1 بروتوكول الثقافة السابق البيضة : <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يحضن بيض الدجاج المخصب <ol class="lroman" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن تخزين بيض الدجاج المخصب بنسبة 13 درجة مئوية تصل إلى 5 أيام قبل الشروع في الحضانة دون التنمية. ويمكن للبرودة النبيذ الأحمر الحفاظ على درجة الحرارة هذه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان البيض الجانب حادة حتى في حاضنة رطوبة ثابتة مع 60 ٪ في التأرجح المستمر 37.5 درجة مئوية لمدة 72 ساعة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الأراجيح (الشكل 1A) <ol class="lroman" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء ¾ 9 أكواب البلاستيك أوقية مع الماء المعقم الدافئ. ألف أوقية العادية 9 الكأس التي يبلغ قطرها 8 سم من الأعلى. وجدنا أن هذا الحجم هو الأنسب لتطبيق وقت طويل الثقافة المعروضة هنا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع حوالي 20 سم تتشبث التفاف. circumferentially يضعوا على رأس الكأس بوضع الشريط المطاطي حولها. وينبغي نشر من البلاستيك على سطح الماء. قطع البلاستيك الزائد حول الفرقة. وجدنا تتشبث التفاف إلى أن تكون أكثر ملائمة لهذا التطبيق لأنه يمنع التصاق من صفار البيض ، مما أدى إلى تقسيم صفار أثناء النقل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسح البلاستيك مع kimwipes (كيمبرلي كلارك ، وشركة) المبللة مع الايثانول 70 ٪. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة البيض من الحاضنة بعد 72 ساعة من الحضانة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعقيم البيض بنسبة مسح السطح مع kimwipes الايثانول 70 ٪ المبللة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع البيض أفقيا لمدة 1-2 دقائق لتحديد الموقع الصحيح للجنين (الشكل 1B). يمكن استخدام كرتون البيض لوضع البيض أفقيا. وتناوب الأجنة إلى الأعلى بعد 1-2 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الأجنة على الأراجيح في جو معقم و مطهر الصفحي هود التدفق. <ol class="lroman" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام حافة حادة (مثل حافة دلو معدني أو كوب زجاج) ، انقر فوق البيض برفق حتى يكون هناك عراقيل صغيرة على الجانب السفلي من البيض (الشكل 1C). تذكر ، يتم وضع الجنين على upperside. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الابهام في طرفي نقيض من دنت وسحب قذائف أفقيا بعيدا (1D الشكل). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صفار مع وضع الجنين ، وكذلك على الألبومين في أرجوحة (الشكل 1E). وسوف توفر بيئة الألبومين الملطف حول صفار البيض لامتصاص الصدمات الناجمة عن الانتقال للنظام فضلا عن أنها توفر التغذية إلى الجنين للممارسات الثقافة طويلة. والمياه تحت أرجوحة ضمان جنين ستبقى موازية على الأرض أثناء النقل ، ويكون بمثابة موصل للحرارة أثناء التصوير إذا تم استخدام سخان المياه تداول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وينبغي بالفعل أن الجنين يكون وضع على أعلى إذا تم تنفيذ نقل بشكل صحيح. إذا لم يكن كذلك ، استخدام unsharp ، وجوه العقيمة (غيض من مقص بلانت أي. المنحنية المغلقة) ويداعب إتجاهي صفار بحيث يدور الجنين إلى الأعلى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان قطره 10 سم طبق بتري على رأس الكأس لختم الجنين. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثقافة مكان الكأس في مجموعة حاضنة في 37.5 درجة مئوية. إذا تم استخدام حاضنة المحمولة ، ووضع سبتمبر 1-2 أكواب أوقية مملوءة بالماء المقطر تحافظ على الرطوبة في ~ 60 ٪ (الشكل 1F). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا زرع الأجنة بعد اليوم 7 الجنينية ، ينبغي تناثرت قطع قشر البيض سحق حول محيط جنين كمصدر للكالسيوم العظام وتطوير النضج. </li></ol> التبعي للمعدات التصوير خارج الحاضنة / التلاعب : بنيت حمام ماء المتداولة في المنزل للحفاظ على درجة حرارة الحضانة بينما التصوير أو تلاعب (الشكل 3). تم توصيل مياه الحمام التي يمكن أن تناسب الكأس عبر أنابيب الحجم المناسب إلى خزان المياه. ألف سخان المقاومة بتسخين المياه في الخزان الذي ينظم يدويا باتباع درجة حرارة الماء. مضخة مياه توزع الماء. التمثيل Pictoral يصور سهولة التصوير عبر ultrasongraphy / florescent المجهري (الشكل 3). <img src="/files/ftp_upload/2154/2125fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1. أرجوحة إعداد ونقل أجنة الدجاج إلى الأراجيح. <img src="/files/ftp_upload/2154/2125fig2.jpg" alt="الشكل 2" /> الشكل 2. يمكن زراعة أجنة الدجاج مرحلة مختلفة نمت عبر تقنية السابقين الثقافة البيضة الجنين اعتبارا من 17 سمو عبر هذه التقنية -- نتائج ممثل. <img src="/files/ftp_upload/2154/2125fig3.jpg" alt="الشكل 3" /> الشكل 3. التخطيطي وممثل الصور من المياه المستخدمة في نظام التداول بالتزامن مع النظام السابق للثقافة البيضة للحفاظ على الأجنة في درجة حرارة مثالية التنمية. 2. تطبيقات مختارة : أولا Microinjection هذه الثقافة الجنين هو مناسبة لتطبيقات الحلول microinjection حيث يجب أن يتم حقنه إلى الأوعية الدموية للتصوير التباين القائمة (أي. المجهري فلوري ، الصغيرة المحسوبة الطوبوغرافيا الخ) (الشكل 4). أقل من بروتوكول microinjection : <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد appara الحقنطوس <ol class="lroman" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سحبت أزياء 0.75 أنابيب زجاجية معرف الشعرية في microneedles مشطوف الحافة باستخدام microforge. حجم رأس المطلوبة يتوقف على المعدل المستهدف قطرها / تدفق الوريد المطلوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الاتصال المحقنة إلى 0.03 بوصة معرف أنابيب السيليكون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل الأنابيب مع الحل ليتم حقنه وتوصيلها إلى microneedle الأنبوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع microneedle على لmicromanipulator والمحاقن لحاملها حقنة أو مضخة الحقنة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة الماء المعقم في رفع الكأس وبالتالي الجنين. عانينا لاختراق تلك المناسبة من الإبرة في وعاء دموي (أي محي السفينة) ، ومعدل انتشار الأفقي ضروري. هذا يتطلب أن يكون الجنين على متن الطائرة نفسها على حواف الكأس. <ol class="lroman" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إخراج الشريط المطاطي عقد بلاستيكية تحت الجنين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رفع جانب واحد من البلاستيك بلطف وإضافة بعض الماء المعقم في الكأس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأمين الشريط المطاطي على البلاستيك مرة أخرى. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن حل لسفينة الجنينية. في تجربتنا ، وعندما يتم حقن حل لسفينة المحية ، microneedles الحجم يحتاج إلى عشر ما يقرب من 1 / 10 من اوعية للحفاظ على كفاءة الارواء دون التسبب في حدوث نزيف. <ol class="lroman" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مضخة حل microneedle ضمان عدم تشكيل فقاعات الهواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> محاذاة غيض من microneedle على السفينة المختارة. بالنسبة للسفن المحية ، اختيار منطقة الشوكة تعطي المساحة القصوى لاختراق سفينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دفع الإبرة في اتجاه السفينة. وسوف يتراجع السفينة الأولى. بمجرد أن تخترق إبرة ، بدء الارواء. وينبغي أن لون الدم المتدفق مع تغيير الارواء. إذا لم يتم تغيير لون المشاهدة ، قد اخترقت إبرة من السفينة. في هذه الحالة ، يتراجع ببطء في حين ضخ microneedle في وقت واحد حتى حل فانه ينظر الى تغير اللون في السفينة. بمجرد اكتمال التروية ، التراجع عن microneedle من السفينة. </li></ol></li></ol><img src="/files/ftp_upload/2154/2125fig4.jpg" alt="الشكل 4" /> الشكل 4 : Microinjection صبغة الفلورسنت في الأوعية الدموية للجنين البيضة فرخ السابقين مثقف. II. الإجراءات المجهرية -- ربط الأذيني الأيسر هذا الإعداد الثقافة السابقين البيضة مثالية لأداء التطبيقات جراحية لافراخ الدجاج نظرا لأنه يتيح الوصول الكامل إلى الجنين. غادر ربط الأذيني (LAL) (الشكل 5) هي أقل من بروتوكول للتقنية سبيل المثال ،. يتم تنفيذ هذا الإجراء حوالي 24 ساعة في الفترة الثقافة (HH24) : <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعد الذراع عقدة ~ 0.5 مم باستخدام النايلون 10-0 خياطة جراحية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملقط مع غرامة ، وإزالة محليا الأغشية المشيمية والسقاء على الجنين ورفع الجنين من الجزء الخلفي للتدوير مثل ذلك عموديا أن الجانب الأيسر من الجنين غير مرئية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام الملقط غرامة ، وإزالة تأمور عبر الأذين الأيسر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> محاذاة عقدة على الأذين الأيسر واربطه بإحكام. وينبغي عقد قرانه وذلك لمنع ~ 75 ٪ من تدفق الدم الأصلي إلى الجانب الأيسر. قطع حواف عقدة مع microscissors وإزالة بعناية وتجاهل الدرز الزائدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدوير الجنين مرة أخرى إلى التوجه الأصلي (على الجانب الأيمن العلوي). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وسوف تشمل الضوابط صورية نفس الإجراء ولكن لن يكون مجرد خياطة مرت ، وتعادل لا. سيتم تأكيد المعاملة LAL فعالة (75 ٪ انقباض) في 24 ساعة بعد الجراحة ، وسيتم استبعاد الأجنة تنحيته. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/2154/2154fig5.jpg" alt="الشكل 5" /> الشكل 5 : عنصر تحكم واليسار الأذيني الجنين الفرخ ligated سهم يظهر الأذين الأيسر ، الذي يبعد نحو 75 ٪ في الجنين أصغر ligated.

<ol>
	<li>Zamir, E. A., Czirok, A., Cui, C., Little, C. D., Rongish, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesodermal+cell+displacements+during+avian+gastrulation+are+due+to+both+individual+cell-autonomous+and+convective+tissue+movements.">Mesodermal cell displacements during avian gastrulation are due to both individual cell-autonomous and convective tissue movements.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 19806-19811 (1980).</li><li>Ehrman, L. A., Yutzey, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lack+of+regulation+in+the+heart+forming+region+of+avian+embryos.">Lack of regulation in the heart forming region of avian embryos.</a> Dev Biol. 207, 163-175 (1999).</li><li>Clark, E. B., Hu, N., Rosenquist, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+conotruncal+constriction+on+aortic-mitral+valve+continuity+in+the+stage+18,+21+and+24+chick+embryo.">Effect of conotruncal constriction on aortic-mitral valve continuity in the stage 18, 21 and 24 chick embryo.</a> Am J Cardiol. 53, 324-327 (1984).</li><li>deAlmeida, A., McQuinn, T., Sedmera, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+ventricular+preload+is+compensated+by+myocyte+proliferation+in+normal+and+hypoplastic+fetal+chick+left+ventricle.">Increased ventricular preload is compensated by myocyte proliferation in normal and hypoplastic fetal chick left ventricle.</a> Circ Res. 100, 1363-1370 (2007).</li><li>Nakamura, H., Funahashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Introduction+of+DNA+into+chick+embryos+by+in+ovo+electroporation.">Introduction of DNA into chick embryos by in ovo electroporation.</a> Methods. 24, 43-48 (2001).</li><li>Butcher, J. T., McQuinn, T. C., Sedmera, D., Turner, D., Markwald, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transitions+in+early+embryonic+atrioventricular+valvular+function+correspond+with+changes+in+cushion+biomechanics+that+are+predictable+by+tissue+composition.">Transitions in early embryonic atrioventricular valvular function correspond with changes in cushion biomechanics that are predictable by tissue composition.</a> Circ Res. 100, 1503-1511 (2007).</li><li>McQuinn, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-frequency+ultrasonographic+imaging+of+avian+cardiovascular+development.">High-frequency ultrasonographic imaging of avian cardiovascular development.</a> Dev. Dyn. 236, 3503-3513 (2007).</li><li>Korn, M. J., Cramer, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Windowing+chicken+eggs+for+developmental+studies.">Windowing chicken eggs for developmental studies.</a> J Vis Exp. , (2007).</li><li>Auerbach, R., Kubai, L., Knighton, D., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+procedure+for+the+long-term+cultivation+of+chicken+embryos.">A simple procedure for the long-term cultivation of chicken embryos.</a> Dev Biol. 41, 391-394 (1974).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

الوصول البصرية والتجريب في أجنة الطيور يمثل تحديا بسبب القيود التي تفرضها على قشرة البيضة. النوافذ يحد بشكل كبير من عدد من microvessels الوصول للنهج الحقن والمجهرية 8. ويمكن نتيجة لذلك يمكن معالجته إلا الأجنة المبكر والمراقبة المستمرة غير ممكن. وكانت أوائل السابقي...

<table><tbody><tr><td>Fertile white Leghorn chicken eggs</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Model GB1, Avery Incubators, Hugo CO</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Saran Wrap</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimberly-Clark Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rubber bands</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Warm sterile water</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>9 oz plastic cup</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>100 mm diameter Petri dish</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1602N thermal air</td><td>GQF Manufacturing</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fluorescein-conjugated dextran (2 MDa, 1% w/v in phosphate buffered saline)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microforge</td><td>Glassworx, Inc, St Louis MO</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glass capillary tubes (0.75 mm ID)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulator</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>Model M3301L</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescent microscopy</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td>Z20</td><td></td></tr><tr><td>Fine 55-forceps</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10-0 nylon surgical suture</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tubing</td><td>VWR international</td><td></td><td>1mm OD</td></tr><tr><td>3 mL syringe</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>200 &amp;mu;L pipetter and pipette tips</td><td>VWR international</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

an ex-ovo chicken embryo culture system suitable for imaging and microsurgery applications

فهم العلاقة بين العوامل الوراثية وmicroenvironmental التي تدفع التطور الجنيني الطبيعي وتالف أمر أساسي لاكتشاف استراتيجيات علاجية جديدة. وقد مكنت التطورات في تكنولوجيا التصوير التحقيق الكمي للتنظيم وإنضاج خطة الجسم ، ولكن التشكل الجنيني مرحلة لاحقة أقل وضوحا. أجنة الدجاج وحيوان فقاري جاذبية النظام النموذجي لهذا التطبيق بسبب سهولة التلاعب الثقافة والجراحية. يمكن تربيتها الأجنة المبكرة لفترة قصيرة على ورقة حلقات التصفية ، التي تمكن من الوصول الكامل لالزخرفة الضوئية الخلية ومصير 1،2 الدراسات. تتم تقليديا دراسة العمليات التنموية المتقدمة مثل التشكل القلب من خلال نافذة من قشر البيض 3-5 ، لكن هذه التقنية البصرية حدود الوصول تبعا لحجم النافذة. ونحن سبق وضعها طريقة بسيطة لثقافة بأكملها الأجنة السابقين البيضة على قوارب تزن سداسية لمدة تصل إلى 10 يوما ، مما مكن ارتفاع القرار التصوير بالموجات فوق الصوتية عبر 6،7. وكانت هذه الثقافات من الصعب النقل ، والحد من أنواع الأدوات المتاحة للتجارب التصوير الحي. نقدم هنا هو تحسين نظام الثقافة قذيفة أقل مع دائرة فعالة من حيث التكلفة والبيئية المحمولة. وضبطت البيض على أرجوحة إنشاؤها بواسطة الغشاء البولي يوريثين (تتشبث التفاف) الملصقة circumferentially الى كوب من البلاستيك مملوءة جزئيا بالماء المعقم. وكانت أبعاد محيط وعمق أرجوحة الحرجة على حد سواء للحفاظ على التوتر السطحي ، في حين أن ميكانيكا أرجوحة والمياه تحت ساعد تخفيف الاهتزازات الناجمة عن النقل. وقد وضعت أيضا بصمة صغيرة تعميم حمام مائي لتمكين استمرار التحكم في درجة الحرارة خلال التجريب. علينا أن نظهر القدرة على الأجنة الثقافة في هذا الطريق لمدة 14 يوما على الأقل من دون عيب أو تأخير morphogenic وتوظيف هذا النظام في عدة المجهرية وتطبيقات التصوير.

Watch this Scientific Journal Video about An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications at JoVE.com

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

في هذه المقالة ، نقدم منهجية بسيطة لتمكين طويل الأجل<em&gt; السابقين البيضة</em&gt; ثقافة جنين الطيور. هذا الأسلوب هو الأمثل لالتجريب الطولية التي تتطلب الوصول بصري كامل و / أو النقل العقيمة في أجنة الطيور.

و السابقين البيضة الثقافة الأجنة النظام الدجاج مناسبة للتطبيقات التصوير والجراحة المجهرية

Understanding the relationships between genetic and microenvironmental factors that drive normal and malformed embryonic development is fundamental for ...

an-ex-ovo-chicken-embryo-culture-system-suitable-for-imaging

Research

JoVE Journal

Biology

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

22.9K Views.  Cornell University. في هذه المقالة ، نقدم منهجية بسيطة لتمكين طويل الأجل السابقين البيضة ثقافة جنين الطيور. هذا الأسلوب هو الأمثل لالتجريب الطولية التي تتطلب الوصول بصري كامل و / أو النقل العقيمة في أجنة الطيور.

Video: An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

Optimized Ex-ovo Culturing of Chick Embryos to Advanced Stages of Development

Research in anatomy, embryology, and developmental biology has largely relied on the use of model organisms. In order to study development in live embryos model organisms, such as the chicken, are often used. The chicken is an excellent model organism due to its low cost and minimal maintenance, however they present observational challenges because they are enclosed in an opaque eggshell. In order to properly view the embryo as it develops, the shell must be windowed or removed. Both windowing and ex ovo techniques have been developed to assist researchers in the study of embryonic development. However, each of the methods has limitations and challenges. Here, we present a simple, optimized ex ovo culture technique for chicken embryos that enables the observation of embryonic development from stage HH 19 into late stages of development (HH 40), when many organs have developed. This technique is easy to adopt in both undergraduate classes and more advanced research laboratories where embryo manipulations are conducted.

Optimized Ex-ovo Culturing of Chick Embryos to Advanced Stages of Development

Viewing and accessing the chicken embryo during development can be challenging. We have developed an ex ovo method that is simple, cost effective, and can easily be used in a classroom or research setting. This method provides access to the embryo into late stages of embryonic development (HH 40).

الأمثل<em&gt; السابقين البيضة</em&gt; التثقيف من الفرخ الأجنة إلى مراحل متقدمة من التطوير

Research in anatomy, embryology, and developmental biology has largely relied on the use of model organisms. In order to study development in live embryos ...

Developmental Biology

A Submerged Filter Paper Sandwich for Long-term Ex Ovo Time-lapse Imaging of Early Chick Embryos

Due to its availability, low cost, flat geometry, and transparency, the ex ovo chick embryo has become a major vertebrate animal model for the study of morphogenetic events, such as gastrulation2, neurulation3-5, somitogenesis6, heart bending7,8, and brain formation9-13, during early embryogenesis. Key to understanding morphogenetic processes is to follow them dynamically by time-lapse imaging. The acquisition of time-lapse movies of chick embryogenesis ex ovo has been limited either to short time windows or to the need for an incubator to control temperature and humidity around the embryo14. Here, we present a new technique to culture chick embryos ex ovo for high-resolution time-lapse imaging using transmitted light microscopy. The submerged filter paper sandwich is a variant of the well-established filter paper carrier technique (EC-culture)1 and allows for the culturing of chick embryos without the need for a climate chamber. The embryo is sandwiched between two identical filter paper carriers and is kept fully submerged in a simple, temperature-controlled medium covered by a layer of light mineral oil. Starting from the primitive streak stage (Hamburger-Hamilton stage 5, HH5)15 up to at least the 28-somite stage (HH16)15, embryos can be cultured with either their ventral or dorsal side up. This allows the acquisition of time-lapse movies covering about 30 hr of embryonic development. Representative time-lapse frames and movies are shown. Embryos are compared morphologically to an embryo cultured in the standard EC-culture.
The submerged filter paper sandwich provides a stable environment to study early dorsal and ventral morphogenetic processes. It also allows for live fluorescence imaging and micromanipulations, such as microsurgery, bead implantation, microinjection, gene silencing, and electroporation, and has a strong potential to be combined with immersion objectives for laser-based imaging (including light-sheet microscopy).

A Submerged Filter Paper Sandwich for Long-term Ex Ovo Time-lapse Imaging of Early Chick Embryos

Here, we present a new technique to culture chick embryos ex ovo for time-lapse imaging using transmitted light and fluorescence microscopy. The submerged filter paper sandwich is a variant of the well-established filter paper carrier technique1 that allows for the culturing of chick embryos fully-submerged in a liquid culture medium.

والمغمورة ساندويتش ورقة مرشح للالمدى الطويل<em&gt; البيضة السابقين</em&gt; الوقت الفاصل بين التصوير من وقت مبكر الفرخ الأجنة

Due to its availability, low cost, flat geometry, and transparency, the ex ovo chick embryo has become a major vertebrate animal model for the study of ...

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ideal tool for studying  the formation and patterning of brain, neural tube, somite and heart primordia. Applications of chick embryo culture include electroporation of DNA or RNA constructs in order to analyze gene function, grafts of growth factor coated beads such as FGFs and BMPs , as well as whole mount in situ hybridization and immunohistochemistry. This video demonstrates the different steps in chick embryo culture; First, the embryo is explanted in saline. Then, the embryo is centered on a glass ring. The membranes surrounding the embryo are lifted along the walls of the ring. The ring is then placed in a culture dish containing a pool of albumine. The culture dish is sealed and placed in a humid chamber, where the embryo is cultured for up to 24 hrs. Finally, the embryo is removed from the ring, fixed and processed for further applications. A troubleshooting guide is also presented.

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

This video demonstrates New culture, a method by which chick embryos are cultured outside the egg for up to 24 hr. This method enables one to study early development (primitive streak to 14 som.), a period corresponding to E7-9 in mouse. Applications of this technique include electroporation, in situ hybridization and immunohistochemistry.

طريقة لثقافة الفرخ المبكر فيفو السابقين الأجنة (الثقافة الجديدة)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ideal for experimentation. Currently, the study of these developmental pathways in the chicken embryo is conducted by applying inhibitors and drugs at localized sites and at low concentrations using a variety of methods. In vitro tissue&#160;culturing is a technique that enables the study of tissues separated from the host organism, while simultaneously bypassing many of the physical limitations present when working with whole embryos, such as the susceptibility of embryos to high doses of potentially lethal chemicals. Here, we present an organotypic culturing protocol for culturing the embryonic chicken half head in vitro, which presents new opportunities for the examination of developmental processes beyond the currently established methods.

Here, we present an organotypic culturing protocol to grow embryonic chicken organs in vitro. Using this method, the development of embryonic chicken tissue can be studied, while maintaining a high degree of control over the culture environment.

أسلوب الثقافة أورجانوتيبيك لدراسة تطوير الأنسجة الجنينية الدجاج

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

Chicken Embryo Spinal Cord Slice Culture Protocol

Slice cultures can facilitate the manipulation of embryo development both pharmacologically and through gene manipulations. In this reduced system, potential lethal side effects due to systemic drug applications can be overcome. However, culture conditions must ensure that normal development proceeds within the reduced environment of the slice. We have focused on the development of the spinal cord, particularly that of spinal motor neurons. We systematically varied culture conditions of chicken embryo slices from the point at which most spinal motor neurons had been born. We assayed the number and type of motor neurons that survived during the culture period and the position of those motor neurons compared to that in vivo. We found that serum type and neurotrophic factors were required during the culture period and were able to keep motor neurons alive for at least 24 hr and allow those motor neurons to migrate to appropriate positions in the spinal cord. We present these culture conditions and the methodology of preparing the embryo slice cultures using eviscerated chicken embryos embedded in agarose and sliced using a vibratome.

Slice cultures facilitate the manipulation of embryo development by gene and pharmacological perturbations. However, culture conditions must ensure that normal development can proceed within the reduced environment of the slice. We illustrate a protocol that facilitates normal spinal cord development to proceed for at least 24 hr.

الدجاج الأجنة شريحة الحبل الشوكي الثقافة البروتوكول

Slice cultures can facilitate the manipulation of  embryo development both pharmacologically and through gene manipulations. In  this reduced system, ...

Neuroscience

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Chicken eggs in the early phase of breeding are between in vitro and in vivo systems and provide a vascular test environment not only to study angiogenesis but also to study tumorigenesis. After the chick chorioallantoic membrane (CAM) has developed, its blood vessel network can be easily accessed, manipulated and observed and therefore provides an optimal setting for angiogenesis assays. Since the lymphoid system is not fully developed until late stages of incubation, the chick embryo serves as a naturally immunodeficient host capable of sustaining grafted tissues and cells without species-specific restrictions. In addition to nurturing developing allo- and xenografts, the CAM blood vessel network provides a uniquely supportive environment for tumor cell intravasation, dissemination, and vascular arrest and a repository where arrested cells extravasate to form micro metastatic foci.
For experimental purposes, in most of the recent studies the CAM was exposed by cutting a window through the egg shell and experiments were carried out in ovo, resulting in significant limitations in the accessibility of the CAM and possibilities for observation and photo documentation of effects. When shell-less cultures of the chick embryo were used1-4, no experimental details were provided and, if published at all, the survival rates of these cultures were low. We refined the method of ex ovo culture of chick embryos significantly by introducing a rationally controlled extrusion of the egg content. These ex ovo cultures enhance the accessibility of the CAM and chick embryo, enabling easy in vivo documentation of effects and facilitating experimental manipulation of the embryo. This allows the successful application to a large number of scientific questions: (1) As an improved angiogenesis assay5,6, (2) an experimental set up for facilitated injections in the vitreous of the chick embryo eye7-9, (3) as a test environment for dissemination and intravasation of dispersed tumor cells from established cell lines inoculated on the CAM10-12, (4) as an improved sustaining system for successful transplantation and culture of limb buds of chicken and mice13 as well as (5) for grafting, propagation, and re-grafting of solid primary tumor tissue obtained from biopsies on the surface of the CAM14.
In this video article we describe the establishment of a refined chick ex ovo culture and CAM assay with survival rates over 50%. Besides we provide a step by step demonstration of the successful application of the ex ovo culture for a large number of scientific applications. 
Daniel S. Dohle, Susanne D. Pasa, and Sebastian Gustmann contributed equally to this study.

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

The chick chorioallantoic membrane (CAM) is a unique, naturally immunodeficient supportive culture environment to study angiogenesis and tumorigenesis. This video article demonstrates the different steps in chick ex ovo culture, application of potentially angiogenic substances and successful inoculation of tumor cells and tissues on the surface of the CAM.

كتكوت البيضة السابقين الثقافة و البيضة السابقين CAM الفحص : كيف يعمل حقا

Chicken eggs in the early phase of breeding are between in vitro and in vivo systems and provide a vascular test environment not only to study ...

Optimization of Renal Organoid and Organotypic Culture for Vascularization, Extended Development, and Improved Microscopy Imaging

Embryonic kidney organotypic cultures, and especially pluripotent stem cell-derived kidney organoids, are excellent tools for following developmental processes and modelling kidney disease. However, the models are limited by a lack of vascularization and functionality. To address this, an improved protocol for the method of xenografting cells and tissues to the chorioallantoic membrane (CAM) of an avian embryo to gain vascularization and restoration of blood flow was developed. The grafts are overlaid with custom-made minireservoirs that fix the samples to the CAM and supply them with culture medium that protects the grafts from drying. The improved culture method allows xenografts to grow for up to 9 days. The manuscript also describes how to provide optimal conditions for long-term confocal imaging of renal organoids and organotypic cultures using the previously published Fixed Z-Direction (FiZD) method. This method gently compresses an embryonic organ or organoid between a glass coverslip and membrane in a large amount of medium and provides excellent conditions for imaging for up to 12 days. Together, these methods allow vascularization and blood flow to renal organoids and organotypic kidney cultures with improved confocal imaging. The methods described here are highly beneficial for studying fundamental and applied functions of kidneys ex vivo. Both methods are applicable to various types of tissues and organoids.

This work describes two methods for studying organ development, an improved xenotransplantation setup on chorioallantoic membrane (CAM) from avian embryos that allows for vascularization of cultured embryonic organs and organoids and a novel fixed z-direction organ culture method with modified experimental conditions that allows for high-resolution time-lapse confocal imaging.

التحسين من الكلين Organoid وOrganotypic الثقافة للعوعية ، التنمية الموسعة ، وتحسين التصوير المجهري

Embryonic kidney organotypic cultures, and especially pluripotent stem cell-derived kidney organoids, are excellent tools for following developmental ...

In Ovo Intravascular Injection in Chicken Embryos

As a classical model system of embryo biology, the chicken embryo has been used to investigate embryonic development and differentiation. Delivering exogenous materials into chicken embryos has a great advantage for studying gene function, transgenic breeding, and chimera preparation during embryonic development. Here we show the method of in ovo intravascular injection whereby exogenous materials such as plasmid vectors or modified primordial germ cells (PGCs) can be transferred into donor chicken embryos at early developmental stages. The results show that the intravascular injection through the dorsal aorta and head allows injected materials to diffuse into the whole embryo through the blood circulatory system. In the presented protocol, the efficacy of exogenous plasmid and lentiviral vector introduction, and the colonization of injected exogenous PGCs in the recipient gonad, were determined by observing fluorescence in the embryos. This article describes detailed procedures of this method, thereby providing an excellent approach to studying gene function, embryo and developmental biology, and gonad-chimeric chicken production. In conclusion, this article will allow researchers to perform in ovo intravascular injection of exogenous materials into chicken embryos with great success and reproducibility.

In Ovo Intravascular Injection in Chicken Embryos

The overall goal of this paper is to describe how to perform in ovo intracellular injection of exogenous materials into chicken embryos. This approach is very useful to study the developmental biology of chicken embryos.

في أوفو الحقن داخل الأوعية الدموية في أجنة الدجاج

As a classical model system of embryo biology, the chicken embryo has been used to investigate embryonic development and differentiation. Delivering ...

المراقبة الطولية لميكانيكا الصفائح العصبية في تطور جنين الفرخ

Monitoring the Mechanical Evolution of Tissue During Neural Tube Closure of Chick Embryo

Neural tube closure (NTC) is a critical process during embryonic development. Failure in this process can lead to neural tube defects, causing congenital malformations or even mortality. NTC involves a series of mechanisms on genetic, molecular, and mechanical levels. While mechanical regulation has become an increasingly attractive topic in recent years, it remains largely unexplored due to the lack of suitable technology for conducting mechanical testing of 3D embryonic tissue in situ. In response, we have developed a protocol for quantifying the mechanical properties of chicken embryonic tissue in a non-contact and non-invasive manner. This is achieved by integrating a confocal Brillouin microscope with an on-stage incubation system. To probe tissue mechanics, a pre-cultured embryo is collected and transferred to an on-stage incubator for ex ovo culture. Simultaneously, the mechanical images of the neural plate tissue are acquired by the Brillouin microscope at different time points during development. This protocol includes detailed descriptions of sample preparation, the implementation of Brillouin microscopy experiments, and data post-processing and analysis. By following this protocol, researchers can study the mechanical evolution of embryonic tissue during development longitudinally.

تسليط الضوء على المؤلف: قياس عدم الاتصال لميكانيكا الأنسجة في أجنة الكتاكيت الحية باستخدام مجهر بريلوين

This protocol was developed to longitudinally monitor the mechanical properties of neural plate tissue during chick embryo neurulation. It is based on the integration of a Brillouin microscope and an on-stage incubation system, enabling live mechanical imaging of neural plate tissue in ex ovo cultured chick embryos.

مراقبة التطور الميكانيكي للأنسجة أثناء إغلاق الأنبوب العصبي لجنين الفرخ

Neural tube closure (NTC) is a critical process during embryonic development. Failure in this process can lead to neural tube defects, causing congenital ...

و السابقين البيضة الثقافة الأجنة النظام الدجاج مناسبة للتطبيقات التصوير والجراحة المجهرية

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

الأمثل

والمغمورة ساندويتش ورقة مرشح للالمدى الطويل

طريقة لثقافة الفرخ المبكر فيفو السابقين الأجنة (الثقافة الجديدة)

أسلوب الثقافة أورجانوتيبيك لدراسة تطوير الأنسجة الجنينية الدجاج

الدجاج الأجنة شريحة الحبل الشوكي الثقافة البروتوكول

كتكوت البيضة السابقين الثقافة و البيضة السابقين CAM الفحص : كيف يعمل حقا

التحسين من الكلين Organoid وOrganotypic الثقافة للعوعية ، التنمية الموسعة ، وتحسين التصوير المجهري

في أوفو الحقن داخل الأوعية الدموية في أجنة الدجاج

مراقبة التطور الميكانيكي للأنسجة أثناء إغلاق الأنبوب العصبي لجنين الفرخ

مراقبة التطور الميكانيكي للأنسجة أثناء إغلاق الأنبوب العصبي لجنين الفرخ