تحسين نموذج القوارض من نقص تروية عضلة القلب وإصابة التروية

Summary

تم تحسين نموذج نقص تروية عضلة القلب لقلب الفئران باستخدام متراجع ذاتي الصنع ، وأنبوب كلوريد البولي فينيل ، وطريقة عقد فريدة من نوعها. أظهر مخطط كهربية القلب وكلوريد ثلاثي فينيل تترازوليوم والتلطيخ النسيجي ونتائج تحليل البقاء على قيد الحياة في المئة أن مجموعة النماذج المحسنة لديها معدلات نجاح وبقاء أعلى من مجموعة النماذج الموجودة بالفعل.

Abstract

يسبب نقص تروية عضلة القلب وإصابة التروية (MIRI) ، الناجمة عن أمراض القلب التاجية (CHD) ، تلفا في الخلايا العضلية القلبية. علاوة على ذلك ، تشير الأدلة إلى أن العلاج بالتخثر أو التدخل التاجي الأولي عن طريق الجلد (PPCI) لا يمنع إصابة التروية. لا يوجد حتى الآن نموذج حيواني مثالي ل MIRI. تهدف هذه الدراسة إلى تحسين نموذج MIRI في الفئران لجعل الجراحة أسهل وأكثر جدوى. تم تطوير طريقة فريدة لإنشاء MIRI باستخدام أنبوب ناعم خلال خطوة رئيسية من فترة نقص التروية. لاستكشاف هذه الطريقة ، تم تقسيم ثلاثين فأرا عشوائيا إلى ثلاث مجموعات: مجموعة صورية (n = 10) ؛ مجموعة النماذج التجريبية (n = 10) ؛ ومجموعة النماذج الحالية (n = 10). تتم مقارنة نتائج تلطيخ كلوريد ثلاثي فينيل تيترازوليوم ، وتخطيط القلب الكهربائي ، والنسبة المئوية للبقاء على قيد الحياة لتحديد دقة ومعدلات البقاء على قيد الحياة للعمليات. استنادا إلى نتائج الدراسة ، تم التوصل إلى أن طريقة الجراحة المحسنة ترتبط بمعدل بقاء أعلى ، وشريحة ST-T مرتفعة ، وحجم احتشاء أكبر ، والذي من المتوقع أن يحاكي أمراض MIRI بشكل أفضل.

Introduction

مرض القلب الإقفاري هو السبب الرئيسي للوفيات في جميع أنحاء العالم. وفيات القلب والأوعية الدموية لها دور حاسم في الصحة العامة وعلم الأوبئة على الصعيد العالمي¹. يلعب نقص تروية عضلة القلب وإصابة التروية وظائف أساسية في مرض نقص تروية القلب ، والذي يشير إلى عملية فسيولوجية مرضية معقدة تشمل استنفاد الأدينوسين ثلاثي الفوسفات² ، والتوليد المفرط لأنواع الأكسجين التفاعلية³ ، والتفاعلات الالتهابية⁴ ، وخلل الميتوكوندريا بسبب الحمل الزائد للكالسيوم⁵ ، مما يؤدي إلى احتشاء عضلة القلب الحاد عن طريق الخلل الأيضي والضرر الهيكلي⁶.

ومع ذلك، لا تزال الآليات التفصيلية الكامنة وراء نقص تروية عضلة القلب وإصابة التروية (MIRI) غير معروفة. يهدف هذا العمل إلى تطوير نموذج حيواني فريد يحاكي بشكل كاف العرض السريري وعلاج MIRI. خلاف ذلك ، في عملية بحث نموذج MIRI ، تتطلب الحيوانات الكبيرة⁷ (مثل الخنازير) جراحة تدخلية ، وهي مكلفة. تتطلب الحيوانات الصغيرة (مثل الأرانب 8 والفئران 9،10،¹¹،¹² والجرذان¹³) جراحة دقيقة تحت الفحص المجهري 10 ^، أو أكياس يتم التحكم فيها عن بعد ⁸،¹¹ ، أو الضغط على القلب خارج التجويف^{9 ،} الأمر الذي يتطلب مستوى عال من التكنولوجيا وقد يسبب العديد من مضاعفات ما بعد الجراحة التي تزعج دقة النتائج. سيلعب نموذج MIRI المثالي بمعدل بقاء أعلى وتكلفة أقل دورا حاسما في الأبحاث المرضية.

هدفت هذه الدراسة إلى مكافحة هذه القضايا من خلال إنشاء نموذج أكثر سهولة وجدوى من MIRI في الفئران لتسهيل البحث في علم أمراض MIRI ، مما قد يؤدي إلى اكتشاف العلاجات السريرية ل MIRI.

Protocol

تمت الموافقة على الدراسة من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوانات بجامعة نانجينغ للطب الصيني (إذن رقم 202004A002). اتبعت الدراسة بدقة المبادئ التوجيهية للمعاهد الوطنية للصحة (NIH) بشأن استخدام المختبر (منشور المعاهد الوطنية للصحة رقم 85-23 ، المنقح 2011). تم استخدام ثلاثين من ذكور فئران Sprague-Dawley (الوزن ، 300 ± 50 جم ؛ العمر ، 12 ± 14 أسبوعا) في هذا العمل.

1. إعداد الحيوان

1. حرمان الفئران من الطعام والماء لمدة 12 ساعة قبل الجراحة. يهدف الصيام قبل الجراحة إلى منع الطموح الرئوي¹⁴.
2. تعقيم جميع الأدوات قبل الجراحة باستخدام معقم بخار عالي الضغط.
3. تخدير الفئران عن طريق إعطاء الصوديوم بنتوباربيتال (1.5 ٪ ، 75 ملغ / كغ) عن طريق الحقن داخل الصفاق (انظر جدول المواد).
4. تقييم فعالية التخدير عن طريق إجراء اختبار قرصة إصبع القدم.
   ملاحظة: يعتبر الفئران مخدرا بما فيه الكفاية إذا لم تلاحظ أي ردود فعل عندما يتم الاحتفاظ بمخلبه الخلفي بواسطة الملقط.
5. قم بتصويب القسم الأوسط من مشبكي ورق لتشكيل شكل "S". اسحب القسم العريض من كل حرف "S" لأسفل لتشكيل متراجع صغير.
6. قطع أنبوب بولي فينيل كلوريد (PVC) قطره 2 مم إلى قطع بطول 7 مم. أدخل خياطة 4-0 بطول 10 سم في أنبوب PVC ، واربط نهاياتها.
7. قم بربط الشريان التاجي الأمامي الأيسر النازل (LAD) وأنبوب PVC معا باستخدام خياطة 6-0. قم بقطع أخدود في منتصف أنبوب PVC باستخدام مقص العيون ، واستخدم الأخدود لخيط خياطة 6-0 عبر الأنبوب لمنعه من السقوط.
   ملاحظة: يظهر أنبوب PVC ومنسحبات الشكل "S" في الشكل التكميلي 1.

2. إجراء الجراحة

1. قم بإجراء عملية جراحية لإنشاء نموذج الفئران MIRI المحسن باتباع الخطوات أدناه.
   ملاحظة: يشار إلى مجموعة النماذج الحيوانية الناتجة عن طريقة MIRI المحسنة باسم مجموعة النماذج التجريبية في جميع أنحاء المقالة.
   1. بعد التخدير (الخطوة 1.2) ، قم بإصلاح أطراف الفئران بشريط لاصق عن طريق وضع الفئران على اللوحة الجراحية في وضع ضعيف. احلق الرقبة ومنطقة الصدر الأمامية اليسرى بكريم مزيل للشعر ، ونظف البشرة ب 75٪ من الكحول ومقشر اليودوفور.
   2. قطع جلد الرقبة بالطول على طول خط عنق الرحم المتوسط باستخدام مقص العيون.
   3. افصل عضلات الرقبة باستخدام ملاقط العيون ، وضع متراجعا (الخطوة 1.4) على كل جانب لسحبها أكثر.
      ملاحظة: من الضروري كشف القصبة الهوائية بشكل كاف ، لأنها ضرورية لمنع النزيف من الغدة الدرقية خلال هذه الخطوة.
   4. بعد كشف القصبة الهوائية ، حدد المسافة بين حلقات القصبة الهوائية الرابعة والخامسة. هذه المساحة هي نقطة الثقب.
   5. ضع علامة على هذه النقطة باستخدام الحافة الحادة لطرف الإبرة. قم بعمل شق 3 مم مواز للغضروف الكريكويد في هذه المرحلة.
   6. أدخل مبزل شفط (انظر جدول المواد) في القصبة الهوائية عبر الشق (الخطوة 2.1.5) ، وقم بتهوية الفئران ميكانيكيا للحفاظ على التنفس الطبيعي بمعدل 80 نفسا / دقيقة وحجم المد والجزر 8 مل / كجم.
   7. بعد ذلك ، قم بعمل شق 4-5 سم من الخناق إلى منتصف المساحة الوربية اليسرى الثانية أثناء تثبيت المشرط بزاوية 45 درجة. بلطف وبطء، افصل العضلات الصدرية الرئيسية والعضلات الأمامية الخزفية باستخدام ملاقط العيون للوصول إلى المساحة الوربية.
   8. قم بعمل شق 1.5 سم بشكل عرضي بين الضلعين الثالث والرابع الأيسر باستخدام مقص العيون.
   9. إذا لزم الأمر ، اقطع الضلع الرابع لفضح القلب المغطى بالرئة اليسرى. هذا يعطي رؤية أفضل.
   10. لمنع الإصابات ، ضع كرات القطن المنقوعة في المحلول الملحي الفسيولوجي فوق الرئتين في التجويف الصدري. تشريح التامور باستخدام ملاقط العيون ، ورفع الزائدة الأذينية اليسرى بواسطة ملاقط ، وتحديد أوستيوم الشريان التاجي الموجود في جذر الشريان الأبهري.
   11. في القسم الواقع بين الرئة اليسرى والأذن، قم بربط LAD والأنبوب القصير المعد مسبقا (الخطوة 1.6) معا باستخدام خياطة جراحية 6-0، واربطه باستخدام عقدة. ضع العقدة في أخدود الأنبوب PVC ، وشد الأنبوب المربوط و LAD باستخدام عقدة ثانية لمدة 45 دقيقة¹⁵ (الشكل 1A ، B).
   12. سجل تغير اللون في الجزء الأمامي من البطين الأيسر وارتفاع الجزء ST على مخطط كهربية القلب (ECG) خلال فترة نقص التروية.
       ملاحظة: يصبح الجزء الأمامي من البطين الأيسر شاحبا خلال فترة نقص التروية.
   13. قم بتثبيت عضلات الصدر والجلد باستخدام مشبك شريان ، وقم بتغطية الجرح بشاش ملحي رطب.
   14. قم بفك العقدة ، وقم بإزالة الأنبوب القصير المعد مسبقا بعد 45 دقيقة¹⁵ (الشكل 1C).
   15. الحفاظ على الفئران مخدرة أثناء التروية لمدة 2 ساعة.
2. قم بإجراء عملية جراحية لتوليد نموذج الفئران باتباع الإجراء^{المنشور سابقا 16}.
   ملاحظة: يشار إلى مجموعة النماذج الحيوانية هذه باسم مجموعة النماذج الموجودة في جميع أنحاء المقالة.
   1. قبل ربط الشريان التاجي LAD ، قم بإجراء نفس الخطوات مثل مجموعة النموذج التجريبي.
   2. خلال فترة نقص التروية ، قم بربط الشريان التاجي LAD القريب لكل فأر باستخدام عقدة انزلاقية فقط باستخدام خياطة جراحية 6-0 في نفس موضع مجموعة النموذج التجريبي وربط عقدة انزلاقية لمدة 45 دقيقة.
   3. بعد الربط ، قم بفك العقدة باستخدام ملاقط ، وخياطة شقوق الفئران بإبرة خياطة وملاقط ، والحفاظ على الحيوان في تخدير عميق بنسبة 1.5٪ من الصوديوم البنتوباربيتال طوال فترة التروية 17^،18،19 لمدة 2 ساعة قبل حصاد قلوب الفئران.

3. تقييم تلطيخ كلوريد ثلاثي فينيل تيترازوليوم

1. في نهاية التروية ، يتم تأصيل الفئران بينما لا تزال مخدرة بعمق. التضحية بالفئران وحصاد قلوبهم^16,20 على الفور. اغسل القلوب في محلول PBS ، وخزنها عند -20 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة تقريبا لتصلب الأنسجة.
2. بعد ذلك ، قم بتقطيع القلوب إلى شرائح 2 مم باستخدام شفرة microtome ، واحتضنها بكلوريد ثلاثي فينيل تترازوليوم 2٪ (TTC) (انظر جدول المواد) عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة تقريبا ، وقم بإصلاحها في الفورمالين المحايد بنسبة 10٪.
3. قم بتصوير شرائح القلب، واحسب مناطق الاحتشاء باستخدام برنامج معالجة الصور لبرنامج ImageJ (انظر جدول المواد).
   ملاحظة: بسبب التلطيخ ، تظهر مواقع الاحتشاء بيضاء شاحبة ، بينما تظهر الأنسجة الطبيعية باللون الأحمر الداكن.

4. تلطيخ الأنسجة

1. حصاد القلوب تحت التخدير العميق من الصوديوم بنتوباربيتال 1.5 ٪ في نهاية فترة إعادة التروية.
2. إصلاح القلوب في 10 ٪ الفورمالين في 4 درجة مئوية لمدة 48 ساعة.
3. بعد ذلك ، قسم القلوب مع ميكروتوم إلى 6 شرائح على الأقل (بسماكة 5 ميكرومتر) وتأكد من ثلاث شرائح على الأقل للهيماتوكسيلين والإيوسين (H & E) وتلطيخ ماسون^20,21.
4. راقب الشرائح تحت المجهر الضوئي ، وصورها.

5. تقييم تخطيط القلب

1. تقسيم الحيوانات عشوائيا إلى مجموعات نموذج MIRI تجريبية أو موجودة أو مجموعات صورية لتقييم تغيرات تخطيط القلب.
2. تخدير جميع الفئران أثناء عمليات الربط الجراحية وتقييم الطرف القياسي الثاني تتبع^20,21 لتحديد تغيرات تخطيط القلب وتأكيد نقص تروية عضلة القلب.
3. تخزين جميع الصور في مكتبة رقمية.

6. التحليل الإحصائي

1. إجراء التحليلات الإحصائية باستخدام برامج الرسوم البيانية والإحصاء العلمي (انظر جدول المواد).
2. التعبير عن جميع البيانات كمتوسط ± خطأ قياسي للمتوسط. بعد اختبارات طبيعية ومنطقية لكل مجموعة ، قم بإجراء تحليل أحادي الاتجاه للتباين واختبارات t²² لتحديد الاختلافات المعنوية بين المجموعات. ضع في اعتبارك قيمة p <0.05 كقيمة إحصائية.

النتائج

TTC تلطيخ
تم تلطيخ أقسام القلب من الفئران التي خضعت إما لإجراء MIRI الحالي أو المحسن أو الجراحة الصورية ب TTC ، وتم تخزين الصور رقميا وتحليلها باستخدام ImageJ. الفئران التي خضعت إما لإجراءات MIRI الموجودة بالفعل أو المحسنة كانت تعاني من احتشاء عضلة القلب ، في حين أن الفئران من المجموعة الوهمية لم تفعل ذلك (الشكل 2B). بالمقارنة مع الفئران في المجموعة الصورية ، كان لدى الفئران في مجموعات نموذج MIRI الموجودة (p < 0.0001) والتجريبية (p < 0.0001) فرقا كبيرا في حجم احتشاء عضلة القلب ، وكان لمجموعة النماذج التجريبية حجم احتشاء عضلة القلب أكبر من مجموعة النماذج الحالية (p = 0.0176) (الشكل 3B).

تلطيخ نسيجي
أظهر تحليل العينات الملطخة باستخدام بقع H&E و Masson ^22,23 أنه بالمقارنة مع المجموعة الوهمية ، فإن الخلايا العضلية القلبية لكل من المجموعات النموذجية التجريبية والحالية قد تعرضت لأضرار جسيمة وانحلال نووي وتم اختراقها بواسطة العديد من العدلات (الشكل 3).

اختبار تخطيط القلب
كانت شرائح تخطيط القلب ST-T من الفئران في مجموعات نموذج MIRI الحالية والتجريبية مرتفعة مقارنة بشرائح الفئران في المجموعة الصورية (الشكل 4A) ، وكانت الاختلافات بين النموذج التجريبي والمجموعات الصورية (p < 0.0001) أو مجموعات النموذج والصورية الحالية (p < 0.0001) معنوية (الشكل 4B). وعلاوة على ذلك، كان قطاع ST-T أكثر ارتفاعا في مجموعة النماذج التجريبية منه في مجموعة النماذج الحالية (p = 0.0274) (الشكل 4C).

النسبة المئوية للبقاء على قيد الحياة
كان معدل البقاء على قيد الحياة مختلفا اختلافا كبيرا بين مجموعتي نموذج MIRI (الشكل 4D). ماتت أربعة من الفئران العشرة في المجموعة النموذجية الحالية. كان معدل الوفيات 40٪ خلال فترة إعادة التروية. في المقابل، لم يمت أي من الفئران في مجموعة النموذج التجريبي أثناء الجراحة، مما يدل على أن النموذج المحسن الحالي لديه معدل بقاء أعلى (p = 0.0291).

الشكل 1: الخطوات الرئيسية لجراحة نموذج إصابة نقص تروية عضلة القلب والإصابة التروية (MIRI). تشير النقاط الخضراء إلى بروتوكول الرباط خلال فترة نقص التروية ، بما في ذلك وضع الأنبوب الناعم على الشرايين التاجية (A) ، وربط خط الخياطة في أخدود الأنبوب الناعم المعد مسبقا (B) ، وتخفيف العقدة ، وإزالة الأنبوب الناعم عند بدء فترة التروية (شريط المقياس = 1 سم) (C ). LAA: الزائدة الأذينية اليسرى ، RAA: الزائدة الأذينية اليمنى ، LAD: الأسفل الأمامي الأيسر ، RCA: الشريان التاجي الأيمن ، IVC: الوريد الأجوف السفلي ، SVC: الوريد الأجوف العلوي ، AO: الشريان الأورطي ، PA: الشريان الرئوي. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 2: إجراء الجراحة بأكمله والاختلافات في تلطيخ كلوريد ثلاثي فينيل تترازوليوم (TTC) بين المجموعات المختلفة. يتم عرض المتراجع الصغير المعد مسبقا (شريط المقياس = 15 مم) ، والأنبوب الناعم (شريط المقياس = 10 مم) ، والجراحة بأكملها (شريط المقياس = 15 مم) (A). تم تقسيم ثلاثين فأرا عشوائيا إلى مجموعات تجريبية (n = 10) ، ومجموعة صورية (n = 10) ، ونموذج موجود (n = 10). أشار تلطيخ TTC إلى أن كلا من مجموعات النماذج التجريبية والحالية لديها تغييرات كبيرة مقارنة بالمجموعة الصورية (B). تحول الجدار الأمامي لعضلة القلب في المجموعة التجريبية والجدار الجانبي في مجموعات النماذج الحالية إلى اللون الأبيض الباهت ، مما يؤكد موقع المنطقة الإقفارية (شريط المقياس = 5 مم). يصور "النموذج الحالي" على أنه "النموذج القديم" في الشكل. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 3: الاختلافات في تلطيخ H&E و Masson بين المجموعات. تم تقسيم ثلاثين من ذكور فئران Sprague Dawley عشوائيا إلى مجموعات تجريبية (n = 10) ، ومجموعة صورية (n = 10) ، ونموذج موجود (n = 10) مجموعات ، وتظهر مقارنة التغيرات المورفولوجية الخلوية بين المجموعات (شريط المقياس = 2 مم). يظهر الهيماتوكسيلين والإيوسين (H & E) ، وتلطيخ ماسون أن خلايا عضلة القلب في النموذج التجريبي ومجموعات النماذج الحالية لها أضرار جسيمة ، وانحلال النواة ، ويتم اختراقها بواسطة العديد من العدلات مقارنة بتلك الموجودة في المجموعة الصورية (شريط المقياس = 100 ميكرومتر). يصور "النموذج الحالي" على أنه "النموذج القديم" في الشكل. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 4: الفروق في النتائج الإحصائية بين المجموعات. تم تقسيم ثلاثين من ذكور فئران سبراغ داولي عشوائيا إلى مجموعات تجريبية (ن = 10) ، ومجموعة صورية (ن = 10) ، ونموذج موجود (ن = 10). تظهر نتائج مخطط كهربية القلب أنه بالمقارنة مع مجموعة النماذج الموجودة بالفعل ، فإن مجموعة النماذج التجريبية لديها حجم احتشاء عضلة القلب أكبر (****p < 0.0001 ، * p = 0.0176) (A) ، وارتفاع أعلى لشريحة ST (****p < 0.0001 ، * p = 0.0274) (B) ، ونسبة بقاء أعلى (p = 0.0291) (C ). على وجه الخصوص ، كانت الفئران من المجموعة النموذجية الحالية أكثر عرضة للموت في بداية فترة نقص التروية وبداية فترة إعادة التروية (D). يصور "النموذج الحالي" على أنه "النموذج القديم" في الشكل. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل التكميلي 1: تفاصيل المتراجع المعد مسبقا وأنبوب PVC. يتم عرض المتراجع المعد مسبقا (A) وأنبوب PVC (B). يرجى النقر هنا لتنزيل هذا الملف.

Discussion

كان الفرق الرئيسي بين الطرق الموجودة بالفعل والمحسنة هو استخدام أنابيب PVC في عملية الربط. في طريقة الجراحة الحالية ، تم ربط أنسجة عضلة القلب باستخدام خياطة الحرير 6-0 فقط ، مما تسبب في تلف عضلة القلب أثناء الربط مما أدى إلى الوفاة أثناء الجراحة. علاوة على ذلك ، فإن نبض القلب من شأنه أن يخفف من العقدة. في المقابل ، في الطريقة المحسنة مع أنبوب PVC ، يمكن تشديد الانزلاق الموضوعة في أخدود الأنبوب ، وزيادة مساحة عضلة القلب المتأثرة بالربط. لوحظت هذه الفوائد أثناء الإجراء التجريبي وأكدتها نتائج تلطيخ TTC والنسبة المئوية للبقاء على قيد الحياة.

كانت الخطوة الحاسمة لطريقة الجراحة المحسنة هي وضع الأنبوب الناعم على الشريان التاجي LAD القريب ، مصحوبا بالأعصاب والأوعية اللمفاوية وأنسجة عضلة القلب أثناء الربط في فترة نقص التروية. يمكن أن يكون هذا الأنبوب الناعم المعد مسبقا بمثابة وسادة تحمي الأنسجة الطرفية (الأعصاب وعضلة القلب والأوعية اللمفاوية) وتقلل من الوفيات أثناء ربط الشريان التاجي. كانت الجراحة التي أجرتها الطريقة الموجودة بالفعل مشابهة لجراحة احتشاء عضلة القلب. أشارت نتائج البقاء على قيد الحياة في المئة إلى أن الفئران في المجموعة النموذجية الحالية ماتت بشكل رئيسي خلال فترة نقص التروية (توفي اثنان من الفئران في 2 دقيقة بعد الربط ، وتوفي اثنان من الفئران في 45 دقيقة بعد الربط). خلاف ذلك ، لا تزال الأسباب الكامنة وراء الوفاة غير واضحة ، وهناك سلسلة من الفرضيات ، بما في ذلك الأضرار الإضافية للهياكل العصبية²³ ، والأوعية اللمفاوية ، وعضلة القلب.

فيما يتعلق بالضرر العصبي ، أشارت الدراسات السابقة إلى أنه خلال فترة نقص تروية النموذج الحيواني ، إلى جانب الآثار المحلية المباشرة لنقص التروية على الهياكل العصبية ، ربما يكون هناك أيضا انخفاض كبير في مستويات neuropeptide Y (NPY) التي تسهم في اضطرابات في النقل الأكسوبلامي في التعصيب الودي²⁴. تتفق هذه النتيجة مع النتائج التي أبلغ عنها Han et ^al.25 ، الذي كشف عن حدوث اختفاء تدريجي ل NPY داخل عضلة القلب المحتقنة بعد ربط الشريان التاجي LAD في الفئران. ومع ذلك، لا يزال دور NPY في هذا السياق غير واضح. يؤدي حذفه إلى تخفيف الخلل الوظيفي في القلب وموت الخلايا المبرمج أثناء احتشاء عضلة القلب الحاد²⁶ ، ويرتبط بعدم انتظام ضربات القلب 27 ، وارتفاع ضغط الدم ، ووظيفة الأوعية الدموية الدقيقة التاجية²⁸.

علاوة على ذلك ، حدث انسداد ضار في التدفق اللمفاوي القلبي خلال فترة نقص تروية القلب ، مما أدى إلى وذمة قلبية حادة ، وخلل وظيفي في اليسار ، ونزيف²⁹ ، والذي قد يكون سببا آخر للوفاة في الفئران. خلال هذه العملية المرضية ، يمكن أن يعزى رباط الشريان التاجي LAD إلى انسداد الشرايين التاجية أو النقل اللمفاوي القلبي داخل منطقة الاحتشاء ، والتي يمكن أن تسبب مضاعفات إضافية ، مثل إعادة التشكيل السلبي للليمفاوية المجمعة للقلب ، وانخفاض التدفق اللمفاوي ، والوذمة المستمرة³⁰.

لذلك ، تلعب الدورة الدموية في الأوعية اللمفاوية دورا وظيفيا في التوازن القلبي³¹ والتئام الجروح³² ، وتشير نتائج البقاء على قيد الحياة في هذه الدراسة إلى أن الإجراء الجراحي المحسن MIRI قد يتجنب التلف اللمفاوي ويعزز التروية اللمفاوية عن طريق وضع الأنبوب الناعم على الشريان التاجي LAD أثناء الرباط. في المقابل ، من المرجح أن تمزق طريقة الجراحة الحالية عضلة القلب وتسبب نزيفا هائلا أثناء ربط الشريان التاجي LAD ، دون تأثير توسيد الأنبوب الناعم. بالإضافة إلى ذلك ، كان قطر الأنبوب الناعم المعد مسبقا أكبر بكثير من خياطة الحرير 6-0 ، وربما يكون الأنبوب قد تقلص وتسبب في حجم احتشاء أكبر عندما تم ربط العقدة بالأنبوب خلال فترة نقص التروية.

كان لهذه الدراسة بعض القيود. تم تحليل حجم احتشاء القلب في التجربة الأولية. تم حساب صيغة الاستبدال (N = 7.75) باستخدام معادلة³³ تم الإبلاغ عنها سابقا. وبالنظر إلى احتمال وفاة الفئران أثناء العملية، تم رفع N بنسبة 25٪. وبالتالي ، تم تحديد n = 10 (عشرة فئران لكل مجموعة). خلاف ذلك ، فإن الطريقة الموجودة بالفعل لإنشاء نموذج MIRI لديها معدل وفيات مرتفع. لذلك ، أثرت حالات قليلة (انخفاض حجم العينة) في مجموعة النموذج التجريبي على النتائج الإحصائية. كانت العديد من التقييمات ، بما في ذلك تخطيط صدى القلب³⁰ ، و Evans Blue staining 34 ، وقياس إنزيم عضلة القلب³⁵ ، ضرورية لتقييم وظائف القلب وتحليلها. ونظرا لانخفاض حجم عينة هذا العمل، لم تجر هذه التقييمات وسيتم وصفها في دراسة مستقبلية للبحوث الدوائية الدينامية في معهد ميري. ومع ذلك ، بالنظر إلى أن الإجراء الجراحي الحالي لإنشاء نموذج MIRI يرتبط بتلف عضلة القلب على نطاق واسع ، فمن المفيد الإبلاغ عن هذه الطريقة الحالية لتحسين نمذجة MIRI في الفئران وتسليط الضوء على هذا النموذج قبل السريري الذي يحاكي بشكل صحيح مرض نقص تروية القلب.

في الختام ، كان لطريقة الجراحة المحسنة لتوليد نموذج MIRI معدل بقاء أعلى ، وشريحة ST-T مرتفعة ، وحجم احتشاء أكبر من طريقة توليد نموذج MIRI الحالية ، مما يشير إلى أن النموذج المحسن يحاكي بشكل أفضل علم أمراض MIRI.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
10% Neutral Formalin	Chunyu, China	_
2,3,5-Triphenyl-2H-Tetrazolium Chloride	Solarbio, China	T8107
75% Alchol	SCR, China	10009261
Artery Clip	Zhonglin Dongsheng, China	6.5cm
Camera	Olympus Corporation, Japan	EPL5
Cotton ball	Huachen, China	_
Dpilatory cream	Veet, China	_
Eye speculum	Shanghai Jingzhong, China	_
Gauze	Zhonggan, China	_
GraphPad	GraphPad Software, USA	8.0
H&E Kit	Solarbio, China	G1120
High-pressure steam sterilizer	TOMY, Japan	SX-500
ImageJ	NIH, USA	_
Masson Kit	Solarbio, China	G1340
Medical Tape	Mr.Song, China	_
Microscope	Olympus Corporation, Japan	CKX31
Microscopy	TEKSQRAY, China	_
Microtome	Leica, Germany	RM2235
Microtome Blade	Leica, Germany	819
Needle holder	Shanghai Jingzhong, China	_
Ophthalmic scissors	Shanghai Jingzhong, China	_
Ophthalmic tweezers	Shanghai Jingzhong, China	_
Paper clip	Chenguang, China	ABS91613
Physiological saline solution	Kelun, China	_
Powerlab ECG	ADINSTRUMENTS ,China	4/35
PVC tube	Guanzhijia, China	_
Small animal ventilator	TECHMAN, China	HX-101E
Sodium Pentobarbital	SIGEMA, USA	1030001
Suction trocar	TECHMAN, China	HX-101E
Suture line	Lingqiao, China	4-0
Suture needle with thread	Shanghai Pudong Jinhua Medical Products Co LTD, China	6-0