FIPE / HCPA - Fundo دي Incentivo إلكتروني Pesquisa Eventos الرؤوس - <a href="http://www.capes.gov.br/">Coordenação دي دي Aperfeiçoamento Pessoal دي نيفل العليا</a>

1. نص بروتوكول <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل جمع الدم الزرد، من الضروري أن تعد المياه التخدير. صب ~ 200 مل من الماء في وعاء ماء بسعة 500 مل. إضافة ~ 200 غرام من رقائق الثلج. يجب أن تكون درجة الحرارة حوالي 4 درجات مئوية. كما رقائق ذوبان الجليد، سيكون من الضروري لإضافة المزيد من رقائق الثلج للحفاظ على درجة حرارة ثابتة بالقرب من 4 درجات مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما الماء التخدير مستعدة، وإعداد المواد اللازمة لجمع الدم. وضع تلميح منخفضة على الاحتفاظ pipettor P20 وترك pipettor حيث يمكن الوصول إليها بسهولة. لا تسمح للطرف ماصة للاتصال بأي مصادر التلوث. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغطية صحن بيتري مع قطعة من الشاش الجافة. يجب وضع شفرة الصلب وآخر قطعة من الشاش في مكان يسهل الوصول إليها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ستكون هناك حاجة لجهاز الطرد المركزي تكييفها للأنابيب بلاستيكية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما يتم إعداد المواد المذكورة آنفا، التقاط الزرد الاولى لتكون خفة دم تخديرهكتار شباك الصيد والافراج عنها في المياه التي أعدت للتخدير. الزرد تتطلب 3-6 ق في المياه المبردة ليكون تخدير، اعتمادا على الأسماك. الحفاظ على الأسماك في المياه الباردة حتى أنه لم يعد يستجيب للمؤثرات الخارجية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام شباك الصيد، ووضع الأسماك تخدير على قطعة من الشاش المعدة، وترك ذيل الخروج من الشاش. طي الشاش فوق رأس السمكة وجسده تاركة فقط لها ذيل. وضع السمكة مغطاة الشاش على طبق بيتري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام شفرة الفولاذ لجعل شق قطري فقط بين الزعنفة الشرجية والزعنفة الذيلية. وسوف تبدأ في الدم للخروج. عند هذه النقطة، فمن الضروري العمل بسرعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بلطف يطمح الدم الذي يخرج مع pipettor P20 (محملة مسبقا مع طرف الاحتفاظ الأقل). كمية الدم التي يمكن جمعها يعتمد على حجم السمك، وإلى أي درجة أنه تم تخديره بشكل صحيح. وهو يختلف عادة 5-20 ميكروليتر. عندما يتوقف الدم جoming خارج، ونقل بلطف الدم المنشود في أنبوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتجنب انحلال الدم، فمن الأهمية بمكان أن يتم التعامل معها في الأنبوب مع الدم في ذلك بحرص شديد، ودون أي تحركات جذرية حتى يتم وضعه في أجهزة الطرد المركزي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتجنب انحلال الدم، فإنه من المهم أيضا أن يتم توفير عينة من الدم في جهاز الطرد المركزي في غضون 10 دقيقة من جمع الدم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا لزم الأمر، فمن الممكن الجمع بين الدم من أكثر من حيوان واحد، مما يجعل بركة. والعينات المجمعة تعمل بشكل جيد ما دام التأخير بين جمع الدم من الأسماك الأولى والطرد المركزي لا تتجاوز 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما يتم جمع الدم، وأجهزة الطرد المركزي في الدم لمدة 10 دقائق عند 0.5 غرام (إيبندورف جهاز طرد مركزي 5415D). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الطرد المركزي، ومصل الدم هو في الطبقة العليا من أنبوب. مع ماصة، نضح المصل، مع التأكد من مجرد الحصول على مصل الدم مع الحفاظ على كل من طبقات مقسمة بشكل جيد ومستقر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الدم في microtube جديدة وذلكمستعد لاستخدامها في التحليلات الكيميائية الحيوية. ويمكن تخزين المصل في الجليد في حين انتظر لبدء التحاليل البيوكيميائية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا لن يتم استخدام المصل فورا، ويمكن تجميده عند -18 درجة مئوية لمدة تصل إلى ما يقرب من 3 أشهر. </li></ol> 2. ممثل النتائج كان من الممكن جمع 5-20 ميكروليتر من الدم الكامل من كل الأسماك ما يمثل الدم حتى 4 مرات أكثر من التقنيات التي سبق وصفها (الجدول 2). تم إجراء تحليل كيميائي حيوي من الكولسترول الكلي، الكولسترول، الكولسترول الضار، والدهون الثلاثية بعد جمع الدم باستخدام هذه التقنية. وصام مجموعتين من كلا الجنسين السمك لمدة 24 ساعة قبل جمع الدم لتجنب الأغذية تدخل السحب. وقد أجريت التحليلات مع صغير تحجيم التجارب اللونية (Labtest Diagnóstica SA، البرازيل) لتحاليل الكوليسترول والدهون الثلاثية مجموع، وتستخدم 3 ميكروليتر من المصل. الكوليسترول LDL للHDL والكوليسترولواستخدمت التحليل، 4 ميكرولتر و 10 ميكروليتر من المصل، على التوالي. وأجريت هذه التحاليل على عينات جمعت من 10 الزرد لكل عينة. وتمت مقارنة مستويات المصل lipidic بين الاسماك التي الوصول إلى البيض الخاصة بهم، وتلك التي، في الحوض السفلي مغطى، لم يكن لديهم إمكانية الحصول على البيض الخاصة بهم لمدة تجريبية من 2 أسابيع. وأظهر تحليل مصل الدم أن مستويات مصل الدم من الكولسترول الكلي (مع البيض 362 ± 42 ملغ / دل وبدون بيض 357 ± 13 ملغ / دل)، HDL الكولسترول (مع البيض 91.22 ± 1.79 ملغ / دل وبدون بيض 72.14 ± 2.89 ملغم / ولم دل)، والكولسترول الضار، (مع البيض 55.68 ± 10.88 ملغ / دل وبدون بيض 44،18 ± 9،84 ملغ / دل) لا تختلف اختلافا كبيرا بين المجموعتين. ومع ذلك، كانت مستويات الدهون الثلاثية أقل من ذلك بكثير في المجموعة التجريبية (بدون بيض 292 ± 64 ملغ / دل) مما كان عليه في السيطرة على المجموعة (مع البيض 457 ± 25 ملغم / دل، P = 0.03). <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> ومصلحة الدولة للاحصاءع؛ </td><td> مع الحصول على البيض </td><td> دون الحصول على البيض </td></tr><tr><td> مجموع الكوليسترول (ملغ / دل) </td><td> 362،82 ± 73،11 </td><td> 357،69 ± 23،08 </td></tr><tr><td> LDL - الكوليسترول (ملغ / دل) </td><td> 55.69 ± 18.84 </td><td> 44.19 ± 17.05 </td></tr><tr><td> HDL - الكوليسترول (ملغ / دل) </td><td> 91.23 ± 3.11 </td><td> 72.14 ± 5.01 </td></tr><tr><td> الدهون الثلاثية (ملغم / دل) </td><td> 457،64 ± 43،78 * </td><td> 292.36 ± 111.28 </td></tr></tbody></table> الجدول رقم 1. سيريتش مستويات الكولسترول والدهون الثلاثية لكلا الفريقين درس (مع إمكانية الحصول على البيض وبدون الحصول على البيض) التي أعرب عنها في المتوسط ​​± الانحراف المعياري. * ذات دلالة إحصائية (P = 0.03). طالب اختبار تي. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> التسليم<html> عجز عن </td><td> بدلا من شق </td><td> حصاد طريقة </td><td> خدر </td><td> كمية الدم التي تم جمعها </td></tr><tr><td> Jagadeeswaran وآخرون. آل.، 1999 مورثا وآخرون، 2003 </td><td> الصغير الخلفي لتشريح الزعنفة الظهرية </td><td> Micropipette </td><td> لم يرد ذكرها MS222 3٪ في الماء البارد </td><td> 1 (أ) ميكرولتر 5 5 (أ) ميكرولتر 10 </td></tr><tr><td> ايمز وآخرون، 2010 </td><td> قطع الرأس </td><td> الشعيرات الدموية الدقيقة أنبوب </td><td> MS222 0،02٪ 28 الماء درجة مئوية </td><td> 5 (أ) ميكرولتر 10 </td></tr><tr><td> الدراسة الحالية </td><td> شق بين الزعنفة الشرجية والزعنفة الذيلية </td><td> Micropipette ونصائح الاحتفاظ منخفض </td><td> الماء والجليد رقائق </td><td> 5 (أ) ميكرولتر 20 </td></tr></tbody></table>e_content &quot;&gt; الجدول رقم 2. مقارنة بين تقنيات جمع الدم التي سبق وصفها واحد هو موضح في هذه الدراسة.

<ol>
	<li>Schneider, A. C. R., dos Santo, J. L., Porawski, M., Schaefer, P. G., Maurer, R. L., Matte, U., da Silveira, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implementa&#231;&#227;o+de+um+novo+modelo+de+experimenta&#231;&#227;o+animal+Zebrafish.">Implementa&#231;&#227;o de um novo modelo de experimenta&#231;&#227;o animal Zebrafish.</a> Rev. HCPA. 29, 100-103 (2009).</li><li>Briggs, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish:+a+new+model+organism+for+integrative+physiology.">The zebrafish: a new model organism for integrative physiology.</a> Am. J. Physiol. Regulatory Integrative Comp. Physiol. 282, 3-9 (2002).</li><li>Menke, A. L., Sptsbergen, J. M., Wolterbeek, A. P. M., Woutersen, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+anatomy+and+histology+of+adult+Zebrafish.">Normal anatomy and histology of adult Zebrafish.</a> Toxicologic Pathology. 000, 1-16 (2011).</li><li>Murtha, J. M., Qi, W., Keller, E. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematologic+and+serum+biochemical+values+for+Zebrafish.">Hematologic and serum biochemical values for Zebrafish.</a> Comp. Med. 53, 37-41 (2003).</li><li>Jagadeeswaran, P., Sheehan, J. P., Craig, F. E., Troyer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+zebrafish+thrombocytes.">Identification and characterization of zebrafish thrombocytes.</a> Br. J. Haematol. 107, 731-738 (1999).</li><li>Jagadeeswaran, P., Sheehan, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+blood+coagulation+in+the+zebrafish.">Analysis of blood coagulation in the zebrafish.</a> Blood Cells Mol. Dis. 25, 239-249 (1999).</li><li>Eames, S. C., Philipson, L. H., Prince, V. E., Kinkel, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sugar+measurement+in+zebrafish+reveals+dynamics+of+glucose+homeostasis.">Blood sugar measurement in zebrafish reveals dynamics of glucose homeostasis.</a> Zebrafish. 7, 205-213 (2010).</li><li>Kilpatrick, E. S., Rumley, A. G., Rumley, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+haemolysis+on+blood+glucose+meter+measurement.">The effect of haemolysis on blood glucose meter measurement.</a> Diabet. Med. 12, 341-343 (1995).</li><li>Gupta, T., Mullins, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+Organs+from+the+Adult+Zebrafish.">Dissection of Organs from the Adult Zebrafish.</a> J. Vis. Exp. (37), e1717 (2010).</li><li>Kinkel, M. D., Eames, S. C., Philipson, L. H., Prince, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraperitoneal+Injection+into+Adult+Zebrafish.">Intraperitoneal Injection into Adult Zebrafish.</a> J. Vis. Exp. (42), e2126 (2010).</li><li>Pugach, E. K., Li, P., White, R., Zon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retro-orbital+Injection+in+Adult+Zebrafish.">Retro-orbital Injection in Adult Zebrafish.</a> J. Vis. Exp. (34), e1645 (2009).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

تعرض هذه الورقة تقنية بسيطة تتيح المزيد من الدم وتحليل مصل الدم في التجارب الزرد. هذه التقنية لديها القدرة على المساهمة في دراسات المستقبل الزرد الدموية التي تتطلب بيانات المعلمة الدم. وينبغي أن يسمح أيضا لمزيد من التطبيقات من الزرد كنموذج تجريبي. <p class="jove_content" style=...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> نصائح الاحتفاظ منخفض </td><td> النظم البيولوجية التطبيقية </td><td> 022493020 </td><td></td></tr><tr><td> إيبندورف جهاز طرد مركزي 5415D </td><td> إيبندورف </td><td> توقف </td><td></td></tr></tbody></table>

blood collection for biochemical analysis in adult zebrafish

وقد استخدم الزرد لتكون نموذجا للدراسات الحيوانية من الأمراض التي تصيب الإنسان عدة. يمكن أن تكون بمثابة منصة قوية لدراسات ما قبل السريرية من الأحداث الجزيئية والاستراتيجيات العلاجية، وكذلك لتقييم الآليات الفسيولوجية لبعض الأمراض 1. وهناك عدد قليل نسبيا من المنشورات المتعلقة الزرد علم وظائف الأعضاء الكبار من الأعضاء والأجهزة 2، والذي قد يؤدي إلى استنتاج الباحثين أن التقنيات الأساسية اللازمة للسماح للاستكشاف نظم الزرد تفتقر 3. ولم يبلغ عن القيم 1 البيوكيميائية الدموية من الزرد في عام 2003 من قبل مورثا و 4 الزملاء الذين يعملون تقنية جمع الدم لأول مرة من قبل Jagadeeswaran وزملاؤه في عام 1999. لفترة وجيزة، تم جمع الدم عن طريق طرف micropipette من خلال شق جانبي، ما يقرب من 0.3 سم في الطول، في المنطقة من الشريان الأبهر الظهري 5. نظرا للأبعاد دقيقة المعنية، هذاهي تقنية عالية الدقة تتطلب ممارس درجة عالية من المهارة. وقد استخدم نفس الاسلوب من قبل المجموعة نفسها في منشور آخر في نفس العام 6. في عام 2010، المقررة ايمز وزملاؤه كل مستويات السكر في الدم في الزرد 7. اكتسبوها الوصول إلى الدم عن طريق إجراء قطع الرؤوس مع مقص ومن ثم ادخال heparinized أنبوب جمع microcapillary في صياغة الصدرية. يذكرون الصعوبات مع انحلال الدم التي تم حلها مع درجة حرارة التخزين المناسبة على أساس آل عمل وآخرون كيلباتريك. 8. وجدنا عند محاولة استخدام تقنية Jagadeeswaran في مختبرنا، وأنه كان من الصعب جعل شق في مكان على وجه التحديد الحق في عدم السماح لكمية كبيرة من الدم إلى أن تضيع قبل أن بدأ جمع. مؤخرا، غوبتا وآخرون. 9 10 صفه كيفية تشريح أجهزة الزرد الكبار، Kinkle وآخرون. ووصف كيفية تنفيذ intraperitonووصف حقن EAL، وPugach وآخرون. 11 كيفية تنفيذ الرجعية المدارية عن طريق الحقن. ومع ذلك، هناك حاجة إلى مزيد من العمل لأكثر تماما استكشاف التقنيات الأساسية للبحث في الزرد. صغر حجم الزرد تحديات للباحثين استخدامه كنموذج تجريبي. وعلاوة على ذلك، نظرا لهذا صغر الحجم، وأنه من المهم أن يتم تطوير تقنيات بسيطة لتمكين الباحثين من دراسة المزايا من طراز الزرد.

Watch this Scientific Journal Video about Blood Collection for Biochemical Analysis in Adult Zebrafish at JoVE.com

Blood Collection for Biochemical Analysis in Adult Zebrafish

وتعرض هذه الورقة التقنية لجمع الدم من الشريان الأبهر الظهري من الزرد. كما يوفر إرشادات للحصول على المصل لاستخدامها في تحليل الكيمياء الحيوية، مثل اختبارات لتحديد مستويات الكولسترول والدهون الثلاثية.

جمع الدم لتحليل الكيمياء الحيوية في الزرد الكبار

The zebrafish has been used as an animal model for studies of several human diseases. It can serve as a powerful preclinical platform for studies of ...

blood-collection-for-biochemical-analysis-in-adult-zebrafish

Research

JoVE Journal

Biology

36.3K Views.  Centro de Pesquisa Experimental Laboratório de Hepatologia e Gastroenterologia Experimental. وتعرض هذه الورقة التقنية لجمع الدم من الشريان الأبهر الظهري من الزرد. كما يوفر إرشادات للحصول على المصل لاستخدامها في تحليل الكيمياء الحيوية، مثل اختبارات لتحديد مستويات الكولسترول والدهون الثلاثية.

Video: Blood Collection for Biochemical Analysis in Adult Zebrafish

Using Flow Cytometry to Detect and Quantitate Altered Blood Formation in the Developing Zebrafish

The diversity of cell lineages that comprise mature blood in vertebrate animals arise from the differentiation of hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs). This is a critical process that occurs throughout the lifespan of organisms, and disruption of the molecular pathways involved during embryogenesis can have catastrophic long-term consequences. For a multitude of reasons, zebrafish (Danio rerio) has become a model organism to study hematopoiesis. Zebrafish embryos develop externally, and by 7 days postfertilization (dpf) have produced most of the subtypes of definitive blood cells that will persist for their lifetime. Assays to assess the number of hematopoietic cells have been developed, mainly utilizing specific histological stains, in situ hybridization techniques, and microscopy of transgenic animals that utilize blood cell-specific promoters driving the expression of fluorescent proteins. However, most staining assays and in situ hybridization techniques do not accurately quantitate the number of blood cells present; only large differences in cell numbers are easily visualized. Utilizing transgenic animals and analyzing individuals with fluorescent or confocal microscopy can be performed, but the quantitation of these assays relies on either counting manually or utilizing expensive imaging software, both of which can make errors. Development of additional methods to assess blood cell numbers would be economical, faster, and could even be automated to quickly assess the effect of CRISPR-mediated genetic modification, morpholino-mediated transcript reduction, and the effect of drug compounds that affect hematopoiesis on a large scale. This novel assay to quantitate blood cells is performed by dissociating whole zebrafish embryos and analyzing the amount of fluorescently labelled blood cells present. These assays should allow elucidation of molecular pathways responsible for blood cell generation, expansion, and regulation during embryogenesis, which will allow researchers to further discover novel factors altered during blood diseases, as well as pathways essential during the evolution of vertebrate hematopoiesis.

This assay is a simple method to quantitate hematopoietic cells in developing embryonic zebrafish. Blood cells from dissociated zebrafish are subjected to flow cytometry analysis. This allows the detection of blood defects in mutant animals and after genetic modification.

استخدام قياس التدفق الخلوي للكشف عن تكوين الدم المعدل وكميته في سمك الحمار الوحشي النامي

The diversity of cell lineages that comprise mature blood in vertebrate animals arise from the differentiation of hematopoietic stem and progenitor cells ...

Developmental Biology

Intraperitoneal Injection into Adult Zebrafish

A convenient method for chemically treating zebrafish is to introduce the reagent into the tank water, where it will be taken up by the fish. However, this method makes it difficult to know how much reagent is absorbed or taken up per fish. Some experimental questions, particularly those related to metabolic studies, may be better addressed by delivering a defined quantity to each fish, based on weight. Here we present a method for intraperitoneal (IP) injection into adult zebrafish. Injection is into the abdominal cavity, posterior to the pelvic girdle. This procedure is adapted from veterinary methods used for larger fish. It is safe, as we have observed zero mortality. Additionally, we have seen bleeding at the injection site in only 5 out of 127 injections, and in each of those cases the bleeding was brief, lasting several seconds, and the quantity of blood lost was small. Success with this procedure requires gentle handling of the fish through several steps including fasting, weighing, anesthetizing, injection, and recovery. Precautions are required to minimize stress throughout the procedure. Our precautions include using a small injection volume and a 35G needle. We use Cortland salt solution as the vehicle, which is osmotically balanced for freshwater fish. Aeration of the gills is maintained during the injection procedure by first bringing the fish into a surgical plane of anesthesia, which allows slow operculum movements, and second, by holding the fish in a trough within a water-saturated sponge during the injection itself. We demonstrate the utility of IP injection by injecting glucose and monitoring the rise in blood glucose level and its subsequent return to normal. As stress is known to increase blood glucose in teleost fish, we compare blood glucose levels in vehicle-injected and non-injected adults and show that the procedure does not cause a significant rise in blood glucose.

We demonstrate intraperitoneal injection into adult zebrafish. We use a 10 &mu;l NanoFil microsyringe controlled by a Micro4 controller and UltraMicroPump III. This demonstration includes the use of cold water as an anesthetic.

حقن داخل الصفاق الى اسماك الزرد الكبار

A convenient method for chemically treating zebrafish is to introduce the reagent into the tank water, where it will be taken up by the fish. However, ...

Optimized Intravenous Injection in Adult Zebrafish

Intravenous (IV) injection is widely recognized as the most effective and commonly utilized method for achieving systemic delivery of substances in mammalian research models. However, its application in adult zebrafish for drug delivery, stem cell transplantation, and regenerative and cancer studies has been limited due to the challenges posed by their small body size and intricate blood vessels. To overcome these limitations, alternative injection techniques such as intracardiac and retro-orbital (RO) injection have been explored in the past for stem cell transplantation in adult zebrafish. However, these techniques have their drawbacks, including the need for meticulous injection techniques or increased risk of mortality.
In this study, we have developed a refined and optimized IV injection procedure specifically tailored to adult zebrafish, addressing the challenges associated with their unique anatomy. To demonstrate the effectiveness of this technique, we performed successful IV injections of whole kidney marrow cells from Tg(mpo: EGFP) fish and FITC-dextran dye into adult Casper fish. The subsequent visualization of injected cells and dyes using a fluorescence microscope confirmed their successful delivery and engraftment within the zebrafish. Furthermore, we demonstrated that compared with the intracardiac and RO injections, the IV injection resulted in improved survival rates and engraftment efficiency in treated zebrafish. This approach enables precise delivery and localization of substances and holds great potential for large-scale drug and chemical screening using adult zebrafish. Additionally, the ability to visually track the injected cells and dyes provides invaluable insights into their engraftment, migration, and interactions with host tissues, enabling a more comprehensive evaluation of therapeutic effects and biological processes in zebrafish models.

Here, we present an optimized and effective protocol for the intravenous injection of cells or pharmacological agents into adult zebrafish, resulting in enhanced cell engraftment and increased survival rates of the treated zebrafish.

الحقن الأمثل في الوريد في أسماك الزرد البالغة

Intravenous (IV) injection is widely recognized as the most effective and commonly utilized method for achieving systemic delivery of substances in ...

Cancer Research

Modeling Tuberculosis in Mycobacterium marinum Infected Adult Zebrafish

Mycobacterium tuberculosis is currently the deadliest human pathogen causing 1.7 million deaths and 10.4 million infections every year. Exposure to this bacterium causes a wide disease spectrum in humans ranging from a sterilized infection to an actively progressing deadly disease. The most common form is the latent tuberculosis, which is asymptomatic, but has the potential to reactivate into a fulminant disease. Adult zebrafish and its natural pathogen Mycobacterium marinum have recently proven to be an applicable model to study the wide disease spectrum of tuberculosis. Importantly, spontaneous latency and reactivation as well as adaptive immune responses in the context of mycobacterial infection can be studied in this model. In this article, we describe methods for the experimental infection of adult zebrafish, the collection of internal organs for the extraction of nucleic acids for the measurement of mycobacterial loads and host immune responses by quantitative PCR. The in-house-developed, M. marinum-specific qPCR assay is more sensitive than the traditional plating methods as it also detects DNA from non-dividing, dormant or recently dead mycobacteria. As both DNA and RNA are extracted from the same individual, it is possible to study the relationships between the diseased state, and the host and pathogen gene-expression. The adult zebrafish model for tuberculosis thus presents itself as a highly applicable, non-mammalian in vivo system to study host-pathogen interactions.

Modeling Tuberculosis in Mycobacterium marinum Infected Adult Zebrafish

Here, we present a protocol to model human tuberculosis in an adult zebrafish using its natural pathogen Mycobacterium marinum. Extracted DNA and RNA from the internal organs of infected zebrafish can be used to reveal the total mycobacterial loads in the fish and the host&#39;s immune responses with qPCR.

السل النمذجة في "الزرد الكبار المصابين" بكتريا مارينوم

Mycobacterium tuberculosis is currently the deadliest human pathogen causing 1.7 million deaths and 10.4 million infections every year. Exposure to this ...

Immunology and Infection

Oral Intubation of Adult Zebrafish: A Model for Evaluating Intestinal Uptake of Bioactive Compounds

Most pathogens invade organisms through their mucosa. This is particularly true in fish as they are continuously exposed to a microbial-rich water environment. Developing effective methods for oral delivery of immunostimulants or vaccines, which activate the immune system against infectious diseases, is highly desirable. In devising prophylactic tools, good experimental models are needed to test their performance. Here, we show a method for oral intubation of adult zebrafish and a set of procedures to dissect and prepare the intestine for cytometry, confocal microscopy and quantitative polymerase chain reaction (qPCR) analysis. With this protocol, we can precisely administer volumes up to 50 &#181;L to fish weighing approximately 1 g simply and quickly, without harming the animals. This method allows us to explore the direct in vivo uptake of fluorescently labelled compounds by the intestinal mucosa and the immunomodulatory capacity of such biologics at the local site after intubation. By combining downstream methods such as flow cytometry, histology, qPCR and confocal microscopy of the intestinal tissue, we can understand how immunostimulants or vaccines are able to cross the intestinal mucosal barriers, pass through the lamina propria, and reach the muscle, exerting an effect on the intestinal mucosal immune system. The model could be used to test candidate oral prophylactics and delivery systems or the local effect of any orally administered bioactive compound.

The protocol describes intubating adult zebrafish with a biologic; then dissecting and preparing the intestine for cytometry, confocal microscopy and qPCR. This method allows administration of bioactive compounds to monitor intestinal uptake and the local immune stimulus evoked. It&#160;is relevant for testing the intestinal dynamics of oral prophylactics.

تنبيب الشفوي من الزرد الكبار: نموذج لتقييم امتصاص الأمعاء للمركبات النشطة بيولوجيا

Most pathogens invade organisms through their mucosa. This is particularly true in fish as they are continuously exposed to a microbial-rich water ...

Analysis of Nephron Composition and Function in the Adult Zebrafish Kidney

The zebrafish model has emerged as a relevant system to study kidney development, regeneration and disease. Both the embryonic and adult zebrafish kidneys are composed of functional units known as nephrons, which are highly conserved with other vertebrates, including mammals. Research in zebrafish has recently demonstrated that two distinctive phenomena transpire after adult nephrons incur damage: first, there is robust regeneration within existing nephrons that replaces the destroyed tubule epithelial cells; second, entirely new nephrons are produced from renal progenitors in a process known as neonephrogenesis. In contrast, humans and other mammals seem to have only a limited ability for nephron epithelial regeneration. To date, the mechanisms responsible for these kidney regeneration phenomena remain poorly understood. Since adult zebrafish kidneys undergo both nephron epithelial regeneration and neonephrogenesis, they provide an outstanding experimental paradigm to study these events. Further, there is a wide range of genetic and pharmacological tools available in the zebrafish model that can be used to delineate the cellular and molecular mechanisms that regulate renal regeneration. One essential aspect of such research is the evaluation of nephron structure and function. This protocol describes a set of labeling techniques that can be used to gauge renal composition and test nephron functionality in the adult zebrafish kidney. Thus, these methods are widely applicable to the future phenotypic characterization of adult zebrafish kidney injury paradigms, which include but are not limited to, nephrotoxicant exposure regimes or genetic methods of targeted cell death such as the nitroreductase mediated cell ablation technique. Further, these methods could be used to study genetic perturbations in adult kidney formation and could also be applied to assess renal status during chronic disease modeling.

The zebrafish adult kidney is an excellent system for renal regeneration and disease studies. An essential aspect of such research is the assessment of nephron structure and function. This protocol describes several methodologies that can be implemented to assess nephron tubule composition and to evaluate renal reabsorption.

تحليل التركيب كليون وظيفة في الكلى اسماك الزرد الكبار

The zebrafish model has emerged as a relevant system to study kidney development, regeneration and disease. Both the embryonic and adult zebrafish kidneys ...

Recovery of Adult Zebrafish Hearts for High-throughput Applications

Use of the zebrafish model system for studying development, regeneration, and disease is expanding toward use of adult hearts for cell dissociation and purification of RNA, DNA, and proteins. All of these applications demand the rapid recovery of significant numbers of zebrafish hearts to avoid gene regulatory, metabolic, and other changes that begin after death. Adult zebrafish hearts are also required for studying heart structure for a variety of mutants and for studying heart regeneration. However, the traditional zebrafish heart dissection is slow and difficult and requires specialized tools, making large-scale dissection of adult zebrafish hearts tedious. Traditional methods also harbor the risk of damaging the heart during the dissection. Here, we describe a method for dissection of adult zebrafish hearts that is fast, reproducible, and preserves heart architecture. Furthermore, this method does not require specialized tools, is painless for the zebrafish, can be performed on fresh or fixed specimens, and can be performed on zebrafish as young as one month old. The approach described expands the use of adult zebrafish for cardiovascular research.

Use of zebrafish for cardiovascular research is expanding towards research on adult hearts. For these applications, quick and simple isolation of cardiac tissues is key to avoid post-mortem changes and to obtain an adequate number of samples. Here, we describe a fast and reproducible method for dissecting adult zebrafish hearts.

التعافي من اسماك الزرد الكبار قلوب للتطبيقات عالية الإنتاجية

Use of the zebrafish model system for studying development, regeneration, and disease is expanding toward use of adult hearts for cell dissociation and ...

Repeated Blood Collection for Blood Tests in Adult Zebrafish

Repeated blood collection is one of the most common techniques performed on laboratory animals. However, a non-lethal protocol for blood collection from zebrafish has not been established. The previous methods for blood collection from zebrafish are lethal, such as lateral incision, decapitation and tail ablation. Thus we have developed a novel &#8220;repeated&#8221; blood collection method, and present here a detailed protocol outlining this procedure. This method is minimally invasive and results in a very low mortality rate (2.3%) for zebrafish, thus enabling repeated blood sampling from the same individual. The maximum volume of blood sampling is dependent on body weight of the fish. The volume for repeated blood sampling at intervals should be&#160;&#8804;0.4% of body weight every week or &#8804;1% every 2 weeks, which were evaluated by measurements of blood hemoglobin. Additionally, hemoglobin, fasting blood glucose, plasma triacylglycerol (TG) and total cholesterol levels in male and female adult zebrafish were measured. We also applied this method to investigate the dysregulation of glucose metabolism in diet-induced obesity. This blood collection method will allow many applications, including glucose and lipid metabolism and hematological studies, which will increase the use of zebrafish as a human disease model organism.

Repeated blood sampling is necessary and important in animal research. We developed a novel, non-lethal and reliable method for repeated blood collection from adult zebrafish, and applied this method to the study of blood biochemistry, including glucose metabolism.

كرر جمع الدم لاختبارات الدم في اسماك الزرد الكبار

Repeated blood collection is one of the most common techniques performed on laboratory animals. However, a non-lethal protocol for blood collection from ...

Partial Hepatectomy in Adult Zebrafish

Liver failure is one of the leading causes of death worldwide, and mortality from chronic liver disease is rising sharply in the United States. Healthy livers are capable of regenerating from toxic damage, but in advanced liver disease, the natural ability of the liver to regenerate is impaired. Zebrafish have emerged as a powerful experimental system for studying regeneration. They are an ideal model for studying liver regeneration from partial hepatectomy, a procedure with direct clinical relevance in which part of the liver is surgically removed, leaving the rest intact. There is no standard protocol for partial hepatectomy; previous studies using this model have used slightly different protocols and reported disparate results. Described here is an efficient, reproducible protocol for performing a partial hepatectomy in adult zebrafish. We use this technique to demonstrate that zebrafish are capable of epimorphic regeneration of the resected lobe. This protocol can be used to further interrogate the mechanisms required for liver regeneration in zebrafish.

This protocol describes the procedure for removing the ventral lobe of the liver in adult zebrafish to enable the study of liver regeneration.

استئصال الهيباتيك الجزئي في سمك الحمار الوحشي البالغ

Liver failure is one of the leading causes of death worldwide, and mortality from chronic liver disease is rising sharply in the United States. Healthy ...

Isolation of Cardiac and Vascular Smooth Muscle Cells from Adult, Juvenile, Larval and Embryonic Zebrafish for Electrophysiological Studies

Zebrafish have long been used as a model vertebrate organism in cardiovascular research. The technical difficulties of isolating individual cells from the zebrafish cardiovascular tissues have been limiting in studying their electrophysiological properties. Previous methods have been described for dissection of zebrafish hearts and isolation of ventricular cardiac myocytes. However, the isolation of zebrafish atrial and vascular myocytes for electrophysiological characterization was not detailed. This work describes new and modified enzymatic protocols that routinely provide isolated juvenile and adult zebrafish ventricular and atrial cardiomyocytes, as well as vascular smooth muscle (VSM) cells from the bulbous arteriosus, suitable for patch-clamp experiments. There has been no literary evidence of electrophysiological studies on zebrafish cardiovascular tissues isolated at embryonic and larval stages of development. Partial dissociation techniques that allow patch-clamp experiments on individual cells from larval and embryonic hearts are demonstrated.

The present protocol describes the acute isolation of viable cardiac and vascular smooth muscle cells from adult, juvenile, larval, and embryonic zebrafish (Danio rerio), suitable for electrophysiological studies.

عزل خلايا العضلات الملساء القلبية والوعائية عن أسماك الزرد البالغة واليافعة واليرقات والجنينية للدراسات الكهروفسيولوجية

Zebrafish have long been used as a model vertebrate organism in cardiovascular research. The technical difficulties of isolating individual cells from the ...