<ol style="list-style-type:upper-alpha;;text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الآفة الوهمية (إعداد الوهمية حوالي 38 إلى 48 ساعة قبل الدورة الفعلية ممارسة الكفاءة FNA (الشكل 1) أو الاستفادة من استعداد لاستخدام &quot;AV فانتوم&quot; من مصدر FNA ، الولايات المتحدة الأمريكية. الآفة الوهمية (المخزنة تحت التبريد دون تجميد) قد أن تظل مستعدة حتى 3 إلى 4 أيام قبل ممارسة الدورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> FNA ممارسة الكفاءة : على الرغم من أننا أظهرنا الإجراء باستخدام THFV Shidham ل(الحاصدة الأنسجة مع صمام الوظيفية) (FNA المصدر ، الولايات المتحدة) ، قد يتم استخدام أي نظام لممارسة FNA الأخرى (الشكل 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نشر وتجهيز نضح على الشرائح الزجاجية (الشكل 3). </li></ol> المواد المطلوبة <ol style="list-style-type:lower-alpha;;text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سيليكون المطاط واضح يسد المتاحة في العديد من مخازن تحسين البناء / الوطن. العديد من العلامات التجارية المتاحة بما في ذلك مديرية إدارة السجون ، GETM ، الشيطان الأحمر ، البرق الابيض ، والعلامات التجارية سلسلة المحلية. استخدمنا تشفير مطاط السيليكون ، منتجات البرق الابيض ، كليفلاند ، أوهايو ، الولايات المتحدة الأمريكية ، <a href="http://www.wlcaulk.com/products/all_purpose/silicone_rubber/wl09010.html">http://www.wlcaulk.com/products/all_purpose/silicone_rubber/wl09010.html</a> ) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السد بندقية </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطعة من ورقة غلاف بلاستيكي (كنا ساران تتشبث التفاف زائد ، والابن جونسون SC المؤتمر الوطني العراقي ، راسين ، ويسكونسن ، الولايات المتحدة الأمريكية <a href="http://www.saranbrands.com/plastic-wrap/index.asp">http://www.saranbrands.com/plastic-wrap/index.asp</a> </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قفازات اللاتكس </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموز واسعة القطر أو السجق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شركة وقاعدة لوحة مسطحة (حوالي 6 بوصات X 6 بوصة) مصنوعة من مجلس بطاقة سميكة ، لوحة اكريليك ، أو غيرها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> FNA أداء المعدات <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الإبر تحت الجلد قياس 25 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Shidham في THFV (أو المكونات الأخرى لأداء FNA) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الشرائح الزجاجية </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تلوين مجموعات </li></ul></li></ol> خطوة بخطوة التفاصيل A. إعداد الآفة الوهمية (إعداد الوهمية 1-2 أيام قبل ممارسة FNA إجادة (الشكل 2) أو الاستفادة من استعداد لاستخدام &quot;AV فانتوم&quot; من مصدر FNA ، الولايات المتحدة الأمريكية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع 6 X 6 حجم شبر من دعم المجلس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع قطعة 2،5 بوصة طويلة من &#39;الأساسية الآفة الوهمية&quot; (الموز أو النقانق). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> طرد 0.5 بوصة طبقة سميكة من يسد على اللوحة الأساسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اضغط على &quot;الآفة الأساسية الوهمية&quot; طفيفة في ليسد هذه الطبقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة المزيد من يسد على &quot;الآفة الأساسية الوهمية&quot; بحيث يتم تضمين تماما في كومة من يسد دون محاصرة فقاعات الهواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعديل ويسد على شكل &quot;الأساسية الآفة الوهمية&quot; مع اليد القفاز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأخذ 6 X 6 بوصة من حجم قطعة غلاف بلاستيكي وتغطي التلة يسد وتعديل سطح التل في التكوين محدبة السلس مع اليد النظيفة القفاز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للشفاء يسد التل لمدة 6-8 ساعات أطول من الوقت علاج المذكورة بناء على تعليمات المنتج ، (عادة لمدة 24 ساعة) ، في مكان دافئ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد المعالجة ، يجب أن يكون حازما يسد ، ويمكن مقشر التفاف البلاستيك قبالة بسهولة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الآفة الوهمية FNA مستعدة لاستخدامه لممارسة الإجراء FNA بعد نحو 8 ساعات عند التلة بأكملها قد يسد شفي تماما لمركز يحتوي على &quot;آفة الوهمية الأساسية&quot; (الموز أو النقانق). </li></ol> باء ممارسة FNA الكفاءة على آفة فانتوم AV. أي نهج في الحصول على جودة عالية ، وينبغي كافية aspirates FNA مع مسحات نوعية جيدة الخلايا مباشرة العنوان التالي الحرجة نقاط <ol style="list-style-type:upper-roman;;text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المقياس على النحو إبرة ضمنية في عنوان الإجراء ، والإبر الدقيقة (عدد أكبر مقياس) العائد أفضل aspirates تمييع الدم مع الحد الأدنى. لتحقيق التوازن الحرج من فوائد وقيود ، ويفضل الإبر قياس 22-25 للاستقرار الميكانيكية الأمثل للإبرة دون التأثير على نوعية نضح FNA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط تسلسل الملائمة في تطبيق فراغ والإفراج خلال FNA الداخلي ، وهذا أمر بالغ الأهمية من أجل إحراز تقدم في عينات خلايا المخ مع كل من الإبرة ، باتجاه محور الإبرة. ومع ذلك ، لا ينبغي أن يستنشق المواد المسموح به للوصول الى منطقة التجمع إبرة تطلع مع حقنة. إذا لم يمنع ذلك ، فإن هذه المادة قد يكون من الصعب استرداد لصنع المسحات (قد ، ولكن هذه المواد ، يمكن استخدامها لإعداد كتلة الخلية أو لتركيز وسائل مثل Cytospin ، وأساليب التصفية ، أو السائل التحضيرات الأخيرة على علم الخلايا). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطوير المهارات المناسبة في تجهيز العينة يستنشق ، بما في ذلك إعداد مسحة مباشرة وعلى موقع التقييم كفاية مع triaging المناسبة لاختبارات الثانوية مثل الخلية كتلة انتخابية استعدادا للكيمياء سيتولوجية مناعية ، بالانتخاب التدفق الخلوي ليمفاوية immunophenotyping الآفات ، وتقديم يمر العقيمة لعلم الأحياء المجهرية الدراسات ، وزميلهالريال لاختبارات الجزيئي (علم الوراثة الخلوية ، الخ). </li></ol> با المسرحية FNA الداخلي (كما هو موضح مع THFV Shidham ل[1] (FNA المصدر ، الولايات المتحدة) ، ولكن يمكن استخدام أي نظام آخر لممارسة FNA). الشكل (3،4،5). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد التجمع FNA مع صمام مغلقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد موقع الآفة وادخال ابرة في قمة الآفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح صمام لتوصيل الفراغ ، من خلال إبرة إلى طرفها ، ونضح المكونات الخلوية ممثل الآفة مع كل من والسكتة الدماغية جيئة وذهابا إلى الآفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على مناطق الفراغ وعينة مختلفة من آفة بإدراج الإبرة في الآفة في اتجاهات مختلفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق صمام لقطع فراغ في تجويف الإبرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معادلة الضغط مع الظروف المحيطة (مثلا بفصل الحقنة صمام الإبرة من لحظة وجيزة وإعادة الاتصال. إذا تم استخدام جهاز خاص مع الخطوات يحمل في ثناياه عوامل ، مثل &#39;THFV&#39; ، هذا وغيرها من الخطوات من خلال Ba1 Ba6 ومتضافرة تلقائيا باتباع الخطوات المختلفة في النظام صمام) [1]. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الإبرة من الآفة مع صمام المغلقة ، من أجل الحيلولة دون فقدان للعينة عمل شعري في الآفة إلا إذا كان هناك ضغط سلبي طفيف في نهاية المحور. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزاحة المحتوى يستنشق على الشريحة الزجاجية للتحضير لطاخة المباشر (أنظر أدناه) (الشكل 6). </li></ol> ب. تجهيز العينة يستنشق مع الفرز المناسبة نشر نضح على الشرائح الزجاجية وإعداد مسحات نوعية جيدة المباشرة (الشكل 6) ، يليه تلطيخ السليم والفرز (الشكل 7،8). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وينتشر قطرة نضح فكها على شريحة زجاجية من قبل مجموعة متنوعة من النهج كما هو مبين في الشكل (6) [2]. النهج المعتاد هو &quot;أ&quot;. ومع ذلك ، إذا كان عينة دم مع بعض microfragments المخفف ، واستنزفت الدم الزائد بعيدا انزلاق إمالة ، وmicrofragments ثم تنتشر بين هذه الشريحة والثانية شريحة زجاجية مماثلة ل&#39;ا&#39;. إذا نضح هي في الغالب دون تعليق microfragments ، مثل من الآفات يمفاوية ، ينتشر مماثلة إلى &#39;ب&#39; أو &#39;ج&#39;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن تجهيزها مسحات والثابتة في مجموعة متنوعة من الطرق لطرق مختلفة خلال تلطيخ تقييم كفاية في الموقع. ومع ذلك ، فإن أفضل أسلوب هو العمل على الهواء الجاف مسحات جميع. ويمكن لطخات ملطخة الهواء المجفف مع البقع رومانوفسكي (مثل Difff - Quik صمة عار وصمة عار رايت) بعد تثبيت الميثانول أو عنق الرحم مع وصمة عار بعد المالحة والإماهة بعد التثبيت (في الايثانول 95 ٪ أو يفضل في الايثانول 95 ٪ مع 5 حمض الخليك ٪) [3]. القضاء على التدخل بسبب التعتيم الدم هو مكسب كبير [3]. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اعتمادا على النتائج التي توصل إليها خلال التقييم الأولي cytomorphologic كفاية في الموقع ، فمن المستحسن الفرز الإضافية (مثل كتلة الخلية الاختيارية ، المجهر الإلكتروني ، والثقافات علم الأحياء المجهرية ، التدفق الخلوي ، علم الوراثة الخلوية الجزيئية اختبارات الخ) كما هو مبين. </li></ol> ممثل النتائج : <img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig1tmb.jpg" alt="الشكل 1" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig1.jpg">الرجاء النقر هنا لرؤية نسخة أكبر من الرقم 1</a> . الشكل 1. المواد اللازمة لإعداد AV فانتوم لممارسة الكفاءة FNA (* نحن نستخدم ساران الاغطية البلاستيكية التي لم تلتزم يسد في النهاية ، في حين إزالة بعد شفاء كامل من يسد). <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;;text-align:right;direction:rtl" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig2tmb.jpg" alt="الشكل 2" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig2.jpg">الرجاء النقر هنا لرؤية نسخة أكبر من الشكل 2.</a> الشكل 2. تحضير آفة فانتوم AV <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;;text-align:right;direction:rtl" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig3tmb.jpg" alt="الشكل 3" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig3.jpg">الرجاء النقر هنا لرؤية نسخة أكبر من الرقم 3.</a> الشكل 3. الخطوات الحاسمة في إجراء FNA. <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;;text-align:right;direction:rtl" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig4tmb.jpg" alt="الشكل 4" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig4.jpg">الرجاء النقر هنا لرؤية نسخة أكبر من الرقم 4.</a> الشكل 4. مسح العمالة والبطالة ، جبعة ، ملخص الخطوات الحاسمة * (انظر الشكل 3) <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;;text-align:right;direction:rtl" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig5tmb.jpg" alt="الشكل 5" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig5.jpg">الرجاء النقر هنا لرؤية نسخة أكبر من الرقم 5.</a> الشكل 5. مطبات المتصلة الخطوات الحاسمة في بروك FNAedure. <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;;text-align:right;direction:rtl" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig6tmb.jpg" alt="الشكل 6" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig6.jpg">الرجاء النقر هنا لرؤية نسخة أكبر من الرقم 6.</a> الشكل 6. إعداد مسحات مباشرة من عينة FNA بين اثنين من الشرائح. <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;;text-align:right;direction:rtl" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig7tmb.jpg" alt="الشكل 7" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig7.jpg">الرجاء النقر هنا لرؤية نسخة أكبر من الرقم 7.</a> الشكل 7. ويت المسحات ثابتة مقابل الهواء المجفف. <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;;text-align:right;direction:rtl" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig8tmb.jpg" alt="الشكل 8" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig8.jpg">الرجاء النقر هنا لرؤية نسخة أكبر من الرقم 8.</a> الشكل 8. ويت المسحات ثابتة مقابل الهواء المجفف.

<ol>
	<li>Shidham, V. B., Pandit, A. W., Rao, R. N., Basir, Z., Shidham, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+Harvester+with+Functional+Valve+(THFV):+Shidham's+device+for+reproducibly+higher+specimen+yield+by+fine+needle+aspiration+biopsy+with+easy+to+perform+steps.">Tissue Harvester with Functional Valve (THFV): Shidham's device for reproducibly higher specimen yield by fine needle aspiration biopsy with easy to perform steps.</a> BMC Clinical Pathology. 7 (2), (2007).</li><li>Shidham, V. B., Epple, J., Shidham, V. B., Atkinson, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AppendiX+I:+Collection+and+processing+of+effusion+fluids+for+cytopathologic+evaluation.">AppendiX I: Collection and processing of effusion fluids for cytopathologic evaluation.</a> , 207-235 (2007).</li><li>Shidham, V., Kampalath, B., England, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Routine+air+drying+of+all+the+smears+prepared+during+fine+needle+aspiration+and+intraoperative+cytology+studies:+An+opportunity+to+practice+a+unified+protocol,+offering+the+flexibility+of+choosing+variety+of+staining+methods.">Routine air drying of all the smears prepared during fine needle aspiration and intraoperative cytology studies: An opportunity to practice a unified protocol, offering the flexibility of choosing variety of staining methods.</a> Acta Cytologica. (45), 60-68 (2001).</li></ol>

تجرى على نطاق واسع التطلع الخزعات غرامة إبرة (FNAB) كتقنية اقتصادية آمنة ، وسريعة ، مينيملي لتشخيص الأورام الأنسجة المختلفة والآفات. في هذا الإجراء يتم إدخال إبرة قياس 18-27 في الآفة ، انتقل ذهابا وإيابا عدة مرات في مناطق مختلفة من آفة الفراغ تحت رقابة (شفط) من شدة متفاوتة تراوحت بين الحد الأدنى في شكل عمل شعري فقط لحوالي 10 مل الفراغ في حقنة لاسترداد المواد التشخيصية الأنسجة. ويفضل قياس أدق إبرة مع ارتفاع العدد إلى استرداد المواد جيدة للتحضير مسحات الخلايا مباشرة. إبرة أوسع مقياس لل18G باسترداد أكثر عينة مناسبة لكتلة الخلية التدفق الخلوي ، المجهر الإلكتروني ، علم الوراثة الخلوية ، علم الأحياء المجهرية الثقافات الخ على الرغم من أن الإجراء هو بسيط ، والسيطرة على مختلف الخطوات مع التطبيق السليم ، والإفراج عن فراغ في الخطوات المناسبة بطريقة منسقة وحاسمة للغاية من أجل تحقيق النتائج المثلى. يتم استخدامها بسبب عدم توفر الإبر ذات الإنتاجية العالية المصممة خصيصا ، إبر الحقن التقليدية أو تعديلات لتنفيذ هذا الإجراء. ومع ذلك ، إبر الحقن وقيود كثيرة مما أدى إلى انخفاض العائد من العينة إذا ما استخدمت بطريقة تقليدية. شرط السيطرة حقنة خاصة عادة يضيف إلى تعقيد العملية. وبالتالي ، ونظرا لعدم وجود مناسبة متاحة تجاريا الجهاز إبرة FNAB ، هذا الإجراء تنوعا للغاية تعاني مشكلة متكررة من استرجاع عينة كافية. مؤخرا ، تم الإبلاغ عن جهاز زيادة الغلة مع استنساخ [1]. بالإضافة إلى ذلك ، هناك حاليا هو عدم وجود نموذج مناسب لممارسة الكفاءة في أداء FNAB بواسطة موظفي الصحة في مجال التدريب بما في ذلك المقيمين والزملاء. كان لدينا نموذج موحد مع قطعة من كبد البقر الطازج المحنطة في القفازات المطاطية لممارسة FNAB الكفاءة. ومع ذلك ، هذا النموذج من الصعب تنظيم في مهلة قصيرة. شراء الأبقار الطازج الكبد عادة ما يحد من المأزق. بالإضافة إلى ذلك ، قد يعرض الكبد معالجة التلوث والعوامل المتصلة بالتعادل كبيرة الى الوراء. الميل للالقفازات المطاطية لتسرب بعد يحرك الإبرة قليلة يؤدي الى فوضى محتملة خلال الدورة الممارسة. ويصف التقرير أننا رواية ولكن طريقة بسيطة لتضمين قطعة صغيرة من الموز (أو النقانق) في سيليكون يسد المطاط متوفرة تجاريا وغيرها من المواد المتاحة بسهولة. شبح FNAB يحتفظ ختم فراغ مما يتيح التطلع من المواد جزءا لا يتجزأ من العينة ، أي ما يعادل FNAB الإجراء الفعلي على الآفة في وضع السريرية. في هذا الفيديو ، ونحن لشرح إجراءات صنع FNAB الوهمية الآفة وممارسة الإجراء FNAB. يدل على ذلك أيضا في معالجة موجز لاسترجاع العينة بما في ذلك إعداد تشويه وتلطيخ [2،3]. لأن يسد يستغرق وقتا طويلا للشفاء ، ينبغي إعداد الآفة الوهمية مقدما حوالي 24 إلى 48 ساعة قبل الدورة ممارسة. ويمكن الحصول على مقارنة جاهزة للاستخدام الآفة الوهمية من مصدر تجاري (FNA المصدر ، الولايات المتحدة). ويمكن استخدام الآفة الوهمية لممارسة FNAB الكفاءة لتدريب المقيمين والزملاء قبل بداية الأداء FNAB على المرضى في الإعداد السريرية.

preparation and using phantom lesions to practice fine needle aspiration biopsies

حاليا ، بما في ذلك العاملين في مجال الصحة المقيمين والزملاء لم يكن لديك نموذج مناسب لممارسة الوهمية غرامة إبرة الخزعة الطموح (FNAB) الداخلي. في الماضي ، فإننا نموذج موحد يتكون من القفازات المطاطية التي تحتوي على كبد الأبقار الطازج لممارسة FNAB. ومع ذلك ، هذا النموذج من الصعب تنظيم وتحضير في وقت قصير ، مع شراء الأبقار الطازج الكبد هو الجانب الأكثر تحديا. معالجة الكبد مع مشاكل التلوث ذات الصلة أيضا بالتعادل كبيرة الى الوراء. بالإضافة إلى ذلك ، وتسرب المواد قفاز إبرة بعد قليل يمر ، وما ينتج عنها من الفوضى. أنشأنا وسيلة بسيطة لتضمين الرواية قطعة صغيرة من الموز أو النقانق في سيليكون المطاط يسد متاحة تجاريا. هذا النموذج يسمح للاحتفاظ ختم الفراغ والطموح من المواد جزءا لا يتجزأ من العينة ، تشبه إجراء FNAB الفعلي للآفات الشامل السريرية. يمكن معالجة المواد يستنشق في المركز إبرة مماثلة لعينات تم شراؤها خلال إجراء FNAB الفعلي ، وتسهيل كفاءة إضافية في إعداد تشويه وتلطيخ.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation and Using Phantom Lesions to Practice Fine Needle Aspiration Biopsies at JoVE.com

Preparation and Using Phantom Lesions to Practice Fine Needle Aspiration Biopsies

مزاولة غرامة الخزعات إبرة الطموح (FNAB) من قبل المتدربين تحديا نسبيا ، نظرا لعدم وجود الآفة ، متاحة بسهولة المناسبة. إعداد الآفة الوهمية AV لممارسة الإجراء FNAB والكفاءة اتقان سهلة نسبيا.

إعداد واستخدام الآفات فانتوم الممارسة التشكيلية الخزعات إبرة الطموح

Currently, health workers including residents and fellows do not have a suitable phantom model to practice the fine- needle aspiration biopsy (FNAB) ...

preparation-using-phantom-lesions-to-practice-fine-needle-aspiration

Research

JoVE Journal

Biology

17.7K Views.  University of Wisconsin - Milwaukee. مزاولة غرامة الخزعات إبرة الطموح (FNAB) من قبل المتدربين تحديا نسبيا ، نظرا لعدم وجود الآفة ، متاحة بسهولة المناسبة. إعداد الآفة الوهمية AV لممارسة الإجراء FNAB والكفاءة اتقان سهلة نسبيا.

Video: Preparation and Using Phantom Lesions to Practice Fine Needle Aspiration Biopsies

Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish (Danio rerio)

Neurosensory epithelia in the inner ear are the crucial structures for hearing and balance functions. Therefore, it is important to understand the cellular and molecular features of the epithelia, which are mainly composed of two types of cells: hair cells (HCs) and supporting cells (SCs). Here we choose to study the inner ear sensory epithelia in adult zebrafish not only because the epithelial structures are highly conserved in all vertebrates studied, but also because the adult zebrafish is able to regenerate HCs, an ability that mammals lose shortly after birth. We use the inner ear of adult zebrafish as a model system to study the mechanisms of inner ear HC regeneration in adult vertebrates that could be helpful for clinical therapy of hearing/balance deficits in human as a result of HC loss.
Here we demonstrate how to do gross and fine dissections of inner ear sensory epithelia in adult zebrafish. The gross dissection removes the tissues surrounding the inner ear and is helpful for preparing tissue sections, which allows us to examine the detailed structure of the sensory epithelia. The fine dissection cleans up the non-sensory-epithelial tissues of each individual epithelium and enables us to examine the heterogeneity of the whole epithelium easily in whole-mount epithelial samples.

Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish Danio rerio

The inner ear sensory epithelium of adult zebrafish is a good model system for understanding the mechanisms of hair cell regeneration in adult vertebrates. This protocol demonstrates the fine dissection of the epithelia, through which we can get tissue samples for studying the regenerative events at cellular and subcellular levels.

الجسيمة والجميلة تشريح الأذن الداخلية الظهارة الحسية في اسماك الزرد الكبار ( دانيو rerio)

Neurosensory epithelia in the inner ear are the crucial structures for hearing and balance functions. Therefore, it is important to understand the ...

Western Blotting: Sample Preparation to Detection

Western blotting is an analytical technique used to detect specific proteins in a given sample of tissue homogenate or extract. It uses gel electrophoresis to separate native or denatured proteins by the length of the polypeptide (denaturing conditions) or by the 3-D structure of the protein (native/ non-denaturing conditions). The proteins are then transferred to a membrane (typically nitrocellulose or PVDF), where they are probed (detected) using antibodies specific to the target protein.

Western blotting is an analytical technique used to detect specific proteins in a given sample of tissue homogenate or extract.

الغربية التنشيف : إعداد نموذج لكشف

Western blotting is an analytical technique used to detect specific proteins in a given sample of tissue homogenate or extract. It uses gel ...

Advanced Confocal Microscopy Techniques to Study Protein-protein Interactions and Kinetics at DNA Lesions

Local microirradiation with lasers represents a useful tool for studies of DNA-repair-related processes in live cells. Here, we describe a methodological approach to analyzing protein kinetics at DNA lesions over time or protein-protein interactions on locally microirradiated chromatin. We also show how to recognize individual phases of the cell cycle using the Fucci cellular system to study cell-cycle-dependent protein kinetics at DNA lesions. A methodological description of the use of two UV lasers (355 nm and 405 nm) to induce different types of DNA damage is also presented. Only the cells microirradiated by the 405-nm diode laser proceeded through mitosis normally and were devoid of cyclobutane pyrimidine dimers (CPDs). We also show how microirradiated cells can be fixed at a given time point to perform immunodetection of the endogenous proteins of interest. For the DNA repair studies, we additionally describe the use of biophysical methods including FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching) and FLIM (Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy) in cells with spontaneously occurring DNA damage foci. We also show an application of FLIM-FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer) in experimental studies of protein-protein interactions.

Laser microirradiation is a useful tool for studies of DNA repair in living cells. A methodological approach for the use of UVA lasers to induce various DNA lesions is shown. We have optimized a method for local microirradiation that maintains the normal cell cycle; thus, irradiated cells proceed through mitosis.

تقنيات الفحص المجهري [كنفوكل] لدراسة تفاعلات البروتين البروتين وحركية في الحمض النووي آفات متقدمة

Local microirradiation with lasers represents a useful tool for studies of DNA-repair-related processes in live cells. Here, we describe a methodological ...

Immunolabelling Myofiber Degeneration in Muscle Biopsies

The necrosis of muscle fibres (myonecrosis) plays a central role in the pathogenesis of several muscle conditions, including muscular dystrophies. Therapeutic options addressing the causes of muscular dystrophy pathogenesis are expected to alleviate muscle degeneration. Therefore, a method to assay and quantify the extent of cell death in muscle biopsies is needed. Conventional methods to observe myofiber degeneration in situ are either poorly quantitative or rely on the injection of vital dyes. In this article, an immunofluorescence protocol is described that stains necrotic myofibers by targeting immunoglobulin G (IgG) uptake by myofibers. The IgG uptake method is based on cell features characterizing the necrotic demise, including 1) the loss of plasma membrane integrity with the release of damage-associated molecular patterns and 2) the uptake of plasmatic proteins. In murine cross-sections, the co-immunolabelling of myofibers, extracellular matrix proteins, and mouse IgG allows clean and straightforward identification of myofibers with necrotic fate. This simple method is suitable for quantitative analysis and applicable to all species, including human samples, and does not require the injection of vital dye. The staining of necrotic myofibers by IgG uptake can also be paired with other co-immunolabelling.

Described here is a protocol for direct immunolabelling of necrotic myofibers in muscle cryosections. Necrotic cells are permeable to serum proteins, including immunoglobulin G (IgG). Revealing the uptake of IgG by myofibers allows the identification and quantification of myofibers that undergo necrosis regardless of muscle condition.

المناعية انحطاط Myofiber في العضلات الخزعات

The necrosis of muscle fibres (myonecrosis) plays a central role in the pathogenesis of several muscle conditions, including muscular dystrophies. ...

Single Cell Micro-aspiration as an Alternative Strategy to Fluorescence-activated Cell Sorting for Giant Virus Mixture Separation

During the amoeba co-culture process, more than one virus may be isolated in a single well. We previously solved this issue by end point dilution and/or fluorescence activated cell sorting (FACS) applied to the viral population. However, when the viruses in the mixture have similar morphologic properties and one of the viruses multiplies slowly, the presence of two viruses is discovered at the stage of genome assembly and the viruses cannot be separated for further characterization. To solve this problem, we developed a single cell micro-aspiration procedure that allows for separation and cloning of highly similar viruses. In the present work, we present how this alternative strategy allowed us to separate the small viral subpopulations of Clandestinovirus ST1 and Usurpativirus LCD7, giant viruses that grow slowly and do not lead to amoebal lysis compared to the lytic and fast-growing Faustovirus. Purity control was assessed by specific gene amplification and viruses were produced for further characterization.

Here, we describe a single cell micro-aspiration method for the separation of infected amoebae. In order to separate viral subpopulations in Vermamoeba vermiformis infected by Faustoviruses and unknown giant viruses, we developed the protocol detailed below and demonstrated its ability to separate two low-abundance novel giant viruses.

خليه واحده الطموح الصغير كاستراتيجية بديله لفرز الخلايا المنشطة الفلورية لفصل خليط الفيروسات العملاقة

During the amoeba co-culture process, more than one virus may be isolated in a single well. We previously solved this issue by end point dilution and/or ...

Assessing Agrochemical Risk to Mated Honey Bee Queens

Current risk assessment strategies for honey bees rely heavily upon laboratory tests performed on adult or immature worker bees, but these methods may not accurately capture the effects of agrochemical exposure on honey bee queens. As the sole producer of fertilized eggs inside a honeybee colony, the queen is arguably the most important single member of a functioning colony unit. Therefore, understanding how agrochemicals affect queen health and productivity should be considered a critical aspect of pesticide risk assessment. Here, an adapted method is presented to expose honey bee queens and worker queen attendants to agrochemical stressors administered through a worker diet, followed by tracking egg production in the laboratory and assessing first instar eclosion using a specialized cage, referred to as a Queen Monitoring Cage. To illustrate the method&#39;s intended use, results of an experiment in which worker queen attendants were fed diet containing sublethal doses of imidacloprid and effects on queens were monitored are described.

This protocol was developed to enhance the understanding of how agrochemicals affect honey bee (Apis mellifera) reproduction by establishing methods to expose honey bee queens and their worker caretakers to agrochemicals in a controlled, laboratory setting and carefully monitoring their relevant responses.

تقييم المخاطر الكيميائية الزراعية لملكات نحل العسل المتزاوج

Current risk assessment strategies for honey bees rely heavily upon laboratory tests performed on adult or immature worker bees, but these methods may not ...

Profiling of H3K4me3 Modification in Plants using Cleavage under Targets and Tagmentation

Epigenomic regulation at the chromatic level, including DNA and histone modifications, behaviors of transcription factors, and non-coding RNAs with their recruited proteins, lead to temporal and spatial control of gene expression. Cleavage under targets and tagmentation (CUT&#38;Tag) is an enzyme-tethering method in which the specific chromatin protein is firstly recognized by its specific antibody, and then the antibody tethers a protein A-transposase (pA-Tn5) fusion protein, which cleaves the targeted chromatin in situ by the activation of magnesium ions. Here, we provide our previously published CUT&#38;Tag protocol using intact nuclei isolated from allortetraploid cotton leaves with modification. This step-by-step protocol can be used for epigenomic research in plants. In addition, substantial modifications for plant nuclei isolation are provided with critical comments.

Cleavage under targets and tagmentation (CUT&amp;Tag) is an efficient chromatin epigenomic profiling strategy. This protocol presents a refined CUT&amp;Tag strategy for the profiling of histone modifications in plants.

توصيف تعديل H3K4me3 في النباتات باستخدام الانقسام تحت الأهداف والوسم

Epigenomic regulation at the chromatic level, including DNA and histone modifications, behaviors of transcription factors, and non-coding RNAs with their ...

An Improved Chemotaxis Assay for the Rapid Identification of Rhizobacterial Chemoattractants in Root Exudates

Chemotaxis identification is very important for the research and application of rhizosphere growth-promoting bacteria. We established a straightforward method to quickly identify the chemoattractants that could induce the chemotactic movement of rhizosphere growth-promoting bacteria on sterile glass slides via simple steps. Bacteria solution (OD600 = 0.5) and sterile chemoattractant aqueous solution were added dropwise on the glass slide at an interval of 1 cm. An inoculating loop was used to connect the chemoattractant aqueous solution to the bacterial solution. The slide was kept at room temperature for 20 min on the clean bench. Finally, the chemoattractant aqueous solution was collected for bacterial counting and microscopic observation. In this study, through multiple comparisons of experimental results, the method overcame multiple shortcomings of traditional bacterial chemotaxis methods. The method reduced the error of plate counting and shortened the experimental cycle. For the identification of chemoattractant substances, this new method can save 2-3 days compared to the traditional method. Additionally, this method allows any researcher to systematically complete a bacterial chemotaxis experiment within 1-2 days. The protocol can be considered a valuable resource for understanding plant-microbe interactions.

Here, we present an improved chemotaxis assay protocol. The goal of this protocol is to reduce the steps and costs of traditional bacterial chemotaxis methods and to serve as a valuable resource for understanding plant-microbe interactions.

فحص كيميائي محسن للتعرف السريع على الجاذبات الكيميائية الريزوبكتيرية في إفرازات الجذر

Chemotaxis identification is very important for the research and application of rhizosphere growth-promoting bacteria. We established a straightforward ...

Comprehensive Echocardiographic Assessment of Right Ventricle Function in a Rat Model of Pulmonary Arterial Hypertension

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a progressive disease caused by vasoconstriction and remodeling of the small arteries in the lungs. This remodeling leads to increased pulmonary vascular resistance, worsened right ventricular function, and premature death. Currently approved therapies for PAH largely target pulmonary vasodilator pathways; however, recent emerging therapeutic modalities are focused on other novel pathways involved in the pathogenesis of the disease, including right ventricle (RV) remodeling. Imaging techniques that allow longitudinal assessment of novel therapeutics are very useful for determining the efficacy of new drugs in preclinical studies. Noninvasive trans-thoracic echocardiography remains the standard approach to evaluating heart function and is widely used in rodent models. However, echocardiographic evaluation of the RV can be challenging due to its anatomical position and structure. In addition, standardized guidelines are lacking for echocardiography&#160;in preclinical rodent models, making it difficult to carry out a uniform assessment of RV&#160;function across studies in different laboratories. In preclinical studies, the monocrotaline (MCT) injury model in rats is widely used to evaluate drug efficacy for treating PAH. This protocol describes the echocardiographic evaluation of the RV in na&#239;ve and MCT-induced PAH rats.

The present protocol describes the echocardiographic characterization of right ventricular morphology and function in a rat model of pulmonary arterial hypertension.

تقييم شامل لتخطيط صدى القلب لوظيفة البطين الأيمن في نموذج الفئران لارتفاع ضغط الدم الشرياني الرئوي

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a progressive disease caused by vasoconstriction and remodeling of the small arteries in the lungs. This ...

استخدام خزعات الجلد لتوليد خلايا بودوسيت مشتقة من المريض

Generation of Patient-Derived Podocytes from Skin Biopsies

Podocytes are epithelial cells sitting on the urinary site of the glomerular filtration barrier that contribute to the selective filter function of the glomerulus. Mutations in podocyte-specific genes can cause focal segmental glomerulosclerosis (FSGS), and podocytes are also affected in many other primary and secondary nephropathies. Due to their differentiated nature, primary cell culture models are limited for podocytes.&#160;Therefore, commonly conditionally immortalized cells are used. However, these conditionally immortalized podocytes (ciPodocytes) have several limitations: the cells can dedifferentiate in culture, especially when they reach confluency, and several podocyte-specific markers are either only slightly or not expressed at all. This brings the use of ciPodocytes and their applicability for physiological, pathophysiological, and clinical reach into question. Here, we describe a protocol for the generation of human podocytes-including patient-specific podocytes-from a skin punch biopsy by episomal reprogramming of dermal fibroblasts into hiPSCs and subsequent differentiation into podocytes. These podocytes resemble in vivo podocytes much better in terms of morphological characteristics, like the development of foot processes and the expression of the podocyte-specific marker. Finally, yet importantly, these cells maintain patients&#39; mutations, resulting in an improved ex vivo model to study podocyte diseases and potential therapeutic substances in an individualized approach.

تسليط الضوء على المؤلف: جيل من الخلايا القلبية المشتقة من المريض من خزعات الجلد  

This manuscript describes a two-step protocol to generate patient-specific podocytes from dermal fibroblasts via episomal reprogramming into human-induced pluripotent stem cells (hiPSCs) and subsequent differentiation into podocytes.

توليد الخلايا القرنية المشتقة من المريض من خزعات الجلد

Podocytes are epithelial cells sitting on the urinary site of the glomerular filtration barrier that contribute to the selective filter function of the ...