دليل خطوة بخطوة لتخطيط كهربية البعوض

Summary

تفصل هذه المقالة بروتوكولا خطوة بخطوة للمخططات الكهربائية الناجحة ومنخفضة الضوضاء في العديد من أجناس البعوض ، بما في ذلك الإناث والذكور.

Abstract

أنثى البعوض هي أكثر الحيوانات فتكا على وجه الأرض ، حيث تودي بحياة أكثر من 1 مليون شخص كل عام بسبب مسببات الأمراض التي تنقلها عند الحصول على وجبة دم. لتحديد موقع مضيف يتغذى عليه ، يعتمد البعوض على مجموعة واسعة من الإشارات الحسية ، بما في ذلك البصرية والميكانيكية والحرارية والشمية. تفصل الدراسة تقنية ، تخطيط كهربية (EAG) ، تسمح للباحثين بتقييم ما إذا كان البعوض يمكنه اكتشاف المواد الكيميائية الفردية ومزيج المواد الكيميائية بطريقة تعتمد على التركيز. عندما تقترن هذه التقنية بكروماتوغرافيا الغاز (GC-EAG) ، فإنها تسمح بتعريض الهوائيات لخليط كامل من فراغ الرأس / معقد وتحدد المواد الكيميائية الموجودة في العينة ذات الاهتمام ، والتي يمكن للبعوض اكتشافها. ينطبق هذا على روائح جسم المضيف وكذلك باقات الأزهار النباتية أو الروائح الأخرى ذات الصلة بيئيا (على سبيل المثال ، روائح مواقع وضع البيض). هنا ، وصفنا بروتوكولا يسمح بفترات طويلة من وقت استجابة التحضير وينطبق على كل من إناث وذكور البعوض من أجناس متعددة ، بما في ذلك بعوض الزاعجة و Culex و Anopheles و Toxorhynchite . نظرا لأن حاسة الشم تلعب دورا رئيسيا في التفاعلات بين البعوض والمضيف وبيولوجيا البعوض بشكل عام ، يمكن ل EAGs و GC-EAG الكشف عن مركبات ذات أهمية لتطوير استراتيجيات جديدة لمكافحة ناقلات الأمراض (مثل الطعوم). مع استكمال المقايسات السلوكية ، يمكن تحديد التكافؤ (على سبيل المثال ، جاذب ، طارد) لكل مادة كيميائية.

Introduction

البعوض هو أكثر الكائنات فتكا على وجه الأرض ، حيث يودي بحياة أكثر من مليون شخص سنويا ويعرض أكثر من نصف سكان العالم لخطر التعرض لمسببات الأمراض التي ينقلونها ، بينما يلدغ¹. تعتمد هذه الحشرات على مجموعة واسعة من الإشارات (أي الحرارية والبصرية والميكانيكية والشمية والسمعية) لتحديد موقع مضيف يتغذى عليه (نباتيا وحيوانيا) ، للتزاوج ووضع البيض ، وكذلك لتجنب الحيوانات المفترسة في كل من مراحل اليرقات والبالغين ^2,3. من بين هذه الحواس ، يلعب حاسة الشم دورا مهما في السلوكيات المذكورة أعلاه ، لا سيما للكشف المتوسط إلى بعيد المدى عن جزيئات الرائحة ^2,3. يتم الكشف عن الروائح المنبعثة من مضيف أو موقع وضع البيض بواسطة مستقبلات شمية محددة مختلفة (على سبيل المثال ، GRs ، ORs ، IRs) الموجودة على خرطوم ملامسة البعوض ، الترسي ، والهوائيات^2،3.

نظرا لأن حاسة الشم هي عنصر أساسي في سلوكيات البحث عن المضيف (النبات والحيوان) والتزاوج ووضع البيض ، فإنها تشكل بالتالي هدفا مثاليا للدراسة لتطوير أدوات جديدة لمكافحة البعوض⁴. البحث عن المواد الطاردة (على سبيل المثال ، DEET ، IR3535 ، picaridin) والطعوم (على سبيل المثال ، إغراء الإنسان BG الحارس) غزير الإنتاج⁵ ، ولكن بسبب التحديات الحالية في مكافحة البعوض (على سبيل المثال ، مقاومة المبيدات الحشرية ، الأنواع الغازية) ، من الضروري تطوير طرق مكافحة فعالة جديدة مستنيرة ببيولوجيا البعوض.

تم استخدام العديد من التقنيات (مثل مقياس الشم ، ومقايسات الهبوط ، والفيزيولوجيا الكهربية) لتقييم النشاط الحيوي للمركبات أو مخاليط المركبات في البعوض. من بينها ، يمكن استخدام electroantennography (أو electroantennograms (EAGs)) لتحديد ما إذا كان يتم الكشف عن الروائح بواسطة هوائيات البعوض. تم تطوير هذه التقنية في البداية بواسطة Schneider⁶ وتم استخدامها في العديد من أجناس الحشرات المختلفة منذ ذلك الحين ، بما في ذلك العث⁷،^8،9 ، النحل الطنان^10،11 ، نحل العسل¹²،¹³ ، وذباب الفاكهة^14،15 على سبيل المثال لا الحصر. كما تم استخدام تخطيط كهربية الأنتنانت باستخدام بروتوكولات مختلفة ، بما في ذلك هوائيات مفردة أو متعددة في البعوض¹⁶،¹⁷،¹⁸،¹⁹،20،²¹،^22،23،^24،25.

البعوض حشرات صغيرة وحساسة نسبيا مع هوائيات رقيقة إلى حد ما. في حين أن إجراء EAGs على الحشرات الكبيرة مثل العث أو النحل الطنان أمر سهل نسبيا بسبب حجمها الأكبر وهوائياتها الأكثر سمكا ، فإن إجراء EAGs في البعوض قد يكون أمرا صعبا. على وجه الخصوص ، يعد الحفاظ على نسبة إشارة إلى ضوضاء جيدة وإعداد سريع الاستجابة متطلبين رئيسيين لاستنساخ البيانات وموثوقيتها.

يقدم الدليل التفصيلي لمجموعات EAG منخفضة الضوضاء المقترحة هنا حلولا مباشرة لهذه القيود ويجعل هذا البروتوكول قابلا للتطبيق على العديد من أنواع البعوض من أجناس مختلفة ، بما في ذلك الزاعجة والأنوفيليس وكوليكس وتوكسورينكيتس ، ويصف التقنية لكل من الإناث والذكور. يوفر تخطيط كهربية الأنتل طريقة سريعة وموثوقة لفحص وتحديد المركبات النشطة بيولوجيا التي يمكن بعد ذلك الاستفادة منها في تطوير الطعم بعد تحديد التكافؤ باستخدام المقايسات السلوكية.

Protocol

1. إعداد محلول ملحي

1. تحضير المياه المالحة مقدما وتخزينها في الثلاجة.
2. اتبع Beyenbach و Masia²⁶ لإعداد الحل.
   ملاحظة: وصفة المالحة في mM: 150.0 كلوريد الصوديوم ، 25.0 HEPES ، 5.0 الجلوكوز ، 3.4 KCl ، 1.8 NaHCO₃ ، 1.7 CaCl 2 ، و 1.0 MgCl₂. يتم ضبط الرقم الهيدروجيني إلى 7.1 مع 1 M NaOH. لا تضيف الجلوكوز أو السكروز إلى التحضير في هذا الوقت لزيادة تخزين الرف. أضف الكمية المطلوبة إلى المحلول الملحي مباشرة قبل تشغيل EAGs (حوالي 50 مل لكل تجربة).

2. تحضير الرائحة وتخزينها

1. تحضير مخاليط الروائح أو التخفيفات المركبة المفردة مسبقا في قوارير كهرمانية سعة 1.5 مل وتخزينها في درجة حرارة -20 درجة مئوية لمنع تدهور المركب.
   ملاحظة: تعتمد التركيزات على الاختبار الذي سيتم إجراؤه. تستخدم 0.1٪ أو 1٪ بشكل شائع لتحديد ما إذا كان يمكن اكتشاف مركب أم لا. بالنسبة لمنحنى الاستجابة للجرعة ، قم بإعداد التخفيفات التسلسلية لمادة كيميائية معينة واختبرها من تلك التركيزات الأدنى إلى الأعلى.
2. تحضير التخفيفات في الماء أو الإيثانول أو الهكسان أو زيت البارافين أو الزيوت المعدنية ، اعتمادا على قابلية ذوبان المادة الكيميائية المختبرة.
3. تأكد من تحضير عنصر تحكم في المذيبات (قارورة تحتوي على المذيب فقط) للتجربة.
4. قم بإزالة الروائح من الفريزر قبل 30 دقيقة من بدء التجارب للسماح لها بالذوبان. دوامة كل قارورة قبل استخدامها لخلط جيدا الكيميائية والمذيب.
5. ماصة 10 ميكرولتر من المحلول على قطعة من ورق الترشيح (0.5 سم × 2 سم) محملة داخل حقنة زجاجية ملصقة أو ماصة باستور.
6. قم بتحميل كل مركب أو خليط في ماصة أو حقنة باستور محددة لمنع التلوث.
   ملاحظة: قم بالتحميل قبل 10 دقائق من بدء التجربة حتى تنتشر الرائحة في المحقنة ولكن ليس لفترة أطول لمنع التدهور. دع ماصة باستور أو المحقنة تظل مغطاة في هذا الوقت للسماح بانتشار جيد للمادة الكيميائية قبل بدء التجربة.
7. بعد كل تشغيل ل EAG ، تخلص من قطعة ورق الترشيح واستبدلها بأخرى جديدة لمنع الورق من النقع الزائد والمخاطرة بانسداد الإبرة. استبدل الإبر بانتظام (كل 10 أشواط).

3. فصل البعوض

1. عزل البعوض في يوم التجارب.
2. استخدم البعوض الذي لا يقل عمره عن 6 أيام في يوم التجارب لزيادة فرص تزاوج الإناث لتعزيز استجابتها للروائح المرتبطة بالمضيف.
   ملاحظة: اضبط عمر البعوض في وقت الاختبار حسب المشروع. تحقق من الحالة الفسيولوجية ووائمها (على سبيل المثال ، تغذية الدم ، الجوع ، لم يسبق إطعامها ، إلخ).
3. تجويع البعوض لمدة تصل إلى 12 ساعة (أي عدم الوصول إلى السكر) لزيادة دوافعهم وحساسيتهم.
4. ضع حاوية البعوض في الثلاجة (4 درجات مئوية) حتى تتوقف عن الطيران حتى يمكن بسهولة نقل الأفراد بدقة إلى أكواب مفردة بالملقط.
   ملاحظة: يمكن إخماد الأنواع ذات القدرة العالية على تحمل البرد باستخدام وسادة ذبابة CO₂ . تأكد من أن البعوض لا يبقى عليه لفترة طويلة لمنع الجفاف ، مما يقلل من استجابة إعداد EAG البعوض.
5. قم بتخزين الأكواب التي تحتوي على بعوض واحد في درجة حرارة الغرفة قبل إجراء EAGs وتخلص من أي بعوض قد لا يتم استخدامه خلال النهار.

4. حامل القطب وإعداد الشعيرات الدموية

1. سحب الشعيرات الدموية وتحضيرها وتخزينها
   1. استخدم الشعيرات الدموية البورسليكات مع خيوط (ID: 0.78 مم ، OD: 1 مم). اسحبهم حسب المعدات²⁷.
      ملاحظة: قم بتخزين الشعيرات الدموية المسحوبة في طبق بتري. ضع طبق بتري على قطع من الشمع أو طين النمذجة غير المعطر لمنعها من الحركة والكسر.
   2. قبل إجراء تجربة EAG ، قم بكسر طرف الشعيرات الدموية 2 برفق باستخدام ملقط تحت المجهر.
      ملاحظة: تأكد من أن أحدهما أكبر قليلا من الآخر ليناسب إما الرقبة (الشعيرات الدموية الأكبر) أو أطراف الهوائيات (الشعيرات الدموية الأصغر). تأكد من أن القطع نظيف مع عدم وجود صدع على جدار الشعيرات الدموية. هذا يتطلب الصبر والممارسة.
   3. إذا كانت لا تزال سليمة ، فأعد استخدام هذه الشعيرات الدموية بعد شطفها بالماء غير المتأين (DI) بعد انتهاء التجربة. قم بإزالة الماء الزائد عن طريق وضع مناديل تنظيف برفق على الحافة. ضع مرة أخرى في طبق بتري التخزين. إذا كان الطرف ملتويا ، فتخلص من الشعيرات الدموية.
2. حامل القطب الكهربائي وتركيب الشعيرات الدموية
   1. قم بتسمية حاملي الأقطاب الكهربائية على أنهما "تسجيل" و "مرجع" باستخدام قطع من شريط المختبر بألوان مختلفة. هذا سوف يساعد في توجيه تصاعد رأس البعوض والأقطاب الكهربائية.
   2. تأكد من أن حوامل الأقطاب الكهربائية واضحة من الداخل وعدم وجود حطام البورسليكات.
   3. الكلورة: انقع الأسلاك الفضية لحاملات الأقطاب الكهربائية في مبيض نقي لمدة 5 دقائق تقريبا. تتحول الأسلاك من الرمادي الفاتح اللامع إلى الرمادي الداكن غير اللامع.
   4. قم بفك السدادة المطاطية واملأ الجزء الداخلي من الشعيرات الدموية بمحلول ملحي بنسبة 10٪ باستخدام إبرة 20 جرام.
   5. ملء الشعرية البورسليكات مع محلول ملحي باستخدام حقنة. تأكد من عدم وجود فقاعات في حامل القطب ولا الشعيرات الدموية المسحوبة.
      ملاحظة: لتقليل فرص وجود فقاعات في الشعيرات الدموية ، استمر في دفع المحلول الملحي في الشعيرات الدموية أثناء سحب الإبرة برفق واستخدم الشعيرات الدموية مع خيوط. من الممكن تحميل الشعيرات الدموية بمحلول يتكون من هلام كهربائي 1: 3 ومحلول ملحي. يمكن أن يساعد ذلك في منع تبخر المحلول الملحي ويمكن أن يكون مفيدا بشكل خاص عند تعلم وممارسة EAGs ، حيث سيحتاج المجرب إلى مزيد من الوقت لإكمال الخطوات المختلفة.
   6. بعد النقع ، شطف الأسلاك الفضية بماء DI وأدخلها في الشعيرات الدموية. تأكد من أن طرف السلك أقل من 1 مم من طرف الشعيرات الدموية. تأكد من أن الشعيرات الدموية تمر بالحلقة المطاطية داخل حامل القطب دون أن تنكسر. شد السدادة المطاطية برفق. تحقق من عدم وجود فقاعات هواء.
   7. استخدم الشعيرات الدموية مع الفتحة الأوسع على حامل القطب المرجعي (الرقبة) ، والفتحة الأصغر على حامل قطب التسجيل (الهوائيات).
   8. اترك حاملي الأقطاب الكهربائية المثبتين على منديل تنظيف مبلل لمنع الطرف من الجفاف حتى يصبح جاهزا لتركيب الرأس.

5. إعداد منصة EAG (الشكل 1)

1. تأكد من أن طاولة الهواء مرتفعة ، وأنه لا يوجد انسداد في شركة الطيران. تأكد من أن خزان الهواء الطبي لا يزال ممتلئا لتجنب تغييره في منتصف التجربة. تأكد من وجود فقاعات في جهاز الترطيب.
2. نظام توصيل الهواء والنبض
   1. قم بتشغيل خزان غاز الهواء الطبي.
   2. تحقق من مستوى اثنين من مقاييس التدفق.
      ملاحظة: يجب أن يكون مقياس التدفق الذي يتحكم في تيار الهواء الرئيسي أثناء التحضير أثناء التجربة بأكملها عند 140 مل / دقيقة ويجب أن يقرأ الآخر المتعلق بنبض الرائحة 15 مل / دقيقة.
3. في حالة القيام ب GC-EAD ، قم بتشغيل الجهاز وخزانات الغاز وإنشاء / تحميل الملف / الطريقة.
4. قم بتشغيل أجهزة الكمبيوتر والتطبيقات البرمجية ومصدر طاقة الصمام وتحقق من اتصال الإنترنت حتى يعمل تطبيق البرنامج.
   1. تطبيق برمجي: يمكن كتابة نص قصير لتوصيل النبض.
   2. برنامج EAG: استخدم أي برنامج للفيزيولوجيا الكهربية.
   3. قم بتنفيذ المعلمات في البرنامج (على سبيل المثال ، مكبر الصوت ، ومدة التسجيل ، ومدة النبضات ، وما إلى ذلك).
5. قم بتوصيل نبضة تحكم للتحقق من أن الصمام الذي يوصل النبضات يعمل.
6. اضبط مصدر الطاقة على 5.2 فولت. تحقق من معلمات مكبر الصوت.
   ملاحظة: المعلمات المستخدمة للبيانات المعروضة هنا هي: مرشح قطع منخفض قدره 0.1 هرتز؛ مرشح قطع عالي 500 هرتز ؛ كسب x100.

6. إعداد رأس البعوض وتركيبه (الشكل 2)

1. ضع صفيحة من الألومنيوم على الثلج وضع قطعة من التنظيف الرطب فوقها.
2. ضع قطعة صغيرة من هلام القطب في الزاوية.
3. ضع كوب البعوض على الثلج واترك البعوضة تبرد لبضع دقائق ، أو حتى تتوقف عن الطيران.
   ملاحظة: بعض الأنواع مقاومة للبرد وقد تتطلب تخديرا سريعا فوق منصة ذبابة CO₂ للنزول. أقل البعوض يبقى على أي منهما ، كان ذلك أفضل.
4. ضع البعوضة على ظهرها وقم بقص طرف كل هوائي (جزء صغير فقط من الجزء الأخير) بمقص صغير.
5. استخدم ملقط لسحب البعوض بجوار هلام القطب الكهربائي واغمس طرف كل هوائي برفق في الجل. تجنب غمس أكثر من مجرد الجزء الأخير في جل القطب.
6. باستخدام ملقط ، اسحب هوائيات البعوض للخارج مع الحفاظ عليها بجانب بعضها البعض. دعهم يخرجون معا من الجل. تأكد من أن الهوائيات لا تلمس سطح مناديل التنظيف ، وإلا فقد تنفصل.
7. ضع البعوضة على جانبها واقطع الرأس باستخدام مقص صغير أو شفرة حلاقة.
   ملاحظة: بمجرد تقطيع الرأس، انتقل بسرعة إلى الخطوات التالية وإلى جهاز EAG لبدء التسجيلات. يجب أن يظل التحضير مستجيبا لمدة 30 دقيقة تقريبا.
8. خذ القطب المرجعي وقم بعمق الطرف في الجل برفق. ابق على اتصال مع أنسجة الرقبة واترك الرأس يلتصق بها.
9. حرك حوامل الأقطاب الكهربائية تحت مجهر EAG وشاهدها من خلال المجهر لوضع قطب الرأس (أي المرجعي) على جهاز مناولة دقيقة. تأكد من أن الهوائيات في المركز.
10. أمسك قطب التسجيل ، ضعه أمام أطراف الهوائيات. حركه وقم بمحاذاته في أقرب وقت ممكن من النصائح باستخدام micromanipulator. باستخدام المجهر ، حرك طرف قطب التسجيل نحو الهوائيات.
11. قم بتوصيل كلا حاملي الأقطاب الكهربائية بمكبر الصوت قبل إدخال الأطراف لمنعهما من التحرك بعد الإدخال.
12. أدخل أطراف الهوائيات في قطب التسجيل. تأكد من أنها تلامس فقط المحلول الملحي وهلام القطب الكهربائي وتكون مرئية بالشفافية من خلال الشعيرات الدموية. يدخل الهوائي من خلال "تأثير الشفط".
13. اضبط موضع الرأس والنصائح بالملقط تحت المجهر ، إذا لزم الأمر.
14. ضع أنبوب الطيران بالقرب من مستحضر رأس البعوض (المسافة: 1 سم).
    ملاحظة: إذا سقط الرأس ، فارجع إلى محطة التشريح وأعد تركيب الرأس أو قم بإعداد واحدة جديدة إذا فقد أو إذا مر أكثر من 5 دقائق منذ قطع الرأس. يعد الاتصال الجيد بين الشعيرات الدموية والرقبة / الهوائيات أمرا ضروريا للضوضاء المنخفضة والتسجيل الموثوق. من الناحية المثالية ، ستكون أطراف الهوائيات على بعد أقل من 1 مم من سلك قطب التسجيل بمجرد إدخالها.
15. قم بإيقاف تشغيل مصدر الضوء ، إذا تم استخدامه.
16. ضع خط الفراغ بالقرب من مستحضر رأس البعوض (المسافة: 20 سم) ومحاذاة مع شركة الطيران الرئيسية.
    ملاحظة: سيساعد الفراغ على إزالة المواد الكيميائية المحيطة بإعداد الرأس بعد التحفيز ، مما قد يؤدي إلى استجابات EAG بعد تطبيق النبضات.

7. التسجيلات

1. بعد إدخال أطراف الهوائيات ، قم بتشغيل مكبر الصوت ومخفض الضوضاء. راقب إشارة خط الأساس وتأكد من أنها ليست صاخبة.
   ملاحظة: لاحظ ما إذا كانت هناك تذبذبات كبيرة في الإشارة الكهربائية. اضبط موضع الرأس وأطراف الهوائيات حسب الحاجة حتى تصبح الإشارة نظيفة. استخدم مشابك التمساح لتأريض أي شيء يدخل ضوضاء إلى قفص فاراداي أو طاولة الهواء. تعد إشارة خط الأساس التي تقل سعتها عن 0.01 مللي فولت مثالية لاكتشاف استجابات EAG الدقيقة وتمييزها.
2. بمجرد أن يكون مستوى الضوضاء مرضيا ، أدخل أول حقنة رائحة لاختبارها في فتحة شركة الطيران.
3. أغلق قفص فاراداي. لا تبقى أمام التحضير ، للحد من الضوضاء.
4. انقر فوق تسجيل على برنامج EAG.
5. قم بتوصيل النبضة (النبضات) باستخدام تطبيق البرنامج.
   ملاحظة: سيختلف عدد النبضات ومدتها حسب التجارب. هنا ، تم استخدام نبضات واحدة 1 ثانية لكل رائحة. تم فصل الروائح بمقدار 45 ثانية.
6. لاحظ استجابة هوائيات البعوض في دفتر ملاحظات المختبر.
   ملاحظة: إذا تم اكتشاف الرائحة بواسطة هوائيات البعوض ، ملاحظة انحراف واضح في الإشارة (انظر الشكل 3 أ).
7. تابع الرائحة أو التركيز التالي. لا تنس أن تختار عرض الروائح بشكل عشوائي ما لم يتم إجراء منحنى استجابة الجرعة.
   ملاحظة: يجب استخدام عنصر تحكم سلبي وتحكم إيجابي في التجارب. سيضمن ذلك أن الاستجابات التي لوحظت هي بالفعل استجابات شمية وليست بسبب الضوضاء الميكانيكية أو الكهربائية.
8. في نهاية التسجيل ، قم بتطبيق عنصر تحكم إيجابي للتحقق من أن الهوائيات لا تزال مستجيبة.
   ملاحظة: استخدم 0.1٪ أو 1٪ بنزالديهايد لأن جميع أنواع البعوض التي تم اختبارها حتى الآن كانت مستجيبة لهذا المركب.
9. المضي قدما في إعداد البعوض المقبل.

8. التنظيف

1. قم بإيقاف تشغيل مكبر الصوت ومخفض الضوضاء وشركة الطيران والكمبيوتر.
2. أعد الروائح إلى الفريزر.
3. قم بإزالة أوراق الترشيح من المحاقن الزجاجية ونظفها بالإيثانول بنسبة 100٪ إذا كانت البقايا مرئية على الجدران. اتركيه يجف على منديل التنظيف طوال الليل.
4. نظف حوامل الأقطاب الكهربائية بماء DI لإزالة أي أثر محتمل للملح. جفف برفق على قطعة من مناديل التنظيف.
5. ضع بقايا البعوض في الثلاجة وتخلص منها بعد 24 ساعة.
   ملاحظة: إذا كنت تعمل مع البعوض المصاب، فاتبع متطلبات السلامة في مؤسستك.

9. تحليل البيانات

1. قم بقياس استجابات مجموعة EAG يدويا أو تلقائيا.
   ملاحظة: يتم قياس سعة EAG (-mV) هنا. متوسط إذا تم تطبيق نبضات متعددة لكل مركب. اعتمادا على البرنامج المستخدم ، يمكن اكتشاف EAGs وقياسها تلقائيا. ومع ذلك ، من الضروري فحص كل استجابة على حدة للتحقق من شكل الاستجابة وتقييم الاستجابة المحتملة المرحلة والمتأخرة وما إلى ذلك. تتماشى استجابة EAG المثالية مع النبض ، وتظهر انحرافا واضحا ، ويمكن تكرارها بين مستحضرات البعوض (الشكل 3).
2. قدم البيانات الأولية لإظهار الحد الأدنى من التباين وإشارة الضوضاء المنخفضة والاستجابات الواضحة (الشكل 3B).
   ملاحظة: يمكن أيضا تسوية البيانات (على سبيل المثال ، درجة Z). يمكن طرح قيمة التحكم السلبية (مثل الزيوت المعدنية) (أي خط الأساس) من الاستجابة ، وإذا لم يكن الأمر كذلك ، فيجب تقديمها في الأرقام. يجب أيضا تقديم تحكم إيجابي.
3. إجراء التحليل الإحصائي باستخدام أي برنامج إحصائي²⁸.

النتائج

يعد التصوير الكهربائي أداة قوية لتحديد ما إذا كان يتم اكتشاف مادة كيميائية أو مزيج من المواد الكيميائية بواسطة هوائي الحشرات. يمكن استخدامه أيضا لتحديد عتبة الكشف عن مادة كيميائية معينة باستخدام زيادة تدريجية في التركيز (أي استجابة منحنى الجرعة ، الشكل 4B). علاوة على ذلك ، ?...

Discussion

تتأثر السلوكيات بوساطة حاسة الشم بالعديد من العوامل ، بما في ذلك الفسيولوجية (على سبيل المثال ، العمر ، الوقت من اليوم) والبيئية (مثل درجة الحرارة والرطوبة النسبية)³⁰. وبالتالي ، عند إجراء EAGs ، من الضروري استخدام الحشرات التي هي في نفس الحالة الفسيولوجية (أي مراقبة العمر ، والجو...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Air table Clean Bench	TMC	https://www.techmfg.com/products/labtables/cleanbench63series/accessoriess	Noise reducer
Analog-to-digital board	National Instruments	BNC-2090A
Benchtop Flowbuddy Complete	Genesee Scientific	59-122BC	To anesthesize mosquitoes
Borosillicate glass capillary	Sutter Instrument	B100-78-10	To make the recording and references capillaries
Chemicals	Sigma Aldrich	Benzaldehyde: 418099-100 mL; Butyric acid: B103500-100mL; 1-Hexanol: 471402-100mL; Mineral oil: M8410-1L	Chemicals used for the experiments presented here
CO2	Airgas or Praxair	N/A	To anesthesize mosquitoes
Cold Light Source	Volpi	NCL-150
Disposable syringes	BD	1 mL (309628)  / 3 mL (309657)
Electrode cables	World Precision Instruments	5371
Electrode gel salt free	Parkerlabs	12-08-Spectra-360
Faraday cage	TMC	https://www.techmfg.com/products/electric-and-magnetic-field-cancellation/faradaycages	Noise reducer
Flowmeters	Bel-art	65 mm (H40406-0010) / 150 mm (H40407-0075)	One of each
GCMS vials and caps	Thermo-fisher scientific	2-SVWKA8-CPK	To prepare odorant dilutions
Glass syringes (Fortuna)	Sigma Aldrich	Z314307	For odor delivery to the EAG prep
Humbug	Quest Scientific	http://www.quest-sci.com/	Noise reducer
2 mm Jack Holder, Narrow, 90 deg., With Wire	A-M Systems	675748	Electrode holder
Magnetic bases	Kanetec	MB-FX	x 2
MATLAB + Toolboxes	Mathworks	https://www.mathworks.com/products/matlab.html	For delivering the pulses
Medical air	Airgas or Praxair	N/A	For main airline
Microscope	Nikkon	SMZ-800N
Micromanipulators Three-Axis Coarse/Fine Compact Micromanipulator	Narishige	MHW-3	x 2
Microelectrode amplifier with headstage	A-M Systems	Model 1800
Mosquito rearing supplies	Bioquip	https://www.bioquip.com/Search/WebCatalog.asp
Needles	BD	25G (305127) / 21G (305165)
Pasteur pipettes	Fisher Scientific	13-678-6A	For odor delivery to the EAG prep
PTFE Tubing of different diameters	Mc Master Carr	N/A	To connect solenoid valve, flowmeter, airline ect.
30V/5A DC Power Supply	Dr. Meter	PS-305DM
R version 3.5.1	R project	https://www.r-project.org/	For data analyses
Relay for solenoid valve	N/A	Custom made
Silver wire 0.01”	A-M Systems	782500
Solenoid valve (3-way)	The Lee Company	LHDA0533115H
WinEDR software	Strathclyde Electrophysiology Software	WinEDR V3.9.1	For EAG recording
Whatman paper	Cole Parmer	UX-06648-03	To load chemical in glass syringe / Pasteur pipette