalog Number (Local Procurement)
Meloxicam (Melonex®)Intas Pharmaceuticals Ltd; IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
Micro needle holders straight &
curved		Mercian; EnglandBS-13-8
Micro needle holders straight &
curved		Mercian; EnglandBS-13-8
MicrotomeHisto-Line Laboratories, ItalyMRS3500
Nylon ThreadMighty; IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
ParaformaldehydeHimedia; IndiaGRM 3660
Percoll®GE Healthcare17-0891-01
Refresh Tears/Eyemist GelAllergan India Private Limited/Sun Pharma, IndiaP3060No specific Catalog Number
RPMIHimedia; IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
ScalpelMajor Surgicals; IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
ScissorsMajor Surgicals; IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
SGOT (ASAT) KITCoral Clinical System, IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
SGPT (ALAT) KITCoral Clinical System, IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
Shandon Cryotome E CryostatThermo Electron Corporation; USNo specific Catalog Number
SucroseSigma; USS0389
Surgical Blade No. 22La Medcare, IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
Surgical BoardLocally madeNo specific Catalog Number (Local Procurement)
Surgical White Tape3M India; India1530-1Micropore Surgical Tape
SuturesEthicon, Johnson & Johnson, IndiaNW 5047
Syringes (1ml, 26 G)Dispo Van; IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
Trimmer (Clipper)PhilipsNL9206AD-4 DRACHTEN QT9005
Weighing MachineBraunNo specific Catalog Number (Local Procurement)
William's E MediaHimedia; IndiaAT125
Xylazine (Xylaxin®)Indian Immunologicals LimitedSedative, Pre-Anaesthetic, Analgesic and muscle relaxant

References

  1. Polson, J., Lee, W. M. AASLD position paper: the management of acute liver failure. Hepatology. 41, 1179-1197 (2005).
  2. Chung, R. T., et al. Pathogenesis of liver injury in acute liver failure. Gastroenterology. 143, 1-7 (2012).
  3. Fyfe, B., Zaldana, F., Liu, C. The Pathology of Acute Liver Failure. Clinical Liver Disease. 22, 257-268 (2018).
  4. Lefkowitch, J. H. The Pathology of Acute Liver Failure. Advances in Anatomic Pathology. 23, 144-158 (2016).
  5. Mitchell, J. R., et al. Acetaminophen-induced hepatic necrosis. I. Role of drug metabolism. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 187, 185-194 (1973).
  6. Rahman, T. M., Hodgson, H. J. Animal models of acute hepatic failure. International Journal of Clinical and Experimental Pathology. 81, 145-157 (2000).
  7. Rahman, T. M., Selden, A. C., Hodgson, H. J. A novel model of acetaminophen-induced acute hepatic failure in rabbits. Journal of Surgical Research. 106, 264-272 (2002).
  8. Dashti, H., et al. Thioacetamide- and carbon tetrachloride-induced liver cirrhosis. European Surgical Research. 21, 83-91 (1989).
  9. Demirdag, K., et al. Role of L-carnitine in the prevention of acute liver damage-induced by carbon tetrachloride in rats. Journal of Gastroenterology and Hepatology. 19, 333-338 (2004).
  10. Sheweita, S. A., Abd El-Gabar, M., Bastawy, M. Carbon tetrachloride-induced changes in the activity of phase II drug-metabolizing enzyme in the liver of male rats: role of antioxidants. Toxicology. 165, 217-224 (2001).
  11. Sinicrope, R. A., Gordon, J. A., Little, J. R., Schoolwerth, A. C. Carbon tetrachloride nephrotoxicity: a reassessment of pathophysiology based upon the urinary diagnostic indices. American Journal of Kidney Diseases. 3, 362-365 (1984).
  12. Takada, Y., Ishiguro, S., Fukunaga, K. Large-animal models of fulminant hepatic failure. Journal of Artificial Organs. 6, 9-13 (2003).
  13. Takada, Y., et al. Increased intracranial pressure in a porcine model of fulminant hepatic failure using amatoxin and endotoxin. Journal of Hepatology. 34, 825-831 (2001).
  14. Leist, M., Wendel, A. A novel mechanism of murine hepatocyte death inducible by concanavalin A. Journal of Hepatology. 25, 948-959 (1996).
  15. Mizuhara, H., et al. Strain difference in the induction of T-cell activation-associated, interferon gamma-dependent hepatic injury in mice. Hepatology. 27, 513-519 (1998).
  16. Bruck, R., et al. Hypothyroidism minimizes liver damage and improves survival in rats with thioacetamide-induced fulminant hepatic failure. Hepatology. 27, 1013-1020 (1998).
  17. Chieli, E., Malvaldi, G. Role of the microsomal FAD-containing monooxygenase in the liver toxicity of thioacetamide S-oxide. Toxicology. 31, 41-52 (1984).
  18. Fontana, L., et al. Serum amino acid changes in rats with thioacetamide-induced liver cirrhosis. Toxicology. 106, 197-206 (1996).
  19. Peeling, J., et al. Cerebral metabolic and histological effects of thioacetamide-induced liver failure. American Journal of Physiology. 265, 572-578 (1993).
  20. Blitzer, B. L., et al. A model of fulminant hepatic failure in the rabbit. Gastroenterology. 74, 664-671 (1978).
  21. Diaz-Buxo, J. A., Blumenthal, S., Hayes, D., Gores, P., Gordon, B. Galactosamine-induced fulminant hepatic necrosis in unanesthetized canines. Hepatology. 25, 950-957 (1997).
  22. Maezono, K., Mawatari, K., Kajiwara, K., Shinkai, A., Maki, T. Effect of alanine on D-galactosamine-induced acute liver failure in rats. Hepatology. 24, 1211-1216 (1996).
  23. Patzer, J. F., et al. D-galactosamine based canine acute liver failure model. Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 1, 354-367 (2002).
  24. Newsome, P. N., Plevris, J. N., Nelson, L. J., Hayes, P. C. Animal models of fulminant hepatic failure: a critical evaluation. Liver Transplantation. 6, 21-31 (2000).
  25. Yoon, E., Babar, A., Choudhary, M., Kutner, M., Pyrsopoulos, N. Acetaminophen-Induced Hepatotoxicity: a Comprehensive Update. Journal of Clinical and Translational Hepatology. 4, 131-142 (2016).
  26. Das, B., et al. Intrasplenic Transplantation of Hepatocytes After Partial Hepatectomy in NOD.SCID Mice. Journal of Visualized Experiments. , (2018).
  27. Mitchell, C., Willenbring, H. A reproducible and well-tolerated method for 2/3 partial hepatectomy in mice. Nature Protocols. 3, 1167-1170 (2008).
  28. Berry, M. N., Friend, D. S. High-yield preparation of isolated rat liver parenchymal cells: a biochemical and fine structural study. Journal of Cell Biology. 43, 506-520 (1969).
  29. Fry, J. R., Jones, C. A., Wiebkin, P., Bellemann, P., Bridges, J. W. The enzymic isolation of adult rat hepatocytes in a functional and viable state. Analytical Biochemistry. 71, 341-350 (1976).
  30. Green, C. J., et al. The isolation of primary hepatocytes from human tissue: optimising the use of small non-encapsulated liver resection surplus. Cell Tissue Bank. 18, 597-604 (2017).
  31. Ismail, T., et al. Growth of normal human hepatocytes in primary culture: effect of hormones and growth factors on DNA synthesis. Hepatology. 14, 1076-1082 (1991).
  32. Greenfield, E. A. Sampling and Preparation of Mouse and Rat Serum. Cold Spring Harbor Protocols. 11, (2017).
  33. Walsh, K. M., Timms, P., Campbell, S., MacSween, R. N., Morris, A. J. Plasma levels of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and tissue inhibitors of metalloproteinases -1 and -2 (TIMP-1 and TIMP-2) as noninvasive markers of liver disease in chronic hepatitis C: comparison using ROC analysis. Digestive Diseases and Sciences. 44, 624-630 (1999).
  34. Thiele, N. D., et al. TIMP-1 is upregulated, but not essential in hepatic fibrogenesis and carcinogenesis in mice. Scientific Reports. 7, 714 (2017).
  35. Li, C. P., Li, J. H., He, S. Y., Li, P., Zhong, X. L. Roles of Fas/Fasl, Bcl-2/Bax, and Caspase-8 in rat nonalcoholic fatty liver disease pathogenesis. Genetics and Molecular Research. 13, 3991-3999 (2014).
  36. Kim, W. R., Flamm, S. L., Di Bisceglie, A. M., Bodenheimer, H. C. Serum activity of alanine aminotransferase (ALT) as an indicator of health and disease. Hepatology. 47, 1363-1370 (2008).
  37. Henry, L. Serum transaminase levels in liver disease. Journal of Clinical Pathology. 12, 131-137 (1959).
  38. Giannini, E. G., Testa, R., Savarino, V. Liver enzyme alteration: a guide for clinicians. Canadian Medical Association Journal. 172, 367-379 (2005).
  39. Hammam, O., et al. The role of fas/fas ligand system in the pathogenesis of liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma. Hepatitis Monthly. 12, 6132 (2012).
  40. Prystupa, A., et al. Activity of MMP-2, MMP-8 and MMP-9 in serum as a marker of progression of alcoholic liver disease in people from Lublin Region, eastern Poland. The Annals of Agricultural and Environmental Medicine. 22, 325-328 (2015).
  41. Sekiyama, K. D., Yoshiba, M., Thomson, A. W. Circulating proinflammatory cytokines (IL-1 beta, TNF-alpha, and IL-6) and IL-1 receptor antagonist (IL-1Ra) in fulminant hepatic failure and acute hepatitis. Clinical and Experimental Immunology. 98, 71-77 (1994).
  42. Schwabe, R. F., Brenner, D. A. Mechanisms of Liver Injury. I. TNF-alpha-induced liver injury: role of IKK, JNK, and ROS pathways. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 290, 583-589 (2006).
  43. Ataseven, H., et al. The levels of ghrelin, leptin, TNF-alpha, and IL-6 in liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma due to HBV and HDV infection. Mediators of Inflammation. 2006, 78380 (2006).
  44. Ambrosino, G., et al. Cytokines and liver failure: modification of TNF- and IL-6 in patients with acute on chronic liver decompensation treated with Molecular Adsorbent Recycling System (MARS). Acta Bio Medica Atenei Parmensis. 74, 7-9 (2003).
  45. Robert, A., Chazouilleres, O. Prothrombin time in liver failure: time, ratio, activity percentage, or international normalized ratio. Hepatology. 24, 1392-1394 (1996).
  46. Francavilla, A., et al. A dog model for acetaminophen-induced fulminant hepatic failure. Gastroenterology. 96, 470-478 (1989).
  47. Terblanche, J., Hickman, R. Animal models of fulminant hepatic failure. Digestive Diseases and Sciences. 36, 770-774 (1991).
  48. Tunon, M. J., et al. Rabbit hemorrhagic viral disease: characterization of a new animal model of fulminant liver failure. Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 141, 272-278 (2003).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

153APAPWistar

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved