עבודה זו נתמך בחלקו על ידי NIH תחת גרנט CA137499 R15-01 (FB) ו קרן הזנק באוניברסיטת אוהיו (FB).

1. Dissection עצמות הירך העכבר tibiae והתרבות של תאים במח העצם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקורבן 2 עכברים בחנק CO 2 ובזהירות לנתח tibias ואת עצמות הירך ללא חיתוך קצות העצם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקו את העצמות מכל הרקמות המצורף על ידי שימוש בנייר טישו. היזהר שלא לשבור את העצמות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר את העצמות על ידי טבילה באתנול 70% עבור 10 דקות בצלחת פטרי 35 מ&quot;מ. מרגע זה, לעבוד בתוך ברדס biosafety כדי למנוע זיהום של תרביות תאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שחזר את העצמות מן אתנול ולתת להם אוויר יבש 5 דקות בצלחת פטרי בתוך ארון biosafety. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את עצמות הירך לשניים, ואת עצם השוק על ידי קצה הדק שלה. להשרות את החלק הפנימי של העצם עם 1 מ&quot;ל של מדיום RPMI (ללא בסרום אך עם אנטיביוטיקה) באמצעות מזרק סטרילי על צלחת פטרי סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ההשעיה התא נאספים ורחץ 2X במדיום RPMI ידי צנטריפוגה 10 דקות ב צינור 15 צנטריפוגות מ&quot;ל ב 1100 סל&quot;ד בצנטריפוגה קירור (4 ° C) עם הרוטור דלי מתנדנד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר לשטוף האחרון, resuspend התאים מ&quot;ל 2 של חיץ תמוגה ACK ו דגירה של 5 דקות בטמפרטורת החדר כדי לחסל כדוריות דם אדומות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 13 מ&quot;ל של RPMI עם 10% FBS, resuspend ולשטוף 2X במדיום הזה עם אותן הגדרות כפי שמתואר 1.6. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת תאים, להסתגל 2 x 10 5 תאים / מ&quot;ל עם RPMI 10% FBS, ולהוסיף rm-GM-CSF (20 ng / ml הריכוז הסופי) 5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 10 מ&quot;ל של השעיה זו איכות, סטרילי מיקרוביולוגית, צלחת פטרי 10 ס&quot;מ, והתרבות 2 CO אינקובטור (37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שלושה ימים לאחר מכן, להוסיף עוד 10 מ&quot;ל של RPMI 10% FBS עם 20 ng / l של rmGM-CSF לכל אחד צלחות מוכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שלושה ימים לאחר מכן 10 מ&quot;ל של השעיה סלולריים הם התאושש מנה פטרי, centrifuged כמו 1.6, resuspended בהיקף זהה של 10% RPMI FBS עם rmGM-CSF וחזר צלחת פטרי. בתרבית תאים הם עבור 2 ימים נוספים של CO 2 באינקובטור. </li></ol> 2. אוסף וסימון של DCs <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 8 ימים בתרבית תאים חסיד רופף הם התאוששו על ידי שטיפת צלחות פטרי עם מדיום חדש. פרוטוקול זה הופך סביב 2-4 x10 8 DCs בידינו. תאים ניתן לנתח עבור פנוטיפ DC ידי cytometry הזרימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים שנאספו מסומנים אז עם קיט 655 Qtracker תיוג Cell בהחלט הבאים הוראות היצרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לנו תוצאות מצוינות תיוג מח עצם הנגזרות Murine DCs עם Qdots בריכוז 10 ננומטר. כדי להשיג זאת, aliquots של תא Qtracker רכיבים תיוג Kit A ו-B מעורבים בכמויות שוות, מודגרות במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר, וכן בדילול מלא מיד 1 / 100 בינוני טרי עם vortexing עבור 30 s. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להכתים 5 x 10 6 DCs, לערבב 5 μl של כל הרכיבים בערכה A ו-B בצינור Eppendorf ו דגירה של 5 דקות על טמפ החדר. לאחר מכן, הוסף 1 מ&quot;ל של דגירה RPMI FBS 10%, ו מערבולת לשנייה 30. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 0.5 מ&quot;ל של השעיה התא המכיל 5 6 DCs x10 ו לדגור על 37 מעלות צלזיוס למשך 60 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן, לשטוף תאים 2X ב RPMI 10% FBS (1,100 סל&quot;ד). תאים יכולים להיות resuspended ב RPMI לתרבות נוספת או PBS להזרקה בעכברים ניסיוני. </li></ol> 3. הערכת DC שכותרתו <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תיוג Cell ניתן להעריך באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי. כדי להשיג זאת, ירידה של השעיה תא מתווסף המיקרוסקופ שקופית, מכוסה coverslip זכוכית, ומוערכת עם מיקרוסקופ פלואורסצנטי לקחת בחשבון כי Qdots אלה פליטת ספקטרום עירור של 565nm-525nm ו - 405 בהתאמה (איור 3 ) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב זה, התאים שכותרתו ניתן להזריק בעלי חיים, או התבגרות יכול להיגרם על ידי דוגרים תאים אלה במשך 48 שעות (37 מעלות צלזיוס, 5 CO 2) בנוכחות LPS (100 ng / ml) ו-TNF ( 20 ng / ml). תיוג פלורסנט אינו מושפע התבגרות DC (איור 4). </li></ol> 4. נציג תוצאות: בזאת אנו תיאר כיצד להכין מח עצם הנגזרות Murine DCs ואיך שכותרתו אותם עם Qdots ניאון. איור. 1 מסכמת את ההליך כדי לקבל את התא, בעוד איור. 2 מתאר את הליך לתייג אותם עם Qdots. כפי שמוצג באיור. 3, כמעט כל התאים מסומנים על ידי הליך זה, והדבר אינו מושפע התבגרות DC עם גורמים דלקתיים (איור 4). איור. 5 מראה כי Qdot מוכתם DCs (Fig.5a) להתנהג בדומה הלא מוכתם תאים כאשר טופלו עם קוקטייל דלקתית. שתי ההכנות תא דומה upregulate ביטוי של מולקולות costimulatory (איור 5 ב); לייצר כמויות דומות של IL-6 (איור 5c) ו תחמוצת החנקן (איור 5d) על גירויים התבגרות. זה מסכים עם previהנתונים שפורסמו המפוקפקת המציין כי מכתים Qdot אינו משפיע על היכולת של DC להפוך תאים בוגרים מסוגלים לעורר תגובות חיסוניות [6]. תאים אלה לאחר מכן ניתן להשתמש להזרקת חיות הניסוי. כפי שמוצג באיור. 6, 2 ימים לאחר הזרקה תוך ורידית של DCs שכותרתו לעכברים, הצלחנו לזהות Qdot מוכתמת תאים בטחול. זהו גם הסכם עם הנתונים שפורסמו הקודם מראה את השימוש של nanocrystals Qdot להעריך ההגירה של DC in vivo [6] על ידי הדמיה לא פולשנית ו cytometry הזרימה. <img src="/files/ftp_upload/2785/2785fig1.jpg" alt="איור 1"/> 1. תרשים זרימה תרשים של הדור DC ממח העצם. בזאת אנו מתארים את תהליך השגת מוח העצם הנגזרות DC. שני tibias ואת עצמות הירך הם גזור ונקי מן הרקמה הסובבת. טיפים העצם נשמרים הפנימי של העצמות הן סמוקות בינוני. לאחר ביטול כדוריות דם אדומות, תאים במח העצם הם מתורבתים במשך 8 ימים בנוכחות GM-CSF כדי לבדל אותם DCs. <img src="/files/ftp_upload/2785/2785fig2.jpg" alt="איור 2"/> 2. איור תרשים זרימה של תהליך התיוג. Aliquots שוויון של תא Qtracker רכיבים תיוג Kit A ו-B מעורבבים בצינור Eppendorf. התאים הדנדריטים הם שנאספו 8 יום מח עצם תרבויות עם GM-CSF ו מעורבב עם צבע את התוויות עבור 60 דקות ב 37C. ואז התאים נשטפים בתקשורת לחסל חלקיקים תיוג עודף. <img src="/files/ftp_upload/2785/2785fig3.jpg" alt="איור 3"/> איור 3. Microphotography פלורסנט של DCs מיד לאחר תיוג. ירידה של תאים שכותרתו הופקד בשקופית זכוכית מכוסה על ידי coverslip. ואז, דגימות הוערכו ב מיקרוסקופ פלואורסצנטי ותמונות נרכשו באמצעות מצלמה דיגיטלית 5.0 Micropublisher CCD צבע (Qimaging, Surrey, BC קנדה). <img src="/files/ftp_upload/2785/2785fig4.jpg" alt="איור 4"/> איור 4. Microphotography פלורסנט של DCs לאחר ההבשלה h 48 במבחנה. DCs תווית היו בתרבית במשך 48 שעות עם LPS (100 ng / ml) ו - TNF-α (20 ng / ml) בשקופיות זכוכית על 2 CO אינקובטור (37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2). ואז, דגימות נשטפו עם PBS (5 דקות, 2X), קבוע עם אצטון (15 דקות, 4 ° C) counterstained עם DAPI. תאים הוערכו ב מיקרוסקופ פלואורסצנטי לעיל. <img src="/files/ftp_upload/2785/2785fig5.jpg" alt="איור 5"/> איור 5. פעילות ביולוגית של Qdot DCs בוגרת מוכתם. DCs תווית התבגר במבחנה לעיל נותחו על ידי cytometry זרימה (א) ו - (ב). (א) Qdot מוכתמת תאים לתת איתות חזק בערוץ FL3 (PercP). מוצלל היסטוגרמה: שליטה בלא כתם. (ב) DCs Qdot מוכתמת בלא כתם היו מוכתמים בנוסף עם נוגדנים ספציפיים כנגד סמנים התבגרות CD86 ו CD40, בקרות אלוטיפ. תאים נותחו אז cytometer זרימה FACSort (בקטון דיקינסון, בסן חוזה, קליפורניה). בנוסף, IL-6 (ג) ו - תחמוצת החנקן (NO) נקבעו supernatants של Qdot מוכתם DCs בוגרת שולטת. רמות IL-6 ו - תחמוצת החנקן נקבעו באמצעות ניתוח ELISA ו assay Griess כפי שתיארנו בעבר 7, 8. כל הנתונים הראו בנתון זה הוא נציג של שניים או שלושה ניסויים בלתי תלויים מראים תוצאות דומות. הנתונים נותחו על ידי ANOVA באמצעות תוכנת GraphPad. <img src="/files/ftp_upload/2785/2785fig6.jpg" alt="איור 6"/> איור 6. גילוי DCs שכותרתו ברקמות גזור. DCs בוגרת תווית (1x10 6 תאים) הוזרקו לעכברים לווריד C57BL / 6. (א) יומיים לאחר מכן העכברים הוקרבו ו spleens שנאספו, הצמד קפוא, מוטבע אוקטובר, ו - 8 חלקים מיקרומטר מוכן באמצעות cryostat. ואז, דגימות תוקנו עם אצטון (15 דקות, 4 ° C) counterstained עם DAPI. תאים הוערכו ב מיקרוסקופ פלואורסצנטי לעיל איור 6 א:. בהגדלה 40X, איור 6 ב: בהגדלה 100x, איור. 6C, 400X ההגדלה.

<ol>
	<li>Banchereau, J., Briere, F., Caux, C., Davoust, J., Lebecque, S., Liu, Y. J., Pulendran, B., Palucka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunobiology+of+dendritic+cells.">Immunobiology of dendritic cells.</a> Annu Rev Immunol. 18, 767-811 (2000).</li><li>Bonasio, R., von Andrian, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation,+migration+and+function+of+circulating+dendritic+cells.">Generation, migration and function of circulating dendritic cells.</a> Curr Opin Immunol. 18, 503-511 (2006).</li><li>Lanzavecchia, A., Sallusto, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+instructive+role+of+dendritic+cells+on+T+cell+responses:+lineages,+plasticity+and+kinetics.">The instructive role of dendritic cells on T cell responses: lineages, plasticity and kinetics.</a> Curr Opin Immunol. 13, 291-298 (2001).</li><li>Conejo-Garcia, J. R., Benencia, F., Courreges, M. C., Kang, E., Mohamed-Hadley, A., Buckanovich, R. J., Holtz, D. O., Jenkins, A., Na, H., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-infiltrating+dendritic+cell+precursors+recruited+by+a+beta-defensin+contribute+to+vasculogenesis+under+the+influence+of+Vegf-A.">Tumor-infiltrating dendritic cell precursors recruited by a beta-defensin contribute to vasculogenesis under the influence of Vegf-A.</a> Nat Med. 10, 950-958 (2004).</li><li>Lutz, M. B., Kukutsch, N., Ogilvie, A. L., Rossner, S., Koch, F., Romani, N., Schuler, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+advanced+culture+method+for+generating+large+quantities+of+highly+pure+dendritic+cells+from+mouse+bone+marrow.">An advanced culture method for generating large quantities of highly pure dendritic cells from mouse bone marrow.</a> J Immunol Methods. 223, 77-92 (1999).</li><li>Noh, Y. W., Lim, Y. T., Chung, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+imaging+of+dendritic+cell+migration+into+lymph+nodes+using+near-infrared+fluorescent+semiconductor+nanocrystals.">Noninvasive imaging of dendritic cell migration into lymph nodes using near-infrared fluorescent semiconductor nanocrystals.</a> Faseb J. 22, 3908-3918 (2008).</li><li>Benencia, F., Courreges, M. C., Conejo-Garcia, J. R., Mohamed-Hadley, A., Zhang, L., Buckanovich, R. J., Carroll, R., Fraser, N., Coukos, G., Franco, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HSV+oncolytic+therapy+upregulates+interferon-inducible+chemokines+and+recruits+immune+effector+cells+in+ovarian+cancer.">HSV oncolytic therapy upregulates interferon-inducible chemokines and recruits immune effector cells in ovarian cancer.</a> Mol Ther. 12, 789-802 (2005).</li><li>Gilboa, E., Vieweg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+immunotherapy+with+mRNA-transfected+dendritic+cells.">Cancer immunotherapy with mRNA-transfected dendritic cells.</a> Immunol Rev. 199, 251-263 (2004).</li><li>Grolleau-Julius, A., Abernathy, L., Harning, E., Yung, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+murine+dendritic+cell+antitumor+dysfunction+in+aging.">Mechanisms of murine dendritic cell antitumor dysfunction in aging.</a> Cancer Immunol Immunother. 58, 1935-1939 (2009).</li><li>Yrlid, U., Svensson, M., Johansson, C., Wick, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salmonella+infection+of+bone+marrow-derived+macrophages+and+dendritic+cells:+influence+on+antigen+presentation+and+initiating+an+immune+response.">Salmonella infection of bone marrow-derived macrophages and dendritic cells: influence on antigen presentation and initiating an immune response.</a> FEMS Immunol Med Microbiol. 27, 313-320 (2000).</li><li>Lutz, M. B., Schnare, M., Menges, M., Rossner, S., Rollinghoff, M., Schuler, G., Gessner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+functions+of+IL-4+receptor+types+I+and+II+for+dendritic+cell+maturation+and+IL-12+production+and+their+dependency+on+GM-CSF.">Differential functions of IL-4 receptor types I and II for dendritic cell maturation and IL-12 production and their dependency on GM-CSF.</a> J Immunol. 169, 3574-3580 (2002).</li><li>Benencia, F., Courreges, M. C., Coukos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+tumor+antigen+vaccination+using+dendritic+cells:+comparison+of+RNA+electroporation+and+pulsing+with+UV-irradiated+tumor+cells.">Whole tumor antigen vaccination using dendritic cells: comparison of RNA electroporation and pulsing with UV-irradiated tumor cells.</a> J Transl Med. 6, 21-21 (2008).</li><li>Probst, H. C., Tschannen, K., Odermatt, B., Schwendener, R., Zinkernagel, R. M., Van Den Broek, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+analysis+of+CD11c-DTR/GFP+mice+after+in+vivo+depletion+of+dendritic+cells.">Histological analysis of CD11c-DTR/GFP mice after in vivo depletion of dendritic cells.</a> Clin Exp Immunol. 141, 398-404 (2005).</li><li>Fainaru, O., Adini, A., Benny, O., Adini, I., Short, S., Bazinet, L., Nakai, K., Pravda, E., Hornstein, M. D., D'Amato, R. J., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+support+angiogenesis+and+promote+lesion+growth+in+a+murine+model+of+endometriosis.">Dendritic cells support angiogenesis and promote lesion growth in a murine model of endometriosis.</a> Faseb J. 22, 522-529 (2008).</li><li>Bobryshev, Y. V., Lord, R. S., Rainer, S., Jamal, O. S., Munro, V. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+dendritic+cells+and+atherosclerosis.">Vascular dendritic cells and atherosclerosis.</a> Pathol Res Pract. 192, 462-467 (1996).</li><li>Nakai, K., Fainaru, O., Bazinet, L., Pakneshan, P., Benny, O., Pravda, E., Folkman, J., D'Amato, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+augment+choroidal+neovascularization.">Dendritic cells augment choroidal neovascularization.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 49, 3666-3670 (2008).</li><li>Huarte, E., Cubillos-Ruiz, J. R., Nesbeth, Y. C., Scarlett, U. K., Martinez, D. G., Buckanovich, R. J., Benencia, F., Stan, R. V., Keler, T., Sarobe, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Depletion+of+dendritic+cells+delays+ovarian+cancer+progression+by+boosting+antitumor+immunity.">Depletion of dendritic cells delays ovarian cancer progression by boosting antitumor immunity.</a> Cancer Res. 68, 7684-7691 (2008).</li><li>Fernandez Pujol, B., Lucibello, F. C., Zuzarte, M., Lutjens, P., Muller, R., Havemann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+derived+from+peripheral+monocytes+express+endothelial+markers+and+in+the+presence+of+angiogenic+growth+factors+differentiate+into+endothelial-like+cells.">Dendritic cells derived from peripheral monocytes express endothelial markers and in the presence of angiogenic growth factors differentiate into endothelial-like cells.</a> Eur J Cell Biol. 80, 99-110 (2001).</li><li>Gottfried, E., Kreutz, M., Haffner, S., Holler, E., Iacobelli, M., Andreesen, R., Eissner, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+human+tumour-associated+dendritic+cells+into+endothelial-like+cells:+an+alternative+pathway+of+tumour+angiogenesis.">Differentiation of human tumour-associated dendritic cells into endothelial-like cells: an alternative pathway of tumour angiogenesis.</a> Scand J Immunol. 65, 329-335 (2007).</li><li>Bobryshev, Y. V., Lord, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+of+vascular+dendritic+cells+in+atherosclerotic+arteries+suggests+their+involvement+in+local+immune-inflammatory+reactions.">Mapping of vascular dendritic cells in atherosclerotic arteries suggests their involvement in local immune-inflammatory reactions.</a> Cardiovasc Res. 37, 799-810 (1998).</li><li>Bobryshev, Y. V., Lord, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-accumulation+of+dendritic+cells+and+natural+killer+T+cells+within+rupture-prone+regions+in+human+atherosclerotic+plaques.">Co-accumulation of dendritic cells and natural killer T cells within rupture-prone regions in human atherosclerotic plaques.</a> J Histochem Cytochem. 53, 781-785 (2005).</li></ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

Murine מיאלואידית) DCs נעשה שימוש נרחב על מנת לקבוע את היעילות ושיפור DC מבוסס חיסונים; לחקור DC: אינטראקציות תא T או פיתוח DC וכן לקבוע את תפקידם במחלות שונות 9-11. בזה אנו מראים כיצד ליצור DCs מ מבשרי התאושש קישואים עצם tibias ואת עצמות הירך. אנו לשחזר את העצמות ללא חיתוך טיפים, ומאפשר לנו לעקר אותם על ידי טבילה באתנול 70%, ובכך להקטין את ההסתברות של זיהום. כדי לבדל את DCs מתאי מוח העצם אנו משתמשים רק GM-CSF כפי שתואר קודם לכן 5. אף על פי פרוטוקולים מסוימים להשתמש גם IL-4, זה כבר דווח כי ציטוקין זה אינו הכרחי כאשר עובדים עם רמות גבוהות של GM-CSF 12. ואכן, אנו הוכיחו בעבר כי DCs הללו מסוגלים לגרום התגובה החיסונית 13. כמו כן, הטיפול חייב להילקח להתאושש התאים רק חסיד רופף בין 8 ימים תרבויות על ידי שטיפת צלחות פטרי עם המדיום מאז תאים המצורפת מראים פנוטיפ יותר מונוציטים דמוי. כאן אנחנו מראים את התיוג של DCs עם חלקיקים Qdot ניאון. תיוג זה יש כמה יתרונות ביחס לשיטות אחרות. ראשית, חלקיקים Qdots משולבים בקלות לתוך התאים. שנית, אות ניאון הוא גבוה מאוד ולא משתנה על ידי התבגרות DC. שלישית, הקרינה לא הולך לאיבוד כאשר תאים או רקמות קבועים עם ממסים כגון אצטון, בניגוד למה קורה אם ה-GFP משמש תג DCs 14, מתן גמישות רבה יותר בכל רגע לבחור פרוטוקולים מכתים. לבסוף, את האות ניאון גבוהה שניתן על ידי חלקיקים אלה מאפשר הדמיה של רקמות התאים למרות אוטומטי פלואורסצנטי. כפי שתואר קודם לכן 6, מכתים Qdot לא השפיע על יכולת התבגרות של תאים אלה. בזה אנו מראים כי Qdot מוכתם DCs להתנהג בצורה דומה לזו של הלא מוכתם DCs, upregulating מולקולות costimulatory, והפקת IL-6 ו - תחמוצת החנקן בתגובה לגירויים דלקתיים. למרות DCs הם תאים מיוחדים המעוררים תגובות חיסוניות, הם הוכחו להשתתף במצבים פתולוגיים כגון סרטן, טרשת עורקים 4, 15, 16. הם כבר טענו גם להשתתף בתהליך angiogenic 17, 18, ​​הציע גם מבחינה מבנית השתתפות בפיתוח של כלי חדש 19, 20. לכן, שיטות המאפשרות מעקב DC in vivo, וקביעת לוקליזציה הגיאוגרפי שלהם ברקמות שונות 4, 21, 22 יקר מאוד.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> שם מגיב </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th><th> הערות (אופציונלי) </th></tr><tr><td> C57BL / 6 עכברים </td><td> ג&#39;קסון מעבדות </td><td></td><td> נקבות, 6-8 שבועות </td></tr><tr><td> RPMI </td><td> Invitrogen </td><td> 11875-119 </td><td></td></tr><tr><td> בסרום שור עוברית, מוסמך </td><td> Invitrogen </td><td> 10437-028 </td><td></td></tr><tr><td> לאנטיביוטיקה antimycotic </td><td> Invitrogen </td><td> 15240-096 </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td> Invitrogen </td><td> 10010-049 </td><td></td></tr><tr><td> Lysing ACK הצפת </td><td> Lonza Walkersville, Inc </td><td> 10-548E </td><td></td></tr><tr><td> רקומביננטי Murine GM-CSF </td><td> PeproTech Inc </td><td> 315-03 </td><td></td></tr><tr><td> 655 Qtracker Cell תיוג Kit </td><td> Invitrogen </td><td> Q25021MP </td><td></td></tr><tr><td> Lipopolysaccharide </td><td> Invivogen </td><td> tlrl-eblps </td><td></td></tr><tr><td> רקומביננטי Murine TNF אלפא </td><td> Peprotech </td><td> 315-01A </td><td></td></tr><tr><td> נוגדן CD86 </td><td> BD Biosciences </td><td> 553691 </td><td></td></tr><tr><td> נוגדן CD40 </td><td> BD Biosciences </td><td> 553791 </td><td></td></tr><tr><td> מגיב Griess מערכת </td><td> Promega </td><td> G2930 </td><td></td></tr><tr><td> IL-6 ללכוד נוגדן </td><td> eBioscience </td><td> 13-7061-81 </td><td></td></tr><tr><td> IL-6 זיהוי הנוגדן </td><td> eBioscience </td><td> 13-7062-81 </td><td></td></tr></tbody></table>

generation and labeling of murine bone marrow-derived dendritic cells with qdot nanocrystals for tracking studies

תאים דנדריטים (DCS) הם תאים אנטיגן מקצועי המציג (נגמ&quot;שים) נמצא ברקמות הפריפריה באיברים החיסון כגון בלוטת התימוס, מח העצם, הטחול, בלוטות הלימפה וטלאים של Peyer 1-3. DCs נוכח היקפי מדגם רקמות האורגניזם נוכחות של אנטיגנים, אשר הם תופסים, תהליך נוכח פני השטח שלהם בהקשר של מולקולות histocompatibility הגדולות (MHC). ואז, אנטיגן טעון DCs לנדוד לאיברים החיסונית שבו הם מציגים את אנטיגן מעובד על לימפוציטים מסוג T מפעילה תגובות חיסוניות ספציפיות. אחת הדרכים להעריך את יכולות הנדידה של DCs היא תווית אותם עם צבעי ניאון 4. בזאת אנו מדגימים את השימוש nanocrystals ניאון Qdot לתייג מח עצם הנגזרות Murine DC. היתרון של תיוג זה הוא Qdot nanocrystals בעלי הקרינה יציב וארוך טווח ההופכים אותם אידיאליים לאיתור תאים ברקמות שכותרתו התאושש. כדי להשיג זאת, התאים הראשונים יהיה התאושש קישואים עצם Murine ותרבותי עבור 8 ימים בנוכחות גורם macrophage-מושבה granulocyte מגרה כדי להשרות התמיינות DC. תאים אלה יתויגו בתור מכן על ידי קצרה הדגירה במבחנה עם Qdots ניאון. תאים ויטראז ניתן דמיינו עם מיקרוסקופ פלואורסצנטי. תאים יהיה ניתן להזריק לתוך חיות הניסוי בשלב זה או יכול להיות לתאים בוגרים של דגירה על במבחנה עם גירוי דלקתי. בידיים שלנו, התבגרות DC לא לקבוע אובדן אות ניאון ואינו מכתים Qdot משפיעים על תכונות ביולוגיות של DCs. לאחר ההזרקה, התאים האלה יכולים להיות מזוהים באיברים החיסונית על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי הבאים לנתיחה טיפוסי ונהלים קיבעון.

Watch this Scientific Journal Video about Generation and Labeling of Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells with Qdot Nanocrystals for Tracking Studies at JoVE.com

Generation and Labeling of Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells with Qdot Nanocrystals for Tracking Studies

תאים דנדריטים ספיגת אנטיגנים ולנדוד אל האיברים החיסונית להציג אנטיגנים לתאי T מעובד. Qdot ננו תיוג מספק אות ניאון ארוכת טווח ויציבה. זה מאפשר מעקב של תאים דנדריטים לאיברים שונים על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

הדור וסימון של Murine מח עצם הנגזרות תאים דנדריטים עם nanocrystals Qdot ללימודי מעקב

Dendritic cells (DCs) are professional antigen presenting cells (APCs) found in peripheral tissues and in immunological organs such as thymus, bone ...

generation-labeling-murine-bone-marrow-derived-dendritic-cells-with

Google

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

24.7K Views.  Ohio University. תאים דנדריטים ספיגת אנטיגנים ולנדוד אל האיברים החיסונית להציג אנטיגנים לתאי T מעובד. Qdot ננו תיוג מספק אות ניאון ארוכת טווח ויציבה. זה מאפשר מעקב של תאים דנדריטים לאיברים שונים על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

Video: Generation and Labeling of Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells with Qdot Nanocrystals for Tracking Studies

Investigation of Macrophage Polarization Using Bone Marrow Derived Macrophages

The article describes a readily easy adaptive in vitro model to investigate macrophage polarization. In the presence of GM-CSF/M-CSF, hematopoietic stem/progenitor cells from the bone marrow are directed into monocytic differentiation, followed by M1 or M2 stimulation. The activation status can be tracked by changes in cell surface antigens, gene expression and cell signaling pathways.

The article describes a readily easy adaptive in vitro model to investigate macrophage polarization. In the presence of GM-CSF/M-CSF, hematopoietic stem/progenitor cells from the bone marrow are directed into monocytic differentiation, followed by M1 or M2 stimulation. The activation status can be tracked by changes in cell surface antigens, gene expression and cell signaling pathways.

חקירה של קיטוב Macrophage שימוש המקרופאגים נגזרים מח עצם

The article describes a readily easy adaptive in vitro model to investigate macrophage polarization. In the presence of GM-CSF/M-CSF, hematopoietic ...

Bone Marrow-derived Macrophage Production

Macrophages are critical components of the innate and adaptive immune responses, and they are the first line of defense against foreign invaders because of their powerful microbicidal activities. Macrophages are widely distributed throughout the body and are present in the lymphoid organs, liver, lungs, gastrointestinal tract, central nervous system, bone, and skin. Because of their repartition, they participate in a wide range of physiological and pathological processes. Macrophages are highly versatile cells that are able to recognize microenvironmental alterations and to maintain tissue homeostasis. Numerous pathogens have evolved mechanisms to use macrophages as Trojan horses to survive, replicate in, and infect both humans and animals and to propagate throughout the body. The recent explosion of interest in evolutionary, genetic, and biochemical aspects of host-pathogen interactions has renewed scientific attention regarding macrophages. Here, we describe a procedure to isolate and cultivate macrophages from murine bone marrow that will provide large numbers of macrophages for studying host-pathogen interactions as well as other processes.

Macrophages have long been recognized as a critical component of the innate and adaptive immune responses. The recent explosion of knowledge pertaining to evolutionary, genetic, and biochemical aspects of the interaction between macrophages and microbes has renewed scientific attention to macrophages. This article describes a method to differentiate macrophages from mouse bone marrow.

מח עצם נגזרות Macrophage הפקה

Macrophages are critical components of the innate and adaptive immune responses, and they are the first line of defense against foreign invaders because ...

Isolation and Intravenous Injection of Murine Bone Marrow Derived Monocytes

As a subtype of leukocytes and progenitors of macrophages, monocytes are involved in many important processes of organisms and are often the subject of various fields in biomedical science. The method described below is a simple and effective way to isolate murine monocytes from heterogeneous bone marrow.
Bone marrow from the femur and tibia of Balb/c mice is harvested by flushing with phosphate buffered saline (PBS). Cell suspension is supplemented with macrophage-colony stimulating factor (M-CSF) and cultured on ultra-low attachment surfaces to avoid adhesion-triggered differentiation of monocytes. The properties and differentiation of monocytes are characterized at various intervals. Fluorescence activated cell sorting (FACS), with markers like CD11b, CD115, and F4/80, is used for phenotyping. At the end of cultivation, the suspension consists of 45%&#177; 12% monocytes. By removing adhesive macrophages, the purity can be raised up to 86%&#177; 6%. After the isolation, monocytes can be utilized in various ways, and one of the most effective and common methods for in vivo delivery is intravenous tail vein injection. 
This technique of isolation and application is important for mouse model studies, especially in the fields of inflammation or immunology. Monocytes can also be used therapeutically in mouse disease models.

Here we present a protocol that generates large amounts of murine monocytes from heterogeneous bone marrow for translational applications. In comparison to others, this new method helps reduce the number of sacrificed animals and lowers costs by avoiding expensive methods such as high gradient magnetic cell separation (MACS).

המונוציטים בידוד והזרקה תוך ורידית של Murine מח העצם נגזר

As a subtype of leukocytes and progenitors of macrophages, monocytes are involved in many important processes of organisms and are often the subject of ...

Generation of Immature, Mature and Tolerogenic Dendritic Cells with Differing Metabolic Phenotypes

Immune response results from a complex interplay between the antigen non-specific innate immune system and the antigen specific adaptive immune system. The immune system is a constant balance in maintaining tolerance to self-molecules and reacting rapidly to pathogens. Dendritic cells (DCs) are powerful professional antigen presenting cells that link the innate immune system to the adaptive immune system and balance the adaptive response between self and non-self. Depending on the maturation signals, immature dendritic cells can be selectively stimulated to differentiate into immunogenic or tolerogenic DCs. Immunogenic dendritic cells provide proliferation signals to antigen-specific T cells for clonal expansion; while tolerogenic dendritic cells regulate tolerance by antigen-specific T-cell deletion or clonal expansion of regulatory T-cells. Due to this unique property, dendritic cells are highly sought after as therapeutic agents for cancer and autoimmune diseases. Dendritic cells can be loaded with specific antigens in vitro and injected into the human body to mount a specific immune response both immunogenic and tolerogenic. This work presents a means to generate in vitro from monocytes, immature monocyte derived dendritic cells (moDCs), tolerogenic and mature moDCs that differ in surface marker expression, function and metabolic phenotypes.

Immature dendritic cells can be selectively differentiated into tolerogenic or mature dendritic cells to regulate the balance between immunity and tolerance. This work presents a means to generate from immature monocyte derived dendritic cells (moDCs), in vitro tolerogenic and mature moDCs that differ in metabolic phenotypes.

הדור של בוגר, בוגרת Tolerogenic דנדריטים תאים, עם שינוי פנוטיפים מטבולית

Immune response results from a complex interplay between the antigen non-specific innate immune system and the antigen specific adaptive immune system. ...

Generation and Identification of GM-CSF Derived Alveolar-like Macrophages and Dendritic Cells From Mouse Bone Marrow

Macrophages and dendritic cells (DCs) are innate immune cells found in tissues and lymphoid organs that play a key role in the defense against pathogens. However, they are difficult to isolate in sufficient numbers to study them in detail, therefore, in vitro models have been developed. In vitro cultures of bone marrow-derived macrophages and dendritic cells are well-established and valuable methods for immunological studies. Here, a method for culturing and identifying both DCs and macrophages from a single culture of primary mouse bone marrow cells using the cytokine granulocyte macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) is described. This protocol is based on the established procedure first developed by Lutz et al. in 1999 for bone marrow-derived DCs. The culture is heterogeneous, and MHCII and fluoresceinated hyaluronan (FL-HA) are used to distinguish macrophages from immature and mature DCs. These GM-CSF derived macrophages provide a convenient source of in vitro derived macrophages that closely resemble alveolar macrophages in both phenotype and function.

Bone marrow cells cultured with granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) generate a heterogeneous culture containing macrophages and dendritic cells (DCs). This method highlights using MHCII and hyaluronan (HA) binding to differentiate macrophages from the DCs in the GM-CSF culture. Macrophages in this culture have many similarities to alveolar macrophages.

דור וזיהוי GM-CSF נגזר מכתשיים דמוי מאקרופאגים דנדריטים תאי עכבר מח עצם

Macrophages and dendritic cells (DCs) are innate immune cells found in tissues and lymphoid organs that play a key role in the defense against pathogens. ...

Generation of Human Monocyte-derived Dendritic Cells from Whole Blood

Dendritic cells (DCs) recognize foreign structures of different pathogens, such as viruses, bacteria, and fungi, via a variety of pattern recognition receptors (PRRs) expressed on their cell surface and thereby activate and regulate immunity. 
The major function of DCs is the induction of adaptive immunity in the lymph nodes by presenting antigens via MHC I and MHC II molecules to na&#239;ve T lymphocytes. Therefore, DCs have to migrate from the periphery to the lymph nodes after the recognition of pathogens at the sites of infection. For in vitro experiments or DC vaccination strategies, monocyte-derived DCs are routinely used. These cells show similarities in physiology, morphology, and function to conventional myeloid dendritic cells. They are generated by interleukin 4 (IL-4) and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) stimulation of monocytes isolated from healthy donors. Here, we demonstrate how monocytes are isolated and stimulated from anti-coagulated human blood after peripheral blood mononuclear cell (PBMC) enrichment by density gradient centrifugation. Human monocytes are differentiated into immature DCs and are ready for experimental procedures in a non-clinical setting after 5 days of incubation.

Here, we demonstrate how monocytes are isolated by magnetic bead separation from peripheral blood mononuclear cells after density gradient centrifugation of human anti-coagulated blood. Following incubation for 5 days, human monocytes are differentiated into immature dendritic cells and are ready for experimental procedures in a non-clinical setting.

דור של תאי דנדריטים אדם נגזר מונוציטים מן הדם מלא

Dendritic cells (DCs) recognize foreign structures of different pathogens, such as viruses, bacteria, and fungi, via a variety of pattern recognition ...

Generation of Large Numbers of Myeloid Progenitors and Dendritic Cell Precursors from Murine Bone Marrow Using a Novel Cell Sorting Strategy

Cultures of monocyte-derived dendritic cells (moDC) generated from mouse bone marrow using Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor (GM-CSF) have recently been recognized to be more heterogeneous than previously appreciated. These cultures routinely contain moDC as well monocyte-derived macrophages (moMac), and even some less developed cells such as monocytes. The goal of this protocol is to provide a consistent method for identification and separation of the many cell types present in these cultures as they develop, so that their specific functions may be further investigated. The sorting strategy presented here separates cells first into four populations based on expression of Ly6C and CD115, both of which are expressed transiently by cells as they develop in GM-CSF-driven culture. These four populations include Common myeloid progenitors or CMP (Ly6C-, CD115-), granulocyte/macrophage progenitors or GMP (Ly6C+, CD115-), monocytes (Ly6C+, CD115+), and monocyte-derived macrophages or moMac (Ly6C-, CD115+). CD11c is also added to the sorting strategy to distinguish two populations within the Ly6C-, CD115- population: CMP (CD11c-) and moDC (CD11c+). Finally, two populations may be further distinguished within the Ly6C-, CD115+ population based on the level of MHC class II expression. MoMacs express lower levels of MHC class II, while a monocyte-derived DC precursor (moDP) expresses higher MHC class II. This method allows for the reliable isolation of several developmentally distinct populations in numbers sufficient for a variety of functional and developmental analyses. We highlight one such functional readout, the differential responses of these cell types to stimulation with Pathogen-Associated Molecular Patterns (PAMPs).

Here we provide a method for identifying and isolating large numbers of GM-CSF driven myeloid cells using high speed cell sorting. Five distinct populations (Common myeloid progenitors, granulocyte/macrophage progenitors, monocytes, monocyte-derived macrophages, and monocyte-derived DCs) can be identified based on Ly6C and CD115 expression.

דור מספר גדול של תאים מיאלואידים אבות ו מבשרי תא דנדריטי ממח העצם מאתר באמצעות תא הרומן מיון אסטרטגיה

Cultures of monocyte-derived dendritic cells (moDC) generated from mouse bone marrow using Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor (GM-CSF) have ...

Detection of Inflammasome Activation and Pyroptotic Cell Death in Murine Bone Marrow-derived Macrophages

Inflammasomes are innate immune signaling platforms that are required for the successful control of many pathogenic organisms, but also promote inflammatory and autoinflammatory diseases. Inflammasomes are activated by cytosolic pattern recognition receptors, including members of the NOD-like receptor (NLR) family. These receptors oligomerize upon the detection of microbial or damage-associated stimuli. Subsequent recruitment of the adaptor protein ASC forms a microscopically visible inflammasome complex, which activates caspase-1 through proximity-induced auto-activation. Following the activation, caspase-1 cleaves pro-IL-1&#946; and pro-IL-18, leading to the activation and secretion of these pro-inflammatory cytokines. Caspase-1 also mediates the inflammatory form of cell death termed pyroptosis, which features the loss of membrane integrity and cell lysis. Caspase-1 cleaves gasdermin D, releasing the N-terminal fragment which forms plasma membrane pores, leading to osmotic lysis.
In vitro, the activation of caspase-1 can be determined by labeling bone marrow-derived macrophages with the caspase-1 activity probe FAM-YVAD-FMK and by labeling the cells with antibodies against the adaptor protein ASC. This technique allows the identification of inflammasome formation and caspase-1 activation in individual cells using fluorescence microscopy. Pyroptotic cell death can be detected by measuring the release of cytosolic lactate dehydrogenase into the medium. This procedure is simple, cost effective and performed in a 96-well plate format, allowing adaptation for screening. In this manuscript, we show that activation of the NLRP3 inflammasome by nigericin leads to the co-localization of the adaptor protein ASC and active caspase-1, leading to pyroptosis.

We describe the detection of NLRP3 inflammasome activation on cellular basis using fluorescence microscopy and staining for active caspase-1 and the adaptor, ASC. A lactate dehydrogenase release assay is presented to detect pyroptotic lysis on a population basis. These techniques can be adapted to study many aspects of inflammasome biology.

זיהוי של Inflammasome ההפעלה ומוות תא Pyroptotic של מקרופאגים הנגזרות מח עצם מאתר

Inflammasomes are innate immune signaling platforms that are required for the successful control of many pathogenic organisms, but also promote ...

An In Vivo Mouse Model to Measure Na&#239;ve CD4 T Cell Activation, Proliferation and Th1 Differentiation Induced by Bone Marrow-derived Dendritic Cells

Quantification of na&#239;ve CD4 T cell activation, proliferation, and differentiation to T helper 1 (Th1) cells is a useful way to assess the role played by T cells in an immune response. This protocol describes the in vitro differentiation of bone marrow (BM) progenitors to obtain granulocyte macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) derived-dendritic cells (DCs). The protocol also describes the adoptive transfer of ovalbumin peptide (OVAp)-loaded GM-CSF-derived DCs and na&#239;ve CD4 T cells from OTII transgenic mice in order to analyze the in vivo activation, proliferation, and Th1 differentiation of the transferred CD4 T cells. This protocol circumvents the limitation of purely in vivo methods imposed by the inability to specifically manipulate or select the studied cell population. Moreover, this protocol allows studies in an in vivo environment, thus avoiding alterations to functional factors that may occur in vitro and including the influence of cell types and other factors only found in intact organs. The protocol is a useful tool for generating changes in DCs and T cells that modify adaptive immune responses, potentially providing important results to understand the origin or development of numerous immune associated diseases.

An &lt;em&gt;In Vivo&lt;/em&gt; Mouse Model to Measure Na&amp;#239;ve CD4 T Cell Activation, Proliferation and Th1 Differentiation Induced by Bone Marrow-derived Dendritic Cells

Here, we present a protocol for the in vivo determination of na&#239;ve CD4 T cell (T cell) activation, proliferation, and Th1 differentiation induced by GM-CSF bone marrow (BM)-derived dendritic cells (DCs). In addition, this protocol describes BM and T-cell isolation, DC generation, and DC and T-cell adoptive transfer.

מודל העכבר In Vivo הפעלת תא T CD4 תמים מידה, התפשטות של בידול Th1 הנגרם על ידי תאים דנדריטים הנגזרות מח עצם

Quantification of na&#239;ve CD4 T cell activation, proliferation, and differentiation to T helper 1 (Th1) cells is a useful way to assess the role played ...

Economical and Efficient Protocol for Isolating and Culturing Bone Marrow-derived Dendritic Cells from Mice

The demand for dendritic cells (DCs) is gradually increasing as immunology research advances. However, DCs are rare in all tissues. The traditional method for isolating DCs primarily involves inducing bone marrow (BM) differentiation into DCs by injecting large doses (&#62;10 ng/mL) of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor/interleukin-4 (GM-CSF/IL-4), making the procedure complex and expensive. In this protocol, using all BM cells cultured in 10 ng/mL GM-CSF/IL-4 medium, after 3-4 half-culture exchanges, up to 2.7 x 107 CD11c+ cells&#160;(DCs) per mouse (two femurs) were harvested with a purity of 80%-95%. After 10 days in culture, the expression of CD11c, CD80, and MHC II increased, whereas the number of cells decreased. The number of cells peaked after 7 days of culture. Moreover, this method only took 10 min to harvest all bone marrow cells, and a high number of DCs were obtained after 1 week of culture.

Here, we present an economical and efficient method to isolate and generate high-purity bone marrow-derived dendritic cells from mice after 7 days of culture with 10 ng/mL GM-CSF/IL-4.

פרוטוקול חסכוני ויעיל לבידוד וגידול תאים דנדריטיים שמקורם במח העצם מעכברים

The demand for dendritic cells (DCs) is gradually increasing as immunology research advances. However, DCs are rare in all tissues. The traditional method ...