فإن الكتاب أود أن أشكر اماندا Tardo ، والدكتور مصطفى Bouljihad ، فيلي ستيفاني كوين كارول الدكتور Ribka ايرين ، والدكتور ديدييه بيتي وكيبلر دوروثي لمساعدتها التقنية. وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح R01 - DK076653 و3R01 DK076653 - KS - 02S1 لومنح التشغيل قاعدة TNPRC RR000164.

1. خزعة الجلد جمع عينة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل إجراء خزعة الجلد ، وتخدير الحيوانات عضليا مع 2.5 ملغ / كغ من هيدروكلوريد تلييتامين وzolazepam خليط هيدروكلوريد telazol (فورت دودج صحة الحيوان ، وفورت دودج ، IA). مراقبة الحيوانات من إدارة مخدر حتى الاستلقاء ثم إزالتها من الضميمة الخاصة بهم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الشعر من منطقة الجلد التي تهم استفاد من المقص الذهبي اوستر A5 سرعة واحدة البيطري بشفرة 40 الحجم (اوستر المنتجات الفنية ، McMinnville ، تينيسي) ، وإعداد جو معقم و مطهر بالتناوب مع فرك betadine والكحول. تأمين ثنى منوفذة معقمة على موقع خزعة المحدد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام تقنية معقمة ، ضع 4.0 ملم Miltex كمة صك الخزعة الجلدية (Miltex ، نيويورك ، والسلطة الفلسطينية) على الجلد بينما تناوب 180 درجة في اتجاه عقارب الساعة صك وعكس عقارب الساعة مع ضغط طفيف حتى لكمة خزعة المقاطع العرضية من خلال طبقات الجلد تحت الجلد في منظمة الشفافية الدوليةssue. إزالة عينة خزعة وفهم جزء مقطوع من الجلد مع ملقط وخالية من الأنسجة تحت الجلد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق عيب خياطة الجلد مع النايلون 3-0 ملحقة إبرة القطع 08/03 دائرة (Ethilon ، Ethicon ، جونسون أند جونسون الطبية المحدودة ، شركة بيركشاير ، المملكة المتحدة) في نمط الصليبي. تعطي جميع الحيوانات 0.01 هيدروكلوريد البوبرينورفين ملغ / كلغ (هوسبيرا ، ليك فورست ، IL) عضليا لتسكين بعد العملية. </li></ol> 2. تجهيز العينة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العمل مع عينات الخزعة الجلدية من التهاب مزمن ومراقبة صحية المكاك وهو قرد اسيوي. الحصول 2-3 (4 مليمتر في القطر) الخزعة عينات من كل حيوان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الإصلاح العينة الأولى في الفورمالين الزنك (Z - الإصلاح ، Anatech المحدودة ، معركة الخور ، MI) لمدة 24 ساعة ، ويغسل في الماء لمدة 30 دقيقة ، ويغسل لفترة وجيزة في الايثانول 70 ٪ ، ومكان في النسيج المعالج ASP300 ايكا (لايكا مايكروسيستمز ، الجاموس غروف ، KS) حيث الأنسجة المجففة مع درجات تصاعدي من 70 ٪ ، 80 ٪ ، 95 ٪ و 100 الإيثانول بنسبة 48 ٪كل دقيقة (فيشر العلمية ، بيتسبرغ ، بنسلفانيا) ، تليها تغييرين من الزيلين (فيشر). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تضمين في وسائل البارافين (فيشر) للتخزين الطويل الأجل في درجة حرارة الغرفة. في مكان - 20oC لمدة 20 دقيقة قبل sectioning. إعداد 6 أقسام ميكرون باستخدام مشراح الدوارة (HM325 ، Microm الدولية ، والدورف ، ألمانيا). أقسام المركز على الشرائح مشحونة (فيشر) والهواء الجاف في 60oC بين عشية وضحاها. وصمة عار مع الهيماتوكسيلين يوزين (H &amp; E) الطريقة القياسية (موضح أدناه). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الإصلاح في العينة الثانية بارافورمالدهيد 2 ٪ (USB كورب ، كليفلاند ، أوهايو) لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة ، ويغسل ثلاث مرات في الفوسفات مخزنة المالحة (PBS ، Gibco - Invitrogen ، كارلسباد ، كاليفورنيا) ، في مكان السكروز 30 ٪ (فيشر) لل 4 ساعات ، وتضمينها في المتوسط ​​تجميد أكتوبر (ساكورا Finetek ، تورنس ، كاليفورنيا). تبقي في دورتها الحادية و80oC لمدة 20 دقيقة قبل sectioning. 15 ميكرومتر تعد المقاطع باستخدام ناظم البرد (HM560 ، الحرارية العلمية ، كالامازو ، MI). </li></ol> 3. H &amp; E تلطيخ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تضمين Deparaffinizeدائرة التنمية الاقتصادية من خلال ثلاثة أقسام تغييرات الزيلين (فيشر) وترطيب ethanols متدرج من خلال : ثلاثة تغييرات من 100 ٪ ، تغييرين من 95 ٪ ، تغيير واحد من 80 ٪ والماء المقطر ، 2 دقيقة لكل منهما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وصمة عار مع الهيماتوكسيلين (ريتشارد آلان ، والعلم ، كالامازو ، MI) لمدة دقيقة ومتابعة من قبل يغسل وجيزة في إدارة مياه الحنفية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملون مباين مع يوزين (سيغما) لمدة 6 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يذوى الأنسجة الملون من خلال 95 ٪ من الإيثانول والمطلقة ، وهما التغيرات في 2 دقيقة ثم كل ثلاثة تغييرات واضحة في لالزيلين ، 3 دقائق لكل منهما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جبل ساترة به Cytoseal متوسطة التركيب (ريتشارد آلان ، والعلم) على مدى H &amp; E - أقسام النسيج الملون. </li></ol> 4. النسجية التقييم تفقد H &amp; E الملطخة أقسام خزعة الجلد تحت المجهر باستخدام الضوء 4 -- التكبير و40X مجهر لايكا مع كاميرا رقمية سبوت انسايت (رقمي آلات المحدودة ، ميتشيغان ، الولايات المتحدة). 5. مناعي staiنينغ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العمل مع المقاطع الجلد جزءا لا يتجزأ من أكتوبر للتلوين مناعي. قبل التلوين ، نقع لمدة 20 دقيقة في برنامج تلفزيوني يحتوي على 0.2 ٪ الأسماك الجيلاتين الجلد (FSG ، سيجما) بنسبة 0.1 ٪ تريتون X - 100 (سيغما) لإزالة أكتوبر وpermeabilize الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد غسل الشرائح ، مع احتضان 10 ٪ مصل الماعز العادي (NGS ، سيغما) ، مخففة في برنامج تلفزيوني ، FSG لمدة 1 ساعة ، في درجة حرارة الغرفة ، في غرفة الشريحة مرطب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من أجل تصور ترسب ايغا والأضداد tTG2 ، احتضان الشرائح المضادة للريسوس ايغا وtTG2 الأجسام المضادة الأولية ، وتضعف في 10 ٪ NGS ، PBS ، FSG لمدة 1 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغسل مع X - 100 - PBS FSG - تريتون (سيغما) لمدة 10 دقيقة ، تليها PBS ، FSG لمدة 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان مع الأجسام المضادة الثانوية isotype محددة ، والموسومة ب اليكسا فلور ملون تألقي 488 (أخضر) ، 568 (أحمر) أو 633 (أزرق) (المسابر الجزيئية - Invitrogen) في 1:1،000 التخفيف. استخدام صبغة ToPro - 3 لتصور الحمض النووي. استخدام 10 ٪ NGS ، PBS ، FSG باعتبارها مخفف الأضداد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الحل المضادة للتبريد (سيغما) لتحميل المقاطع النسيج الملون. </li></ol> 6. مبائر التصوير أداء التصوير مع TCS ايكا SP2 ليزر متحد البؤر صحيح مجهر المسح الضوئي (لايكا ، Wetzlar ، المانيا) مجهزة بثلاث ليزر (ستة خطوط الإثارة متوفرة) : ليزر الأرجون ، الكريبتون في 488 نانومتر (الأخضر) ، ليزر الكريبتون في 568 نانومتر ( الحمراء) ، وجهاز ليزر الهليوم نيون في 633 نانومتر (الأزرق) ، التي تمتد من مرئية إلى الجانب بعيدة الحمراء من الطيف. سجل المقابل تدخل الفرق (DIC) لتقييم الصور غير المسمى هندسة الأنسجة. 7. ممثل النتائج ويرد مثال على الاعتراف الإيجابي من قبل كل من ETG tTG2 وايغا الاضداد في الشكل. 3A. بما يتفق مع الوضع في المرضى من البشر ، ونظرا لانتشار أقل بكثير من DH - مثل التهاب الجلد من CD - مثل حساسية الغلوتين أيضا في المكاك وهو قرد اسيوي ، يتوقع معظم الجلد عينات الخزعة إلى SHOث التفاعل الإيجابي مع tTG2 الأجسام المضادة ولكن من دون وجود خلايا tTG2 + + ايغا ايجابية مزدوجة (الشكل 4). وهذه الحالات لا علاقة لها DH - ، بما في ذلك حالات التهاب جرثومي المنشأ ، تكشف عن بعض + ايغا واحدة إيجابية لخلايا متناثرة تحت الظهارة ولكن ليس التداخل بين الأطياف tTG2 وايغا المسمى علامات (الشكلان 3B و 4) ولذلك ، فمن المهم للحفاظ على ترتيب إجراءات الاختبار المقترحة ، بدءا من الفحص السريري (الشكل 1) ، تليها الأنسجة التقييم (الشكل 2) ، وإلا إذا لم يمكن التعرف على الآخر ، المسببة للالتهاب أكثر شيوعا وكلاء مبائر ، الفحص المجهري له ما يبرره من خزعات الجلد الملون لtTG2 و IgA. التقييمات السريرية و / أو الأنسجة وحدها ليست كافية للتشخيص الإيجابي لهذا الشرط. في تلك الحالات عند النقر المزدوج الايجابية (ايغا tTG2 + +) ويتم تحديد الخلايا في جميع أنحاء المنطقة من الحليمات الجلدية ، يمكن أن تصدر مثل DH - تشخيص التهاب الجلد. في مثل هذه الحالات ، والانسحاب من الغلوتين الغذائيةوأوصت بإقامة نظام غذائي خال من الغلوتين من أجل التخفيف من أعراض التهاب الجلد. <img src="/files/ftp_upload/3154/3154fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1. الأربي المنطقة من قبل EM96 المكاك (A) وبعد (ب) الانسحاب من الغلوتين الغذائية لمدة 5 أسابيع. وتزامن انبعاث الغلوتين الغذائية مع ظهور أكزيما (C). <img src="/files/ftp_upload/3154/3154fig2.jpg" alt="الشكل 2" /> الشكل 2. معالي تلون EM96 خزعات الجلد المكاك التي تم جمعها من قبل (A) وبعد (ب) الانسحاب من الغلوتين الغذائية لمدة 9 أسابيع. ج : هو ثخن الطلائية (7-15 طبقات من الخلايا الظهارية) مع قشرة سطحية سميكة من الخلايا التقرن تسلل العدلات مع التحول. العدلات تظهر أيضا داخل الظهارة وتختلط مع أعداد متوسطة من الخلايا الليمفاوية وخلايا البلازما ، والخلايا الناسجة حول ملحقات في الأدمة العليا. باء : بعض hyperkeratعمليات التفتيش الموقعي ما زال موجودا ، وسمك الظهارية غير طبيعية (4-7 طبقات) مع الحد الأدنى من تسلل lymphoplasmacytic في الأدمة العليا. يتم تضمين جلد البطن عادي من FR56 المكاك ، مع عدم وجود تسلل lymphoplasmacytic ، للمقارنة : C. تكبير 20X. <img src="/files/ftp_upload/3154/3154fig3.jpg" alt="الشكل 3" /> الشكل 3. الصور المجهري متحد البؤر EM96 من خزعات الجلد المكاك التي تم جمعها من قبل (A) وبعد (ب) الانسحاب من الغلوتين الغذائية لمدة 9 أسابيع. ج : تلطيخ ايغا (الأخضر) ، tTG2 (الحمراء) ، وToPro - 3 علامة الحمض النووي (الأزرق). شارك في توطين ايغا وtTG2 يظهر باللون الأصفر في جميع أنحاء المنطقة من papilae الجلدية. باء : عينة الجلد التي اتخذت بعد 9 أسابيع من اتباع نظام غذائي خال من الغلوتين لا يظهر أي ايغا داخل الظهارة في حين أن البعض لا يزال تحت الظهارة ايغا الحالية (الأخضر) ، tTG2 (الحمراء) ، وToPro - 3 علامة الحمض النووي (الأزرق). <img src="/files/ftp_upload/3154/3154fig4.jpg" alt="الشكل 4" /> الشكل 4. </قوية&gt; الصور المجهري متحد البؤر من GI24 خزعات الجلد المكاك ريسوس التي جمعت بينما كان الحيوان اظهار أعراض الأكزيما (لا علاقة لها DH -) المزمن. لتلطيخ ايغا في الخضراء ، الحمراء وtTG2 ToPro - 3. علامة الحمض النووي هو في الزرقاء الخلايا + tTG2 موجودة داخل ظهارة ، وعدد قليل ايغا + الخلايا تحت الظهارة ، في حين ينظر أي تداخل واسع بين الأطياف علامات حمراء وخضراء. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> العلامات الحيوانية </td><td> جنس [M / F] </td><td> عمر [سنوات] </td><td> الأعراض السريرية </td><td> البلازما tTG2 الأضداد </td><td> حمية [1،2] * </td></tr><tr><td> HJ71 </td><td> F </td><td> 1.3 </td><td> صحي </td><td> -- </td><td> 1 </td></tr><tr><td> HD13 </td><td> M </td><td> 1.4 </td><td> صحية ، والإسهال في بعض الأحيان </td><td> + </td><td> 1 </td></tr><tr><td> FR56 </td><td> M </td><td> 5.4 </td><td> الاسهال المزمن مجهول السبب </td><td> -- </td><td> 1 </td></tr><tr><td> EM96 </td><td> F </td><td> 5.0 </td><td> التهاب مزمن </td><td> + / -- (الشريط الحدودي) </td><td> 1 و 2 </td></tr><tr><td> GI24 </td><td> F </td><td> 4.6 </td><td> التهاب مزمن </td><td> -- </td><td> 1 </td></tr></tbody></table> الجدول 1. TNPRC المكاك ريسوس تستخدم لجمع عينات للفحص الجلد * النظام الغذائي 1 -- القرد تشاو العادية (التي تحتوي على الغلوتين) ؛ حمية 2 -- اتباع نظام غذائي خال من الغلوتين

<ol>
	<li>Diosdado, B., Wijmenga, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+the+adaptive,+innate+and+regulatory+immune+responses+in+the+intestinal+mucosa+of+celiac+disease+patients.">Molecular mechanisms of the adaptive, innate and regulatory immune responses in the intestinal mucosa of celiac disease patients.</a> Expert. Rev. Mol. Diagn. 5 (5), 681-700 (2005).</li><li>Schuppan, D., Dennis, M. D., Kelly, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Celiac+disease:+epidemiology,+pathogenesis,+diagnosis,+and+nutritional+management.">Celiac disease: epidemiology, pathogenesis, diagnosis, and nutritional management.</a> Nutr. Clin. Care. 8 (2), 54-69 (2005).</li><li>Sardy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+transglutaminase+(TGase+3)+is+the+autoantigen+of+dermatitis+herpetiformis.">Epidermal transglutaminase (TGase 3) is the autoantigen of dermatitis herpetiformis.</a> J. Exp. Med. 195 (6), 747-757 (2002).</li><li>Rose, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibodies+against+epidermal+transglutaminase+are+a+sensitive+diagnostic+marker+in+patients+with+dermatitis+herpetiformis+on+a+normal+or+gluten-free+diet.">Autoantibodies against epidermal transglutaminase are a sensitive diagnostic marker in patients with dermatitis herpetiformis on a normal or gluten-free diet.</a> J. Am. Acad. Dermatol. 61 (1), 39-43 (2009).</li><li>Bethune, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transepithelial+transport+and+enzymatic+detoxification+of+gluten+in+gluten-sensitive+rhesus+macaques.">Transepithelial transport and enzymatic detoxification of gluten in gluten-sensitive rhesus macaques.</a> PLoS ONE. 3 (3), e1857-e1857 (2008).</li><li>Mazumdar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+transepithelial+passage+of+the+immunogenic+33-residue+peptide+from+&#x03B1;-2+gliadin+in+gluten-sensitive+macaques.">Visualization of transepithelial passage of the immunogenic 33-residue peptide from &#x03B1;-2 gliadin in gluten-sensitive macaques.</a> PLoS ONE. 5 (4), e10228-e10228 (2010).</li><li>Schuppan, D., Junker, Y., Barisani, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Celiac+disease:+from+pathogenesis+to+novel+therapies.">Celiac disease: from pathogenesis to novel therapies.</a> Gastroenterol. 137 (6), 1912-1933 (2009).</li><li>Hunt, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Newly+identified+genetic+risk+variants+for+celiac+disease+related+to+the+immune+response.">Newly identified genetic risk variants for celiac disease related to the immune response.</a> Nature Genet. 40 (4), 395-402 (2008).</li><li>Abadie, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integration+of+genetic+and+immunological+insights+into+a+model+of+celiac+disease+pathogenesis.">Integration of genetic and immunological insights into a model of celiac disease pathogenesis.</a> Annu. Rev. Immunol. 29, 493-525 (2011).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

وقد استخدمت مؤخرا لدينا المنشأة حديثا غير البشرية نموذج الثدييات العليا للحساسية الغلوتين لدراسة التغيرات نفاذية الأمعاء الناجمة عن الغلوتين الغذائية 5،6. تم الكشف عن الأجسام المضادة tTG2 البلازما وكذلك الأمعاء tTG2 + + ودائع ايغا الغلوتين المكاك في بعض الأحرف. من?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم الكاشف أو المعدات </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم / رمز المنتج </td><td> مذكرة </td></tr><tr><td> مكافحة الإنسان ايغا - FITC * </td><td> سيغما ، وسانت لويس ، MO </td><td> F - 5259 </td><td> 1:100 تمييع العمل </td></tr><tr><td> مكافحة الإنسان tTG2 </td><td> الحرارية العلمية وكالامازو ، MI </td><td> MS - 300 - P1ABX </td><td> 1:100 تمييع العمل </td></tr><tr><td> المضادة للماوس IgG1 ** </td><td> Invitrogen ، كارلسباد ، كاليفورنيا </td><td> A - 21124 </td><td> 1:1،000 تمييع العمل </td></tr><tr><td> ToPro - 3 الحمض النووي التحقيق *** </td><td> Invitrogen ، كارلسباد ، كاليفورنيا </td><td> T - 3605 </td><td> 1:1،000 تمييع العمل </td></tr><tr><td> الزنك الفورمالين (Z - إصلاح) </td><td> Anatech المحدودة ، معركة الخور ، MI </td><td> 171 </td><td></td></tr><tr&gt; <td> أكتوبر التجميد متوسط </td><td> ساكورا Finetek ، تورنس ، CA </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> Cytoseal تركيب متوسط </td><td> ريتشارد آلان ، والعلم ، كالامازو ، MI </td><td> 8312-4 </td><td></td></tr><tr><td> الرواية المضادة لل حل </td><td> سيغما ، وسانت لويس ، MO </td><td> ف 3130 </td><td></td></tr><tr><td> Ethilon (خياطة نايلون) </td><td> Ethicon ، وجونسون آند جونسون ، بيركشاير ، المملكة المتحدة </td><td> 663G </td><td></td></tr><tr><td> Miltex كمة الصك الخزعة الجلدية </td><td> Miltex ، نيويورك ، والسلطة الفلسطينية </td><td> NA </td><td></td></tr><tr><td> اوستر الذهبي A5 البيطرية سرعة واحدة المقص بشفرة حجم 40 </td><td> اوستر ، منتجات McMinnville ، TN </td><td> 78005-050 </td><td></td></tr><tr><td> ايكا الأنسجة المعالج </td><td> شركة لايكا مايكروسيستمز. ، الجاموس غروف ، KS </td><td> ASP300 </td><td></td></tr><tr><td> دوارة مشراح </td><td> Microm الدولية ، والدورف ، ألمانيا </td><td> HM325 </td><td></td></tr><tr><td> ناظم البرد </td><td> الحرارية العلمية ، كالامازو ، MI </td><td> HM560 </td><td></td></tr><tr><td> مبائر مجهر </td><td> لايكا ، Wetzlar ، ألمانيا </td><td> TCS SP2 </td><td></td></tr></tbody></table> * فلوريسئين ثيوسيانات ** الثانوية (اليكسا فلور 568 مترافق) الأجسام المضادة المستخدمة بعد tTG2 الضد الابتدائي ** صبغ

recognition of epidermal transglutaminase by iga and tissue transglutaminase 2 antibodies in a rare case of rhesus dermatitis

ناقلة الغلوتامين الأنسجة 2 (tTG2) هو انزيم الهضم في الأمعاء التي deamidates بالفعل هضم الغلوتين جزئيا مثل الببتيدات غليادين الغذائية. في الأفراد مهيئون جينيا ، tTG2 مشغلات الاستجابات الذاتية التي تتميز إنتاج الأجسام المضادة وtTG2 ترسبها المباشرة إلى 1،2 جدار الأمعاء الصغيرة. وجود مثل هذه الأجسام المضادة تشكل واحدة من السمات المميزة الرئيسية لمرض الاضطرابات الهضمية (CD). البشرة ناقلة الغلوتامين (ETG) هو عضو آخر من عائلة ناقلة الغلوتامين التي يمكن أن تعمل أيضا بمثابة مستضد ذاتي في أقلية صغيرة من المرضى مؤتمر نزع السلاح. في هذه الحالات نادرة نسبيا ، ETG العوامل التي تسبب رد فعل المناعة الذاتية (طفح جلدي) المعروف سريريا والتهاب الجلد الحلئي (DH). على الرغم من عدم والآلية الدقيقة لمؤتمر نزع السلاح والتسبب درهم مفهومة جيدا ، فمن المعروف أن tTG2 وETG الحواتم مستضدي حصة التي يمكن أن تكون معترف بها من قبل أضداد المصل من المرضى على حد سواء CD و 3،4 درهم. معشوقة استخدمت = &quot;jove_content&quot;&gt; في هذه الدراسة ، والفحص المجهري لعينات الخزعة مبائر من الآفات الجلدية من المكاك وهو قرد اسيوي اثنين (المكاك الخلاسي) مع الجلد (الجدول 1 ، الشكل 1 و 2) لدراسة الأنسجة المتضررة. في حيوان واحد (EM96) وتبين وجود تداخل الطيفية ايغا وtTG2 الأضداد (الشكل 3). وجود المزدوج tTG2 ايجابية وتركزت + + ايغا خلايا في البشرة العميقة ، في جميع أنحاء الحليمات الجلدية. وهذا يتفق مع الإصابات الموصوفة في المرضى DH 3. عندما وضعت EM96 على نظام غذائي خال من الغلوتين ، والجلد ، فضلا عن tTG2 ايغا + + ودائع اختفت ولم تعد قابلة للكشف (الشكلان 1-3). التهاب الجلد الظهور ومع ذلك ، استنادا إلى إعادة إدخال الغلوتين من الغذاء في EM96 (لا يظهر). في قرود المكاك الأخرى بما في ذلك الحيوانات مع التهاب لا علاقة لها ، لم يتم الكشف عن + + ودائع tTG2 ايغا. اتباع نظام غذائي خال من الغلوتين التي تعتمد على مغفرة من التهاب في EM96 مع وجود tTG2 + + ايغا الخلايا في الجلد تشير إلى المناعة الذاتية ، مثل DH -آلية لوضع هذا الشرط. هذا هو التقرير الأول من DH - مثل التهاب في أي الرئيسيات غير البشرية.

Watch this Scientific Journal Video about Recognition of Epidermal Transglutaminase by IgA and Tissue Transglutaminase 2 Antibodies in a Rare Case of Rhesus Dermatitis at JoVE.com

Recognition of Epidermal Transglutaminase by IgA and Tissue Transglutaminase 2 Antibodies in a Rare Case of Rhesus Dermatitis

التهاب الجلد الحلئي (DH) هو مرض مزمن التهابات يتميز رد فعل المناعة الذاتية بين ايغا والبشرة ناقلة الغلوتامين (ETG). DH يتطور على جزء صغير جدا من المرضى الذين يعانون من الغلوتين الحساسة و / أو الاضطرابات الهضمية. نتائج هذه الدراسة تشير إلى أن درهم ويمكن أيضا أن تضع في مضيف قرد هندي صغير مع اعراض التهاب idiopatic.

الاعتراف ناقلة الغلوتامين البشرة بواسطة الأجسام المضادة IgA و 2 ناقلة الغلوتامين الأنسجة في حالة نادرة من القرد الجلد

Tissue transglutaminase 2 (tTG2) is an intestinal digestive enzyme which deamidates already partially digested dietary gluten e.g. gliadin peptides. In ...

recognition-epidermal-transglutaminase-iga-tissue-transglutaminase-2

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Recognition of Epidermal Transglutaminase by IgA and Tissue Transglutaminase 2 Antibodies in a Rare Case of Rhesus Dermatitis

24.4K Views.  Tulane National Primate Research Center. التهاب الجلد الحلئي (DH) هو مرض مزمن التهابات يتميز رد فعل المناعة الذاتية بين ايغا والبشرة ناقلة الغلوتامين (ETG). DH يتطور على جزء صغير جدا من المرضى الذين يعانون من الغلوتين الحساسة و / أو الاضطرابات الهضمية. نتائج هذه الدراسة تشير إلى أن درهم ويمكن أيضا أن تضع في م?...

Video: Recognition of Epidermal Transglutaminase by IgA and Tissue Transglutaminase 2 Antibodies in a Rare Case of Rhesus Dermatitis

Multicolor Flow Cytometry Analyses of Cellular Immune Response in Rhesus Macaques

The rhesus macaque model is currently the best available model for HIV-AIDS with respect to understanding the pathogenesis as well as for the development of vaccines and therapeutics1,2,3. Here, we describe a method for the detailed phenotypic and functional analyses of cellular immune responses, specifically intracellular cytokine production by CD4+ and CD8+ T cells as well as the individual memory subsets. We obtained precise quantitative and qualitative measures for the production of interferon gamma (INF-) and interleukin (IL) -2 in both CD4+ and CD8+ T cells from the rhesus macaque PBMC stimulated with PMA plus ionomycin (PMA+I). The cytokine profiles were different in the different subsets of memory cells. Furthermore, this protocol provided us the sensitivity to demonstrate even minor fractions of antigen specific CD4+ and CD8+ T cell subsets within the PBMC samples from rhesus macaques immunized with an HIV envelope peptide cocktail vaccine developed in our laboratory. The multicolor flow cytometry technique is a powerful tool to precisely identify different populations of T cells 4,5 with cytokine-producing capability6 following non-specific or antigen-specific stimulation 5,7.

We demonstrate the utility of multicolor flow cytometry for detailed phenotypic and functional characterization of total as well as memory subsets of CD4+ and CD8+ T cells in rhesus macaques, the ideal model for HIV/AIDS vaccine studies.

تحليلات متعددة الألوان من التدفق الخلوي الاستجابة المناعية الخلوية في المكاك وهو قرد اسيوي

The rhesus macaque model is currently the best available model for HIV-AIDS with respect to understanding the pathogenesis as well as for the development ...

IgY Technology: Extraction of Chicken Antibodies from Egg Yolk by Polyethylene Glycol (PEG) Precipitation

Hens can be immunized by means of i.m. vaccination (Musculus pectoralis, left and right, injection volume 0.5-1.0 ml) or by means of Gene-Gun plasmid-immunization. Dependent on the immunogenicity of the antigen, high antibody-titres (up to 1:100,000 - 1:1,000,000) can be achieved after only one or 3 - 4 boost immunizations. Normally, a hen lays eggs continuously for about 72 weeks, thereafter the laying capacity decreases. This protocol describes the extraction of total IgY from egg yolk by means of a precipitation procedure (PEG. Polson et al. 1980). The method involves two important steps. The first one is the removal of lipids and the second is the precipitation of total IgY from the supernatant of step one. After dialysis against a buffer (normally PBS) the IgY-extract can be stored at -20&deg;C for more than a year. The purity of the extract is around 80 %, the total IgY per egg varies from 40-80 mg, dependent on the age of the laying hen. The total IgY content increases with the age of the hen from around 40 mg/egg up to 80 mg/egg (concerning PEG precipitation). The laying capacity of a hen per year is around 325 eggs. That means a total potential harvest of 20 g total IgY/year based on a mean IgY content of 60 mg total IgY/egg (see Table 1).

IgY Technology: Extraction of Chicken Antibodies from Egg Yolk by Polyethylene Glycol PEG Precipitation

This protocol describes in particular the extraction of total IgY from egg yolk by means of polyethylene glycol precipitation and gives general information about IgY technology.

IGY التكنولوجيا : استخراج الأجسام المضادة من صفار البيض الدجاج بواسطة البولي ايثيلين جلايكول (PEG) الأمطار

Hens can be immunized by means of  i.m. vaccination (Musculus pectoralis, left and right, injection volume  0.5-1.0 ml) or by means of Gene-Gun ...

Cercarial Transformation and in vitro Cultivation of Schistosoma mansoni Schistosomules

Schistosome parasites are the causative agents of schistosomiasis, a chronically debilitating disease that affects over 200 million people globally and ranks second to malaria among parasitic diseases in terms of public health and socio-economic impact (1-4). Schistosome parasites are trematode worms with a complex life cycle interchanging between a parasitic life in molluscan and mammalian hosts with intervening free-swimming stages. Briefly, free-swimming cercariae infect a mammalian host by penetrating the skin with the aid of secreted proteases, during which time the cercariae lose their tails, transforming into schistosomules. The schistosomules must now evade the host immune system, develop a gut for digestion of red blood cells, and migrate though the lungs and portal circulation en route to their final destination in the hepatic portal system and eventually the mesenteric veins (for S. mansoni) where male and female worms pair and mate, producing hundreds of eggs daily. Some of the eggs are excreted from the body into fresh water, where the eggs hatch into free-swimming miracidia (5-10). The miracidia infect specific snail species and transform into mother and daughter sporocysts, which in turn, produce infective cercariae, completing the life cycle. Unfortunately, the entire schistosome life cycle cannot be cultured in vitro, but infective cercariae can be transformed into schistosomules, and the schistosomules can be cultured for weeks for the analysis of schistosome development in vitro or microarray analysis. In this protocol, we provide a visual description of cercarial transformation and in vitro culturing of schistosomules. We shed infectious cercariae from the snail host Biomphalaria glabrata and manually transform them into schistosomules by detaching their tails using an emulsifying double-ended needle. The in vitro cercarial transformation and schistosomules culture techniques described avoid the use of a mammalian host, which simplifies visualization of schistosomes and facilitates the collection of the parasite for experimental analysis. in vitro transformation and culturing techniques of schistosomes have been done for years (11, 12), but no visual protocols have been developed that are available to the entire community.

Cercarial Transformation and in vitro Cultivation of Schistosoma mansoni Schistosomules

We describe an in vitro method for culturing schistosomula of the flatworm parasite Schistosoma mansoni, via the harvesting and transformation of infective cercariae from the fresh water snail intermediate host Biomphalaria glabrata.

بالمذنبات والتحول في المختبر زراعة البلهارسيا المنسونية Schistosomules

Schistosome parasites are the causative agents of schistosomiasis, a chronically debilitating disease that affects over 200 million people globally and ...

Identification of Rare Bacterial Pathogens by 16S rRNA Gene Sequencing and MALDI-TOF MS

There are a number of rare and, therefore, insufficiently described bacterial pathogens which are reported to cause severe infections especially in immunocompromised patients. In most cases only few data, mostly published as case reports, are available which investigate the role of such pathogens as an infectious agent. Therefore, in order to clarify the pathogenic character of such microorganisms, it is necessary to conduct epidemiologic studies which include large numbers of these bacteria. The methods used in such a surveillance study have to meet the following criteria: the identification of the strains has to be accurate according to the valid nomenclature, they should be easy to handle (robustness), economical in routine diagnostics and they have to generate comparable results among different laboratories. Generally, there are three strategies for identifying bacterial strains in a routine setting: 1) phenotypic identification characterizing the biochemical and metabolic properties of the bacteria, 2) molecular techniques such as 16S rRNA gene sequencing and 3) mass spectrometry as a novel proteome based approach. Since mass spectrometry and molecular approaches are the most promising tools for identifying a large variety of bacterial species, these two methods are described. Advances, limitations and potential problems when using these techniques are discussed.

Matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) and molecular techniques (16S rRNA gene sequencing) permit the identification of rare bacterial pathogens in routine diagnostics. The goal of this protocol lies in the combination of both techniques which leads to more accurate and reliable data.

تحديد مسببات الأمراض البكتيرية النادرة التي 16S الريباسي جين تسلسل وMALDI-TOF MS

There are a number of rare and, therefore, insufficiently described bacterial pathogens which are reported to cause severe infections especially in ...

Antibody Binding Specificity for Kappa (V&#954;) Light Chain-containing Human (IgM) Antibodies: Polysialic Acid (PSA) Attached to NCAM as a Case Study

Antibodies of the IgM isotype are often neglected as potential therapeutics in human trials, animal models of human diseases as well as detecting agents in standard laboratory techniques. In contrast, several human IgMs demonstrated proof of efficacy in cancer models and models of CNS disorders including multiple sclerosis (MS) and amyotrophic lateral sclerosis (ALS). Reasons for their lack of consideration include difficulties to express, purify and stabilize IgM antibodies, challenge to identify (non-protein) antigens, low affinity binding and fundamental knowledge gaps in carbohydrate and lipid research. 
This manuscript uses HIgM12 as an example to provide a detailed protocol to detect antigens by Western blotting, immunoprecipitations and immunocytochemistry. HIgM12 targets polysialic acid (PSA) attached to the neural cell adhesion molecule (NCAM). Early postnatal mouse brain tissue from wild type (WT) and NCAM knockout (KO) mice lacking the three major central nervous system (CNS) splice variants NCAM180, 140 and 120 was used to evaluate the importance of NCAM for binding to HIgM12. Further enzymatic digestion of CNS tissue and cultured CNS cells using endoneuraminidases led us to identify PSA as the specific binding epitope for HIgM12.

Antibody Binding Specificity for Kappa (V&amp;#954;) Light Chain-containing Human (IgM) Antibodies: Polysialic Acid (PSA) Attached to NCAM as a Case Study

We present a protocol to identify protein moieties containing antigens for human and mouse IgM antibodies with specific kappa (V&#954;) light chains. This protocol is not limited to IgM class antibodies but applies to all immunoglobulin isotypes that target their antigen with sufficiently high affinity during immunoprecipitations.

الأجسام المضادة ملزم خصوصية لكابا (Vκ) ضوء الإنسان (الغلوبولين المناعي) الأجسام المضادة التي تحتوي على سلسلة: Polysialic حمض (PSA) المرفقة لNCAM كدراسة حالة

Antibodies of the IgM isotype are often neglected as potential therapeutics in human trials, animal models of human diseases as well as detecting agents ...

Generation of Murine Monoclonal Antibodies by Hybridoma Technology

Monoclonal antibodies are universal binding molecules and are widely used in biomedicine and research. Nevertheless, the generation of these binding molecules is time-consuming and laborious due to the complicated handling and lack of alternatives. The aim of this protocol is to provide one standard method for the generation of monoclonal antibodies using hybridoma technology. This technology combines two steps. Step 1 is an appropriate immunization of the animal and step 2 is the fusion of B lymphocytes with immortal myeloma cells in order to generate hybrids possessing both parental functions, such as the production of antibody molecules and immortality. The generated hybridoma cells were then recloned and diluted to obtain stable monoclonal cell cultures secreting the desired monoclonal antibody in the culture supernatant. The supernatants were tested in enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) for antigen specificity. After the selection of appropriate cell clones, the cells were transferred to mass cultivation in order to produce the desired antibody molecule in large amounts. The purification of the antibodies is routinely performed by affinity chromatography. After purification, the antibody molecule can be characterized and validated for the final test application. The whole process takes 8 to 12 months of development, and there is a high risk that the antibody will not work in the desired test system.

An optimized protocol is presented for the generation of monoclonal antibodies based on the hybridoma technology. Mice were immunized with an immunoconjugate. Spleen cells were fused by PEG and an electric impulse with immortal myeloma cells. Antibody-producing hybridoma cells were selected by HAT and antigen-specific ELISA screening.

جيل من الفئران وحيدة النسيلة الأجسام المضادة بواسطة تقنية هجين

Monoclonal antibodies are universal binding molecules and are widely used in biomedicine and research. Nevertheless, the generation of these binding ...

Analysis of Simian Immunodeficiency Virus-specific CD8+ T-cells in Rhesus Macaques by Peptide-MHC-I Tetramer Staining

Peptide-major histocompatibility complex class I (pMHC-I) tetramers have been an invaluable tool to study CD8+ T-cell responses. Because these reagents directly bind to T-cell receptors on the surface of CD8+ T-lymphocytes, fluorochrome-labeled pMHC-I tetramers enable the accurate detection of antigen (Ag)-specific CD8+ T-cells without the need for in vitro re-stimulation. Moreover, when combined with multi-color flow cytometry, pMHC-I tetramer staining can reveal key aspects of Ag-specific CD8+ T-cells, including differentiation stage, memory phenotype, and activation status. These types of analyses have been especially useful in the field of HIV immunology where CD8+ T-cells can affect progression to AIDS. Experimental infection of rhesus macaques with simian immunodeficiency virus (SIV) provides an invaluable tool to study cellular immunity against the AIDS virus. As a result, considerable progress has been made in defining and characterizing T-cell responses in this animal model. Here we present an optimized protocol for enumerating SIV-specific CD8+ T-cells in rhesus macaques by pMHC-I tetramer staining. Our assay permits the simultaneous quantification and memory phenotyping of two pMHC-I tetramer+ CD8+ T-cell populations per test, which might be useful for tracking SIV-specific CD8+ T-cell responses generated by vaccination or SIV infection. Considering the relevance of nonhuman primates in biomedical research, this methodology is applicable for studying CD8+ T-cell responses in multiple disease settings.

Analysis of Simian Immunodeficiency Virus-specific CD8+ T-cells in Rhesus Macaques by Peptide-MHC-I Tetramer Staining

Here, we present an optimized protocol for enumerating and characterizing rhesus macaque CD8+ T cells against the AIDS virus. This article is useful not only to the field of HIV immunology, but also to other areas of biomedical research where CD8+ T cell responses are known to affect disease outcome.

تحليل قردي نقص المناعة CD8 للفيروسات محددة<sup&gt; +</sup&gt; خلايا تي في القرد قرود المكاك التي كتبها الببتيد-MHC-I Tetramer تلطيخ

Peptide-major histocompatibility complex class I (pMHC-I) tetramers have been an invaluable tool to study CD8+ T-cell responses. Because these reagents ...

Detection and Enrichment of Rare Antigen-specific B Cells for Analysis of Phenotype and Function

B cells reactive with a specific antigen usually occur at a frequency of &lt;0.05% of lymphocytes. For decades researchers have sought methods to isolate and enrich these rare cells for studies of their phenotype and biology. Approaches are inevitably based on the principle that B cells recognize native antigen by virtue of cell surface receptors that are representative in specificity of antibodies that will eventually be secreted by their differentiated daughters. Perhaps the most obvious approach to the problem involves use of fluorochrome-conjugated antigens in conjunction with fluorescence-activated cell sorting (FACS). However, the utility of these methods is limited by cell frequency and the achievable rate of analysis and isolation by electronic sorting. A novel method to enrich rare antigen-specific B cells using magnetic nanoparticles that results in high yield enrichment of antigen-reactive B cells from large starting cell populations is described. This method enables improved monitoring of the phenotype and biology of antigen reactive cells before and following in vivo antigen encounter, such as after immunization or during development of autoimmunity.

A simple yet effective method that employs magnetic nanoparticles to detect and enrich antigen-reactive B cells for functional and phenotypic analysis is described.

كشف وإثراء نادر محددة مستضد الخلايا B لتحليل النمط الظاهري وظيفة

B cells reactive with a specific antigen usually occur at a frequency of &lt;0.05% of lymphocytes. For decades researchers have sought methods to isolate ...

Effects of Exposure of Formaldehyde to a Rat Model of Atopic Dermatitis Induced by Neonatal Capsaicin Treatment

Atopic dermatitis is chronically relapsing pruritic eczema and prevails around the world especially in developed countries. Complex interactions between genetic and environmental factors are known to play an important role in the pathophysiology of atopic dermatitis. However, we still lack a detailed picture of the pathogenesis of this disease. Thus, it is of importance to develop appropriate animal models for elucidating the progression of atopic dermatitis. Moreover, investigating the effect of environmental factors such as air pollutants on atopic dermatitis expands understanding of the disease. Here, we describe a method for inducing atopic dermatitis in rats with neonatal capsaicin treatment and a protocol for exposure of a constant concentration of formaldehyde to rats to reveal effects on the development of atopic dermatitis in infantile and adolescent periods. These protocols have been successfully applied to several experiments and can be used for other substances.

We describe here methods for neonatal capsaicin treatment to induce atopic dermatitis in rats and exposure of vaporized formaldehyde to investigate the effects of formaldehyde inhalation on atopic dermatitis.

آثار تعرض فورمالدهايد لنموذج الفئران الاستشرائية الناجمة عن معاملة الأطفال حديثي الولادة كبخاخات

Atopic dermatitis is chronically relapsing pruritic eczema and prevails around the world especially in developed countries. Complex interactions between ...

A Method to Assess Fc-mediated Effector Functions Induced by Influenza Hemagglutinin Specific Antibodies

Antibodies play a crucial role in coupling the innate and adaptive immune responses against viral pathogens through their antigen binding domains and Fc-regions. Here, we describe how to measure the activation of Fc effector functions by monoclonal antibodies targeting the influenza virus hemagglutinin with the use of a genetically engineered Jurkat cell line expressing an activating type 1 Fc-Fc&#947;R. Using this method, the contribution of specific Fc-Fc&#947;R interactions conferred by immunoglobulins can be determined using an in vitro assay.

We describe a method to measure the activation of Fc-mediated effector functions by antibodies that target the influenza virus hemagglutinin. This assay can also be adapted to assess the ability of monoclonal antibodies or polyclonal sera targeting other viral surface glycoproteins to induce Fc-mediated immunity.

أسلوب لتقييم وظائف المستجيب Fc بوساطة الناجم عن الإنفلونزا هيماغلوتينين أجسام مضادة محددة

Antibodies play a crucial role in coupling the innate and adaptive immune responses against viral pathogens through their antigen binding domains and ...