نخر myofiber هو سمة من الاضطرابات العصبية العضلية المتعددة ويلعب دورا مركزيا في التسبب في الأمراض. طريقة محددة وموثوق بها لتقييم انحطاط العضلات مهمة للتشخيص والبحوث الترجمية. تسمح هذه التقنية القابلة للتكيف للغاية وضع العلامات من مستضد متعددة في نفس الوقت في نفس المقطع داخل myofibers.
فمن الممكن مع الأصباغ الحيوية. H & E تلطيخ هو أساليب تجريبية غير قابلة للتكيف لاعتداء موثوق بها وقابلة للتكرار. ومع ذلك، فإن تلطيخ امتصاص IgG محدد بالنسبة للخلايا العضلية النخرية وقابل للتطبيق على الخزعات البشرية.
هذه التقنية يمكن أن توفر نظرة ثاقبة في جميع الاضطرابات العصبية العضلية التي تتميز بالتصلب العضلي. بعد إزالة الشعر من الساق من الفائدة وضع الذكور أربعة من العمر MDX الحيوان في موقف supine وتأمين الكفوف إلى لوحة الفلين. باستخدام مقص الدقة أو ملقط إزالة الجلد الساق من القدم إلى الركبة لفضح طول الساق وtiibialis الأمامي.
استخدم المقص لإجراء شق بين الساق والبيبية الأمامية. استخدام ملقط لإزالة بعناية طبقة epimysium من سطح العضلات. في الكاحل، استخدم ملقط لعزل الوتر الأمامي من الوتر الآخر وسحب بلطف على الوتر لعزله عن الساق والعضلات المحيطة بها.
عندما البطن الأمامي tibialis قد فصل تماما عقد وتر حتى أن يتم إرفاق فقط الجزء القريب من العضلات الأمامية tibialis إلى الركبة. وقطع بلطف وتر قريب أقرب ما يمكن إلى الرضفة. ضع الـ tibialis الأمامي على قطعة من الشاش المُخفف بخفة مع المالحة لتجنب التجفيف.
تراجع جزئيا كوب يحتوي على 70 إلى 100 ملليلتر من ال isopentane في حاوية من النيتروجين السائل حتى الايسوبينتان في الجزء السفلي من كوب يصبح صلبا أبيض. بعناية ما قبل التسمية على الجانب الآخر من الفلين بحيث يمكن التعرف على خزعة بشكل صحيح بعد التجميد، وإضافة ما يقرب من 0.5 ملليلتر من العلكة tragacanth على 20 في 11 من 8 ملليمتر قطعة دائرية من الفلين. استخدام ملقط لتضمين تيبياليس الأمامي في جانب وتر اللثة.
عقد العضلات مع محورها عمودي على سطح الفلين. يجب أن يبقى نصف جانب وتر الوتر على الأقل من الـ tibialis الأمامي مكشوفًا من اللثة. ثم سرعان ما تراجع الفلين مع العضلات جزءا لا يتجزأ من في المبردة، غير مجمدة إيسوبتينتان لمدة دقيقتين تقريبا للسماح التجميد الكامل.
الحصول على أجزاء من الأنسجة المجمدة، تعيين درجة حرارة التبريد إلى ناقص 25 درجة مئوية واستخدام مركب درجة حرارة القطع الأمثل لإصلاح الأنسجة على كتلة القطع التبريد. تقليم العينة حتى يتم التوصل إلى البطن العضلات. الحصول على سبعة إلى 10 أقسام ميكرومتر جمع ما لا يقل عن قسمين لكل شريحة الزجاج وضع الشرائح في درجة حرارة الغرفة كما يتم التقاط المقاطع.
السماح لتجفيف الأنسجة لمدة 20 دقيقة على الأقل في درجة حرارة الغرفة في بيئة التهوية. ثم تخزين القسم في ناقص 80 درجة مئوية حتى انهم تلطيخ. المناعة مناعة الأنسجة.
أولاً، ذوبان الشرائح في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة على الأقل في بيئة التهوية. بعد ذلك، حدد الأقسام بقلم مبيد للماء. إصلاح الأنسجة مع 2٪ شبهformaldehyde لمدة 10 دقائق في غرفة رطبة.
في نهاية تثبيت شطف المقاطع مع اثنين من غسل 5 دقائق في برنامج تلفزيوني الطازجة في غسل. منع أي ربط غير محددة مع مصل الماعز 10٪ المخفف في برنامج تلفزيوني. بعد 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة التسمية الأقسام مع الأجسام المضادة الأولية من الفائدة، مخففة في مصل الماعز 5٪ لمدة 2 ساعة في درجة حرارة الغرفة.
في نهاية الحضانة، شطف الشرائح مع ثلاث غسلات 5 دقائق في برنامج تلفزيوني تتبع عن طريق وضع العلامات مع الأجسام المضادة الثانوية الفلوروومي المناسبة لمدة 45 دقيقة في درجة حرارة الغرفة المحمية من الضوء. في نهاية الحضانة، وغسل الشرائح مع ثلاثة يغسل 10 دقيقة في برنامج تلفزيوني. قم بتركيب القسم بوسيلة فلورسنت للتصاعد تحتوي على 100 نانوغرام لكل ملليلتر من DAPI وزلة غطاء.
ثم جفف الشرائح بين عشية وضحاها عند أربع درجات مئوية قبل التصوير. عضلات تيبياليس الأمامية من أربعة أسابيع الفئران mdx القديمة غالبا ما تظهر ملامح غير متجانسة بما في ذلك المناطق المتضررة بشكل سيئ في المناطق التدهور وتجديد معا في نفس المقطع العرضي. تتأثر المناطق المتضررة أقل ما يقال العضلات تحتوي على myofibers من حجم كبير ومتجانس والنوى في كثافة منخفضة التي تقع أساسا في المحيط أو بين myofibers.
IgG myofibers إيجابية عموما غائبة في مثل هذه الصحة أو المناطق المتضررة أقل ما يقال في حين IgG المناعية داخل myofibers يشير إلى myonecrosis. myofibers شكلت حديثا موجودة في حجم صغير في مراحلها المبكرة من التجدد توسيع تدريجيا كما دمج السلف العضلي في المساهمة في الخلية المتزامنة. خلال هذه العملية، و myonuclei لا تزال في مركز تجديد الأنسجة مع مجموعات من myofibers الصغيرة، نوىوسيد المركزية تشير إلى myofibers تجديدها مؤخرا لتقليل خطر القطع الأثرية من المهم أن تبقي في العضلات مباشرة عند تجميد الأنسجة وعند درجة الحرارة الصحيحة.
وينبغي دائما التعامل مع إيسوبنتان وPFA بحذر وتحت غطاء محرك الدخان.
