1. Lysing ونشر نواة من الخزعة قسيم أرومي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وينبغي أن نكون مستعدين للتحلل الخلية عازلة تنتشر الخلايا (0.2 ٪ Tween20 في حمض الهيدروكلوريك 0.01 م ، ودرجة الحموضة 2.0) 24 ساعة مسبقا وحفظها عند درجة حرارة -20 درجة مئوية. تحضير 100 مل وتصفية 20 مل في وعاء معقم 30 مل الجميع باستخدام المحاقن المعقمة وتصفية 20 مل حقنة. 1 مل الاستغناء aliquots في 10-15 1.7 مل أنابيب microcentrifuge العقيمة ، وثيقة وتسمية الأنابيب قبل التجميد. فمن المستحسن أن يكون على دفعتين المختلفة الاستخدام ، دفعة جديدة والدفعة السابقة ، والتي تم اختبارها ويمكن استخدامها إذا كانت دفعة جديدة غير مرضية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تذويب المنطقة العازلة تحلل في درجة حرارة الغرفة 30 دقيقة قبل إجراء الخزعة. للأغراض العملية سوف تكون درجة حرارة الغرفة بين درجة الحرارة ودرجة حرارة اليد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> درجة دائرة صغيرة (قطرها حوالي 5 ملم) على الجانب السفلي من شريحة أمين المغلفة (مثل Genetix) باستخدام قلم الماس والتسمية قبل الشريحة مع رقم القضية ، فريد رقم الشريحة والتاريخ الخزعة. استخدام شريحة منفصلة لكل قسيم أرومي بالترتيب العددي ، والتسمية مع عدد الأجنة. ينبغي أن توضع على الشرائح مع قلم رصاص الصلبة مثل 4H ، و &quot;نشف&quot; مع القفازات المطاطية لإزالة أي غبار الغرافيت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع كمية صغيرة من تحلل العازلة داخل الدائرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل قسيم أرومي الخزعة في المخزن المؤقت تحلل. إذا لزم الأمر إضافة العازلة تحلل داخل الدائرة حتى يبدأ في الخلية ليز ، وينبغي الخلية ليز تماما والسيتوبلازم تفريق قبل أن يجف العازلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة النواة لضمان بقائه ضمن دائرة وضاع لا ؛ إذا كانت الخلية لا يملك نواة أو قد نوى متعددة ، خزعة خلية أخرى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ترك الشريحة لتجف في الهواء في درجة حرارة الغرفة. </li></ol> 2. في الموقع التهجين من نواة واحدة قسيم أرومي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعد سلسلة الايثانول (70 و 90 و 100 ٪) تتكون في الماء المقطر المعقم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل وتعيين كتلة ساخنة (على سبيل المثال أو Hybaid Omnislide Hybrite Vysis) إلى 75 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقيقات تذويب ، الدوامة ، والطرد المركزي. وينبغي أن شهدت الكواشف والتحقق من أن يكون صحيحا حتى قبل اتخاذ هذا الخليط التحقيق. أحجام ماصة على النحو المحدد من قبل الشركة المصنعة لتعويض خليط التحقيق في أنبوب 0.65 مل microcentrifuge معقمة ودوامة الطرد المركزي وقبل الاستخدام. وينبغي أن الحجم الكلي للخليط التحقيق تكون كافية للسماح لفحصها 2 ميكرولتر في نواة وتقريب تصل إلى 10 ميكرولتر أقرب للسماح بهامش أمان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل غسل الشرائح في الجرار coplin باستخدام الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) (7.0 درجة الحموضة : 0.14 م كلوريد الصوديوم ، 3 مم بوكل ، 10 ملي نا 2 هبو 4 ، 2 مم KH 2 PO 4) لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف شرائح مرتين في ماء مقطر معقم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يذوى الشرائح مع سلسلة الايثانول (70 ، 90 ، و 100 ٪) عن كل 2 دقيقة في درجة حرارة الغرفة والهواء الجاف. مغمورة تماما ضمان الشرائح وإذا كان أي غبار الغرافيت يطفو على السطح ، وتمتص بمنديل نظيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل موقف للنواة داخل دائرة من خلال وضع تصور للمرحلة مجهر التباين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يذوى مع الإيثانول بنسبة 100 ٪ لمدة 2 دقيقة في درجة حرارة الغرفة والهواء الجاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق 2 ميكرولتر من خليط التحقيق ، وتغطي مع 9 × 9 ملم ساترة (1 / 4 من 18 × 18 مم ساترة NO.1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ختم حواف ساترة مع الاسمنت والمطاط (مثل الصمغ البقرة ؛ تدقيق البقرة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Codenature الشرائح على كتلة الساخنة عند 75 درجة مئوية لمدة 5 دقائق ، ثم بين عشية وضحاها هجن الشرائح (16-20 ح) في غرفة ترطيب عند 37 درجة مئوية. ويمزج التحقيق التي تتكون بالكامل من تحقيقات السنترومير (أي لحالات مرتبطة بالجنس) تعطي نتيجة مرضية بعد 60 دقيقة من التهجين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعد حمام مائي مع الجرار coplin كافية والحرارة إلى 71 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 0.4x سيترات المالحة القياسية (SSC) صرامة حل غسل (7.0 درجة الحموضة عند 71 درجة مئوية ، وكلوريد الصوديوم 0.06 M 6 مم ، C 6 H 5 O 7 3 نا 0.2 H 2 O) والحرارة في حمام مائي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الاستغناء عن 50 مل من غسل صرامة في جرة coplin المطلوبة ، وتأكد من أن درجة الحرارة 71 درجة مئوية قبل استخدامها على الفور باستخدام ميزان حرارة نظيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة بعناية الاسمنت والمطاط من كل الشرائح وشطف قبالة باستخدام ساترة 4X SSC/0.05 Tween20 ٪ (الرقم الهيدروجيني 7.0) في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغسل الشرائح في غسل SSC 0.4x صرامة في 71 دقيقة لمدة 5 درجة مئوية. غسل ما لا يزيد عن 6 شرائح في جرة coplin. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغسل الشرائح في 4X Tween20 SSC/0.05 ٪ في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان يحتوي على مزيج المسبار المسبار المسمى بشكل غير مباشر (ق) ، واستنزاف الشرائح من السوائل الزائدة وتطبيق 20 ميكرولتر من الأجسام المضادة مترافق fluorescently تحت مربع 20 x 20 مم من Parafilm. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان مرطب في غرفة في 37 دقيقة لمدة 15 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة Parafilm ويغسل مرة واحدة في 4X Tween20 SSC/0.05 ٪ في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغسل مرتين لمدة 2 دقيقة في برنامج تلفزيونير درجة حرارة الغرفة واستنزاف الشرائح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 6 تطبيق ميكرولتر من دابي / Vectashield (160 نانوغرام من 4 &#39;،6 - diamidino - 2 - phenylindole هيدروكلوريد في 1 مل من المتوسط ​​Vectashield المتصاعدة ، المتجهات مختبرات) إلى 22 مم 22 × لا. 0 ساترة وعكس الشريحة على ساترة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وختم وصمة عار على حواف ساترة مع طلاء الأظافر واضحة. </li></ol> 3. التحليل باستخدام مجهر الإسفار مجهزة بالمعدات المناسبة مع الفلاتر المناسبة لمجسات مستعملة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إشارات النتيجة المباشرة التي تصور باستخدام مجهر مضان واحد الفرقة تمرير مرشحات لكل ملون تألقي في مقايسة. وينبغي أن سجل كل نواة من قبل اثنين من المحللين. وينبغي أن يكون المبدأ التوجيهي العام يؤدي الى التهديف من إشارة واحدة حيث إشارتين المتقاربة أقل من مجال واحد (إشارة العرض) وبصرف النظر ، ولكن الحكم على أساس الخبرة يحتاج إلى أن يمارس لتفسير إشارات متفاوتة الحجم والكثافة ، والانفصال. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام برامج التصوير (مثل إيزيس ، MetaSystems ، Altlussheim ، ألمانيا ؛ CytoVision ، Genetix) لالتقاط صورة من نواة لتأكيد التشخيص البصري ، وأرشفة الصور كجزء من خطة لضمان جودة المختبرات. </li></ol> 4. ممثل النتائج : ينبغي النظر الطورية والطور البيني من نوى الخلايا الليمفاوية مثقف الدم المحيطي للتأكد من أن تحقيقات المختارة هي محددة للصبغيات إزفاء ، بالمعلومات عن نقاط (التحقيقات subtelomere ينبغي هجن فقط على قطاعات وtranslocated التحقيق السنترومير (ق) إلى تتمحور وينبغي أن الجزء (ق)) واشارات في نواة الطور البيني يكون مشرقا ومنفصلة. سجل عدد من الإشارات لكل التحقيق في نواة الطور البيني 100 من كل شريك من المستحسن لتقييم كفاءة الفحص. في هذه الحالة وسجل 2 إشارات في 95 ٪ -99 ٪ من النوى لكل التحقيق. الشكل 1 يبين الطورية ونواة الطور البيني من التحضير لإزفاء متبادلة بين الأسلحة قصيرة من الكروموزومات 5 و 9. وينبغي أن الإشارات في نواة الطور البيني من blastomeres الجنين يكون مشرقا ومنفصلة ومستقلة وسجل باستخدام مرشحات تمرير الفرقة عن الألوان المستخدمة. ويبين الشكل 2 نواة قسيم أرومي مع نمط إشارة طبيعية (2 نسخ عن جميع مواضع اختبار) بما يتفق مع الكروموسومات العادي أو متوازنة للكروموسوم 5 و 9 ، ونواة مع إشارة نمط غير طبيعي يتفق مع منتج غير المتوازن للإزفاء الذي أحاد الصبغي (نسخة واحدة) للجزء translocated من كروموسوم 5 و تثلث الصبغي (3 نسخ) للجزء من كروموسوم translocated 9. <img src="/files/ftp_upload/2570/2570fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1 وانتشار الطورية ونواة الطور البيني المحضرة من مثقف اللمفاويات في الدم المحيطي من حاملة لإزفاء متبادلة بين الأسلحة قصيرة من الكروموزومات 5 و 9 نقاط في 5p14.3 مع و9p24.1 : 46 ، س ص ، ر (5 ؛ 9) (p14.3 ؛ p24.1) العش ر (5 ؛ 9ptel30 ، 5ptel48 + ، + 9cen) ؛ 9) 5ptel48 ، 9ptel30 + ( وقد تم اختيار كل من الأسماك للتحقيقات شرائح translocated (5p14.3 → 5pter ، أحمر Cytocell subtelomere5ptel48 TexasRed ؛ 9p24.1 → 9pter ، الأخضر Cytocell subtelomere 9ptel30 FITC) وتتمحور حول الجزء من الصبغي 9 (9p24.1 → 9qter ، الأزرق ابوت CEP 9 القمر الصناعي SpectrumAqua ألفا). <img src="/files/ftp_upload/2570/2570fig2.jpg" alt="الشكل 2" /> القبض على الرقم 2. إشارات في نواة الطور البيني قسيم أرومي من يوم 3 أجنة باستخدام فلتر مختلفة لكل ملون تألقي ودمجها لتكوين صورة مركبة. (أ) اثنان عن كل الإشارات تشير إلى التحقيق نسختين من كل مكان ، وهو ما يتسق مع تكملة طبيعية أو متوازنة لإزفاء الكروموسومات. (ب) والاشارة الحمراء ، وثلاث إشارات خضراء وزرقاء تشير إلى إشارتين نسخة واحدة من الجزء translocated من كروموسوم 5 ، وثلاث نسخ من الجزء translocated من كروموسوم (9) ونسختين من الجزء مركزية من الكروموسوم 9 ، وهو ما يتسق مع المجاورة -1 الفصل بين إزفاء مما أسفر عن المنتجات غير متوازن مع أحاد الصبغي ل5pter → 5p14.3 وتثلث الصبغي ل9pter → 9p24.1.

<ol>
	<li>Scriven, P. N., Handyside, A. H., Ogilvie, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+translocations:+segregation+modes+and+strategies+for+preimplantation+genetic+diagnosis.">Chromosome translocations: segregation modes and strategies for preimplantation genetic diagnosis.</a> Prenat. Diagn. 18, 1437-1449 (1998).</li><li>Mackie Ogilvie, C., Scriven, P. N., Harper, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preimplantation+genetic+diagnosis+for+chromosome+rearrangements.">Preimplantation genetic diagnosis for chromosome rearrangements.</a> Preimplantation Genetic Diagnosis. , 194-201 (2009).</li><li>Harper, J. C., Coonen, E., Ramaekers, F. C. S., Delhanty, J. D. A., Handyside, A. H., Winston, R. M. L., Hopman, A. H. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+sex+of+human+preimplantation+embryos+in+two+hours+using+an+improved+spreading+method+and+fluorescent+in+situ+hybridisation+using+directly+labelled+probes.">Identification of the sex of human preimplantation embryos in two hours using an improved spreading method and fluorescent in situ hybridisation using directly labelled probes.</a> Hum. Reprod. 9, 721-724 (1994).</li><li>Mackie Ogilvie, C., Scriven, P. N., Harper, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preimplantation+genetic+diagnosis+for+sex-linked+diseases+and+sex-selection+for+non-medical+reasons.">Preimplantation genetic diagnosis for sex-linked diseases and sex-selection for non-medical reasons.</a> Preimplantation Genetic Diagnosis. , 230-235 (2009).</li><li>Munn&#233;, S., Lee, A., Rosenwaks, Z., Grifo, J., Cohen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+of+major+chromosome+aneuploidies+in+human+preimplantation+embryos.">Diagnosis of major chromosome aneuploidies in human preimplantation embryos.</a> Hum. Reprod. 8, 2185-2192 (1993).</li><li>Mackie Ogilvie, C., Scriven, P. N., Harper, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preimplantation+genetic+diagnosis+for+infertility+(preimplantation+genetic+screening).">Preimplantation genetic diagnosis for infertility (preimplantation genetic screening).</a> Preimplantation Genetic Diagnosis. , 203-229 (2009).</li><li>Scriven, P. N., Bossuyt, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+accuracy:+theoretical+models+for+preimplantation+genetic+testing+of+a+single+nucleus+using+the+fluorescence+in+situ+hybridization+technique.+Hum+Reprod.">Diagnostic accuracy: theoretical models for preimplantation genetic testing of a single nucleus using the fluorescence in situ hybridization technique. Hum Reprod.</a> Cytogenetics. 5, 394-400 (2010).</li><li>Coonen, E., Dumoulin, J. C., Ramaekers, F. C., Hopman, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+preparation+of+preimplantation+embryo+interphase+nuclei+for+analysis+by+fluorescence+in-situ+hybridization.">Optimal preparation of preimplantation embryo interphase nuclei for analysis by fluorescence in-situ hybridization.</a> Hum. Reprod. 9, 533-537 (1994).</li><li>Dozortsev, D. I., McGinnis, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+fixation+technique+for+fluorescence+in+situ+hybridization+for+preimplantation+genetic+diagnosis.">An improved fixation technique for fluorescence in situ hybridization for preimplantation genetic diagnosis.</a> Fertil. Steril. 76, 186-188 (2001).</li><li>Hsu, L. Y., Benn, P. A., Tannenbaum, H. L., Perlis, T., Carlson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosomal+polymorphisms+of+1,+9,+16,+and+Y+in+4+major+ethnic+groups:+a+large+prenatal+study.">Chromosomal polymorphisms of 1, 9, 16, and Y in 4 major ethnic groups: a large prenatal study.</a> Am. J. Med. Genet. 26, 95-101 (1987).</li><li>Shim, S. H., Pan, A., Huang, X. L., Tonk, V. S., Varma, S. K., Milunsky, J. M., Wyandt, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FISH+variants+with+D15Z1.">FISH variants with D15Z1.</a> J. Assoc. Genet. Technol. 29, 146-151 (2003).</li><li>Knight, S. J., Flint, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfect+endings:+a+review+of+subtelomeric+probes+and+their+use+in+clinical+diagnosis.">Perfect endings: a review of subtelomeric probes and their use in clinical diagnosis.</a> J. Med. Genet. 37, 401-409 (2000).</li><li>Thornhill, A. R., de Die-Smulders, C. E., Geraedts, J. P., Harper, J. C., Harton, G. L., Lavery, S. A., Moutou, C., Robinson, M. D., Schmutzler, A. G., Scriven, P. N., Sermon, K. D., Wilton, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ESHRE+PGD+Consortium+(PGS)+ESHRE+PGD+Consortium+'Best+practice+guidelines+for+clinical+preimplantation+genetic+diagnosis+(PGD)+and+preimplantation+genetic+screening+(PGS)'.">ESHRE PGD Consortium (PGS) ESHRE PGD Consortium 'Best practice guidelines for clinical preimplantation genetic diagnosis (PGD) and preimplantation genetic screening (PGS)'.</a> Hum. Reprod. 20, 35-48 (2005).</li><li>Munn&#233;, S., Wells, D., Cohen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technology+requirements+for+preimplantation+genetic+diagnosis+to+improve+assisted+reproduction+outcomes.">Technology requirements for preimplantation genetic diagnosis to improve assisted reproduction outcomes.</a> Fertil. Steril. 94, 408-430 (2010).</li><li>Wilton, L., Williamson, R., McBain, J., Edgar, D., Voullaire, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Birth+of+a+healthy+infant+after+preimplantation+confirmation+of+euploidy+by+comparative+genomic+hybridization.">Birth of a healthy infant after preimplantation confirmation of euploidy by comparative genomic hybridization.</a> N. Engl. J. Med. 345, 1537-1541 (2001).</li><li>Wells, D., Alfarawati, S., Fragouli, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+comprehensive+chromosomal+screening+for+embryo+assessment:+microarrays+and+CGH.">Use of comprehensive chromosomal screening for embryo assessment: microarrays and CGH.</a> Mol. Hum. Reprod. 14, 703-710 (2008).</li><li>Handyside, A. H., Harton, G. L., Mariani, B., Thornhill, A. R., Affara, N., Shaw, M. A., Griffin, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Karyomapping,+a+universal+method+for+genome+wide+analysis+of+genetic+disease+based+on+mapping+crossovers+between+parental+haplotypes.">Karyomapping, a universal method for genome wide analysis of genetic disease based on mapping crossovers between parental haplotypes.</a> J. Med. Genet. 47, 651-658 (2010).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

تطبيق مضان التهجين في الموضع (FISH) لخلية جنين واحد (قسيم أرومي) تحديات خاصة على حد سواء في الجوانب العملية وتفسير نمط الإشارة. الخلية الخزعة تحتاج إلى أن تنتشر داخل منطقة محددة مسبقا على الشريحة من أجل تسهيل السمكية في توطين التالية ؛ العناية القصوى يجب أن يؤخذ في ضمان lysed الخلية ، التي تم تفريق السيتوبلازم والنواة التي مرئيا وسليمة ، ولأن التشخيص يعتمد على النتائج من هذه الخلية واحدة ، وسجل الصارمة وتفسيرها وينبغي تطبيق المبادئ التوجيهية. ومع ذلك ، في أيدي ذوي الخبرة ، والسمك هي تقنية قوية لمرحلة ما قبل انغراس التشخيص الوراثي (PGD) في الممارسة السريرية. مبدأ PGD بواسطة FISH هي التي يمكن استخدامها تحقيقات هدف محدد الحمض النووي المسمى مع fluorochromes haptens مختلفة أو للكشف عن عدد النسخ من مواضع محددة ، وبالتالي للكشف عن الخلل الصبغي المرتبطة العزل الانتصافي لإعادة ترتيب الكروموسومات (1) ، بما في ذلك روبرتسوني translocations ، translocations المتبادل ، ظاهرة الانقلاب ، وإعادة ترتيب معقدة (2). ويمكن أيضا أن تستخدم السمكية لتحديد الأجنة الإناث في الأسر التي لديها العاشر مرتبطة المرض ، والتي لا يوجد اختبار طفرة معينة (3 ، 4). الأكثر إثارة للجدل ، كما تم السمكية المستخدمة للكشف عن عدم توازن الصبغيات في الكروموسوم متفرقة من أجل محاولة تحسين كفاءة المساعدة على الإنجاب (5 ، 6) ، إلا أن القيمة التنبؤية لهذا الاختبار باستخدام FSIH ومن المرجح أن تكون منخفضة بشكل غير مقبول في معظم الناس لا ينصح اليدين وذلك للاستعمال السريري الروتيني (7). هذا المقال يركز على الجوانب التقنية والقيود المطبقة على الأسماك وحيدة الخلية التشخيص السريري. طرق انتشاره وتحديد blastomeres واحدة تشمل الميثانول / حامض الخليك (5 ، 8) ، توين / حمض الهيدروكلوريك (9) ، ومزيج من توين / حمض الهيدروكلوريك والميثانول / حامض الخليك (10). تشمل معالجة الاختلافات ناقص التوتر من الخلايا قبل نشر و / أو البيبسين والعلاج بارافورمالدهيد بعد التثبيت. وينبغي التحقق من صحة الأسلوب المناسب للمختبر (14). يوصف أسلوب توين / حمض الهيدروكلوريك بالتفصيل في هذه المقالة. أسلوب توين / حمض الهيدروكلوريك هو بسيط للغاية من الناحية الفنية واستنساخه في المختبرات المختلفة. ويمكن استخدام هذا الأسلوب لإعداد نواة واحدة لتشخيص السمكية من تحديد الجنس وإعادة ترتيب الكروموسومات مع دقة التشخيص مقبول (7). يمكن أن يمزج الجمع بين التحقيق مباشرة والمسمى المسمى غير مباشرة التحقيقات ، والتحقيقات من مختلف الصانعين. وينبغي تجنب تحقيقات للتعرف مناطق متعددة الأشكال الصبغي (11 ، 12) ، أو تلك المعروفة العابرة للهجن بشكل كبير مع غيرها من الصبغيات (13) ، رغم أنه يمكن استخدامها إذا ثبت أن تكون محددة ومناسبة لPGD عن طريق اختبار قبل الشركاء على حد سواء الإنجابية . fluorochromes متاح / haptens واستراتيجيات تميز تحقيقات تشمل ما يلي : تكساس الأحمر (TR) ، فلوريسئين ثيوسيانات (FITC) ، SpectrumGreen (Vysis) ، SpectrumOrange (Vysis) ، SpectrumAqua ، مع الكشف عن التحقيقات biotinylated TR - أفيدين ، FITC أفيدين ، أو CY - 5 streptavidin (تصور استخدام عامل تصفية FarRed) ، وهو مزيج من مجسات أحمر وأخضر لإنتاج إشارة الصفراء ، وهي الجولة الثانية من التهجين وخلق لون ثالث من خلال التقاط متتابع للSpectrumOrange باستخدام TexasRed وتصفية SpectrumGold). وأوصت مجموعة المسبار يحتوي على ثلاثة تحقيقات ومحددة للمناطق السنترومير من كروموزومات X و Y واحد صبغي جسدي ، لتحديد نوع الجنس (14) ، ويستخدم المجس راثي لوضع الصيغة الصبغية وبالتالي التفريق بين تثلث الصبغي X (2N ، 47 ، XXX) ، وتثلث الصيغة الصبغية (3N ، 69 ، XXX) ، وبين رباع الصبغي X (48 ، XXXX) ورباع الصيغة الصبغية (4N ، 92 ، XXXX). تشكيل لتحقيق النموذجية المطبقة في هذا الإعداد هو مزيج يحتوي على AneuVysion ابوت ألفا الساتلية X ، Y ، و 18 ، وقد تم التحقيق أثبتت هذه المجموعة لديها نسبة التعدد قليلة جدا ، وبالتالي ما قبل المعالجة متابعة العمل من الشركاء الإنجابية ليس مطلوبا (14). وينبغي تحقيق هذا المزيج عن أي إعادة ترتيب معين : تحتوي على الأقل من الناحية المثالية تحقيقات كافية لكشف كل المنتجات المتوقعة لإعادة ترتيب مع الخلل الصبغي. إذا لم يكن هذا ممكنا ، يمزج التحقيق حيث تم تقييم المنتجات التي لم يتم كشفها غير متوازن لتكون غير قابلة للاستمرار في حمل معترف بها ويحتمل أن يكون الانتشار المنخفض جدا قد يكون مقبولا (14). يمكن اختباره على metaphases اللمفاويات مثقف من كل من الشركاء الإنجابية. ينبغي النظر لا يقل عن عشرة ينتشر الطورية لخصوصية التحقيق ، وعبر أشكال متعددة من التهجين ، وحاملة لكروموسوم إعادة ترتيب ، لضمان أن التحقيقات هجن كما هو متوقع لقطاعات مختلفة من إعادة ترتيب. بالإضافة ، يجب أن لا يقل عن 100 سجل نواة الطور البيني من هذه الاستعدادات لتقييم نوعية الإشارة ، والسطوع ، والتحوط (14). Commeو rcial مجموعات التحقيق PGS المتاحة (مثل ابوت MultiVysion PB أو PGT) ، التي تستهدف في معظم الأحيان الكروموسومات جدت لتكون في المنتجات مختل الصيغة الصبغية من الحمل ، وتضم التحقيق كروموسوم واحد لكل المستهدفة. عادة ما قد يكون نواة التهجين الثاني مع تحقيقات إضافية للصبغيات توفير مقايسة للصبغيات 13 ، 15 ، 16 ، 18 ، 21 ، 22 ، وXY (14). القيمة التنبؤية لهذا الاختبار باستخدام تقنية FISH نشر وصفها هنا من المحتمل أن تكون منخفضة بشكل غير مقبول في أيدي معظم الناس وليس من المستحسن للاستخدام السريري الروتيني (7 ، 15). تقنيات مثل التهجين الجينومي المقارن (CGH) المطبقة على الخلايا وحيدة قادرة على اختبار لنسخة من كل عدد الكروموسومات (ويلتون وآخرون 2001) ، واستخدام أشكال متعددة من تركيبة واحدة (SNP) صفائف والتحليل الكمي (ويلز وآخرون . 2008) أو &quot;karyomapping&quot; التنميط الجيني (Handyside وآخرون 2009) واعدة تقنيات بديلة للكشف عن عدم توازن الصبغيات في الكروموسوم. ومع ذلك ، فإن قرار الحد من اختلال التوازن والدقة لشريحة لا تزال غير مؤكدة ، ومن المحتمل أن الأسماك سيستمر هذا الأسلوب المفضل لإعادة ترتيب الكروموسومات التي تنطوي على قطاعات صغيرة.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Hydrochloric Acid, 2.5L</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>101254H</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Chloride, 5Kg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>443827W</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Potassium Chloride, 250g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>26764.232</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>di-Sodium Hydrogen Orthophosphate Anhydrous, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>102494C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Potassium Dihydrogen Orthophosphate, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>10203 4B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Hydroxide Pellets, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>28245.265</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tween20, 500mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>663684B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ethanol, 2.5L</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>8.18760.2500</td>
<td>Duty Paid</td>
</tr>
<tr>
<td>Tri-Sodium Citrate, 5Kg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>27833.363</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cow Gum, 250mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cow Proofings Ltd.</td>
<td>No longer available</td>
<td>Old stocks can still be found in art shops</td>
</tr>
<tr>
<td>DAPI/Antifade ES, 0.125&mu;g/mL, 500ul</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cytocell</td>
<td>DES500L</td>
<td>150&mu;l vial rec&#x2019;d with each Cytocell TEL Probe</td>
</tr>
<tr>
<td>Nail Varnish, 12mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Boots</td>
<td>10088316001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Amine-coated Slides, 25</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Genetix</td>
<td>K2615</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DAPI, 0.1mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>D-9542</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vectashield, 10mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>H1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Texas-Red-avidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>A-2016</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FITC-avidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>A-2011</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cy-5 Streptavidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>PA45001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microcentrifuge Tubes, 1.75mL, box of 500</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-MCT-175-C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microcentrifuge Tubes, 0.6mL, box of 1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-MCT-060-C-CS</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>30ml Universal Containers, box of 400</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sterilin</td>
<td>128B</td>
<td>Available from NHS Supply Chain, Cat No. KCP053</td>
</tr>
<tr>
<td>Hot Block</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Spirit Burner Spirit Burner Socket Spirit Burner Wick</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR VWR VWR</td>
<td>451-0107 451-3112 451-3111</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plugged Glass Pipettes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>PMK-300-052R</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissecting Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Wild Heerbrugg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissues, 100boxes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS SUPPLY CHAIN</td>
<td>MJT058</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Metal Culture Trays</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plastic Melamine Trays</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>682-009</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Oven</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouth Pipette Mouthpiece</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>HAE3700 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tubing</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Syringe Filter, 0.2&mu;m pore size, 25mm diameter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>FDM-340-010U</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Diamond Pen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>818-0021</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hot Block for Slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Hybaid</td>
<td>HBOSBB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hybridization Chamber</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue Roll</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS SUPPLY CHAIN</td>
<td>MJT004</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Schieferdecker Jar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>631-9313</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coplin Jar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>631-9331</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps, Fine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>232-2123</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps, Blunt</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>232-2113</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1000mL Beaker</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>213-1642</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phase Contrast Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nikon</td>
<td>E200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fibre-free Blotting Cards, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific (Raymond Lamb)</td>
<td>SDE1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Blue-Frosted Microscope Slides, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3022</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips, 18x18mm, No. 1, box of 200</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3110</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td> Coverslips, 22x22mm, No. 0, box of 200</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3104</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips, 22x50mm, No. 0, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3206</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Syringe, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS Supply Chain</td>
<td>FWC045</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Pipette Tip, 10racks of 1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-T-1000-C-L-R</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Incubator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>LEEC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Waterbath</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Grant</td>
<td>W22</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alcohol Thermometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Various sources available</td>
</tr>
<tr>
<td>pH Meter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jenway</td>
<td>3305</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>pH Electrode</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>662-1759</td>
<td>BNC Plug to fit Jenway pH meter 3305</td>
</tr>
<tr>
<td>Heated Stirrer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bibby</td>
<td>HC502</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Pasteur Pipettes, box of 500</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>PIP4202</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Parafilm, 50mm x 75m</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>291-1214</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

fish for pre-implantation genetic diagnosis

قبل انغراس التشخيص الوراثي (PGD) هو البديل الذي أنشئ لتشخيص ما قبل الولادة ، وينطوي على اختيار ما قبل زرع الأجنة من الأتراب التي تم إنشاؤها بواسطة تكنولوجيا المساعدة على الإنجاب (ART). قد تكون هناك حاجة لأن هذا الاختيار أحادي الجين العائلي للمرض (التليف الكيسي على سبيل المثال) ، أو لشريك واحد يحمل كروموسوم إعادة ترتيب (على سبيل المثال إزفاء متبادلة في الاتجاهين). PGD ​​متاحة للأزواج الذين لديهم أطفال المتأثرين السابقة ، و / أو في حالة إعادة ترتيب الكروموسومات والاجهاض المتكرر ، أو العقم. البويضات الملقحة ويستنشق التالية تحفيز المبيض من خلال الانغماس في المختبر في السائل المنوي (IVF) أو عن طريق حقن الحيوان المنوي داخل الهيولى من الفردية (ICSI). وتحتاج فحص ما قبل الزرع في مرحلة الانقسام الأجنة ، وعادة عن طريق إزالة من خلية واحدة في اليوم 3 بعد الإخصاب ، ويتم اختبار الخلايا تحتاج فحص لتحديد الوضع الجيني للجنين. مضان التهجين في الموضع (FISH) على نواة ثابتة من الخلايا تحتاج فحص مع هدف محدد تحقيقات الحمض النووي هو الأسلوب المفضل للكشف عن الخلل الصبغي المرتبطة إعادة ترتيب الكروموسومات ، واختيار الأجنة الإناث في الأسر التي لديها العاشر مرتبطة المرض الذي لا يوجد أي طفرة معينة الاختبار. كما تم FISH تستخدم لفحص الاجنة لعدم توازن الصبغيات في الكروموسوم عفوية (المعروف أيضا باسم أو PGS AS - PGD) من أجل محاولة تحسين كفاءة المساعدة على الإنجاب ، إلا أن القيمة التنبؤية لهذا الاختبار باستخدام تقنية FISH نشر وصفها هنا ومن المرجح أن تكون منخفضة بشكل غير مقبول في أيدي معظم الناس وليس من المستحسن للاستخدام السريري الروتيني. وصفنا اختيار تحقيقات مناسبة للأسماك وحيدة الخلية ، وتقنيات لنشر قسيم أرومي النوى ، والتهجين في الموقع وسجل إشارة ، تطبق على PGD في عملية إعداد سريرية.

Watch this Scientific Journal Video about FISH for Pre-implantation Genetic Diagnosis at JoVE.com

FISH for Pre-implantation Genetic Diagnosis

توضح هذه المقالة اختيار تحقيقات مناسبة للأسماك وحيدة الخلية ، وتقنيات لنشر قسيم أرومي النوى ، والتهجين في الموقع وسجل إشارة ، تطبق على التشخيص الجيني قبل الزرع (PGD) في عملية إعداد سريرية.

FISH ما قبل انغراس التشخيص الوراثي

Pre-implantation genetic diagnosis (PGD) is an established alternative to pre-natal diagnosis, and involves selecting pre-implantation embryos from a ...

fish-for-pre-implantation-genetic-diagnosis

Research

JoVE Journal

Medicine

36.6K Views.  Guy’s & St Thomas’ Centre for Preimplantation Genetic Diagnosis. توضح هذه المقالة اختيار تحقيقات مناسبة للأسماك وحيدة الخلية ، وتقنيات لنشر قسيم أرومي النوى ، والتهجين في الموقع وسجل إشارة ، تطبق على التشخيص الجيني قبل الزرع (PGD) في عملية إعداد سريرية.

Video: FISH for Pre-implantation Genetic Diagnosis

Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine their efficacy and safety.
Gene therapy using viral vectors is one of the most promising approaches for treating cardiac diseases. Viral delivery of various different genes by changing the carrier gene has immeasurable therapeutic potential.
In this video, the full process of an animal model of heart failure creation followed by gene transfer is presented using a swine model. First, myocardial infarction is created by occluding the proximal left anterior descending coronary artery. Heart remodeling results in chronic heart failure. Unique to our model is a fairly large scar which truly reflects patients with severe heart failure who require aggressive therapy for positive outcomes. After myocardial infarct creation and development of scar tissue, an intracoronary injection of virus is demonstrated with simultaneous nitroglycerine infusion. Our injection method provides simple and efficient gene transfer with enhanced gene expression. This combination of a myocardial infarct swine model with intracoronary virus delivery has proven to be a consistent and reproducible methodology, which helps not only to test the effect of individual gene, but also compare the efficacy of many genes as therapeutic candidates.

A method of gene transfer for the treatment of ischemic heart failure is described using a swine model of myocardial infarction. Our simple and reproducible method enables us to readily evaluate the efficacy of various gene transfers with a very simple and reproducible way.

نقل الجينات لقصور القلب الدماغية في نموذج ما قبل السريرية

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine ...

Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves' Muntjac Deer

Reeves' muntjac deer (Muntiacus reevesi) are a small cervid species native to southeast Asia, and are currently being investigated as a potential model of prion disease transmission and pathogenesis. Vertical transmission is an area of interest among researchers studying infectious diseases, including prion disease, and these investigations require efficient methods for evaluating the effects of maternal infection on reproductive performance. Ultrasonographic examination is a well-established tool for diagnosing pregnancy and assessing fetal health in many animal species1-7, including several species of farmed cervids8-19, however this technique has not been described in Reeves' muntjac deer. Here we describe the application of transabdominal ultrasound to detect pregnancy in muntjac does and to evaluate fetal growth and development throughout the gestational period. Using this procedure, pregnant animals were identified as early as 35 days following doe-buck pairing and this was an effective means to safely monitor the pregnancy at regular intervals. Future goals of this work will include establishing normal fetal measurement references for estimation of gestational age, determining sensitivity and specificity of the technique for diagnosing pregnancy at various stages of gestation, and identifying variations in fetal growth and development under different experimental conditions.

Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves&#039; Muntjac Deer

Transabdominal ultrasound is described as an effective, noninvasive means for assessing reproductive status in Reeves' muntjac deer. These methods can be used to achieve early pregnancy diagnosis and to evaluate fetal viability. Future applications of this technique include estimation of gestational age and effects of maternal disease on fetal development.

الموجات فوق الصوتية عبر الموجات فوق الصوتية لتشخيص الحمل في ريفز 'Muntjac الغزلان

Reeves' muntjac deer (Muntiacus reevesi) are a small cervid species native to southeast Asia, and are currently being investigated as a potential model of ...

Diagnosis of Musculus Gastrocnemius Tightness - Key Factors for the Clinical Examination

Common foot and ankle pathologies have been linked to isolated Musculus gastrocnemius tightness (MGT). Various examination techniques have been described to assess MGT. Still, a standardized examination procedure is missing. Literature argues for weightbearing examination but the degree of knee flexion needed to eliminate the restraining effect of the M. gastrocnemius on ankle dorsiflexion (ADF) is unknown. This manuscript investigates the effect of knee flexion on ankle dorsiflexion and provides a detailed description of a standardized examination protocol. Examination on 20 healthy individuals revealed, that 20&#176; of knee flexion is sufficient to fully eliminate the influence of the M. gastrocnemius on ADF. This builds the prerequisite for a standardized examination for MGT. Non-weightbearing and weightbearing examination of ADF has to be conducted with the knee fully extended and at least 20&#176; flexed. Two investigators should conduct non-weightbearing testing with the subject in supine position. In order to obtain reliable results, the axis of the fibula should be marked. One examiner can conduct weightbearing examination with the subject in lunge stance. Isolated MGT is present if ADF is impaired with the knee fully extended and knee flexion results in a significant ADF increase. The herein presented standardized examination is the prerequisite for future studies aiming at establishing norm values.

Diagnosis of Musculus Gastrocnemius Tightness - Key Factors for the Clinical Examination

Isolated Musculus gastrocnemius tightness is a common cause for foot and ankle pathologies. Currently no standardized examination procedure exists. This manuscript demonstrates that 20 degree of knee flexion eliminates the restraining effect of the M. gastrocnemius on ankle dorsiflexion and presents a video description of a standardized examination protocol.

تشخيص<em&gt; العضلة الساق</em&gt; ضيق - العوامل الرئيسية لامتحان السريري

Common foot and ankle pathologies have been linked to isolated Musculus gastrocnemius tightness (MGT). Various examination techniques have been described ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The &quot;Wire-Injury&quot; Model

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

تحريض تصلب الشرايين المتسارع في الفئران: نموذج "الأسلاك- إصابة"

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Hydra, a Computer-Based Platform for Aiding Clinicians in Cardiovascular Analysis and Diagnosis

Cardiovascular diseases (CVDs) are the leading cause of death throughout the world. The total risk of developing CVD is determined by the combined effect of different cardiovascular risk factors (e.g., diabetes, raised blood pressure, unhealthy diet, tobacco use, stress, etc.) that commonly coexist and act multiplicatively. Most CVDs can be prevented by an early identification of the highest risk factors and an appropriate treatment. The stratification of cardiovascular risk factors involves a wide range of parameters and tests that specialists use in their clinical practice. In addition to cardiovascular (CV) risk stratification, ambulatory blood pressure monitoring (ABPM) also provides relevant information for diagnostic and treatment purposes. This work presents a list of protocols based on the Hydra platform, a web-based system for clinical decision support which incorporates a set of functionalities and services that are required for complete cardiovascular analysis, risk assessment, early diagnosis, treatment and monitoring of patients over time. The program includes tools for inputting and managing comprehensive patient data, organized into different checkups to track the evolution over time. It also has a risk stratification tool to compute a CV risk factor based upon several risk stratification tables of reference. Additionally, the program includes a tool that incorporates ABPM analysis and allows the extraction of valuable information by monitoring blood pressure over a specific period of time. Finally, the reporting service summarizes the most relevant information in a set of reports that aid clinicians in their clinical decision-making process.

This article presents a protocol based on Hydra &#8212; a web-based system for clinical decision support that integrates a full and detailed set of functionalities and services required by physicians for complete cardiovascular analysis, risk assessment, early diagnosis, treatment, and monitoring over time.

هيدرا، منصة حاسوبية لمساعدة الأطباء في تشخيص وتحليل القلب والأوعية الدموية

Cardiovascular diseases (CVDs) are the leading cause of death throughout the world. The total risk of developing CVD is determined by the combined effect ...

International Expert Consensus and Recommendations for Neonatal Pneumothorax Ultrasound Diagnosis and Ultrasound-guided Thoracentesis Procedure

Pneumothorax (PTX) represents accumulation of the air in the pleural space. A large or tension pneumothorax can collapse the lung and cause hemodynamic compromise, a life-threatening disorder. Traditionally, neonatal pneumothorax diagnosis has been based on clinical images, auscultation, transillumination, and chest X-ray findings. This approach may potentially lead to a delay in both diagnosis and treatment. The use of lung US in diagnosis of PTX together with US-guided thoracentesis results in earlier and more precise management. The recommendations presented in this publication are aimed at improving the application of lung US in guiding neonatal PTX diagnosis and management.

Pneumothorax is a common emergency and critical disease in newborn infants that needs rapid, clear diagnosis and timely treatment. Diagnosis and treatment based on chest X-rays are associated with delayed management and radiation damage. Lung ultrasound (US) provides useful guidance for rapid, accurate diagnosis and the precise thoracentesis of pneumothorax.

إجماع الخبراء الدوليين وتوصيات لتشخيص الموجات فوق الصوتية للرئة الوليدية وإجراءات البزل البثور الموجه بالموجات فوق الصوتية

Pneumothorax (PTX) represents accumulation of the air in the pleural space. A large or tension pneumothorax can collapse the lung and cause hemodynamic ...

Diagnosis and Surgical Treatment of Human Brucellar Spondylodiscitis

Brucellar spondylodiscitis (BS) is the most prevalent and significant osteoarticular presentation of human Brucellosis, which is commonly manifested in pastoral communities. It is difficult to differentially diagnose and usually leads to irreversible neurologic deficits and spinal deformities. The initial diagnosis of BS is based on clinical findings and radiographic assessments, and the confirmed diagnosis should be established by the isolation of Brucella species from the blood and/or the standard tube agglutination test. Differential diagnosis of multifocal BS from either degenerative disc diseases or tuberculosis is especially highlighted. The surgical approach, either endoscopic or open, is demonstrated in detail, accompanied by radiographic evidence of structural compression or severe instability. Further, the crucial surgical steps, including single-stage transforaminal decompression, debridement, interbody fusion, and internal fixation, are explained. Moreover, perioperative care and postoperative rehabilitation are also addressed. Taken together, this clinical algorithm presents a practical guide that has yielded substantially satisfactory outcomes in the past decades, which can also be introduced for large-scale application to manage human BS, especially in endemic regions.

We describe a clinical algorithm, based on decades of front-line experience of diagnosis and surgical treatment of human Brucellar spondylodiscitis in the largest medical center of the China's Xinjiang Pastoral Area.

تشخيص وعلاج جراحي لالتهاب البروسيلار البشري

Brucellar spondylodiscitis (BS) is the most prevalent and significant osteoarticular presentation of human Brucellosis, which is commonly manifested in ...

Testing Acetylcholine Followed by Adenosine for Invasive Diagnosis of Coronary Vasomotor Disorders

More than 50% of patients with signs and symptoms of myocardial ischemia undergoing coronary angiography have unobstructed coronary arteries. Coronary vasomotor disorders (impaired vasodilatation and/or enhanced vasoconstriction/spasm) represent important functional causes for such a clinical presentation. Although impaired vasodilatation may be assessed with non-invasive techniques such as positron emission tomography or cardiac magnetic resonance imaging, there is currently no reliable non-invasive technique for the diagnosis of coronary spasm available. Thus, invasive diagnostic procedures (IDP) have been developed for the diagnosis of coronary vasomotor disorders including spasm testing as well as assessment of coronary vasodilatation. The identification of the underlying type of disorder (so called endotype) allows the initiation of targeted pharmacological treatments. Despite the fact that such an approach is recommended by the current European Society of Cardiology guidelines for the management of chronic coronary syndromes based on the CorMicA study, comparability of results as well as multicenter trials are currently hampered by major differences in institutional protocols for coronary functional testing. This article describes a comprehensive IDP protocol including intracoronary acetylcholine provocation testing for diagnosis of epicardial/microvascular spasm, followed by Doppler wire-based assessment of coronary flow reserve (CFR) and hyperemic microvascular resistance (HMR) in search of coronary vasodilatory impairment.

Coronary vasomotion disorders represent frequent functional causes of angina in patients with unobstructed coronaries. The underlying mechanism of angina (endotype) in these patients can be determined by a comprehensive invasive diagnostic procedure based on acetylcholine provocation testing followed by Doppler-derived assessment of the coronary flow reserve and microvascular resistance.

اختبار الأسيتيل كولين متبوعا بالأدينوزين للتشخيص الغازي للاضطرابات الحركية الوعائية التاجية

More than 50% of patients with signs and symptoms of myocardial ischemia undergoing coronary angiography have unobstructed coronary arteries. Coronary ...

Measurement of Myocardial Lactate Production for Diagnosis of Coronary Microvascular Spasm

In about a quarter of patients with angina and non-obstructive coronary arteries, no epicardial spasm is noted on coronary arteriography during an angina attack. Since the pressure-rate product is almost identical at rest and the onset of attack in those patients, the decrease in coronary blood flow rather than increased myocardial oxygen consumption is likely to explain myocardial ischemia, indicating a substantial involvement with coronary microvascular spasm (MVS). Myocardial lactate production, which could be defined as a negative myocardial lactate extraction ratio (ratio of the coronary arterial-venous difference in lactate concentration to arterial concentration), is considered indicative of objective evidence to support the emerging myocardial ischemia. Thus, monitoring of the myocardial lactate production and the emergence of chest pain and ischemic electrocardiographic changes during acetylcholine (ACh) provocation testing is of significant value for detecting the entity of MVS. Practically, 1 min after incremental doses of ACh (20, 50, and 100 &#956;g) are administered into the left coronary artery (LCA), paired samples of 1 mL of blood are collected from the LCA ostium and coronary sinus for measurement of lactate concentration by a calibrated automatic lactate analyzer. Then, the development of MVS could be confirmed by negative myocardial lactate extraction ratio despite the absence of angiographically demonstrable epicardial coronary spasm or before its occurrence throughout ACh provocation testing. In conclusion, assessment of myocardial lactate production is essential and valuable for the diagnosis of MVS.

Myocardial lactate production (coronary arterial-venous difference in serum lactate level) during coronary spasm provocation testing is considered as a highly sensitive marker that reflects acetylcholine-induced myocardial ischemia due to microvascular spasm. This article presents the procedures to assess myocardial lactate production for the diagnosis of coronary microvascular spasm.

قياس إنتاج لاكتات عضلة القلب لتشخيص تشنج الأوعية الدموية الدقيقة التاجية

In about a quarter of patients with angina and non-obstructive coronary arteries, no epicardial spasm is noted on coronary arteriography during an angina ...

Basophil Activation Test for Allergy Diagnosis

The basophil activation test (BAT) is a complementary in vitro diagnostic test that can be used in addition to clinical history, skin test (ST), and specific IgE (sIgE) determination in the evaluation of IgE-mediated allergic reactions to food, insect venom, drugs, as well as some forms of chronic urticaria. However, the role of this technique in the diagnostic algorithms is highly variable and not well determined.
BAT is based on the determination of basophil response to allergen/drug cross-linking IgE activation through the measurement of activation markers (such as CD63, CD203c) by flow cytometry. This test can be a useful and complementary tool to avoid controlled challenge tests&#160;to confirm allergy diagnosis, especially in subjects experiencing severe life-threatening reactions. In general, the performance of BAT should be considered if i) the allergen/drug produces false positive results in ST; ii) there is no allergen/drug source to use for ST or sIgE determination; iii) there is discordance between patient history and ST or sIgE determination; iv) symptoms suggest that ST may result in systemic response; v) before considering a CCT to confirm the culprit allergen/drug. The main limitations of the test are related to non-optimal sensitivity, especially in drug allergy, the need to perform the test no longer than 24 h after sample extraction, and the lack of standardization between laboratories in terms of procedures, concentrations, and cell markers.

The basophil activation test is a complementary in vitro diagnostic test for the evaluation of IgE-mediated allergic reactions based on the detection of basophil activation in the presence of a specific stimulus through the measure of activation markers by flow cytometry.

اختبار تنشيط باسوفيل لتشخيص الحساسية

The basophil activation test (BAT) is a complementary in vitro diagnostic test that can be used in addition to clinical history, skin test (ST), and ...