作者想感谢他们的技术援助阿曼达Tardo，博士穆斯塔法Bouljihad，斯蒂芬妮费力，卡罗尔柯尼博士艾琳Ribka，博士皮特迪迪埃和多萝西Kuebler。这项工作得到了NIH的拨款R01 - DK076653 DK076653 3R01 - 02S1金水TNPRC RR000164基地经营授予。

1。皮肤活检样品采集<ol><li>之前皮肤活检手术，麻醉动物肌注2.5毫克/公斤盐酸tiletamine zolazepam盐酸telazol的混合物（道奇堡动物健康，道奇堡，IA）。监控管理，直到斜卧麻醉的动物，然后删除其外壳。 </li><li>取下的头发和皮肤面积大小40刀片（奥斯特的专业产品，麦克明维尔，TN）利用奥斯特金A5单速兽医帆船利益无菌准备与优碘擦洗，酒精交替。一个在选定的活检部位的安全无菌孔的悬垂。 </li><li>使用无菌技术，一个4.0毫米Miltex打孔真皮活检仪器（Miltex，纽约，PA）对皮肤，同时旋转180度顺时针和逆时针轻微的压力的仪器，直到活检穿透真皮层断面进入皮下TIssue。取出活检样本和掌握钳和皮下组织的皮肤横断部分。 </li><li>一个十字图案附着在一个3 / 8圈切割针（Ethilon，爱惜康，强生公司医疗有限公司，伯克郡，英国）用3-0尼龙缝合关闭皮肤缺损。给所有的动物0.01毫克/千克手术后镇痛丁丙诺啡盐酸（Hospira公司，森林湖，IL）肌注。 </li></ol> 2。样品处理<ol><li>恒河猴慢性皮炎和健康控制工作，从皮肤活检标本。获得两到三个（4毫米直径）活检从每个动物的样本。 </li><li>锌福尔马林（Z轴修复，Anatech有限公司，巴特尔克里克，心肌梗死），24小时修复第一个范例，在水冲洗30分钟，简单地在70％乙醇洗，并将其放置到ASP300徕卡组织处理器（莱卡微系统公司水牛城树丛，KS）组织脱水70％，80％，95％和100％的乙醇48升等级每分钟（费希尔科学，宾夕法尼亚州匹兹堡），其次是两个对二甲苯的变化（费舍尔）。 </li><li>长期储存在室温下嵌入石蜡媒体（费舍尔）。广场前20分钟到切片在20℃。准备用旋转切片机（HM325，MICROM国际，华尔道夫，德国）6微米的部分。广场路段收取的幻灯片（费舍尔）和空气干燥，60℃过夜。染色与苏木精和伊红（H＆E）的标准方法（如下所述）。 </li><li>修正了2％多聚甲醛（USB公司，克利夫兰，俄亥俄州）在室温下30分钟的第二个样本，在磷酸盐洗三次缓冲液（PBS，GIBCO Invitrogen公司，卡尔斯巴德，加利福尼亚州），在30％的蔗糖（费舍尔） 4小时，并嵌入在华侨城冻结介质（樱花Finetek，托伦斯，CA）。前20分钟到切片- 80℃保持。使用低温恒温器（HM560，Thermo Scientific的卡拉马祖，心肌梗死），准备15微米的部分。 </li></ol> 3。 H＆E染色<ol><li> Deparaffinize嵌入DED部分：通过三个转变二甲苯（费舍尔）和补充水分，通过分级ethanols三个转变为100％，95％的两个变化，一个变化的80％和蒸馏水，每2分钟。 </li><li>染色苏木（理查德艾伦科学，卡拉马祖MI）1分钟，并遵循一个简单的洗，在运行自来水。 </li><li> （Sigma公司）与曙红染液为6分钟。 </li><li>通过95％和无水乙醇脱水染色组织，两个转变，每次2分钟，然后在三个变化对二甲苯明确，每3分钟。 </li><li>山玻璃罩使用Cytoseal安装介质（理查德 - 阿兰科学）在H＆E -染色组织切片。 </li></ol> 4。病理组织学评价检查H＆E -染色活检皮肤下的光显微镜使用4部分现货透视数码相机（数码仪器公司，美国密歇根州） - 40倍的放大倍率和徕卡显微镜。 5。免疫荧光STAI宁<ol><li> OCT包埋免疫荧光染色的皮肤部分的工作。染色前，浸泡20分钟PBS中含0.1％，0.2％的鱼皮明胶（FSG，Sigma公司）TRITON X - 100（Sigma公司）删除华侨城通透组织。 </li><li> 10％正常山羊血清（NGS，Sigma）的PBS - FSG稀释为1小时，在室温下，，孵育，洗涤后的幻灯片，在加湿的幻灯片室。 </li><li>为了形象化沉积的IgA和tTG2抗体，孵育反恒河猴IgA和tTG2初级抗体在10％农工商PBS - FSG稀释为1小时，幻灯片。 </li><li>洗10分钟，10分钟，PBS - FSG PBS - FSG - TRITON X - 100（Sigma公司）。 </li><li>孵育中学，同种特定标签的Alexa Fluor荧光488（绿色），568（红色）或633（蓝色）分子探针（Invitrogen公司）1:1,000稀释的抗体。使用TOPRO - 3染料可视化的核DNA。使用10％的农工商PBS - FSG作为抗体稀释液。 </li><li>使用反淬火液（Sigma公司），装入染色组织切片。 </li></ol> 6。共焦成像执行了Leica TCS SP2真正的共聚焦激光扫描显微镜配备了三个激光器（六行激发可用）（莱卡，韦茨拉尔，德国）成像：氩，氪激光波长为488（绿色），在568 nm的氪激光（红色）和在633 nm（蓝色），从可见光谱的远红方跨度的氦氖激光。记录微分干涉对比（DIC）的图像的非标记的组织架构进行评估。 7。代表性的成果如图ETG tTG2和IgA抗体阳性确认的一个例子。 3A。在人类患者的情况，由于DH样皮炎的发病率要低得多，比CD般的面筋敏感性也恒河猴一致，皮肤活检标本大部分预计将SHOW的tTG2抗体阳性反应，但没有tTG2 + IGA +双（图4）阳性细胞的存在。这些卫生署无关的情况下，包括微生物来源皮炎的情况下，就会发现一些单积极IGA +散落下的上皮细胞，但tTG2和IgA标记的标记（图3B和4）之间的光谱重叠。因此，重要的是要保持建议的测试程序的顺序，与临床检查（图1）病理组织学评估（图2），只有在没有其他更常见的皮炎，造成代理商可以识别，焦，开始显微镜tTG2和IgA染色的皮肤切片检查是必要的。临床和/或组织病理学评估单是不足够的阳性诊断这种情况。在这种情况下，双阳性（tTG2 + IGA +）细胞真皮乳头周围区域确定，可以发出的DH -样皮炎诊断。在这种情况下，撤回饮食面筋和管理无麸质饮食的建议，以减轻皮炎症状。 <img src="/files/ftp_upload/3154/3154fig1.jpg" alt="图1" /> 图1。EM96猕猴前腹股沟区（A）和后（b）为5个星期的饮食面筋的撤离。重新饮食面筋正好与再现性皮炎（三）。 <img src="/files/ftp_upload/3154/3154fig2.jpg" alt="图2" /> 图2 HE染色EM96猕猴的皮肤活组织切片检查，收集前（A）和（二）撤销9个星期的饮食面筋。答：上皮增厚（7-15层上皮细胞）厚的角化细胞表面的地壳变质中性粒细胞浸润。中性粒细胞也出现上皮细胞内和中等数量的淋巴细胞，浆细胞，在真皮上层的附属器周围的组织细胞混合。乙：有些hyperkerat尘埃沉着病仍然存在，上皮厚度正常化（4-7层），以最小的淋巴浆细胞浸润在真皮上部。 C：FR56猕猴腹部皮肤正常，无淋巴浆细胞浸润，包括进行比较。放大倍数20倍。 <img src="/files/ftp_upload/3154/3154fig3.jpg" alt="图3" /> 图3。EM96猕猴的皮肤活组织切片检查前收集的共聚焦显微镜图像（A）和（二）撤销9个星期的饮食面筋。答：IGA染色（绿），tTG2（红色）和TOPRO - 3核DNA标记（蓝色）。 IgA和tTG2合作定位出现在周围的皮肤papilae面积的黄色。乙：皮肤样本9周后无麸质饮食显示，上皮细胞内没有IGA，​​而一些皮下IGA仍然存在（绿色），tTG2（红色）和TOPRO - 3核DNA标记（蓝色）。 <img src="/files/ftp_upload/3154/3154fig4.jpg" alt="图4" /> 图4。 </&gt; GI24恒河猴皮肤活检共聚焦显微镜图像的收集，而动物是参展的慢性皮炎（DH -无关）症状。 IGA染色tTG2绿色，红色和TOPRO - 3核DNA标记是蓝色的。 tTG2 +细胞存在上皮细胞内，几个IGA +下方的上皮细胞，而没有广泛的光谱重叠的红色和绿色标记之间是可见的。 <table border="1"><tbody><tr><td> 动物标签 </td><td> 性别 [男/女] </td><td> 年龄 [年] </td><td> 临床症状 </td><td> 等离子tTG2 抗体 </td><td> 饮食 [1,2] * </td></tr><tr><td> HJ71 </td><td> F </td><td> 1.3 </td><td>健康</td><td> - </td><td> 1 </td></tr><tr><td> HD13 </td><td>中号</td><td> 1.4 </td><td>健康，偶有腹泻</td><td> + </td><td> 1 </td></tr><tr><td> FR56 </td><td>中号</td><td> 5.4 </td><td>慢性特发性腹泻</td><td> - </td><td> 1 </td></tr><tr><td> EM96 </td><td> F </td><td> 5.0 </td><td>慢性皮炎</td><td> + / - （边缘） </td><td> 1和2 </td></tr><tr><td> GI24 </td><td> F </td><td> 4.6 </td><td>慢性皮炎</td><td> - </td><td> 1 </td></tr></tbody></table> 表1。TNPRC恒河猴用于收集皮肤活检 *饮食1 - 定期猴子议员（含麸质）;饮食2 - 无麸质饮食

<ol>
	<li>Diosdado, B., Wijmenga, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+the+adaptive,+innate+and+regulatory+immune+responses+in+the+intestinal+mucosa+of+celiac+disease+patients.">Molecular mechanisms of the adaptive, innate and regulatory immune responses in the intestinal mucosa of celiac disease patients.</a> Expert. Rev. Mol. Diagn. 5 (5), 681-700 (2005).</li><li>Schuppan, D., Dennis, M. D., Kelly, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Celiac+disease:+epidemiology,+pathogenesis,+diagnosis,+and+nutritional+management.">Celiac disease: epidemiology, pathogenesis, diagnosis, and nutritional management.</a> Nutr. Clin. Care. 8 (2), 54-69 (2005).</li><li>Sardy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+transglutaminase+(TGase+3)+is+the+autoantigen+of+dermatitis+herpetiformis.">Epidermal transglutaminase (TGase 3) is the autoantigen of dermatitis herpetiformis.</a> J. Exp. Med. 195 (6), 747-757 (2002).</li><li>Rose, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibodies+against+epidermal+transglutaminase+are+a+sensitive+diagnostic+marker+in+patients+with+dermatitis+herpetiformis+on+a+normal+or+gluten-free+diet.">Autoantibodies against epidermal transglutaminase are a sensitive diagnostic marker in patients with dermatitis herpetiformis on a normal or gluten-free diet.</a> J. Am. Acad. Dermatol. 61 (1), 39-43 (2009).</li><li>Bethune, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transepithelial+transport+and+enzymatic+detoxification+of+gluten+in+gluten-sensitive+rhesus+macaques.">Transepithelial transport and enzymatic detoxification of gluten in gluten-sensitive rhesus macaques.</a> PLoS ONE. 3 (3), e1857-e1857 (2008).</li><li>Mazumdar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+transepithelial+passage+of+the+immunogenic+33-residue+peptide+from+&#x03B1;-2+gliadin+in+gluten-sensitive+macaques.">Visualization of transepithelial passage of the immunogenic 33-residue peptide from &#x03B1;-2 gliadin in gluten-sensitive macaques.</a> PLoS ONE. 5 (4), e10228-e10228 (2010).</li><li>Schuppan, D., Junker, Y., Barisani, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Celiac+disease:+from+pathogenesis+to+novel+therapies.">Celiac disease: from pathogenesis to novel therapies.</a> Gastroenterol. 137 (6), 1912-1933 (2009).</li><li>Hunt, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Newly+identified+genetic+risk+variants+for+celiac+disease+related+to+the+immune+response.">Newly identified genetic risk variants for celiac disease related to the immune response.</a> Nature Genet. 40 (4), 395-402 (2008).</li><li>Abadie, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integration+of+genetic+and+immunological+insights+into+a+model+of+celiac+disease+pathogenesis.">Integration of genetic and immunological insights into a model of celiac disease pathogenesis.</a> Annu. Rev. Immunol. 29, 493-525 (2011).</li></ol>

没有利益冲突的声明。

最近，我们新成立的非人类灵长类动物模型面筋敏感性是用于研究饮食面筋 5,6引发的肠道通透性变化。等离子体tTG2抗体以及肠道tTG2 + IGA +存款中检测到一些敏感的麸质的猕猴。由于我们最近认同在殖民地特发性皮炎的罕见事件恒河猴猕猴，这里没有通常的传染病/代谢的病因可能是成立，本研究的目的是，以评估如果tTG2 + IGA +抗体的存款可能被检测到的皮肤样本从这些罕见的情况下皮炎?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 试剂或设备名称 </td><td> 公司 </td><td> 目录编号/产品编号 </td><td> 请注意 </td></tr><tr><td>抗人IGA - FITC </td><td> Sigma公司，圣路易斯，密苏里州</td><td> F - 5259 </td><td> 1:100工作液</td></tr><tr><td>反人权tTG2 </td><td> Thermo Scientific的卡拉马祖，心肌梗死</td><td> MS - 300 - P1ABX </td><td> 1:100工作液</td></tr><tr><td>抗鼠IgG1 ** </td><td> Invitrogen公司，卡尔斯巴德，CA </td><td> A - 21124 </td><td> 1:1,000工作液</td></tr><tr><td> TOPRO - 3 DNA探针*** </td><td> Invitrogen公司，卡尔斯巴德，CA </td><td> T - 3605 </td><td> 1:1,000工作液</td></tr><tr><td>锌福尔马林 （Z - FIX） </td><td> Anatech有限公司，巴特尔克里克，MI </td><td> 171 </td><td></td></tr><tr&gt; <td>华侨城冻结 中等</td><td>樱花Finetek，托伦斯，CA </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> Cytoseal安装 中等</td><td>理查德艾伦科学，卡拉马祖，心肌梗死</td><td> 8312-4 </td><td></td></tr><tr><td>反淬火 解决方案</td><td> Sigma公司，圣路易斯，密苏里州</td><td> P 3130 </td><td></td></tr><tr><td> Ethilon （尼龙缝线） </td><td>爱惜康公司，强生公司，英国伯克郡， </td><td> 663G </td><td></td></tr><tr><td> Miltex打孔真皮活检仪器</td><td> Miltex，纽约，PA </td><td>不适用</td><td></td></tr><tr><td>奥斯特金A5单速度与规模的40刀片兽医快船</td><td>奥斯特产品，麦克明维尔，TN </td><td> 78005-050 </td><td></td></tr><tr><td>徕卡组织处理器</td><td>莱卡微系统公司布法罗树丛，KS </td><td> ASP300 </td><td></td></tr><tr><td>旋转式切片机</td><td> MICROM国际 华尔道夫，德国</td><td> HM325 </td><td></td></tr><tr><td>低温恒温器</td><td> Thermo Scientific的， 卡拉马祖MI </td><td> HM560 </td><td></td></tr><tr><td>共聚焦显微镜</td><td>莱卡，韦茨拉尔 德国</td><td> TCS SP2 </td><td></td></tr></tbody></table> *异硫氰酸荧光素 **中使用抗体后tTG2初级抗体（共轭的Alexa Fluor 568） **染料

recognition of epidermal transglutaminase by iga and tissue transglutaminase 2 antibodies in a rare case of rhesus dermatitis

组织转谷氨酰胺酶2（tTG2）是肠道的消化酶deamidates已经部分消化的饮食面筋如醇溶蛋白肽。在遗传倾向的个体，tTG2触发自身免疫反应的特点是由生产tTG2抗体和直接沉积到小肠壁 1,2 。这种抗体的存在，构成腹腔病（CD）的重要标志之一。表皮转谷氨酰胺酶（ETG），也可以作为在少数的CD患者的自身抗原的转谷氨酰胺酶家族的另一成员。在这些比较少见的情况下，ETG触发自身免疫反应（皮疹），临床上称为疱疹性皮炎（DH）。虽然CD和卫生署的发病的确切机制还不是很清楚，它是已知tTG2和血清抗体可以识别CD和卫生署病人 3,4 ETG份额抗原表位。 猕猴 ）皮炎（表1，图1和2）皮损活检标本用于研究受影响的组织。在一个动物（EM96）IgA和tTG2抗体（图3）光谱重叠证明。集中在深的表皮，真皮​​乳头周围，存在的双阳性tTG2 + IGA +细胞。这是符合卫生署病人描述的病变 3 。当EM96是一个无麸质饮食，皮炎，以及放置tTG2 + IGA +存款消失，不再检测到（图1-3）皮炎再现然而，基于EM96的饮食面筋（未显示）的重新引入。包括动物无关皮炎的其他猕猴，tTG2 + IGA +存款均未检出。无麸质饮食依赖性皮炎缓解EM96 tTG2存在+ IGA +在它的皮肤细胞表明自身免疫性疾病，卫生署状这种情况的发展机制。这是任何非人类灵长类动物中的DH -样皮炎的第一次报告。

Watch this Scientific Journal Video about Recognition of Epidermal Transglutaminase by IgA and Tissue Transglutaminase 2 Antibodies in a Rare Case of Rhesus Dermatitis at JoVE.com

Recognition of Epidermal Transglutaminase by IgA and Tissue Transglutaminase 2 Antibodies in a Rare Case of Rhesus Dermatitis

疱疹性皮炎（DH）是一种慢性炎症性IGA和表皮转谷氨酰胺酶（ETG）之间的自身免疫反应的条件。卫生署发展中的麸质敏感和/或腹腔的患者非常小的部分。这项研究的结果表明，卫生署也可以在idiopatic皮炎症状猕猴主机发展。

在极少数情况下，表皮转谷氨酰胺酶IgA和组织转谷氨酰胺酶2抗体的识别恒河猴皮炎

Tissue transglutaminase 2 (tTG2) is an intestinal digestive enzyme which deamidates already partially digested dietary gluten e.g. gliadin peptides. In ...

recognition-epidermal-transglutaminase-iga-tissue-transglutaminase-2

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Recognition of Epidermal Transglutaminase by IgA and Tissue Transglutaminase 2 Antibodies in a Rare Case of Rhesus Dermatitis

24.4K 次观看.  Tulane National Primate Research Center. 疱疹性皮炎（DH）是一种慢性炎症性IGA和表皮转谷氨酰胺酶（ETG）之间的自身免疫反应的条件。卫生署发展中的麸质敏感和/或腹腔的患者非常小的部分。这项研究的结果表明，卫生署也可以在idiopatic皮炎症状猕猴主机发展。