يؤيد هذا العمل في جزء من المعاهد الوطنية للصحة في إطار المنحة CA137499 R15 - 01 (اف ب) وصندوق بدء التشغيل من جامعة ولاية أوهايو (اف ب).

1. تشريح femurs الماوس وظنبوب والثقافة من خلايا نخاع العظام <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 2 التضحية الفئران خنقا 2 أكسيد الكربون وتشريح بعناية tibias وfemurs دون قطع نهايات العظام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنظيف العظام من الأنسجة التي ربطت باستخدام المناديل الورقية. يجب الحرص على عدم كسر العظام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعقيم العظام عن طريق الغمر في الإيثانول 70 ٪ لمدة 10 دقيقة في طبق بتري 35 مم. من هذه اللحظة ، والعمل داخل غطاء السلامة الأحيائية لتجنب التلوث من الثقافات الخلية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استعادة عظام من الايثانول والسماح لهم الهواء الجاف لمدة 5 دقائق في طبق بتري داخل مجلس الوزراء السلامة الأحيائية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع femurs إلى النصف ، والساق والتي طرفها أنحف. يبث في داخل العظم مع 1 مل من المتوسط ​​RPMI (بدون المصل ولكن مع المضادات الحيوية) باستخدام محقنة معقمة على طبق بتري معقمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم جمع نظام التعليق الخلية وغسلها 2X في المتوسط ​​RPMI بواسطة الطرد المركزي 10 دقيقة في أنبوب الطرد المركزي 15 مل في 1100 دورة في الدقيقة في جهاز للطرد المركزي المبردة (4 درجات مئوية) مع الدوار الدلو المتأرجح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد غسل الماضي ، resuspend الخلايا في 2 مل من تحلل ACK العازلة واحتضان لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة من أجل القضاء على خلايا الدم الحمراء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 13 مل من RPMI FBS مع 10 ٪ ، ويغسل resuspend 2X في هذه الوسيلة مع نفس الإعدادات كما هو موضح في 1.6. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عدد الخلايا ، والتكيف مع 2 × 10 5 خلية / مل مع FBS 10 ٪ RPMI وإضافة RM - GM - CSF (20 نانوغرام / مل تركيز النهائي) 5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 10 مل من هذا التعليق على الجودة ، ومعقمة الميكروبيولوجية ، 10 طبق بيتري سم ، والثقافة في حاضنة CO 2 (37 درجة مئوية ، 5 ٪ CO 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد ثلاثة أيام ، إضافة آخر 10 مل من 10 ٪ FBS RPMI مع 20 نانوغرام / لتر من rmGM - CSF إلى كل من لوحات معدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم استردادها بعد ثلاثة أيام من 10 مل تعليق خلية من كل طبق بيتري ، كما هو الحال في طرد 1.6 ، معلق في نفس الحجم من FBS 10 ٪ RPMI مع rmGM - CSF ، وعاد إلى صحن بتري. يتم استزراع خلايا ل 2 أيام إضافية في الحاضنة 2 CO. </li></ol> 2. جمع وتصنيف البلدان النامية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 8 أيام في الثقافة وتسترد الخلايا الملتصقة فضفاضة بغسل الصحون مع بيتري المتوسطة الطازجة. يجعل هذا البروتوكول في جميع أنحاء البلدان النامية 8 X10 2-4 في أيدينا. ويمكن تحليل الخلايا عن النمط الظاهري العاصمة التي التدفق الخلوي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم وصفت الخلايا التي تم جمعها مع Qtracker 655 خلية وصفها بدقة كيت باتباع إرشادات الشركة المصنعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حصلنا على نتائج ممتازة وسم الفئران نخاع العظام المستمدة من البلدان النامية مع التركيز على Qdots 10 نانومتر. لتحقيق هذا الهدف ، aliquots مكونات الخلية Qtracker كيت وصفها مختلطة ألف وباء في أحجام متساوية ، حضنت لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة ، والمخففة على الفور 1 / 100 في المتوسط ​​جديدة مع لمدة 30 ثانية. vortexing </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وصمة عار على 5 × 10 6 البلدان النامية ، ومزيج من كل 5 ميكرولتر مكونات عدة ألف وباء في أنبوب إيبندورف واحتضان لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. ثم ، إضافة 1 مل من احتضان RPMI FBS 10 ٪ ، ودوامة لمدة 30 ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 0.5 مل من تعليق خلية تحتوي على 5 6 X10 البلدان النامية ، واحتضان في 37 دقيقة لمدة 60 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم ، وغسل الخلايا في FBS 2X RPMI 10 ٪ (1100 دورة في الدقيقة). يمكن معلق الخلايا في RPMI للثقافة أخرى أو في برنامج تلفزيوني للحقن في فئران التجارب. </li></ol> 3. تقييم المسمى DC <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن تقييم وضع العلامات الخلية عن طريق المجهر الفلورسنت. لتحقيق ذلك ، إضافة قطرة من تعليق الخلية إلى شريحة المجهر ، وتغطي مع ساترة الزجاج ، وتقييمها مع المجهر الفلورسنت مع الأخذ بعين الاعتبار أن هذه الانبعاثات قد Qdots والإثارة أطياف 565nm 525nm و 405 على التوالي (الشكل 3 ) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عند هذه النقطة ، يمكن استخدام الخلايا المسمى لحقن الحيوانات ، أو يمكن أن يتسبب النضج التي تفرخ هذه الخلايا لمدة 48 ساعة (37 درجة مئوية ، 5 CO 2) في حضور LPS (100 نانوغرام / مل) ، وTNF (- 20 نانوغرام / مل). لا يتأثر وضع العلامات الفلورسنت التي نضوج العاصمة (الشكل 4). </li></ol> 4. ممثل النتائج : وصف طيه أننا كيفية تحضير الفئران نخاع العظام المستمدة من البلدان النامية ، وكيف لهم المسمى Qdots الفلورسنت. الشكل. 1 موجزا للإجراءات الحصول على الخلايا ، في حين شكل. 2 يصور الداخلي لتسمية لهم Qdots. كما هو مبين في الشكل. 3 ، وصفت تقريبا كافة الخلايا بواسطة هذا الإجراء ، ولا يتأثر هذا النضج بواسطة DC مع العوامل الالتهابية (الشكل 4). الشكل. 5 يدل على أن Qdot الملطخة البلدان النامية (Fig.5a) تتصرف مشابهة لخلايا غير ملطخة عندما تعامل مع كوكتيل التهابات. كلا الاستعدادات الخلية upregulate بالمثل التعبير عن جزيئات costimulatory (الشكل 5B) ، وإنتاج كميات مماثلة من IL - 6 (الشكل 5C) واكسيد النيتريك (الشكل 5D) عند نضوج المنبهات. هذا يتفق مع previالأوس البيانات المنشورة تشير إلى أن تلطيخ Qdot لا يؤثر على القدرة على العاصمة لتتحول الى خلايا ناضجة قادرة على انتزاع استجابات مناعية [6]. ويمكن عندئذ أن تستخدم هذه الخلايا لحقن حيوانات التجارب. كما هو مبين في الشكل. 6 ، 2 بعد أيام من الحقن في الوريد من البلدان النامية في الفئران المسمى ، كنا قادرين على كشف Qdot الملطخة الخلايا في الطحال. وهذا هو أيضا في اتفاق مع البيانات المنشورة السابقة تبين استخدام البلورات النانوية Qdot لتقييم هجرة العاصمة في الجسم الحي [6] من غير الغازية التصوير والتدفق الخلوي. <img src="/files/ftp_upload/2785/2785fig1.jpg" alt="الشكل 1"/> مخطط تدفق الرقم 1. توليد العاصمة من نخاع العظام. طيه أننا تصوير عملية الحصول على نخاع العظام المستمدة من العاصمة. يتم تشريح كلا tibias وfemurs ونظيفة من الأنسجة المحيطة. هي الحفاظ على العظام ونصائح ومسح المناطق الداخلية من العظام مع المتوسط. بعد القضاء على خلايا الدم الحمراء ، ويتم استزراع خلايا نخاع العظم لمدة 8 أيام في حضور GM - CSF لتمييزها في البلدان النامية. <img src="/files/ftp_upload/2785/2785fig2.jpg" alt="الشكل 2"/> مخطط تدفق الرقم 2. الإجراء التوسيم. aliquots متساوية من مكونات الخلية Qtracker كيت وصفها مختلطة ألف وباء في أنبوب إيبندورف. يتم جمع الخلايا الجذعية من 8 ايام الثقافات نخاع العظم مع جنرال موتورز - CSF ومختلطة مع الصبغة لوضع العلامات على 37C 60 دقيقة. ثم يتم غسل الخلايا في وسائل الاعلام للقضاء على جزيئات العلامات الزائدة. <img src="/files/ftp_upload/2785/2785fig3.jpg" alt="الشكل 3"/> الشكل 3. microphotography نيون من البلدان النامية على الفور بعد وضع العلامات. أودع قطرة من الخلايا المسمى على شريحة زجاجية وتغطيها ساترة. ثم ، تم تقييم العينات في مضان المجهر والصور تم الحصول عليها من خلال كاميرا رقمية 5.0 Micropublisher اللون اتفاقية مكافحة التصحر (Qimaging ، ساري ، قبل الميلاد كندا). <img src="/files/ftp_upload/2785/2785fig4.jpg" alt="الشكل 4"/> الشكل 4. microphotography نيون من البلدان النامية بعد نضوج 48 ساعة في المختبر. وكانت البلدان النامية مثقف المسمى لمدة 48 ساعة مع LPS (100 نانوغرام / مل) ، وTNF - α (20 نانوغرام / مل) على شرائح من الزجاج على حاضنة CO 2 (37 درجة مئوية ، 5 ٪ CO 2). ثم ، تم غسلها مع عينات PBS (5 دقائق ، 2X) ، ثابت مع الأسيتون (15 دقيقة و 4 درجات مئوية) وcounterstained مع دابي. وجرى تقييم الخلايا في المجهر الفلورسنت على النحو الوارد أعلاه. <img src="/files/ftp_upload/2785/2785fig5.jpg" alt="الشكل 5"/> الشكل 5. النشاط البيولوجي للبلدان النامية Qdot ناضجة الملون. وقد تم تحليل البلدان النامية المسمى نضجت في المختبر على النحو الوارد أعلاه عن طريق التدفق الخلوي (A) و (B) (A) Qdot الملطخة خلايا تعطي إشارة قوية في القناة (PercP) FL3. مظللة الرسم البياني : مراقبة غير ملوثين. (ب) كانت ملطخة بالإضافة إلى البلدان النامية Qdot الملطخة وغير ملوثين أجسام مضادة محددة ضد علامات النضج وCD86 CD40 ، والضوابط isotype. ثم تم تحليل الخلايا في عداد الكريات تدفق FACSort (بيكتون ديكنسون ، سان خوسيه ، كاليفورنيا). بالإضافة إلى ذلك ، تم تحديد IL - 6 (C) واكسيد النيتريك (NO) في البلدان النامية من supernatants Qdot الملطخة ناضجة والضوابط. وتم تحديد مستويات IL - 6 وأكسيد النيتريك من خلال تحليل وفحص ELISA Griess كما وصفناها سابقا 7 و 8. جميع البيانات أظهرت في هذا الرقم هو ممثل اثنين أو ثلاث تجارب مستقلة تظهر نتائج مماثلة. وتم تحليل البيانات بواسطة ANOVA باستخدام برنامج GraphPad. <img src="/files/ftp_upload/2785/2785fig6.jpg" alt="الشكل 6"/> الشكل 6. الكشف عن البلدان النامية المسمى في أنسجة تشريح. تم حقن في الوريد البلدان النامية ناضجة المسمى (1x10 6 خلايا) في الفئران C57BL / 6. (A) وبعد ذلك بيومين تم التضحية الفئران والتي تم جمعها الطحال ، المجمدة المفاجئة ، جزءا لا يتجزأ من أكتوبر ، و 8 أقسام ميكرومتر أعدت باستخدام ناظم البرد. ثم ، كانت ثابتة العينات مع الأسيتون (15 دقيقة و 4 درجات مئوية) وcounterstained مع دابي. وجرى تقييم الخلايا في المجهر الفلورسنت على النحو الوارد أعلاه الشكل 6A : التكبير 40X ، الشكل 6B : التكبير 100X ، الشكل. 6C ، التكبير 400X.

<ol>
	<li>Banchereau, J., Briere, F., Caux, C., Davoust, J., Lebecque, S., Liu, Y. J., Pulendran, B., Palucka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunobiology+of+dendritic+cells.">Immunobiology of dendritic cells.</a> Annu Rev Immunol. 18, 767-811 (2000).</li><li>Bonasio, R., von Andrian, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation,+migration+and+function+of+circulating+dendritic+cells.">Generation, migration and function of circulating dendritic cells.</a> Curr Opin Immunol. 18, 503-511 (2006).</li><li>Lanzavecchia, A., Sallusto, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+instructive+role+of+dendritic+cells+on+T+cell+responses:+lineages,+plasticity+and+kinetics.">The instructive role of dendritic cells on T cell responses: lineages, plasticity and kinetics.</a> Curr Opin Immunol. 13, 291-298 (2001).</li><li>Conejo-Garcia, J. R., Benencia, F., Courreges, M. C., Kang, E., Mohamed-Hadley, A., Buckanovich, R. J., Holtz, D. O., Jenkins, A., Na, H., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-infiltrating+dendritic+cell+precursors+recruited+by+a+beta-defensin+contribute+to+vasculogenesis+under+the+influence+of+Vegf-A.">Tumor-infiltrating dendritic cell precursors recruited by a beta-defensin contribute to vasculogenesis under the influence of Vegf-A.</a> Nat Med. 10, 950-958 (2004).</li><li>Lutz, M. B., Kukutsch, N., Ogilvie, A. L., Rossner, S., Koch, F., Romani, N., Schuler, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+advanced+culture+method+for+generating+large+quantities+of+highly+pure+dendritic+cells+from+mouse+bone+marrow.">An advanced culture method for generating large quantities of highly pure dendritic cells from mouse bone marrow.</a> J Immunol Methods. 223, 77-92 (1999).</li><li>Noh, Y. W., Lim, Y. T., Chung, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+imaging+of+dendritic+cell+migration+into+lymph+nodes+using+near-infrared+fluorescent+semiconductor+nanocrystals.">Noninvasive imaging of dendritic cell migration into lymph nodes using near-infrared fluorescent semiconductor nanocrystals.</a> Faseb J. 22, 3908-3918 (2008).</li><li>Benencia, F., Courreges, M. C., Conejo-Garcia, J. R., Mohamed-Hadley, A., Zhang, L., Buckanovich, R. J., Carroll, R., Fraser, N., Coukos, G., Franco, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HSV+oncolytic+therapy+upregulates+interferon-inducible+chemokines+and+recruits+immune+effector+cells+in+ovarian+cancer.">HSV oncolytic therapy upregulates interferon-inducible chemokines and recruits immune effector cells in ovarian cancer.</a> Mol Ther. 12, 789-802 (2005).</li><li>Gilboa, E., Vieweg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+immunotherapy+with+mRNA-transfected+dendritic+cells.">Cancer immunotherapy with mRNA-transfected dendritic cells.</a> Immunol Rev. 199, 251-263 (2004).</li><li>Grolleau-Julius, A., Abernathy, L., Harning, E., Yung, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+murine+dendritic+cell+antitumor+dysfunction+in+aging.">Mechanisms of murine dendritic cell antitumor dysfunction in aging.</a> Cancer Immunol Immunother. 58, 1935-1939 (2009).</li><li>Yrlid, U., Svensson, M., Johansson, C., Wick, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salmonella+infection+of+bone+marrow-derived+macrophages+and+dendritic+cells:+influence+on+antigen+presentation+and+initiating+an+immune+response.">Salmonella infection of bone marrow-derived macrophages and dendritic cells: influence on antigen presentation and initiating an immune response.</a> FEMS Immunol Med Microbiol. 27, 313-320 (2000).</li><li>Lutz, M. B., Schnare, M., Menges, M., Rossner, S., Rollinghoff, M., Schuler, G., Gessner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+functions+of+IL-4+receptor+types+I+and+II+for+dendritic+cell+maturation+and+IL-12+production+and+their+dependency+on+GM-CSF.">Differential functions of IL-4 receptor types I and II for dendritic cell maturation and IL-12 production and their dependency on GM-CSF.</a> J Immunol. 169, 3574-3580 (2002).</li><li>Benencia, F., Courreges, M. C., Coukos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+tumor+antigen+vaccination+using+dendritic+cells:+comparison+of+RNA+electroporation+and+pulsing+with+UV-irradiated+tumor+cells.">Whole tumor antigen vaccination using dendritic cells: comparison of RNA electroporation and pulsing with UV-irradiated tumor cells.</a> J Transl Med. 6, 21-21 (2008).</li><li>Probst, H. C., Tschannen, K., Odermatt, B., Schwendener, R., Zinkernagel, R. M., Van Den Broek, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+analysis+of+CD11c-DTR/GFP+mice+after+in+vivo+depletion+of+dendritic+cells.">Histological analysis of CD11c-DTR/GFP mice after in vivo depletion of dendritic cells.</a> Clin Exp Immunol. 141, 398-404 (2005).</li><li>Fainaru, O., Adini, A., Benny, O., Adini, I., Short, S., Bazinet, L., Nakai, K., Pravda, E., Hornstein, M. D., D'Amato, R. J., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+support+angiogenesis+and+promote+lesion+growth+in+a+murine+model+of+endometriosis.">Dendritic cells support angiogenesis and promote lesion growth in a murine model of endometriosis.</a> Faseb J. 22, 522-529 (2008).</li><li>Bobryshev, Y. V., Lord, R. S., Rainer, S., Jamal, O. S., Munro, V. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+dendritic+cells+and+atherosclerosis.">Vascular dendritic cells and atherosclerosis.</a> Pathol Res Pract. 192, 462-467 (1996).</li><li>Nakai, K., Fainaru, O., Bazinet, L., Pakneshan, P., Benny, O., Pravda, E., Folkman, J., D'Amato, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+augment+choroidal+neovascularization.">Dendritic cells augment choroidal neovascularization.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 49, 3666-3670 (2008).</li><li>Huarte, E., Cubillos-Ruiz, J. R., Nesbeth, Y. C., Scarlett, U. K., Martinez, D. G., Buckanovich, R. J., Benencia, F., Stan, R. V., Keler, T., Sarobe, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Depletion+of+dendritic+cells+delays+ovarian+cancer+progression+by+boosting+antitumor+immunity.">Depletion of dendritic cells delays ovarian cancer progression by boosting antitumor immunity.</a> Cancer Res. 68, 7684-7691 (2008).</li><li>Fernandez Pujol, B., Lucibello, F. C., Zuzarte, M., Lutjens, P., Muller, R., Havemann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+derived+from+peripheral+monocytes+express+endothelial+markers+and+in+the+presence+of+angiogenic+growth+factors+differentiate+into+endothelial-like+cells.">Dendritic cells derived from peripheral monocytes express endothelial markers and in the presence of angiogenic growth factors differentiate into endothelial-like cells.</a> Eur J Cell Biol. 80, 99-110 (2001).</li><li>Gottfried, E., Kreutz, M., Haffner, S., Holler, E., Iacobelli, M., Andreesen, R., Eissner, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+human+tumour-associated+dendritic+cells+into+endothelial-like+cells:+an+alternative+pathway+of+tumour+angiogenesis.">Differentiation of human tumour-associated dendritic cells into endothelial-like cells: an alternative pathway of tumour angiogenesis.</a> Scand J Immunol. 65, 329-335 (2007).</li><li>Bobryshev, Y. V., Lord, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+of+vascular+dendritic+cells+in+atherosclerotic+arteries+suggests+their+involvement+in+local+immune-inflammatory+reactions.">Mapping of vascular dendritic cells in atherosclerotic arteries suggests their involvement in local immune-inflammatory reactions.</a> Cardiovasc Res. 37, 799-810 (1998).</li><li>Bobryshev, Y. V., Lord, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-accumulation+of+dendritic+cells+and+natural+killer+T+cells+within+rupture-prone+regions+in+human+atherosclerotic+plaques.">Co-accumulation of dendritic cells and natural killer T cells within rupture-prone regions in human atherosclerotic plaques.</a> J Histochem Cytochem. 53, 781-785 (2005).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

وقد الفئران النخاعي) البلدان النامية تستخدم على نطاق واسع من أجل تحديد فعالية وتحسين العاصمة مقرا لقاحات ، والتحقيق العاصمة : تفاعلات الخلايا التائية أو تطوير العاصمة ، وتحديد دورها في الأمراض المختلفة 9-11. طيه نظهر كيفية توليد البلدان النامية من السلائف تعافى من الكوسا وعظم tibias femurs. نستعيد العظام دون قطع النصائح ، مما يسمح لنا لتعقيم لهم من قبل الانغمار في الايثانول 70 ٪ ، وبالتالي تقليل احتمال تعرضها للتلوث. للتمييز بين البلدان النامية من خلايا نخاع العظام التي نستخدمها فقط GM - CSF إلى 5 الموصوفة سابقا. على الرغم من بعض البروتوكولات أيضا استخدام IL - 4 ، وأفيد أن هذه خلوى ليس من الضروري عند التعامل مع مستويات عالية من GM - CSF 12. في الواقع ، لقد أثبتنا سابقا أن هذه البلدان النامية قادرة على حمل 13 الاستجابات المناعية. أيضا ، والرعاية التي يجب اتخاذها لاستعادة خلايا ملتصقة فقط فضفاضة من 8 ايام الثقافات من خلال غسل أطباق بتري مع المتوسط ​​منذ خلايا النمط الظاهري المرفقة تظهر أكثر مثل الوحيدات. هنا نعرض وسم البلدان النامية مع جزيئات Qdot الفلورسنت. هذه العلامات لديها بعض المزايا لاحترام أساليب أخرى. أولا ، تدمج بسهولة Qdots الجزيئات في الخلايا. الثاني ، إشارة الفلورسنت عالية جدا وليس تعديلها من قبل نضوج العاصمة. الثالث ، هو عدم فقدان مضان عندما يتم إصلاح الخلايا أو الأنسجة مع المذيبات مثل الأسيتون ، على عكس ما يحدث إذا تم استخدام البطاقات في البلدان النامية GFP 14 ، وإعطاء المزيد من المرونة في اختيار الوقت المناسب لتلوين البروتوكولات. أخيرا ، إشارة عالية الفلورسنت التي قدمتها هذه الجزيئات التصور يسمح للخلايا الأنسجة على الرغم من السيارات ومضان. 6 كما هو موضح سابقا ، لم Qdot تلطيخ لا يؤثر على القدرة نضوج هذه الخلايا. طيه نظهر أن Qdot الملطخة البلدان النامية تتصرف بطريقة مشابهة للبلدان النامية غير الملون ، upregulating costimulatory الجزيئات ، وإنتاج IL - 6 وأكسيد النتريك في الاستجابة للمحفزات للالتهابات. على الرغم من أن البلدان النامية هي خلايا متخصصة في إحداث استجابة مناعية ، وقد تبين لهم بالمشاركة في الحالات المرضية مثل السرطان وتصلب الشرايين 4 ، 15 ، 16. وقد زعموا أيضا المشاركة في عملية عائية 17 ، 18 ، كما اقترح حتى المشاركة هيكليا في البلدان النامية من السفن الجديدة 19 و 20. وهكذا ، والطرق التي تسمح العاصمة تتبع في الجسم الحي ، وتحديد موقعها الجغرافي التوطين في الأنسجة المختلفة 4 ، 21 ، 22 هي قيمة للغاية.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th><th> تعليقات (اختياري) </th></tr><tr><td> C57BL / 6 الفئران </td><td> جاكسون المختبرات </td><td></td><td> الإناث ، 6-8 أسابيع من العمر </td></tr><tr><td> RPMI </td><td> Invitrogen </td><td> 11875-119 </td><td></td></tr><tr><td> مصل بقري جنيني ، تأهل </td><td> Invitrogen </td><td> 10437-028 </td><td></td></tr><tr><td> مضاد فطري للمضادات الحيوية </td><td> Invitrogen </td><td> 15240-096 </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td> Invitrogen </td><td> 10010-049 </td><td></td></tr><tr><td> ACK Lysing العازلة </td><td> Lonza Walkersville ، المؤتمر الوطني العراقي </td><td> 10 - 548E </td><td></td></tr><tr><td> الفئران المعدلة وراثيا المؤتلف - CSF </td><td> PeproTech المؤتمر الوطني العراقي </td><td> 315-03 </td><td></td></tr><tr><td> Qtracker 655 خلية وصفها كيت </td><td> Invitrogen </td><td> Q25021MP </td><td></td></tr><tr><td> Lipopolysaccharide </td><td> Invivogen </td><td> tlrl - eblps </td><td></td></tr><tr><td> المؤتلف الفئران ألفا TNF </td><td> Peprotech </td><td> 315 01A </td><td></td></tr><tr><td> CD86 الأجسام المضادة </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 553691 </td><td></td></tr><tr><td> CD40 الأجسام المضادة </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 553791 </td><td></td></tr><tr><td> Griess نظام كاشف </td><td> Promega </td><td> G2930 </td><td></td></tr><tr><td> IL - 6 التقاط الأجسام المضادة </td><td> eBioscience </td><td> 13-7061-81 </td><td></td></tr><tr><td> IL - 6 الكشف عن الأجسام المضادة </td><td> eBioscience </td><td> 13-7062-81 </td><td></td></tr></tbody></table>

generation and labeling of murine bone marrow-derived dendritic cells with qdot nanocrystals for tracking studies

الخلايا الجذعية (DCS) هي خلايا المستضد المهنية تقديم (ناقلة جنود مصفحة) وجدت في الأنسجة الطرفية والأجهزة المناعية مثل الغدة الصعترية ، ونخاع العظم والطحال والغدد الليمفاوية وبقع باير 1-3. البلدان النامية الموجودة في عينة الأنسجة الطرفية الكائن الحي عن وجود مستضدات ، وهو ما يستغرق والعملية وحاضرا في سطحها في سياق جزيئات التوافق النسيجي الرئيسي (MHC). ثم ، مستضد تحميل البلدان النامية يهاجرون إلى الأجهزة المناعية حيث تقديم المستضد لمعالجة الخلايا اللمفية تي مطلقة استجابات مناعية معينة. طريقة واحدة لتقييم قدرات البلدان النامية من الهجرة هو التسمية لهم الأصباغ الفلورية 4. طيه أننا شرح استخدام البلورات النانوية نيون Qdot لتسمية الفئران نخاع العظام المستمدة من العاصمة. وميزة هذا الوسم هو أن تمتلك Qdot البلورات النانوية مضان مستقرة وطويلة الأمد التي تجعلها مثالية للكشف عن الخلايا في الأنسجة المسمى استردادها. لإنجاز هذا ، سيتم استرداد الخلايا الأولى من الكوسا العظام الفئران والمثقفين لمدة 8 أيام في وجود عامل بلعم - ​​مستعمرة محببة تحفيز من أجل حمل العاصمة التمايز. وسوف تكون هذه الخلايا المسماة ثم مع Qdots الفلورسنت التي حضانة قصيرة في المختبر. ويمكن تصور الخلايا الملون مع المجهر الفلورسنت. ويمكن حقن الخلايا في حيوانات التجارب عند هذه النقطة أو يمكن أن تصبح خلايا ناضجة عليها في المختبر مع المثيرات حضانة للالتهابات. في أيدينا ، ولم يتم تحديد DC نضوج فقدان الإشارة الفلورسنت ولا تلطيخ Qdot تؤثر على الخصائص البيولوجية للبلدان النامية. عند الحقن ، ويمكن تحديد هذه الخلايا في أجهزة المناعة بواسطة المجهر الفلورسنت التالية تشريح نموذجي وإجراءات التثبيت.

Watch this Scientific Journal Video about Generation and Labeling of Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells with Qdot Nanocrystals for Tracking Studies at JoVE.com

Generation and Labeling of Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells with Qdot Nanocrystals for Tracking Studies

التغصنية المستضدات امتصاص الخلايا وترحيل نحو أجهزة المناعة لتقديم المستضدات المصنعة للخلايا T. Qdot النانوية الوسم يوفر إشارة طويلة الامد ومستقرة الفلورسنت. وهذا يسمح لتعقب الخلايا الجذعية إلى أجهزة مختلفة عن طريق المجهر الفلورسنت.

جيل ووسمها الفئران خلايا نخاع العظام المستمدة من البلورات النانوية مع شجيري Qdot تتبع للدراسات

Dendritic cells (DCs) are professional antigen presenting cells (APCs) found in peripheral tissues and in immunological organs such as thymus, bone ...

generation-labeling-murine-bone-marrow-derived-dendritic-cells-with

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

24.7K Views.  Ohio University. التغصنية المستضدات امتصاص الخلايا وترحيل نحو أجهزة المناعة لتقديم المستضدات المصنعة للخلايا T. Qdot النانوية الوسم يوفر إشارة طويلة الامد ومستقرة الفلورسنت. وهذا يسمح لتعقب الخلايا الجذعية إلى أجهزة مختلفة عن طريق المجهر الفلورسنت.

Video: Generation and Labeling of Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells with Qdot Nanocrystals for Tracking Studies

Investigation of Macrophage Polarization Using Bone Marrow Derived Macrophages

The article describes a readily easy adaptive in vitro model to investigate macrophage polarization. In the presence of GM-CSF/M-CSF, hematopoietic stem/progenitor cells from the bone marrow are directed into monocytic differentiation, followed by M1 or M2 stimulation. The activation status can be tracked by changes in cell surface antigens, gene expression and cell signaling pathways.

The article describes a readily easy adaptive in vitro model to investigate macrophage polarization. In the presence of GM-CSF/M-CSF, hematopoietic stem/progenitor cells from the bone marrow are directed into monocytic differentiation, followed by M1 or M2 stimulation. The activation status can be tracked by changes in cell surface antigens, gene expression and cell signaling pathways.

التحقيق في الاستقطاب البلاعم عن طريق نخاع العظم الضامة المشتقة

The article describes a readily easy adaptive in vitro model to investigate macrophage polarization. In the presence of GM-CSF/M-CSF, hematopoietic ...

Bone Marrow-derived Macrophage Production

Macrophages are critical components of the innate and adaptive immune responses, and they are the first line of defense against foreign invaders because of their powerful microbicidal activities. Macrophages are widely distributed throughout the body and are present in the lymphoid organs, liver, lungs, gastrointestinal tract, central nervous system, bone, and skin. Because of their repartition, they participate in a wide range of physiological and pathological processes. Macrophages are highly versatile cells that are able to recognize microenvironmental alterations and to maintain tissue homeostasis. Numerous pathogens have evolved mechanisms to use macrophages as Trojan horses to survive, replicate in, and infect both humans and animals and to propagate throughout the body. The recent explosion of interest in evolutionary, genetic, and biochemical aspects of host-pathogen interactions has renewed scientific attention regarding macrophages. Here, we describe a procedure to isolate and cultivate macrophages from murine bone marrow that will provide large numbers of macrophages for studying host-pathogen interactions as well as other processes.

Macrophages have long been recognized as a critical component of the innate and adaptive immune responses. The recent explosion of knowledge pertaining to evolutionary, genetic, and biochemical aspects of the interaction between macrophages and microbes has renewed scientific attention to macrophages. This article describes a method to differentiate macrophages from mouse bone marrow.

نخاع العظام المستمدة من بلعم الإنتاج

Macrophages are critical components of the innate and adaptive immune responses, and they are the first line of defense against foreign invaders because ...

Isolation and Intravenous Injection of Murine Bone Marrow Derived Monocytes

As a subtype of leukocytes and progenitors of macrophages, monocytes are involved in many important processes of organisms and are often the subject of various fields in biomedical science. The method described below is a simple and effective way to isolate murine monocytes from heterogeneous bone marrow.
Bone marrow from the femur and tibia of Balb/c mice is harvested by flushing with phosphate buffered saline (PBS). Cell suspension is supplemented with macrophage-colony stimulating factor (M-CSF) and cultured on ultra-low attachment surfaces to avoid adhesion-triggered differentiation of monocytes. The properties and differentiation of monocytes are characterized at various intervals. Fluorescence activated cell sorting (FACS), with markers like CD11b, CD115, and F4/80, is used for phenotyping. At the end of cultivation, the suspension consists of 45%&#177; 12% monocytes. By removing adhesive macrophages, the purity can be raised up to 86%&#177; 6%. After the isolation, monocytes can be utilized in various ways, and one of the most effective and common methods for in vivo delivery is intravenous tail vein injection. 
This technique of isolation and application is important for mouse model studies, especially in the fields of inflammation or immunology. Monocytes can also be used therapeutically in mouse disease models.

Here we present a protocol that generates large amounts of murine monocytes from heterogeneous bone marrow for translational applications. In comparison to others, this new method helps reduce the number of sacrificed animals and lowers costs by avoiding expensive methods such as high gradient magnetic cell separation (MACS).

عزل وحقن في الوريد من الفئران نخاع العظام المستمدة حيدات

As a subtype of leukocytes and progenitors of macrophages, monocytes are involved in many important processes of organisms and are often the subject of ...

Generation of Immature, Mature and Tolerogenic Dendritic Cells with Differing Metabolic Phenotypes

Immune response results from a complex interplay between the antigen non-specific innate immune system and the antigen specific adaptive immune system. The immune system is a constant balance in maintaining tolerance to self-molecules and reacting rapidly to pathogens. Dendritic cells (DCs) are powerful professional antigen presenting cells that link the innate immune system to the adaptive immune system and balance the adaptive response between self and non-self. Depending on the maturation signals, immature dendritic cells can be selectively stimulated to differentiate into immunogenic or tolerogenic DCs. Immunogenic dendritic cells provide proliferation signals to antigen-specific T cells for clonal expansion; while tolerogenic dendritic cells regulate tolerance by antigen-specific T-cell deletion or clonal expansion of regulatory T-cells. Due to this unique property, dendritic cells are highly sought after as therapeutic agents for cancer and autoimmune diseases. Dendritic cells can be loaded with specific antigens in vitro and injected into the human body to mount a specific immune response both immunogenic and tolerogenic. This work presents a means to generate in vitro from monocytes, immature monocyte derived dendritic cells (moDCs), tolerogenic and mature moDCs that differ in surface marker expression, function and metabolic phenotypes.

Immature dendritic cells can be selectively differentiated into tolerogenic or mature dendritic cells to regulate the balance between immunity and tolerance. This work presents a means to generate from immature monocyte derived dendritic cells (moDCs), in vitro tolerogenic and mature moDCs that differ in metabolic phenotypes.

جيل غير ناضج، ناضج ومولد للتحمل الجذعية خلايا مع اختلاف الاستقلابية الظواهر

Immune response results from a complex interplay between the antigen non-specific innate immune system and the antigen specific adaptive immune system. ...

Generation and Identification of GM-CSF Derived Alveolar-like Macrophages and Dendritic Cells From Mouse Bone Marrow

Macrophages and dendritic cells (DCs) are innate immune cells found in tissues and lymphoid organs that play a key role in the defense against pathogens. However, they are difficult to isolate in sufficient numbers to study them in detail, therefore, in vitro models have been developed. In vitro cultures of bone marrow-derived macrophages and dendritic cells are well-established and valuable methods for immunological studies. Here, a method for culturing and identifying both DCs and macrophages from a single culture of primary mouse bone marrow cells using the cytokine granulocyte macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) is described. This protocol is based on the established procedure first developed by Lutz et al. in 1999 for bone marrow-derived DCs. The culture is heterogeneous, and MHCII and fluoresceinated hyaluronan (FL-HA) are used to distinguish macrophages from immature and mature DCs. These GM-CSF derived macrophages provide a convenient source of in vitro derived macrophages that closely resemble alveolar macrophages in both phenotype and function.

Bone marrow cells cultured with granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) generate a heterogeneous culture containing macrophages and dendritic cells (DCs). This method highlights using MHCII and hyaluronan (HA) binding to differentiate macrophages from the DCs in the GM-CSF culture. Macrophages in this culture have many similarities to alveolar macrophages.

جيل وتحديد GM-CSF المشتقة مثل السنخية الضامة والخلايا الجذعية من الفأر نخاع العظم

Macrophages and dendritic cells (DCs) are innate immune cells found in tissues and lymphoid organs that play a key role in the defense against pathogens. ...

Generation of Human Monocyte-derived Dendritic Cells from Whole Blood

Dendritic cells (DCs) recognize foreign structures of different pathogens, such as viruses, bacteria, and fungi, via a variety of pattern recognition receptors (PRRs) expressed on their cell surface and thereby activate and regulate immunity. 
The major function of DCs is the induction of adaptive immunity in the lymph nodes by presenting antigens via MHC I and MHC II molecules to na&#239;ve T lymphocytes. Therefore, DCs have to migrate from the periphery to the lymph nodes after the recognition of pathogens at the sites of infection. For in vitro experiments or DC vaccination strategies, monocyte-derived DCs are routinely used. These cells show similarities in physiology, morphology, and function to conventional myeloid dendritic cells. They are generated by interleukin 4 (IL-4) and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) stimulation of monocytes isolated from healthy donors. Here, we demonstrate how monocytes are isolated and stimulated from anti-coagulated human blood after peripheral blood mononuclear cell (PBMC) enrichment by density gradient centrifugation. Human monocytes are differentiated into immature DCs and are ready for experimental procedures in a non-clinical setting after 5 days of incubation.

Here, we demonstrate how monocytes are isolated by magnetic bead separation from peripheral blood mononuclear cells after density gradient centrifugation of human anti-coagulated blood. Following incubation for 5 days, human monocytes are differentiated into immature dendritic cells and are ready for experimental procedures in a non-clinical setting.

جيل من الوحيدات المستمدة الخلايا الجذعية البشرية من الدم الكامل

Dendritic cells (DCs) recognize foreign structures of different pathogens, such as viruses, bacteria, and fungi, via a variety of pattern recognition ...

Generation of Large Numbers of Myeloid Progenitors and Dendritic Cell Precursors from Murine Bone Marrow Using a Novel Cell Sorting Strategy

Cultures of monocyte-derived dendritic cells (moDC) generated from mouse bone marrow using Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor (GM-CSF) have recently been recognized to be more heterogeneous than previously appreciated. These cultures routinely contain moDC as well monocyte-derived macrophages (moMac), and even some less developed cells such as monocytes. The goal of this protocol is to provide a consistent method for identification and separation of the many cell types present in these cultures as they develop, so that their specific functions may be further investigated. The sorting strategy presented here separates cells first into four populations based on expression of Ly6C and CD115, both of which are expressed transiently by cells as they develop in GM-CSF-driven culture. These four populations include Common myeloid progenitors or CMP (Ly6C-, CD115-), granulocyte/macrophage progenitors or GMP (Ly6C+, CD115-), monocytes (Ly6C+, CD115+), and monocyte-derived macrophages or moMac (Ly6C-, CD115+). CD11c is also added to the sorting strategy to distinguish two populations within the Ly6C-, CD115- population: CMP (CD11c-) and moDC (CD11c+). Finally, two populations may be further distinguished within the Ly6C-, CD115+ population based on the level of MHC class II expression. MoMacs express lower levels of MHC class II, while a monocyte-derived DC precursor (moDP) expresses higher MHC class II. This method allows for the reliable isolation of several developmentally distinct populations in numbers sufficient for a variety of functional and developmental analyses. We highlight one such functional readout, the differential responses of these cell types to stimulation with Pathogen-Associated Molecular Patterns (PAMPs).

Here we provide a method for identifying and isolating large numbers of GM-CSF driven myeloid cells using high speed cell sorting. Five distinct populations (Common myeloid progenitors, granulocyte/macrophage progenitors, monocytes, monocyte-derived macrophages, and monocyte-derived DCs) can be identified based on Ly6C and CD115 expression.

توليد عدد كبير من فروعه النقوي وسلائف الخلايا الجذعية من نخاع العظام مورين باستخدام خلية رواية فرز استراتيجية

Cultures of monocyte-derived dendritic cells (moDC) generated from mouse bone marrow using Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor (GM-CSF) have ...

Detection of Inflammasome Activation and Pyroptotic Cell Death in Murine Bone Marrow-derived Macrophages

Inflammasomes are innate immune signaling platforms that are required for the successful control of many pathogenic organisms, but also promote inflammatory and autoinflammatory diseases. Inflammasomes are activated by cytosolic pattern recognition receptors, including members of the NOD-like receptor (NLR) family. These receptors oligomerize upon the detection of microbial or damage-associated stimuli. Subsequent recruitment of the adaptor protein ASC forms a microscopically visible inflammasome complex, which activates caspase-1 through proximity-induced auto-activation. Following the activation, caspase-1 cleaves pro-IL-1&#946; and pro-IL-18, leading to the activation and secretion of these pro-inflammatory cytokines. Caspase-1 also mediates the inflammatory form of cell death termed pyroptosis, which features the loss of membrane integrity and cell lysis. Caspase-1 cleaves gasdermin D, releasing the N-terminal fragment which forms plasma membrane pores, leading to osmotic lysis.
In vitro, the activation of caspase-1 can be determined by labeling bone marrow-derived macrophages with the caspase-1 activity probe FAM-YVAD-FMK and by labeling the cells with antibodies against the adaptor protein ASC. This technique allows the identification of inflammasome formation and caspase-1 activation in individual cells using fluorescence microscopy. Pyroptotic cell death can be detected by measuring the release of cytosolic lactate dehydrogenase into the medium. This procedure is simple, cost effective and performed in a 96-well plate format, allowing adaptation for screening. In this manuscript, we show that activation of the NLRP3 inflammasome by nigericin leads to the co-localization of the adaptor protein ASC and active caspase-1, leading to pyroptosis.

We describe the detection of NLRP3 inflammasome activation on cellular basis using fluorescence microscopy and staining for active caspase-1 and the adaptor, ASC. A lactate dehydrogenase release assay is presented to detect pyroptotic lysis on a population basis. These techniques can be adapted to study many aspects of inflammasome biology.

الكشف عن التنشيط إينفلاماسومي وموت الخلايا بيروبتوتيك في مورين الضامة المشتقة من نخاع العظام

Inflammasomes are innate immune signaling platforms that are required for the successful control of many pathogenic organisms, but also promote ...

An In Vivo Mouse Model to Measure Na&#239;ve CD4 T Cell Activation, Proliferation and Th1 Differentiation Induced by Bone Marrow-derived Dendritic Cells

Quantification of na&#239;ve CD4 T cell activation, proliferation, and differentiation to T helper 1 (Th1) cells is a useful way to assess the role played by T cells in an immune response. This protocol describes the in vitro differentiation of bone marrow (BM) progenitors to obtain granulocyte macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) derived-dendritic cells (DCs). The protocol also describes the adoptive transfer of ovalbumin peptide (OVAp)-loaded GM-CSF-derived DCs and na&#239;ve CD4 T cells from OTII transgenic mice in order to analyze the in vivo activation, proliferation, and Th1 differentiation of the transferred CD4 T cells. This protocol circumvents the limitation of purely in vivo methods imposed by the inability to specifically manipulate or select the studied cell population. Moreover, this protocol allows studies in an in vivo environment, thus avoiding alterations to functional factors that may occur in vitro and including the influence of cell types and other factors only found in intact organs. The protocol is a useful tool for generating changes in DCs and T cells that modify adaptive immune responses, potentially providing important results to understand the origin or development of numerous immune associated diseases.

An &lt;em&gt;In Vivo&lt;/em&gt; Mouse Model to Measure Na&amp;#239;ve CD4 T Cell Activation, Proliferation and Th1 Differentiation Induced by Bone Marrow-derived Dendritic Cells

Here, we present a protocol for the in vivo determination of na&#239;ve CD4 T cell (T cell) activation, proliferation, and Th1 differentiation induced by GM-CSF bone marrow (BM)-derived dendritic cells (DCs). In addition, this protocol describes BM and T-cell isolation, DC generation, and DC and T-cell adoptive transfer.

نموذج ماوس في فيفو إلى تدبير السذاجة CD4 تي خلية التنشيط وانتشارها والتمايز Th1 الناجمة عن الخلايا الجذعية المشتقة من نخاع العظام

Quantification of na&#239;ve CD4 T cell activation, proliferation, and differentiation to T helper 1 (Th1) cells is a useful way to assess the role played ...

Economical and Efficient Protocol for Isolating and Culturing Bone Marrow-derived Dendritic Cells from Mice

The demand for dendritic cells (DCs) is gradually increasing as immunology research advances. However, DCs are rare in all tissues. The traditional method for isolating DCs primarily involves inducing bone marrow (BM) differentiation into DCs by injecting large doses (&#62;10 ng/mL) of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor/interleukin-4 (GM-CSF/IL-4), making the procedure complex and expensive. In this protocol, using all BM cells cultured in 10 ng/mL GM-CSF/IL-4 medium, after 3-4 half-culture exchanges, up to 2.7 x 107 CD11c+ cells&#160;(DCs) per mouse (two femurs) were harvested with a purity of 80%-95%. After 10 days in culture, the expression of CD11c, CD80, and MHC II increased, whereas the number of cells decreased. The number of cells peaked after 7 days of culture. Moreover, this method only took 10 min to harvest all bone marrow cells, and a high number of DCs were obtained after 1 week of culture.

Here, we present an economical and efficient method to isolate and generate high-purity bone marrow-derived dendritic cells from mice after 7 days of culture with 10 ng/mL GM-CSF/IL-4.

بروتوكول اقتصادي وفعال لعزل وزراعة الخلايا الشجيرية المشتقة من نخاع العظم من الفئران

The demand for dendritic cells (DCs) is gradually increasing as immunology research advances. However, DCs are rare in all tissues. The traditional method ...