1. 전 비켜 문화 프로토콜 : <ol><li> 수정된 닭 알을 품어 <ol class="lroman"><li> 수정된 닭고기 달걀은 13 저장할 수 있습니다 ° C를 부화하기 전에 오일을 개발을 시작하지 않고. 레드 와인 쿨러는 온도를 유지할 수 있습니다. </li><li> 72 시간 37.5에서 지속적인 락을 함께 60 %의 일정한 습도 보육 ° C에서 부화 계란은 뭉툭한 쪽을. </li></ol></li><li> 해먹스 (그림 1A)를 준비 <ol class="lroman"><li> 기입 어 9온스 플라스틱 컵의 따뜻한 물을 멸균. 일반 9온스 컵 8cm의 최고의 직경이 있습니다. 우리는이 정도 크기의 이곳 표시 오랫동안 문화 응용 프로그램에 가장 적합한 것으로 나타났습니다. </li><li> 컷 약 20 cm가 랩 집착. circumferentially 주변 고무 밴드를 배치하여 컵 위에 접사. 플라스틱은 물 위에 확산되어야합니다. 밴드 주변의 과도한 플라스틱 컷. 우리는 운송 중에 노른자 분리의 결과로, 노른자의 접착력을 방지 때문에이 응용 프로그램에 가장 적합하도록 포장을 집착 발견했습니다. </li><li> 70 % 에탄올로 침수 kimwipes (킴벌리 - 클락, 주식 회사)와 플라스틱을 닦아주십시오. </li></ol></li><li> 부화 후 72 시간 후 배양기에서 계란을 제거합니다. </li><li> 70 % 에탄올 침수 kimwipes로 표면을 닦는하여 달걀을 소독. </li><li> 배아의 적절한 위치 (그림 1B) 1-2 분 수평 알을 낳습. 계란 판지 상자는 가로로 누워있는 계란을 사용할 수 있습니다. 배아 1-2 분 후에 위로 회전합니다. </li><li> 층류 후드에서 무균 해먹스에 배아를 전송합니다. <ol class="lroman"><li> 계란 (그림 1C)의 아래쪽에 작은 덴트가있을 때까지 날카로운 가장자리 (양동이 또는 유리 비커의 가장자리와 같은)를 사용하여 부드럽게 계란을 누릅니다. 기억, 배아는 upperside에 위치합니다. </li><li> 자국의 반대편에 엄지손가락을 넣고 (그림 1D) 떨어져 수평 껍질을 가져옵니다. </li><li> 배아로뿐만 아니라 알부민 해먹 (그림 1E)에 노른자를 넣습니다. 알부민은 오랫동안 문화 관행에 대한 배아에 영양을 제공뿐만 아니라 시스템을 이동하여 유도 충격을 흡수하기 위해 노른자 주위 댐퍼닝 환경을 제공합니다. 해먹 아래 물 물 순환 히터를 사용하는 경우 배가 이미징 동안 운송 도중 땅에 병렬 머물면서 더위의 지휘자 역할을합니다 수 있도록합니다. </li><li> 전송이 제대로 수행되는 경우 배아가 이미 정상에 위치해야합니다. 그렇지 않다면, 확대해, 불임 개체 (닫힌 곡선 가위 ie. 블런트 끝)와 directionally 애무 배가 위로 회전 그러한 노른자를 사용합니다. </li><li> 배아를 봉인하기 위해 컵 위에 10cm 직경 페트리 접시를 놓습니다. </li></ol></li><li> 37.5에서 보육 세트로 컵 문화 플레이스 ° C. 휴대용 인큐베이터를 사용하는 경우, 증류수로 가득 9월 1일부터 2일까지 오즈의 마법사 &#39;컵을 배치하는 것은 ~에 습도를 유지 60% (그림 1 층). </li><li> 배아 일 7.2 이상 culturing의 배아는 조각 달걀 껍질 조각은 뼈 개발과 성숙을위한 칼슘 소스로 배아의 주변에 흩어져해야하는 경우. </li></ol> 외부 인큐베이터 영상 / 조작을위한 액세서리 장비 : 순환 물 목욕은 배양 온도를 유지하기 위해 집안에 지어진 동안 영상이나 조작 (그림 3). 컵 맞는 물 목욕은 물을 저수지에 맞는 크기의 튜브를 통해 연결되어 있습니다. 저항 히터는 물의 온도에 따라 수동으로 규제하는 저수지에서 물을 가열. 펌프가 물을 순환. Pictoral 표현 ultrasongraphy / florescent 현미경 (그림 3)를 통해 이미징 편리 모습. <img src="/files/ftp_upload/2154/2125fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1. 해먹 및 해먹스에 닭 배아의 양도의 준비. <img src="/files/ftp_upload/2154/2125fig2.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2. 대표 결과 -. 예 비켜 문화 기술을 통해 재배 여러 단계 닭 배아 HH 17 이후 태아는이 기술을 통해 성장하실 수 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/2154/2125fig3.jpg" alt="그림 3" /> 그림 3. 이상적인 개발 온도에서 배아를 유지하는 전 비켜 문화 시스템과 함께 사용하는 물 순환 시스템의 개략도 및 대표 사진. 2. 선택된 애플 리케이션 : I.의 Microinjection 이 배아 문화는 솔루션 대비 기반 이미징 (예 형광 현미경, 마이크로 계산된 지형 등) (그림 4) vasculature에 주입해야 microinjection 응용 프로그램에 적합합니다. 아래 microinjection 프로토콜은 다음과 같습니다 : <ol><li> 주사 appara 준비내밀어 <ol class="lroman"><li> 패션은 microforge를 사용하여 beveled 팁 microneedles에 0.75 ID 유리 모세관 튜브를 뽑아. 필요한 팁의 크기가 원하는 목표 정맥 직경 / 유동 속도에 따라 다릅니다. </li><li> 0.03 인치 ID의 실리콘 튜브에 주사기를 연결합니다. </li><li> 주입하는 솔루션으로 튜브를로드하고 튜브에 microneedle를 연결합니다. </li><li> 주사기 홀더 또는 주사기 펌프에 micromanipulator과 주사기에 microneedle를 놓습니다. </li></ol></li><li> 컵에 따라서 배아를 인상 멸균 물을 추가합니다. 우리는 혈관 (예 vitelline 선박)에 바늘의 적절한 침투를 위해, 수평 침투가 필요하다고 경험. 이것은 배 (胚)가 컵의 가장자리와 같은 비행기에 있어야합니다. <ol class="lroman"><li> 배아에서 플라스틱을 가지고있는 고무 밴드를 꺼내. </li><li> 부드럽게 플라스틱 한쪽을 들어 컵 일부 멸균 물을 추가합니다. </li><li> 다시 플라스틱에 고무 밴드를 고정합니다. </li></ol></li><li> 배아 선박에 대한 해결책을 주사. 우리의 경험에서 솔루션 vitelline 용기에 주입되었을 때, 출혈을 유발하지 않고 효율적인 재관류를 유지하기 위해 혈관 직경의 크기 약 10분의 1 일 있어야만 microneedles. <ol class="lroman"><li> 기포가 전혀 형성을 보장하지 microneedle에 대한 해결책을 펌프. </li><li> 선택한 그릇에 microneedle의 팁을 맞춥니다. vitelline 선박 들어, 포크 영역을 선택하면 선박에 침투 최대 영역을 제공합니다. </li><li> 배를 향에 바늘을 밀어. 배는 먼저 철회합니다. 바늘이 침투되면, 재관류를 시작합니다. 흐르는 혈액의 색깔은 재관류로 변경해야합니다. 색상의 변화가 본적이되지 않으면 바늘이 혈관 밖으로 침투 수 있습니다. 선박의 색상 변경을 볼 때까지 동시에 솔루션을 양수하면서 그 경우에는 천천히 microneedle을 철회. 재관류가 완료되면, 선박의 microneedle을 철회. </li></ol></li></ol><img src="/files/ftp_upload/2154/2125fig4.jpg" alt="그림 4" /> 그림 4 : 전 비켜 교양 여자는 배아의 vasculature에 형광 염료의 Microinjection. II. Microsurgical 절차 - 왼쪽 심방세동 내고 이 전 비켜 문화 설치는 배아에 대한 모든 액세스를 제공 이후 여자는 태아에 외과 응용 프로그램을 수행하는 데 이상적입니다. 아래 예제 기술에 대한 프로토콜은, 심방 내고 (랄) (그림 5)은 떠났다. 절차는 약 24 시간 문화 시대 (HH24)로 수행됩니다 : <ol><li> 매듭을 overhand 준비 ~ 10-0 나일론 수술 봉합사를 사용하여 0.5 mm의 직경. </li><li> 고급 집게로 로컬 배아 통해 chorionic와 allantoic 세포막을 제거하고 배아의 왼쪽 볼 것을 그것이 수직으로 같은 회전 뒷부분에서 배아를 리프트. </li><li> 고급 집게를 사용하여 좌심방을 통해 심낭을 제거합니다. </li><li> 좌심방을 통해 매듭을 정렬하고 조입니다. 왼쪽에 원래의 혈액 흐름 ~ 75 % 금지로 매듭 너무 묶여 있어야합니다. microscissors와 매듭의 가장자리를 잘라 조심스럽게 초과 봉합사를 제거하고 폐기. </li><li> 원래 방향 (위에서 오른쪽)에 다시 배아를 회전합니다. </li><li> 섐 컨트롤은 동일한 절차를 포함되지만 봉합사를 막 통과하고 묶여되지 않습니다. 효과 랄 치료 (75 % 수축)가 24시간 수술에서 확인되며, 자격이 배아는 제외됩니다. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/2154/2154fig5.jpg" alt="그림 5" /> 그림 5 :. 컨트롤과 왼쪽 심방 출혈도 잡았 여자의 배아 화살표는 출혈도 잡았 배아의 75 퍼센트 작은 왼쪽 심방을 보여줍니다.

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	<li>Zamir, E. A., Czirok, A., Cui, C., Little, C. D., Rongish, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesodermal+cell+displacements+during+avian+gastrulation+are+due+to+both+individual+cell-autonomous+and+convective+tissue+movements.">Mesodermal cell displacements during avian gastrulation are due to both individual cell-autonomous and convective tissue movements.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 19806-19811 (1980).</li><li>Ehrman, L. A., Yutzey, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lack+of+regulation+in+the+heart+forming+region+of+avian+embryos.">Lack of regulation in the heart forming region of avian embryos.</a> Dev Biol. 207, 163-175 (1999).</li><li>Clark, E. B., Hu, N., Rosenquist, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+conotruncal+constriction+on+aortic-mitral+valve+continuity+in+the+stage+18,+21+and+24+chick+embryo.">Effect of conotruncal constriction on aortic-mitral valve continuity in the stage 18, 21 and 24 chick embryo.</a> Am J Cardiol. 53, 324-327 (1984).</li><li>deAlmeida, A., McQuinn, T., Sedmera, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+ventricular+preload+is+compensated+by+myocyte+proliferation+in+normal+and+hypoplastic+fetal+chick+left+ventricle.">Increased ventricular preload is compensated by myocyte proliferation in normal and hypoplastic fetal chick left ventricle.</a> Circ Res. 100, 1363-1370 (2007).</li><li>Nakamura, H., Funahashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Introduction+of+DNA+into+chick+embryos+by+in+ovo+electroporation.">Introduction of DNA into chick embryos by in ovo electroporation.</a> Methods. 24, 43-48 (2001).</li><li>Butcher, J. T., McQuinn, T. C., Sedmera, D., Turner, D., Markwald, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transitions+in+early+embryonic+atrioventricular+valvular+function+correspond+with+changes+in+cushion+biomechanics+that+are+predictable+by+tissue+composition.">Transitions in early embryonic atrioventricular valvular function correspond with changes in cushion biomechanics that are predictable by tissue composition.</a> Circ Res. 100, 1503-1511 (2007).</li><li>McQuinn, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-frequency+ultrasonographic+imaging+of+avian+cardiovascular+development.">High-frequency ultrasonographic imaging of avian cardiovascular development.</a> Dev. Dyn. 236, 3503-3513 (2007).</li><li>Korn, M. J., Cramer, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Windowing+chicken+eggs+for+developmental+studies.">Windowing chicken eggs for developmental studies.</a> J Vis Exp. , (2007).</li><li>Auerbach, R., Kubai, L., Knighton, D., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+procedure+for+the+long-term+cultivation+of+chicken+embryos.">A simple procedure for the long-term cultivation of chicken embryos.</a> Dev Biol. 41, 391-394 (1974).</li></ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

광 접속 및 조류 배아의 실험은 알 껍질의 제약으로 인해 도전이다. 윈도우 크게 분사하고 microsurgical 접근 8 액세스할 수 microvessels의 수를 제한합니다. 결과적으로 초기 단 배아는 조작과 지속적인 관찰이 불가능하실 수 있습니다. 장기 문화 9 방해 배아에서 표면 장력의 불충 분한 제어하기 때문에 배양 접시를 사용하여 초기 전 비켜 문화는 제한된 사용했다. 우리는 최근?...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Fertile white Leghorn chicken eggs</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Model GB1, Avery Incubators, Hugo CO</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Saran Wrap</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Kimwipes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Kimberly-Clark, Inc.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rubber bands</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Warm sterile water</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>9 oz plastic cup</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>100 mm diameter Petri dish</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1602N thermal air</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GQF Manufacturing CO, Savannah GA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluorescein-conjugated dextran (2 MDa, 1% w/v in phosphate buffered saline)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma Aldrich Inc.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microforge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Glassworx, Inc, St Louis MO</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glass capillary tubes (0.75 mm ID)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micromanipulator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments, Sarasota FL</td>
<td>Model M3301L</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluorescent microscopy</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Zeiss</td>
<td>Z20</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fine 55-forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments, Sarasota FL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10-0 nylon surgical suture</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ethicon</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tubing</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>1mm OD</td>
</tr>
<tr>
<td>3 mL syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>200 &mu;L pipetter and pipette tips</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

an ex-ovo chicken embryo culture system suitable for imaging and microsurgery applications

정상 및 기형 배아 개발을 운전 유전과 microenvironmental 요인 사이의 관계를 이해하는 것은 새로운 치료 전략을 발견하기위한 필수적입니다. 이미징 기술의 발전은 조직과 신체 계획의 성숙의 양적 조사를 활성화하지만, 나중에 무대 배아 morphogenesis 덜 분명하다. 치킨 배아 때문에 문화와 수술 조작의 용이성이 응용 프로그램에 대한 매력적인 척추 동물 모델 시스템입니다. 초기 배아는 세포 patterning과 운명을 연구 1,2을위한 완벽한 광 액세스를 가능하게 필터 종이 링에 짧은 시간 동안 교양 수 있습니다. 같은 심장 morphogenesis로 유학 고급 개발 프로세스는 전통적으로 달걀 껍질 3-5의 창문을 통해 수행하지만,이 기술은 창 크기에 따라 광학 접근을 제한하고 있습니다. 최대 초음파 6,7 통해 고해상도 이미징을 활성화 10 일까지 우리는 이전에 육각 무게 보트에서 전 비켜 문화 전체 배아를 간단한 방법을 개발했습니다. 이러한 문화는 라이브 실험에 사용할 수 이미징 도구의 유형을 제한, 운송하기 어려웠다. 우리는 여기서 비용 효율적인 휴대용 환경 챔버와 개선된 쉘 적은 문화 시스템을 제시한다. 계란은 부분적으로 살균 물로 채워진 플라스틱 컵에 circumferentially 부착된 폴리 우레탄 막 (포장을 집착)에 의해 만들어진 그물에 금이 있었다. 아래 해먹와 물의 역학 교통으로 유도 진동을 저해할 도움 동안 해먹의 원주와 깊이의 크기는 두 표면 장력을 유지하기 위해 중요했다. 물 목욕을 순환 작은 풋프린트 또한 실험 기간 동안 지속적인 온도 제어를 사용하도록 개발되었습니다. 우리는 morphogenic 결함없이 적어도 14 일 동안 이런 방식으로 문화 배아 수있는 능력을 입증 또는 여러 microsurgical 및 이미징 응용 프로그램에서이 시스템을 지연하고 사용합니다.

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An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

이 문서에서는, 우리는 장기 사용하는 간단한 방법을 제시<em&gt; 전 비켜</em&gt; 조류 배아의 문화. 이 기술은 전체 광 액세스 및 / 또는 조류 배아의 살균 운송을 필요로하는 길이 실험​​에 이상적입니다.

전 비켜</em이미징 및 미세 애플 리케이션에 적합> 치킨의 배아 문화 시스템

Understanding the relationships between genetic and microenvironmental factors that drive normal and malformed embryonic development is fundamental for ...

an-ex-ovo-chicken-embryo-culture-system-suitable-for-imaging

Research

JoVE Journal

Biology

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

22.8K 조회수.  Cornell University. 이 문서에서는, 우리는 장기 사용하는 간단한 방법을 제시 전 비켜 조류 배아의 문화. 이 기술은 전체 광 액세스 및 / 또는 조류 배아의 살균 운송을 필요로하는 길이 실험​​에 이상적입니다.

전 비켜 치킨의 배아 문화 시스템