1. Lyse et la diffusion de noyau d&#39;une blastomère biopsiés <ol><li> Tampon de lyse cellulaire des cellules propagation (0,2% de Tween 20 dans 0,01 M HCl, pH 2,0) doit être préparée 24 heures à l&#39;avance et stocké à -20 ° C. Préparer 100 ml et 20 ml de filtre dans un conteneur de 30 ml stériles universelle en utilisant une seringue stérile de 20 ml et un filtre seringue. Distribuer des aliquotes de 1 mL dans 10 à 15 1,7 ml microtubes stériles, fermer et étiqueter les tubes avant de le congeler. Il est recommandé d&#39;avoir deux lots différents est l&#39;utilisation, le nouveau lot et le lot précédent, qui a été testé et peut être utilisé si le nouveau lot est insatisfaisante. </li><li> Décongeler le tampon de lyse à température ambiante 30 minutes avant la biopsie. Pour des raisons pratiques, la température de travail se situe entre la température ambiante et la température de la main. </li><li> Score d&#39;un petit cercle (environ 5 mm de diamètre) sur la partie inférieure d&#39;une lame d&#39;amine-couché (par exemple Genetix) en utilisant un stylo de diamants et de pré-label de la diapositive avec le numéro de dossier, numéro de la diapositive unique, et la date de biopsie. Utilisez une lame séparée pour chaque blastomère dans l&#39;ordre numérique, et l&#39;étiquette avec le numéro de l&#39;embryon. Les diapositives doivent être étiquetés avec un crayon dur comme 4H, et &quot;effacé&quot; avec un gant de latex pour enlever toute la poussière de graphite. </li><li> Placez un petit volume de tampon de lyse dans le cercle. </li><li> Transférer le blastomère biopsié dans le tampon de lyse. Si nécessaire, ajouter un tampon de lyse dans le cercle jusqu&#39;à ce que la cellule commence à se lyser, la cellule doit lyser complètement et le cytoplasme se disperser avant le séchage de la mémoire tampon. </li><li> Observez le noyau afin de s&#39;assurer qu&#39;il reste dans le cercle et ne sont pas perdues; si la cellule n&#39;a pas de noyau ou a noyaux multiples, la biopsie d&#39;une autre cellule. </li><li> Laisser la lame sécher à l&#39;air à température ambiante. </li></ol> 2. Hybridation in situ d&#39;un seul noyau de blastomères <ol><li> Préparer une série d&#39;éthanol (70, 90 et 100%), composé dans l&#39;eau distillée stérile. </li><li> Allumez-le et mettre le bloc chaud (par exemple Hybaid Omnislide ou Vysis Hybrite) à 75 ° C. </li><li> Sondes de dégivrage, vortex et centrifuger. Les réactifs doivent être témoin et vérifiées pour être correcte avant de faire le mélange de la sonde. Volumes de pipette comme spécifié par le fabricant pour rattraper le mélange de sonde dans un tube à 0,65 ml microtubes stériles et le vortex et centrifuger avant l&#39;utilisation. Le volume total du mélange de la sonde devrait être suffisante pour permettre à 2 l par le noyau pour être testé et arrondi au plus proche des 10 uL pour permettre une marge de sécurité. </li><li> Pré-laver les lames dans des bocaux Coplin en utilisant un tampon phosphate salin (PBS) (pH 7,0: 0,14 M de NaCl, 3 mM de KCl, 10 mM Na 2 HPO 4, 2 mM KH 2 PO 4) pendant 5 min à température ambiante. </li><li> Rincer les lames à deux reprises dans de l&#39;eau distillée stérile. </li><li> Déshydrater les lames avec la série d&#39;éthanol (70, 90 et 100%) pendant 2 min chacun à la température ambiante et l&#39;air sec. Assurez diapositives sont entièrement immergés et si toute la poussière de graphite flotte à la surface, éponger avec un tissu propre. </li><li> Enregistrer la position du noyau dans le cercle en visualisant avec un microscope à contraste de phase. </li><li> Déshydrater à l&#39;éthanol à 100% pendant 2 min à température ambiante et l&#39;air sec. </li><li> Appliquer 2 pl de mélange de sonde, et couvrir avec une lamelle de 9 x 9 mm (un quart de 18 x 18 mm lamelle n ° 1). </li><li> Scellez les bords de la lamelle de caoutchouc ciment (gomme de vache par exemple; Proofing vache). </li><li> Codenature les diapositives sur un bloc chaude à 75 ° C pendant 5 min, puis l&#39;hybridation des diapositives nuit (16-20 h) dans une chambre humidifiée à 37 ° C. Mêle sonde constitués entièrement de sondes centromère (ie pour liée au sexe des cas) donnera un résultat satisfaisant après 60 min d&#39;hybridation. </li><li> Préparez un bain d&#39;eau avec des jarres Coplin suffisant et la chaleur à 71 ° C. </li><li> Préparer un 0.4x citrate saline standard (SSC) de solution de lavage sévères (pH 7,0 à 71 ° C, 0,06 M de NaCl, 6 mM C 6 H 5 Na 3 O 7 .2 H 2 O) et de chaleur dans l&#39;eau du bain. </li><li> Déposer 50 ml de lavage rigoureuses par Coplin jar nécessaires et vérifier que la température est de 71 ° C immédiatement avant l&#39;utilisation à l&#39;aide d&#39;un thermomètre propre. </li><li> Retirer délicatement le ciment de caoutchouc de chaque diapositive et rincer la lamelle à l&#39;aide 4x SSC/0.05% de Tween 20 (pH 7,0) à température ambiante. </li><li> Laver les lames dans le lavage SSC 0.4x strictes à 71 ° C pendant 5 min. Lavez pas plus de 6 diapositives par jarre de Coplin. </li><li> Laver les lames dans Tween 20% SSC/0.05 4x à température ambiante pendant 2 min. </li><li> Si le mélange sonde contient la sonde indirectement marqué (s), égoutter les diapositives de l&#39;excès de liquide et d&#39;appliquer 20 uL d&#39;anticorps par fluorescence conjugué dans un carré de 20 x 20 mm de Parafilm. </li><li> Incuber dans une chambre humidifiée à 37 ° C pendant 15 min. </li><li> Retirez le Parafilm et laver une fois dans Tween 20% SSC/0.05 4x à température ambiante pendant 2 min. </li><li> Laver deux fois pendant 2 min dans du PBS unela température ambiante t et égoutter les lames. </li><li> Appliquer 6 uL d&#39;DAPI / Vectashield (160 ng de 4 &#39;,6-diamidino-2-phénylindole dihydrochlorure dans 1 ml de milieu de montage Vectashield, Vector Laboratories) à un 22 x 22 mm non. 0 lamelle et inverser la glisser sur la lamelle. </li><li> Blot et sceller les bords de la lamelle avec du vernis à ongles transparent. </li></ol> 3. Analyse au microscope à fluorescence convenablement équipé avec des filtres appropriés pour les sondes utilisées. <ol><li> Score signaux par visualisation directe en utilisant un microscope à fluorescence et unique filtres passe-bande pour chaque fluorochrome dans le dosage. Chaque noyau devrait être marqué par deux analystes. Une ligne directrice générale devrait conduire à marquer d&#39;un signal unique lorsque deux signaux sont espacées de moins d&#39;un domaine (le signal de largeur) à part, cependant, le jugement fondé sur l&#39;expérience doit être exercé à interpréter les signaux de taille variable, l&#39;intensité et de séparation. </li><li> Utiliser un logiciel d&#39;imagerie (par exemple Isis, métasystèmes, Altlussheim, Allemagne; CytoVision, Genetix) pour capturer une image du noyau pour la confirmation du diagnostic visuel, et pour l&#39;archivage des images dans le cadre d&#39;un plan d&#39;assurance qualité du laboratoire. </li></ol> 4. Les résultats représentatifs: Métaphase et noyaux interphasiques de cultures de lymphocytes du sang périphérique devraient être examinés pour confirmer que les sondes sélectionnées sont spécifiques pour les chromosomes de translocation, instructive pour les points d&#39;arrêt (les sondes subtelomere devrait s&#39;hybrider seulement pour les segments translocation et la sonde centromère (s) à l&#39;centric segment (s)) et les signaux dans les noyaux interphasiques doit être brillante et discrète. Notation du nombre de signaux pour chaque sonde dans 100 noyaux interphasiques de chaque partenaire est recommandé d&#39;évaluer l&#39;efficacité de l&#39;essai. Dans ce cas, deux signaux ont été marqués en 95% -99% de noyaux pour chaque sonde. La figure 1 montre une métaphase et noyau interphasique d&#39;une préparation à une translocation réciproque entre les bras courts des chromosomes 5 et 9. Signaux dans les noyaux interphasiques à partir de blastomères d&#39;embryons doit être brillant et discret et marqué à l&#39;aide séparées filtres passe-bande pour les couleurs utilisées. La figure 2 montre un noyau de blastomères avec un motif de signal normal (2 copies pour tous les loci testés) compatible avec un complément chromosomique normal ou équilibré pour le chromosome 5 et 9, et un noyau avec un modèle de signal anormal compatible avec un produit de la translocation déséquilibrée qui a monosomie (une copie) pour le segment transloqué du chromosome 5 et trisomie (3 copies) pour le segment transloqué du chromosome 9. <img src="/files/ftp_upload/2570/2570fig1.jpg" alt="Figure 1" /> Figure 1 Un écart métaphase et un noyau interphasique préparés à partir de cultures de lymphocytes du sang périphérique à partir d&#39;un porteur d&#39;une translocation réciproque entre les bras courts des chromosomes 5 et 9 avec points d&#39;arrêt à 5p14.3 et 9p24.1:. 46, XY, t (5 ; 9) (p14.3;. p24.1) ish t (5; 9) (5ptel48-, 9ptel30 +; 9ptel30-, 5ptel48 +, 9cen +). Sondes FISH ont été sélectionnés pour les deux segments translocation (5p14.3 → 5pter, rouge Cytocell subtelomere5ptel48 TexasRed; 9p24.1 → 9pter, vert Cytocell subtelomere 9ptel30 FITC) et centrée sur le segment du chromosome 9 (9p24.1 → 9qter, bleu Abbott CEP 9 alpha-satellites SpectrumAqua). <img src="/files/ftp_upload/2570/2570fig2.jpg" alt="Figure 2" /> Signaux Figure 2. Blastomère en interphase noyaux de jours-3 embryons capturées à l&#39;aide d&#39;un filtre différent pour chaque fluorochrome et ont fusionné pour former une image composite. (A) Deux signaux pour chaque sonde indiquant deux copies de chaque locus, ce qui est cohérent avec un complément normal ou équilibré pour les chromosomes de translocation. (B) Un signal rouge, vert et trois signaux de deux signaux bleu indiquant une copie du segment transloqué du chromosome 5, trois copies du segment transloqué du chromosome 9 et deux copies du segment centrique du chromosome 9, ce qui est cohérent avec les voisins -1 ségrégation de la translocation résultant en un produit déséquilibrée avec monosomie pour 5p14.3 → 5pter et une trisomie pour 9p24.1 → 9pter.

<ol>
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Steril. 94, 408-430 (2010).</li><li>Wilton, L., Williamson, R., McBain, J., Edgar, D., Voullaire, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Birth+of+a+healthy+infant+after+preimplantation+confirmation+of+euploidy+by+comparative+genomic+hybridization.">Birth of a healthy infant after preimplantation confirmation of euploidy by comparative genomic hybridization.</a> N. Engl. J. Med. 345, 1537-1541 (2001).</li><li>Wells, D., Alfarawati, S., Fragouli, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+comprehensive+chromosomal+screening+for+embryo+assessment:+microarrays+and+CGH.">Use of comprehensive chromosomal screening for embryo assessment: microarrays and CGH.</a> Mol. Hum. Reprod. 14, 703-710 (2008).</li><li>Handyside, A. H., Harton, G. L., Mariani, B., Thornhill, A. R., Affara, N., Shaw, M. A., Griffin, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Karyomapping,+a+universal+method+for+genome+wide+analysis+of+genetic+disease+based+on+mapping+crossovers+between+parental+haplotypes.">Karyomapping, a universal method for genome wide analysis of genetic disease based on mapping crossovers between parental haplotypes.</a> J. Med. Genet. 47, 651-658 (2010).</li></ol>

L&#39;application de l&#39;hybridation fluorescente in situ (FISH) à une cellule d&#39;embryon unique (blastomère) présente des défis particuliers à la fois dans les pratiques et dans l&#39;interprétation du modèle de signal. La cellule de biopsie doit être réparti dans une zone pré-définie sur la lame afin de faciliter ses poissons de localisation suivants; un soin extrême doit être pris en veillant à ce que la cellule est lysée, que le cytoplasme a été dispersée, et que le noyau est visible et intacte, et, comme le diagnostic repose sur les résultats de cette cellule unique, la notation et l&#39;interprétation stricte des lignes directrices devraient être appliquées. Toutefois, dans des mains expérimentées, le poisson est une technique robuste pour diagnostic pré-implantatoire génétique (DPI) en pratique clinique. Le principe du DPI par FISH est que les sondes spécifiques de la cible d&#39;ADN marqués avec des fluorochromes différents ou haptènes peuvent être utilisés pour détecter le nombre de copies de loci spécifiques, et ainsi de détecter les déséquilibres chromosomiques associées à de ségrégation méiotique des réarrangements chromosomiques (1), y compris Robertsonienne translocations, translocations réciproques, inversions, et des réarrangements complexes (2). Le poisson peut aussi être utilisé pour sélectionner des embryons féminins dans les familles avec X-linked maladie, pour laquelle il n&#39;existe pas de test de mutation spécifique (3, 4). De façon plus controversée, le poisson a également été utilisé pour dépister l&#39;aneuploïdie chromosomique sporadiques afin d&#39;essayer d&#39;améliorer l&#39;efficacité de la reproduction assistée (5, 6); toutefois, la valeur prédictive de ce test à l&#39;aide FSIH est susceptible d&#39;être trop bas dans la plupart des gens les mains et il n&#39;est pas recommandé pour une utilisation clinique de routine (7). Cet article se concentre sur les aspects techniques et les limites de la FISH appliquée aux cliniques unicellulaires diagnostic. Les méthodes de propagation et la fixation des blastomères simples comprennent méthanol / acide acétique (5, 8), Tween / HCl (9), et une combinaison de Tween / HCl et méthanol / acide acétique (10). Les variations incluent le traitement hypotonique des cellules avant l&#39;épandage et / ou la pepsine et le traitement paraformaldéhyde après fixation. La méthode doit être correctement validé pour le laboratoire (14). La méthode Tween / HCl est décrite en détail dans cet article. La méthode Tween / HCl est techniquement simple et hautement reproductibles dans différents laboratoires. Cette méthode peut être utilisée pour préparer des noyaux simples pour le diagnostic FISH de la détermination du sexe et des réarrangements chromosomiques avec une précision acceptable de diagnostic (7). Mêle sonde peut combiner directement et indirectement étiqueté sondes marquées, et des sondes de différents fabricants. Sondes pour connaître les régions du chromosome polymorphe (11, 12), ou ceux qui sont connus de contre-s&#39;hybrider de façon significative avec d&#39;autres chromosomes (13) doit être évitée, mais peut être utilisé s&#39;il est démontré d&#39;être précis et adapté à un DPI par des essais préalables sur les deux partenaires de reproduction . Fluorochromes disponibles / haptènes et des stratégies pour les sondes discriminante sont les suivantes: le rouge Texas (TR), l&#39;isothiocyanate de fluorescéine (FITC), SpectrumGreen (Vysis), SpectrumOrange (Vysis), SpectrumAqua, sondes biotinylées détectés avec TR-avidine, FITC-avidine, ou Cy-5 streptavidine (visualisés à l&#39;aide d&#39;un filtre Farred), un mélange de sondes rouges et vertes pour produire un signal jaune, un second tour de l&#39;hybridation et une troisième couleur créé par la capture séquentielle des SpectrumOrange utilisant un TexasRed et un filtre SpectrumGold). Un ensemble de sondes contenant trois sondes, spécifiques pour les régions de l&#39;centromère des chromosomes X et Y et un autosome, est recommandé pour la détermination du sexe (14); la sonde autosomique est utilisé pour établir la ploïdie et ainsi faire la différence entre X trisomie (2n, 47 , XXX) et triploïdie (3n, 69, XXX), et entre tétrasomie X (48, XXXX) et tétraploïdie (4n, 92, XXXX). Une sonde typique située à appliquer dans ce contexte est le mélange AneuVysion Abbott contenant l&#39;alpha-satellites X, Y, et 18; cet ensemble de sonde a été démontré que le polymorphisme ont un taux très faible, et donc de pré-traitement du travail de reproduction des partenaires Il n&#39;est pas nécessaire (14). Le mélange de sonde pour tout réarrangement spécifique doit: Idéalement contiennent des sondes au moins suffisant pour détecter tous les produits attendus de la transposition à un déséquilibre chromosomique. Si cela n&#39;est pas possible, la sonde se mélange où les produits détectés déséquilibrés ont été évalués comme non viables dans une grossesse reconnaissables et sont susceptibles d&#39;avoir une très faible prévalence peut être acceptable (14). Être testés sur des cultures de lymphocytes métaphases des deux partenaires de la reproduction. Au moins dix propage métaphase devraient être examinés pour la spécificité de la sonde, polymorphismes et hybridation croisée, et, pour le transporteur réarrangement chromosomique, afin de s&#39;assurer que les sondes hybrident comme prévu aux différents segments du réarrangement. En outre, au moins 100 noyaux interphasiques de ces préparations doit être marqué d&#39;évaluer la spécificité du signal, la luminosité et discret (14). Commercial ensembles PGS sonde sont disponibles (par exemple, Abbott MultiVysion PB ou TCP), en ciblant les chromosomes les plus fréquemment trouvés à aneuploïdes dans les produits de la conception, et comprenant une seule sonde par chromosome ciblé. Typiquement le noyau peut avoir un seconde hybridation avec des sondes pour les chromosomes supplémentaires fournissant un test pour les chromosomes 13, 15, 16, 18, 21, 22, et XY (14). La valeur prédictive de ce test en utilisant la diffusion et la technique de FISH décrite ici est susceptible d&#39;être beaucoup trop faible dans les mains de la plupart des gens et il n&#39;est pas recommandé pour une utilisation clinique de routine (7, 15). Des techniques telles que l&#39;hybridation génomique comparative (CGH) appliquée à des cellules individuelles sont en mesure de tester pour le nombre de copies de chaque chromosome (Wilton et al. 2001), et l&#39;utilisation de polymorphismes nucléotidiques simples (SNP) des tableaux et l&#39;analyse quantitative (Wells et al . 2008) ou &quot;karyomapping« génotypage (Handyside et al. 2009) sont prometteurs techniques alternatives pour détecter l&#39;aneuploïdie chromosomique. Toutefois, la limite de résolution et de précision pour le déséquilibre du segment restent incertaines et il est probable que les poissons continuent d&#39;être la technique de choix pour les réarrangements chromosomiques impliquant de petits segments.

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Hydrochloric Acid, 2.5L</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>101254H</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Chloride, 5Kg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>443827W</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Potassium Chloride, 250g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>26764.232</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>di-Sodium Hydrogen Orthophosphate Anhydrous, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>102494C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Potassium Dihydrogen Orthophosphate, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>10203 4B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Hydroxide Pellets, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>28245.265</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tween20, 500mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>663684B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ethanol, 2.5L</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>8.18760.2500</td>
<td>Duty Paid</td>
</tr>
<tr>
<td>Tri-Sodium Citrate, 5Kg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>27833.363</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cow Gum, 250mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cow Proofings Ltd.</td>
<td>No longer available</td>
<td>Old stocks can still be found in art shops</td>
</tr>
<tr>
<td>DAPI/Antifade ES, 0.125&mu;g/mL, 500ul</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cytocell</td>
<td>DES500L</td>
<td>150&mu;l vial rec&#x2019;d with each Cytocell TEL Probe</td>
</tr>
<tr>
<td>Nail Varnish, 12mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Boots</td>
<td>10088316001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Amine-coated Slides, 25</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Genetix</td>
<td>K2615</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DAPI, 0.1mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>D-9542</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vectashield, 10mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>H1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Texas-Red-avidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>A-2016</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FITC-avidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>A-2011</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cy-5 Streptavidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>PA45001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microcentrifuge Tubes, 1.75mL, box of 500</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-MCT-175-C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microcentrifuge Tubes, 0.6mL, box of 1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-MCT-060-C-CS</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>30ml Universal Containers, box of 400</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sterilin</td>
<td>128B</td>
<td>Available from NHS Supply Chain, Cat No. KCP053</td>
</tr>
<tr>
<td>Hot Block</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Spirit Burner Spirit Burner Socket Spirit Burner Wick</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR VWR VWR</td>
<td>451-0107 451-3112 451-3111</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plugged Glass Pipettes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>PMK-300-052R</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissecting Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Wild Heerbrugg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissues, 100boxes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS SUPPLY CHAIN</td>
<td>MJT058</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Metal Culture Trays</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plastic Melamine Trays</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>682-009</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Oven</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouth Pipette Mouthpiece</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>HAE3700 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tubing</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Syringe Filter, 0.2&mu;m pore size, 25mm diameter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>FDM-340-010U</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Diamond Pen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>818-0021</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hot Block for Slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Hybaid</td>
<td>HBOSBB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hybridization Chamber</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue Roll</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS SUPPLY CHAIN</td>
<td>MJT004</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Schieferdecker Jar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>631-9313</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coplin Jar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>631-9331</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps, Fine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>232-2123</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps, Blunt</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>232-2113</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1000mL Beaker</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>213-1642</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phase Contrast Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nikon</td>
<td>E200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fibre-free Blotting Cards, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific (Raymond Lamb)</td>
<td>SDE1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Blue-Frosted Microscope Slides, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3022</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips, 18x18mm, No. 1, box of 200</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3110</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td> Coverslips, 22x22mm, No. 0, box of 200</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3104</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips, 22x50mm, No. 0, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3206</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Syringe, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS Supply Chain</td>
<td>FWC045</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Pipette Tip, 10racks of 1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-T-1000-C-L-R</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Incubator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>LEEC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Waterbath</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Grant</td>
<td>W22</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alcohol Thermometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Various sources available</td>
</tr>
<tr>
<td>pH Meter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jenway</td>
<td>3305</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>pH Electrode</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>662-1759</td>
<td>BNC Plug to fit Jenway pH meter 3305</td>
</tr>
<tr>
<td>Heated Stirrer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bibby</td>
<td>HC502</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Pasteur Pipettes, box of 500</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>PIP4202</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Parafilm, 50mm x 75m</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>291-1214</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

fish for pre-implantation genetic diagnosis

Diagnostic pré-implantatoire génétique (DPI) est une alternative établie pour le diagnostic prénatal, et implique la sélection pré-implantatoire des embryons à partir d&#39;une cohorte générées par la technologie de reproduction assistée (TRA). Cette sélection peut être nécessaire en raison de maladie familiale monogénique (par exemple la mucoviscidose), ou parce que l&#39;un des partenaires réalise un réarrangement chromosomique (par exemple une translocation réciproque dans les deux sens). Le DPI est disponible pour les couples qui ont déjà eu des enfants affectés et / ou dans le cas des réarrangements chromosomiques, fausses couches à répétition, ou l&#39;infertilité. Les ovocytes aspirés stimulation ovarienne sont fécondés par la suite à l&#39;immersion dans le sperme in vitro (FIV) ou par injection intracytoplasmique d&#39;un spermatozoïde individuel (ICSI). Pré-implantatoire des embryons au stade clivage sont biopsiées, habituellement par le prélèvement d&#39;une cellule unique sur 3 jours après la fécondation, et la cellule de biopsie est testé pour établir le statut génétique de l&#39;embryon. L&#39;hybridation fluorescente in situ (FISH) sur les noyaux de cellules fixes biopsiés avec la cible spécifique des sondes d&#39;ADN est la technique de choix pour détecter les déséquilibres chromosomiques associées à des réarrangements chromosomiques, et de sélectionner les embryons féminins dans les familles avec des maladies liées à l&#39;X pour lesquels il n&#39;existe aucune mutation spécifique de test. FISH a également été utilisé pour les embryons de l&#39;écran de l&#39;aneuploïdie chromosomique spontanée (aussi connu comme PGS ou PGD-AS), afin de tenter d&#39;améliorer l&#39;efficacité de la procréation assistée, mais la valeur prédictive de ce test en utilisant la diffusion et la technique de FISH décrite ici est susceptible d&#39;être beaucoup trop faible dans les mains de la plupart des gens, et il n&#39;est pas recommandé pour une utilisation clinique de routine. Nous décrivons le choix des sondes appropriées pour les mono-cellules de poisson, les techniques de propagation pour les noyaux des blastomères, et l&#39;hybridation in situ et la notation du signal, appliqué aux DPI dans un cadre clinique.

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FISH for Pre-implantation Genetic Diagnosis

Cet article décrit la sélection des sondes appropriées pour les mono-cellules de poisson, les techniques de propagation pour les noyaux des blastomères, et l&#39;hybridation in situ et la notation du signal, appliquées au diagnostic génétique pré-implantatoire (DPI) dans un contexte clinique.

FISH pour le diagnostic préimplantatoire génétique

Pre-implantation genetic diagnosis (PGD) is an established alternative to pre-natal diagnosis, and involves selecting pre-implantation embryos from a ...

fish-for-pre-implantation-genetic-diagnosis

Research

JoVE Journal

Medicine

36.6K vues.  Guy’s & St Thomas’ Centre for Preimplantation Genetic Diagnosis. Cet article décrit la sélection des sondes appropriées pour les mono-cellules de poisson, les techniques de propagation pour les noyaux des blastomères, et l'hybridation in situ et la notation du signal, appliquées au diagnostic génétique pré-implantatoire (DPI) dans un contexte clinique.

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Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine their efficacy and safety.
Gene therapy using viral vectors is one of the most promising approaches for treating cardiac diseases. Viral delivery of various different genes by changing the carrier gene has immeasurable therapeutic potential.
In this video, the full process of an animal model of heart failure creation followed by gene transfer is presented using a swine model. First, myocardial infarction is created by occluding the proximal left anterior descending coronary artery. Heart remodeling results in chronic heart failure. Unique to our model is a fairly large scar which truly reflects patients with severe heart failure who require aggressive therapy for positive outcomes. After myocardial infarct creation and development of scar tissue, an intracoronary injection of virus is demonstrated with simultaneous nitroglycerine infusion. Our injection method provides simple and efficient gene transfer with enhanced gene expression. This combination of a myocardial infarct swine model with intracoronary virus delivery has proven to be a consistent and reproducible methodology, which helps not only to test the effect of individual gene, but also compare the efficacy of many genes as therapeutic candidates.

A method of gene transfer for the treatment of ischemic heart failure is described using a swine model of myocardial infarction. Our simple and reproducible method enables us to readily evaluate the efficacy of various gene transfers with a very simple and reproducible way.

Transfert de gènes pour insuffisance cardiaque ischémique dans un modèle préclinique

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine ...

Recherche

Médecine

Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves' Muntjac Deer

Reeves' muntjac deer (Muntiacus reevesi) are a small cervid species native to southeast Asia, and are currently being investigated as a potential model of prion disease transmission and pathogenesis. Vertical transmission is an area of interest among researchers studying infectious diseases, including prion disease, and these investigations require efficient methods for evaluating the effects of maternal infection on reproductive performance. Ultrasonographic examination is a well-established tool for diagnosing pregnancy and assessing fetal health in many animal species1-7, including several species of farmed cervids8-19, however this technique has not been described in Reeves' muntjac deer. Here we describe the application of transabdominal ultrasound to detect pregnancy in muntjac does and to evaluate fetal growth and development throughout the gestational period. Using this procedure, pregnant animals were identified as early as 35 days following doe-buck pairing and this was an effective means to safely monitor the pregnancy at regular intervals. Future goals of this work will include establishing normal fetal measurement references for estimation of gestational age, determining sensitivity and specificity of the technique for diagnosing pregnancy at various stages of gestation, and identifying variations in fetal growth and development under different experimental conditions.

Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves&#039; Muntjac Deer

Transabdominal ultrasound is described as an effective, noninvasive means for assessing reproductive status in Reeves' muntjac deer. These methods can be used to achieve early pregnancy diagnosis and to evaluate fetal viability. Future applications of this technique include estimation of gestational age and effects of maternal disease on fetal development.

Échographie transabdominale pour le diagnostic de grossesse chez le cerf muntjac de Reeves

Reeves' muntjac deer (Muntiacus reevesi) are a small cervid species native to southeast Asia, and are currently being investigated as a potential model of ...

Diagnosis of Musculus Gastrocnemius Tightness - Key Factors for the Clinical Examination

Common foot and ankle pathologies have been linked to isolated Musculus gastrocnemius tightness (MGT). Various examination techniques have been described to assess MGT. Still, a standardized examination procedure is missing. Literature argues for weightbearing examination but the degree of knee flexion needed to eliminate the restraining effect of the M. gastrocnemius on ankle dorsiflexion (ADF) is unknown. This manuscript investigates the effect of knee flexion on ankle dorsiflexion and provides a detailed description of a standardized examination protocol. Examination on 20 healthy individuals revealed, that 20&#176; of knee flexion is sufficient to fully eliminate the influence of the M. gastrocnemius on ADF. This builds the prerequisite for a standardized examination for MGT. Non-weightbearing and weightbearing examination of ADF has to be conducted with the knee fully extended and at least 20&#176; flexed. Two investigators should conduct non-weightbearing testing with the subject in supine position. In order to obtain reliable results, the axis of the fibula should be marked. One examiner can conduct weightbearing examination with the subject in lunge stance. Isolated MGT is present if ADF is impaired with the knee fully extended and knee flexion results in a significant ADF increase. The herein presented standardized examination is the prerequisite for future studies aiming at establishing norm values.

Diagnosis of Musculus Gastrocnemius Tightness - Key Factors for the Clinical Examination

Isolated Musculus gastrocnemius tightness is a common cause for foot and ankle pathologies. Currently no standardized examination procedure exists. This manuscript demonstrates that 20 degree of knee flexion eliminates the restraining effect of the M. gastrocnemius on ankle dorsiflexion and presents a video description of a standardized examination protocol.

Le diagnostic de la<em&gt; Musculus Gastrocnemius</em&gt; Étanchéité - facteurs clés pour l&#39;examen clinique

Common foot and ankle pathologies have been linked to isolated Musculus gastrocnemius tightness (MGT). Various examination techniques have been described ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The &quot;Wire-Injury&quot; Model

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

Induction de l’athérosclérose accélérée chez les souris : le modèle « Wire-Injury »

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Hydra, a Computer-Based Platform for Aiding Clinicians in Cardiovascular Analysis and Diagnosis

Cardiovascular diseases (CVDs) are the leading cause of death throughout the world. The total risk of developing CVD is determined by the combined effect of different cardiovascular risk factors (e.g., diabetes, raised blood pressure, unhealthy diet, tobacco use, stress, etc.) that commonly coexist and act multiplicatively. Most CVDs can be prevented by an early identification of the highest risk factors and an appropriate treatment. The stratification of cardiovascular risk factors involves a wide range of parameters and tests that specialists use in their clinical practice. In addition to cardiovascular (CV) risk stratification, ambulatory blood pressure monitoring (ABPM) also provides relevant information for diagnostic and treatment purposes. This work presents a list of protocols based on the Hydra platform, a web-based system for clinical decision support which incorporates a set of functionalities and services that are required for complete cardiovascular analysis, risk assessment, early diagnosis, treatment and monitoring of patients over time. The program includes tools for inputting and managing comprehensive patient data, organized into different checkups to track the evolution over time. It also has a risk stratification tool to compute a CV risk factor based upon several risk stratification tables of reference. Additionally, the program includes a tool that incorporates ABPM analysis and allows the extraction of valuable information by monitoring blood pressure over a specific period of time. Finally, the reporting service summarizes the most relevant information in a set of reports that aid clinicians in their clinical decision-making process.

This article presents a protocol based on Hydra &#8212; a web-based system for clinical decision support that integrates a full and detailed set of functionalities and services required by physicians for complete cardiovascular analysis, risk assessment, early diagnosis, treatment, and monitoring over time.

Hydra, une plateforme informatique pour aider les cliniciens dans le diagnostic et d’analyse cardiovasculaire

Cardiovascular diseases (CVDs) are the leading cause of death throughout the world. The total risk of developing CVD is determined by the combined effect ...

International Expert Consensus and Recommendations for Neonatal Pneumothorax Ultrasound Diagnosis and Ultrasound-guided Thoracentesis Procedure

Pneumothorax (PTX) represents accumulation of the air in the pleural space. A large or tension pneumothorax can collapse the lung and cause hemodynamic compromise, a life-threatening disorder. Traditionally, neonatal pneumothorax diagnosis has been based on clinical images, auscultation, transillumination, and chest X-ray findings. This approach may potentially lead to a delay in both diagnosis and treatment. The use of lung US in diagnosis of PTX together with US-guided thoracentesis results in earlier and more precise management. The recommendations presented in this publication are aimed at improving the application of lung US in guiding neonatal PTX diagnosis and management.

Pneumothorax is a common emergency and critical disease in newborn infants that needs rapid, clear diagnosis and timely treatment. Diagnosis and treatment based on chest X-rays are associated with delayed management and radiation damage. Lung ultrasound (US) provides useful guidance for rapid, accurate diagnosis and the precise thoracentesis of pneumothorax.

Consensus d’experts internationaux et recommandations pour le diagnostic d’échographie de pneumothorax néonatal et la procédure de thoracentesis à ultrasons

Pneumothorax (PTX) represents accumulation of the air in the pleural space. A large or tension pneumothorax can collapse the lung and cause hemodynamic ...

Diagnosis and Surgical Treatment of Human Brucellar Spondylodiscitis

Brucellar spondylodiscitis (BS) is the most prevalent and significant osteoarticular presentation of human Brucellosis, which is commonly manifested in pastoral communities. It is difficult to differentially diagnose and usually leads to irreversible neurologic deficits and spinal deformities. The initial diagnosis of BS is based on clinical findings and radiographic assessments, and the confirmed diagnosis should be established by the isolation of Brucella species from the blood and/or the standard tube agglutination test. Differential diagnosis of multifocal BS from either degenerative disc diseases or tuberculosis is especially highlighted. The surgical approach, either endoscopic or open, is demonstrated in detail, accompanied by radiographic evidence of structural compression or severe instability. Further, the crucial surgical steps, including single-stage transforaminal decompression, debridement, interbody fusion, and internal fixation, are explained. Moreover, perioperative care and postoperative rehabilitation are also addressed. Taken together, this clinical algorithm presents a practical guide that has yielded substantially satisfactory outcomes in the past decades, which can also be introduced for large-scale application to manage human BS, especially in endemic regions.

We describe a clinical algorithm, based on decades of front-line experience of diagnosis and surgical treatment of human Brucellar spondylodiscitis in the largest medical center of the China's Xinjiang Pastoral Area.

Diagnostic et traitement chirurgical de la spondylodiscite humaine de Brucellar

Brucellar spondylodiscitis (BS) is the most prevalent and significant osteoarticular presentation of human Brucellosis, which is commonly manifested in ...

Testing Acetylcholine Followed by Adenosine for Invasive Diagnosis of Coronary Vasomotor Disorders

More than 50% of patients with signs and symptoms of myocardial ischemia undergoing coronary angiography have unobstructed coronary arteries. Coronary vasomotor disorders (impaired vasodilatation and/or enhanced vasoconstriction/spasm) represent important functional causes for such a clinical presentation. Although impaired vasodilatation may be assessed with non-invasive techniques such as positron emission tomography or cardiac magnetic resonance imaging, there is currently no reliable non-invasive technique for the diagnosis of coronary spasm available. Thus, invasive diagnostic procedures (IDP) have been developed for the diagnosis of coronary vasomotor disorders including spasm testing as well as assessment of coronary vasodilatation. The identification of the underlying type of disorder (so called endotype) allows the initiation of targeted pharmacological treatments. Despite the fact that such an approach is recommended by the current European Society of Cardiology guidelines for the management of chronic coronary syndromes based on the CorMicA study, comparability of results as well as multicenter trials are currently hampered by major differences in institutional protocols for coronary functional testing. This article describes a comprehensive IDP protocol including intracoronary acetylcholine provocation testing for diagnosis of epicardial/microvascular spasm, followed by Doppler wire-based assessment of coronary flow reserve (CFR) and hyperemic microvascular resistance (HMR) in search of coronary vasodilatory impairment.

Coronary vasomotion disorders represent frequent functional causes of angina in patients with unobstructed coronaries. The underlying mechanism of angina (endotype) in these patients can be determined by a comprehensive invasive diagnostic procedure based on acetylcholine provocation testing followed by Doppler-derived assessment of the coronary flow reserve and microvascular resistance.

Test de l’acétylcholine suivie d’une adénosine pour le diagnostic invasif des troubles vasomoteurs coronariens

More than 50% of patients with signs and symptoms of myocardial ischemia undergoing coronary angiography have unobstructed coronary arteries. Coronary ...

Measurement of Myocardial Lactate Production for Diagnosis of Coronary Microvascular Spasm

In about a quarter of patients with angina and non-obstructive coronary arteries, no epicardial spasm is noted on coronary arteriography during an angina attack. Since the pressure-rate product is almost identical at rest and the onset of attack in those patients, the decrease in coronary blood flow rather than increased myocardial oxygen consumption is likely to explain myocardial ischemia, indicating a substantial involvement with coronary microvascular spasm (MVS). Myocardial lactate production, which could be defined as a negative myocardial lactate extraction ratio (ratio of the coronary arterial-venous difference in lactate concentration to arterial concentration), is considered indicative of objective evidence to support the emerging myocardial ischemia. Thus, monitoring of the myocardial lactate production and the emergence of chest pain and ischemic electrocardiographic changes during acetylcholine (ACh) provocation testing is of significant value for detecting the entity of MVS. Practically, 1 min after incremental doses of ACh (20, 50, and 100 &#956;g) are administered into the left coronary artery (LCA), paired samples of 1 mL of blood are collected from the LCA ostium and coronary sinus for measurement of lactate concentration by a calibrated automatic lactate analyzer. Then, the development of MVS could be confirmed by negative myocardial lactate extraction ratio despite the absence of angiographically demonstrable epicardial coronary spasm or before its occurrence throughout ACh provocation testing. In conclusion, assessment of myocardial lactate production is essential and valuable for the diagnosis of MVS.

Myocardial lactate production (coronary arterial-venous difference in serum lactate level) during coronary spasm provocation testing is considered as a highly sensitive marker that reflects acetylcholine-induced myocardial ischemia due to microvascular spasm. This article presents the procedures to assess myocardial lactate production for the diagnosis of coronary microvascular spasm.

Mesure de la production de lactate myocardique pour le diagnostic des spasmes microvasculaires coronaires

In about a quarter of patients with angina and non-obstructive coronary arteries, no epicardial spasm is noted on coronary arteriography during an angina ...

Basophil Activation Test for Allergy Diagnosis

The basophil activation test (BAT) is a complementary in vitro diagnostic test that can be used in addition to clinical history, skin test (ST), and specific IgE (sIgE) determination in the evaluation of IgE-mediated allergic reactions to food, insect venom, drugs, as well as some forms of chronic urticaria. However, the role of this technique in the diagnostic algorithms is highly variable and not well determined.
BAT is based on the determination of basophil response to allergen/drug cross-linking IgE activation through the measurement of activation markers (such as CD63, CD203c) by flow cytometry. This test can be a useful and complementary tool to avoid controlled challenge tests&#160;to confirm allergy diagnosis, especially in subjects experiencing severe life-threatening reactions. In general, the performance of BAT should be considered if i) the allergen/drug produces false positive results in ST; ii) there is no allergen/drug source to use for ST or sIgE determination; iii) there is discordance between patient history and ST or sIgE determination; iv) symptoms suggest that ST may result in systemic response; v) before considering a CCT to confirm the culprit allergen/drug. The main limitations of the test are related to non-optimal sensitivity, especially in drug allergy, the need to perform the test no longer than 24 h after sample extraction, and the lack of standardization between laboratories in terms of procedures, concentrations, and cell markers.

The basophil activation test is a complementary in vitro diagnostic test for the evaluation of IgE-mediated allergic reactions based on the detection of basophil activation in the presence of a specific stimulus through the measure of activation markers by flow cytometry.

Test d’activation basophile pour le diagnostic des allergies

The basophil activation test (BAT) is a complementary in vitro diagnostic test that can be used in addition to clinical history, skin test (ST), and ...